酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 4学时

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

实验十酵母菌形态观察及死活细胞鉴定一．目的要求：1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴别。

3.掌握酵母子囊孢子的观察方法。

二.实验原理1．形态观察酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。

大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方法。

2.死活鉴定本实验通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

3.子囊孢子子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母菌要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏培养基（葡萄糖—醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

三.实验器材1.菌种：酿酒酵母培养约2d的酵母合成培养基和麦氏琼脂斜面。

2.溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用碘液。

5%的孔雀绿水溶液，0.5%的番红水溶液，95%的乙醇3.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片等。

四.操作步骤1.酵母合成培养基的配制按配方称取酵母合成培养基各组分，配置3瓶60ml的培养液各装入250ml锥形瓶中，再用六层纱布封口，用牛皮纸包扎后121℃灭菌20min。

灭菌后置于摇床上震荡。

2.麦氏琼脂的配制按配方称取麦氏琼脂各组分，制成10只斜面，每只内培养液为5至10ml，按常规方法包扎后121℃灭菌20min。

实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别一、实验目的：1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。

2.学习区分细胞的死活状态。

二、实验原理：1.放线菌的形态特征：放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。

放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。

放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。

2.酵母菌的形态特征：酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。

酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。

酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。

3.死活细胞鉴别：通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。

三、实验材料与方法：1.材料：-放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片-无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器-酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等-亚甲基蓝染液：浓度为1%2.方法：a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。

b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。

d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。

e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。

f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。

g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。

四、实验结果与分析：通过观察放线菌的细胞形态和菌落特征，可以发现放线菌的形态特征是不规则的菌落结构，内部有菌丝状结构。

放线菌的细胞形态多样，有圆形或椭圆形细胞。

实验十酵母菌形态观察及死活细胞鉴定
一目的要求：
1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖。

2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法.
二.实验原理
本实验通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

三.实验器材
1.酿酒酵母
2. 0．05％、0．1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；
3.显微镜，载玻片，盖玻片等。

四.操作步骤（美蓝水浸片的制作）
1在载玻片中央加一滴0．1％吕氏碱性美蓝染液然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

2用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

3将制好的水浸片放置3分钟后镜检。

先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

4染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。

5用0．05％吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。

五、实验报告
结果
(1)绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

(2)说明观察到的吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。

酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

1。

实验十六酵母菌细胞形态观察及死活细胞的染色鉴别目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构。

2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色方法。

材料1. 菌种：酵母菌菌悬液。

2. 染料：0.1％美兰染色液。

3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、试管、蒸馏水等。

原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。

用美兰染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。

美兰是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。

活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美兰还原，而细胞不被染色。

因此，用美兰对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，呈蓝色的则为死亡细胞。

需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是一定的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。

方法1．酵母菌细胞形态的观察取洁净的载玻片一块，用滴管取酵母菌悬滴于载玻片中央，取盖玻片一块，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下，以避免产生气泡。

至此，一片酵母菌水浸标本片就制成了。

先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，观察时注意酵母细胞的形状及出芽情况。

2．死活酵母细胞的染色鉴别取0.1％美兰液一滴，滴在一块洁净的载玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5分钟后加盖玻片制成水浸标本片，镜检。

内容1. 制片观察所给各种酵母菌的细胞形态。

2. 用美兰液对酵母菌死活细胞进行染色鉴别。

结果与思考题1. 绘图表示所观察的各种酵母菌，注明菌名及放大倍数。

2. 用美兰对酵母细胞进行染色鉴别时，为什么要控制染料的浓度和染色时间?。

微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032实验四酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别，微生物细胞大小的测定一、实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法.3．了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。

二、实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

实验三酵母菌的形态观察与死活鉴定
一、实验目的与内容
1、实验目的：
2、实验内容：
二、实验原理
三、实验器材
1.供试菌种
2.试剂
3.器皿
四、实验步骤
(一)美蓝浸片观察
(二)水-碘浸片观察
(三)酵母菌死亡率计算
酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞的百分数。

在一个视野里计数死细胞和活细胞，共计数5~6个视野，记录并计算。

死亡率=死细胞总数/(死、活细胞总数)×100%
五、注意事项
六、实验结果分析
七、实验报告
1.绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征，注明菌名与放大倍数。

2.三线表记录吕氏碱性美蓝、碘染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。

八、思考与探究
1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、试剂与器材1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验内容1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检2.水-碘浸片观察五、关键步骤及注意事项1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。

2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。

六、思考题1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。

2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时.实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别预习内容：1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页）2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题：1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?一、实验目的与要求1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理1. 酵母菌酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。

但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）三、实验设备及材料1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 .3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。

二实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把 10 mm长度刻成 100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

一、实验目的
1、观察酵母菌的个体形态；
2、掌握区分酵母菌死活细胞的实验原理和方法。

二、实验仪器与器材
1、菌种：
普通酵母菌
2、染色液：
0.1%美蓝染液。

3、器材：
显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、接种环等。

三、实验原理
酵母菌是单细胞微生物，细胞核与细胞质有明显分化，个体直径比细菌大10倍左右，多为圆形或椭圆形。

用美蓝染色液制成的水浸片，不仅可以观察酵母菌的外形，还可以区分死活细胞。

这是因为活细胞新陈代谢旺盛，还原力强，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，而死细胞无还原力，美蓝不变色。

四、实验内容
1、制片取0.1%美蓝染色液1滴于载玻片中央，用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀，染色2~3min后加盖玻片。

2、镜检
用低倍镜和高倍镜观察细胞形态。

根据酵母菌是否染上蓝色区别细胞的死活。

3、染色约
0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。

五、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

六、思考题
1、绘酵母菌的形态图。

2、美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死活细胞数量有何影响？。

实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别一、目的要求1.进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法；2.观察并掌握酵母菌的个体形态及其子囊、子囊孢子和假菌丝的形态；3.学习并掌握鉴别酵母菌细胞死活的方法；4.了解酵母菌子囊孢子的染色方法及假菌丝观察的压片培养法。

二、实验材料1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）、粟酒裂殖酵母（Sachizosaccharomyces pombe）2.染色液：0.1％美蓝染色液、孔雀绿染色液、沙黄染色液、95％乙醇等3.其他：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸等三、基本原理酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见的细菌大几倍甚至几十倍，因此，不必染色即可用显微镜观察其形态。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌纲中的酵母菌在一定条件下，可产生子囊孢子的方式进行有性生殖。

酵母菌假菌丝的生成与培养基的种类、培养条件等因素有关。

美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。

用美蓝对酵母细胞进行染色时，活细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能将美蓝由兰色的氧化态转变为无色的还原态型，从而细胞呈无色；而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则由于细胞内还原力较弱而不具备这种能力，从而细胞呈蓝色，据此可对酵母菌的细胞死活进行鉴别。

四、操作步骤1。

水浸片观察：1）制片：在干净的载玻片中央加一滴预先稀释至适宜浓度的酵母液体培养物，从侧面盖上一片盖玻片（先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上），应避免产生气泡，并用吸水纸吸去多余的水分（菌液不宜过多或过少，否则，在盖盖玻片时，菌液会溢出或出现气泡而影响观察；盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡）。

2）镜检：将制作好的水浸片置于显微镜的载物台上，先用低倍镜，后用高倍镜进行观察，注意观察各种酵母的细胞形态和繁殖方式，并进行记录。