实验一 槐米中芦丁的提取 分离和鉴定

槐米中芦丁的提取、水解和鉴定实验简介槐米系豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾。

能凉血止血，清肝泻火。

药理实验证明芦丁有调节毛细血管渗透作用，临床上可作为毛细血管脆弱引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。

其有效成分为芸香苷，又称芦丁(rutin)，含量可高达12～20％。

芦丁为槲皮素-3-O-芸香糖苷，淡黄色粉末或细针状结晶，含3分子结晶水（C 27H 30O 16•3H2O ），mp.177~178℃，无水物mp.188~190℃。

溶解度:冷水中的溶解度为1﹕10000，沸水中1﹕200，冷乙醇1﹕650，沸乙醇1﹕60，沸甲醇中1﹕7，可溶于丙酮、乙酸乙酯、吡啶及碱液中，不溶于三氯甲烷、乙醚、苯及石油醚。

芦丁水解后得槲皮素，槲皮素为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水（C 15H 10O 7•3H2O ），mp.313~314℃（分解），无水物mp.316℃。

溶解度:热乙醇中1﹕23,冷乙醇中1﹕300,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、吡啶与冰醋酸等，不溶于水、三氯甲烷、乙醚、苯与石油醚等。

本实验应用碱溶解酸沉淀法，重结晶法，酸水解法，纸色谱法，紫外光谱分析法对槐米中芦丁进行提取、水解和鉴定。

O O HO OH O OHOHO O OH OHOHH 2CO OH OH CH 3OH 3H 2O 芦丁 O HO OH OH OH 槲皮素实验原理1、提取精制的原理：芦丁分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又可沉淀析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。

芦丁的精制可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）中溶解度相差悬殊的性质进行。

2、鉴定的原理：利用纸色谱的吸附分配原理，将样品和对照品在同一条件下展开显色，判断芦丁和槲皮素的Rf值，达到鉴定的目的。

利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断化合物羟基的位置。

槐米中芦丁的提取,分离与鉴定实验报告一、实验目的1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。

2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。

二、实验原理芦丁:浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。

溶解度:1:8000;热水1:200;冷乙醇1:300;热乙醇1:30;冷甲醇1:100:热甲醇1:10.槲皮素:黄色结晶，mp313℃-314℃，能溶解于冷乙醇，易溶于沸乙醇，可溶于甲醇、乙酸乙酯等;难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。

本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。

三、药品材料槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸四、实验操作芦丁的的提取和精制芦丁的提取:取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟，并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。

浓缩至1/2体积，滤液在60℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。

五、实验说明及注意事项1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。

在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。

槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。

PH应严格控制8-9，不得超过10,。

因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。

酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。

2、提取过程中加入硼砂作用:保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。

槐米中芦丁的提取与分离摘要：利用芦丁在沸水中溶解度大的性质将其在沸水中进行提取，而芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离。

关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定1 引言芦丁（Rutin ）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。

尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。

芦丁是由槲皮素（Quercetin ）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose ）〔葡萄糖（Glucose ）与鼠李糖（Rhamnose ）组成的双糖〕脱水形成的苷。

芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子结晶水，熔点为174~178℃，不含水的芦丁熔点为188℃。

含2分子结晶，熔点为313~314℃。

水溶解度：冷水中为1:10000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。

微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。

不含结晶水的槲皮素熔点为316℃，它们的结构式如下：OHOHO O OHO OOH OHOH OHOH CH 2CH 3OH O O OH芦丁（Rutin ）O OHO OH OHOH槲皮素（Quercetin ）芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。

2 实验内容与步骤2.1仪器与试剂仪器：紫外灯 蒸馏装置一套 250mL 烧杯（一只） 500mL 烧杯（两只） 100mL 三角瓶（两只） 纱布 色谱柱（Ф1.5×30cm ） 玻璃板 硅胶G 板试剂：甲醇 70%工业乙醇 槐米 层析用聚酰胺（60-100目） 芦丁标准样2.2 芦丁的提取将粉碎好的槐米10g 倒入500mL 烧杯中，加沸水150mL ，煮沸1h(在煮沸的过程中可补加水），趁热用纱布过滤，残渣加入100mL 水，再煮沸30分钟，共进行两次，将两次滤液混合，放置，冷却，即有大量黄色沉淀生成，抽滤。

实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）实验目的要求1.制备芦丁，供药用。

2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。

3.熟悉重结晶技巧。

4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。

（二）实验的基本原理1.芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。

也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。

2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。

芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。

也可采用醇溶水沉法进行精制。

3. 芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。

（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。

(三) 实验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。

2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。

3. 溶剂重结晶精制芦丁。

4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材槐米20g。

2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。

3. 试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。

（五）实验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。

残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。

实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定一、概述槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。

具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。

近年来被用作治疗高血压的辅助药物。

药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。

槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。

主要化学成分的结构及理化性质：芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。

难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。

槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。

能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。

二、实验部分（一）实验目的1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。

2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。

3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。

（二）实验原理1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。

2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。

3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。

（三）实验药材、仪器与试剂1、药材：槐米50g(每组)。

槐米中芦丁的实验报告槐米中芦丁的实验报告槐米是一种常见的食材，被广泛应用于中餐和糕点中。

近年来，人们开始对槐米中的营养成分进行深入研究。

其中，槐米中的芦丁引起了科学家们的兴趣。

芦丁是一种天然的黄酮类化合物，具有多种保健功效。

本实验旨在探究槐米中芦丁的含量及其对人体的潜在益处。

实验一：槐米中芦丁的提取首先，我们收集了新鲜的槐米样本，并将其研磨成粉末状。

然后，我们使用乙醇作为溶剂，将槐米粉末浸泡在其中。

经过搅拌和过滤，我们得到了槐米乙醇提取物。

接下来，我们使用高效液相色谱法（HPLC）对槐米乙醇提取物中的芦丁进行定量分析。

结果显示，槐米中的芦丁含量为每克10毫克。

这一发现表明，槐米是一种富含芦丁的食材。

实验二：芦丁的抗氧化性质芦丁被广泛认为具有抗氧化作用，能够帮助人体对抗自由基的侵害。

为了验证这一假设，我们进行了一系列的实验。

首先，我们使用2,2-联氨基二苯基-1-苦肼（DPPH）自由基清除实验来评估芦丁的抗氧化能力。

结果显示，芦丁能够有效清除DPPH自由基，表明其具有明显的抗氧化活性。

其次，我们进行了DNA损伤实验。

通过将DNA暴露在过氧化氢的作用下，我们模拟了细胞内自由基对DNA的损伤。

然后，我们添加不同浓度的芦丁溶液，并观察DNA的损伤程度。

结果显示，芦丁能够显著减轻DNA的损伤，说明其具有保护细胞核酸免受自由基攻击的能力。

实验三：芦丁的抗炎作用芦丁还被认为具有抗炎作用，能够减轻炎症反应。

为了验证这一假设，我们进行了一系列的实验。

首先，我们使用细胞培养技术，将人类巨噬细胞暴露在炎症刺激物（如细菌脂多糖）的作用下。

然后，我们添加不同浓度的芦丁溶液，并观察细胞的炎症反应。

结果显示，芦丁能够显著抑制炎症反应，并减少炎性细胞因子的释放。

其次，我们使用小鼠模型进行了体内实验。

我们给小鼠注射炎症刺激物，并同时给予不同剂量的芦丁。

结果显示，芦丁能够显著减轻小鼠的炎症反应，表明其具有抗炎作用。

结论通过本实验，我们发现槐米中富含芦丁，并且芦丁具有抗氧化和抗炎作用。