基因的操作程序作业

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一、目的基因的获取:
(1)从基因文库中获取目的基因
①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多 ,导入受体菌的群体中 ,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。

基因组文库:含有一种生物的 基因
②种类
cDNA 文库:含有一种生物的 基因
(2)利用PCR 技术扩增目的基因
①原理:
②前提条件:提供已知 的核苷酸序列,根据这段序列合成 。

③过程:目的基因DNA 变性形成DNA 单链,与 结合,然后在 的
作用下延伸形成DNA 。

④特点: 扩增,即2n (n 为扩增循环次数)。

(3)人工合成方法:当基因较小,核苷酸序列已知时,可以用人工方法合成(例如,通过 直接合成)。

二、基因表达载体的构建
(1)表达载体的组成:目的基因+ + +标记基因等。

(2)启动子:位于基因的 ,它是 结合的部位,驱动基因转录产生
mRNA 。

(3)终止子:位于基因的 ,终止 。

(4)表达载体的功能:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且 给下一
代;使目的基因 ____ 和发挥作用。

(5)标记基因: 受体细胞是否含有目的基因。

(6)不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同,基因表达载体的构建上也会有
所差别。

三、将目的基因导入受体细胞
(一)转化:目的基因进入受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和 的过程。

(二)方法
1.将目的基因导入植物细胞
采用最多的方法是
①农杆菌特点:易感染 植物和裸子植物,对___________植物没有感染力;其Ti 质粒
的 可转移至受体细胞,并整合到受体细胞的染色体上。

②转化:目的基因插入
−−→−进入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。

其次还有: 和 等方法。

2、将目的基因导入动物细胞
(1)方法: 。

(2)操作程序:目的基因的 提纯→取卵(受精卵)→ →移植输
卵管或子宫内→新性状动物
3、将目的基因导入微生物细胞
(1)原核生物的特点:, 。

(2)转化:用 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→感受态
细胞吸收 分子,完成转化。

四、目的基因的检测与测定
1、检测:①检测转基因生物的染色体DNA 上的 ,原理是 技术。

②检测目的基因是否转录出 ,原理是 技术。

③检测目的基因是否翻
译成蛋白质,原理是 技术。

2、鉴定:个体生物学水平鉴定,如抗虫、抗病鉴定等。