小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察

? 巨噬细胞广泛分布于全身各处。当病原微生物或其他 异物进入机体时，能招引巨噬细胞向异物所在处移动， 伸出伪足将之包围并内吞入细胞形成吞噬体，继而和 溶酶体融合形成吞噬溶酶体，在其中将异物杀伤消除。
吞噬过程
? 大致分为四个阶段： ? 识别结合 ? 部分吞入 ? 形成内吞体（或称吞噬体） ? 形成吞噬溶酶体。
结果观察
? 用40倍镜或油镜观察巨噬细胞吞噬鸡红 细胞情况。画出不同吞噬阶段的图。
注意事项
? 1、粘附过程要防止液体干掉； ? 2、吞噬时间应掌握好，过短，鸡红细胞
尚未被吞入；过长，已吞噬消化。
? 4、制片。（ 1）直接观察：滴 1滴腹腔液，盖上 盖玻片直接观察；
（2）染色观察
? 加0.2ml-0.3ml腹腔液于盖玻片上，放湿 盒置37℃恒温培养箱30min使巨噬细胞粘 附；
? 用带针头的注射器吸取0.01M，PH7.2的 PBS 5ml冲洗掉未粘附的细胞及腹腔液；
? 将玻片浸入甲醇中固定3－5min，凉干； ? Giemsa染色30min； ? 流水冲去浮液，凉干观察。
实验操作
? 1、巨噬细胞诱导。实验前 1天，每只小鼠腹腔 注射1ml 4％淀粉肉汤。
? 2、体内吞噬。实验当天，先给每只小鼠腹腔注 射2ml 1%鸡红细胞生理盐水悬液，轻揉腹部， 使其在腹腔分布均匀。吞噬 45min。
? 3、处死小鼠，吸取巨噬细胞。脱颈处死小鼠， 随即向腹腔注入 1ml生理盐水，揉匀。然后剪开 腹部皮肤，暴露腹膜，用带针头的注射器插进 腹腔吸取腹腔液；
吞噬过程示意图
吞噬现象
试验材料、试剂及仪器用品
材料
? 1、6－8周龄健康雄性小鼠 ? 2、5％鸡红细胞。 ? 采血1ml，放入4ml阿氏液中，用PBS洗3

实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察〔实验目的〕1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及意义2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法〔实验原理〕巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。

当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。

巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。

〔试剂材料〕1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2、试剂：（1）0.85%生理盐水（2）Alverse溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。

pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃保存（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其溶解，煮沸灭菌，4℃保存。

用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）3、材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞〔内容方法〕一、腹腔巨噬细胞的吞噬1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。

2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。

3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。

4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。

5、甲醛固定10min。

捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持 其尾巴向后拉，小鼠那么会尽力向前蹬。 用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤， 然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
腹腔注射
给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静 脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们 常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如 前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用 酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下， 进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹 腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿 左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的 液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。
『实验原理』 高等动物体内存在着具有防疫功能的吞
噬细胞系统，它由粒细胞和单核细胞等白细 胞构成，是机体免疫系统的重要组成局部。 巨噬细胞是体内的一种重要的免疫细胞，具 有非特异性吞噬功能，当机体受到细菌等病 原体及其它异物侵入时，巨噬细胞将向病原 体或异物游走，当接触异物时，伸出伪足将 其包围并进行内吞作用，将病原体或异物吞 入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与吞 噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验 将观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血 红细胞进行吞噬的情况。
单核巨噬细胞
『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％
的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的
鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分 散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部， 使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏 推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片， 标本便制备好了。 6、实验绘图。

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。

2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。

3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。

二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。

吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。

本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。

3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。

四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。

（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。

（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。

（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。

3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。

五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。

2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。

六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。

2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。

3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。

七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。

实验六 巨噬细胞吞噬现象的观察
一、 实验目的
1.通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的试 验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功 能。 2.了解巨噬细胞在机体非特异免疫中的重 要作用。
二、实验原理
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细 胞，具有吞噬作用的功能。它们广泛分布在组织和 血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要作用。 当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬 细胞，而巨噬细胞又有趋化性，它通过产生活跃的 变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把 异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向 内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞 噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。 巨噬细胞吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体 免疫水平的高低。
单核细胞（上）和巨噬细胞（下）
单核巨噬细胞吞噬过程示意图
巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞
巨噬细胞吞噬细菌（电镜）
肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）
三、实验仪器、材料和试剂
1. 仪器、用具：显微镜、高压灭菌锅、解剖盘、解 剖剪、1ml注射器、吸管、载玻片、盖玻片。 2. 材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。 3. 试剂： 4%台盼蓝染液：台盼蓝染粉 0.4克，加0.85%生 理盐水100ml。 6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）：牛肉膏 0.3克； 蛋白胨 1.0克；氯化钠0.5克；蒸馏水 100ml。加热后, 可加入6.0克可溶性淀粉，促使溶解，再煮沸灭菌， 置40C冰箱保存，用时水浴熔化，加入适量4%台盼 蓝染液混匀，使呈蓝色。
五、实验结果
六．注意事项
1、给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤时要注意 进针适度，注射量要合适。 2、给小白鼠腹腔注射时，抓小鼠不要太 紧，以免小鼠死亡。 3、使用的载玻片要很干净。

实 验 原 理

细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物 质的方式，也是原始防御作用。随着动物界 的进化，在高等动物中，则发展生成大小两 类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，
专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要
组成部分。

巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后 进入血液到达各组织内，并进一步分化为各 种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入 机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有 趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃 的变形运动，主动向病原体和异物移行，在 接触到病原体或异物时，即‘伸出伪足，将 之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细 胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形 成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下， 将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化 的残渣排出细胞外。
在机体的免疫过程中，巨噬细胞承 担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰 老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细 胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降 解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨 噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的 激活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖 和分化具有调节作用。
【实验用品】 1．材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液 2．试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝）， 0.9%生理盐水 3．仪器设备：显微镜、注射器、注射针 头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、 载玻片、盖玻片、记号笔

Байду номын сангаас
实 验 方 法
1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5％鸡红细胞
lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实
验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈 皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手 的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固 定，即可在腹部后 l／2处的一侧注射。进针勿过深，

三、实验用品 、
1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、 剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。 2、试剂： ①0.85%生理盐水 ②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50 ml即可。 ③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）： 将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏 水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置 4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混 匀，使其呈蓝色。
④Alsever溶液： 称取2.05g葡萄糖、 0.89g柠檬酸钠 Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸 （C6H6O7.H2O）和 0.42g氯化钠，用蒸馏水定 容至100ml，调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌 10min，置4℃冰箱保存。
四、实验材料： 实验材料：
1、小白鼠 2、1%鸡红细胞悬液 1%鸡红细胞悬液制备： 从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放 入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备 用（2 周内使用）。使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜 鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的NaCl 溶液，小心混匀， 1500 r/min 离心5min，如此洗涤3 次，最后配成1%的鸡 红细胞悬液。
六、实验结果
在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞， 其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的 淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核 的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨 噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞 入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭 圆形吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正 在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶 段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。

一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。

2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。

二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。

在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。

2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。

3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。

四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。

2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。

3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。

4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。

5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。

五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。

具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。

2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。

3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。

六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。

2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。

3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。

4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。

七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。

实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。

三、实验仪器、材料和试剂 （1）仪器、用具：显微镜、、解剖盘、注射器、吸管、载 玻片、盖玻片。 （2）材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。 （3）试剂：6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）。
方法与步骤 （1）实验前24h，每天给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含 台盼蓝）1ml。 （2）实验时，再往腹腔内注射1ml1%鸡红细胞悬液，并轻 柔腹部，使鸡红细胞悬液分散。
（3）20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠 尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓 与脑髓间断开致死）。 （4）迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取腹 腔液。 （5）取一张干净的载玻片，滴一滴腹腔液在载玻片上， 盖上盖玻片，显微镜下检查。
四 实验作业和思考题
实验六 小鼠巨噬细胞吞噬的观察
一、实验目的：
通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验，
了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。
了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。
二、实验原理：
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细
胞，具有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中
，在机体的非特异免疫功能中起着重要的作用。当病
原微生物或其他异物侵入机体时，能招 动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附 在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸
出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在
细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶 体，把病原体杀死，异物消化分解。

小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。

方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。

结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。

结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。

【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。

巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。

巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。

1 材料与方法1.1 实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。

1.2 主要试剂6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。

1.3 主要仪器 Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。

1.4 材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。

1.5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。

48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。

30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min 8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。

吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞1.6 细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。

吞噬速率测定
通过定量分析，计算出巨噬细胞的吞 噬速率，结果表明吞噬速率与细胞活 性呈正相关。
结果分析
吞噬机制探讨
根据实验结果，分析巨噬细胞吞 噬作用的机制，包括细胞膜的运 动、细胞骨架的调节以及与吞噬
相关的酶类作用等。
吞噬与免疫关系
探讨巨噬细胞吞噬作用与免疫系统 的关系，分析其在机体防御和炎症 反应中的作用。
利用荧光物质标记细胞或 外来物质，以便在显微镜 下观察和追踪。
细胞培养技术
在体外培养巨噬细胞，以 便观察其吞噬行为。
显微观察技术
通过显微镜观察巨噬细胞 吞噬现象，记录并分析实 验结果。
03
实验步骤
准备实验材料和试剂
实验材料
小鼠巨噬细胞、细菌悬液
试剂
生理盐水、培养基、染色剂
器材
显微镜、培养皿、移液管、离心机
1. 用染色剂对细胞进 行染色。
步骤三：染色与观察
实验操作流程
01 2. 在显微镜下观察并记录吞噬现象，如吞 噬数量、吞噬程度等。
02
步骤四：数据记录与处理
03
1. 详细记录实验数据，包括吞噬数量、吞 噬程度等。
04
2. 对实验数据进行统计分析，得出结论。
数据记录和处理
01
使用表格或电子表格记录每组实验数据。
学习并掌握相关实验技术和方法
通过本实验，学生将学习并掌握相关的实验技术和方法，如细胞培养、显微镜观 察、染色等技术。这些技术是生物学和医学领域中常用的基本技能，对于学生未 来的学习和工作具有重要意义。
通过实践操作，学生可以加深对相关理论知识的理解，提高实验操作能力和科学 探究能力。此外，本实验还可以为学生提供实践经验，为后续的课程和科研工作 打下基础。

实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验一实验目的1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程二基本原理细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。

巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。

吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。

三实验用品1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2．试剂：0.9%生理盐水；可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。

（6%淀粉中含0.3%台盼蓝）3．材料：小白鼠；0.5%鸡红细胞悬液四实验步骤1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。

2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。

3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。

4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死）。

5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。

6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。

7. 观察时，将视野调暗。

在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。

鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。

而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起（伪足），细胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。

变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬吞噬鸡红细胞的过程。

实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察姓名：李思露学号：131140040一、 实验目的1. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；2. 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法二、 实验原理吞噬作用也称为胞吞作用（cellular eating ），指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质（直径一般大于250mm ）的过程。

许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。

不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能强弱的重要反映。

吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。

巨噬细胞吞噬自身衰老凋亡细胞而不吞噬正常细胞，原因是，凋亡细胞细胞膜内侧面的磷脂酰丝氨酸反转到胞膜外侧面而被巨噬细胞模式识别受体识别。

吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映。

吞噬百分率＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100％吞噬指数＝吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数内吞内吞体吞噬溶酶体胞吐三、实验材料、试剂及器材（一）材料：1.健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL。

2.抗凝鸡血（二）试剂:1.4%淀粉肉汤2.D-Hanks液3.0.85％生理盐水4.180IU/mL肝素钠生理盐水溶液（三）用品普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃）、5mL一次性注射器、10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验操作1.巨噬细胞收集：脱颈处死小鼠；腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
实验目的：
本实验的主要目的是观察小鼠腹腔巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬作用并初步探究巨噬细胞的吞噬过程及机制。

实验材料：
1. 胶体金溶液；
2. 无菌生理盐水；
3. 酶消化试剂；
5. 显微镜和激光共聚焦显微镜。

实验步骤：
1. 将腹腔巨噬细胞准备好，收集细胞的方法可以在Gibco™血清教育中心找到。

2. 将100微升的胶体金颗粒溶液加入小鼠巨噬细胞的培养基中。

3. 将培养基加入培养箱中，并调节适当的条件，使细胞生长。

4. 观察并拍摄巨噬细胞吞噬胶体金颗粒的过程。

5. 经过一段时间后，将巨噬细胞用生理盐水洗涤几次，以去除吞噬的颗粒和其他杂质。

6. 对巨噬细胞进行显微镜观察，并用激光共聚焦显微镜观察细胞的粒饱和度，探究吞噬过程中的机制。

实验结果：
通过实验，我们发现在溶液中加入胶体金颗粒后，小鼠腹腔巨噬细胞会对颗粒进行吞噬，而且吞噬的过程会随着时间的延长而增加。

在观察吞噬过程时，我们发现颗粒先进入到巨噬细胞的液泡内，液泡随后与溶质相合并，颗粒进入到细胞内部。

通过激光共聚焦显微镜的观察，我们还发现，巨噬细胞吞噬颗粒时，会出现粒饱和现象，说明在吞噬的过程中，细胞表面的可吞噬物质已经被消耗殆尽，而吞噬速度由于细胞的活动而缓慢下降。

结论：
细胞吞噬是一种重要的细胞生理过程，对于身体的免疫防御系统具有重要意义。

而小鼠腹腔巨噬细胞具有良好的吞噬能力，对于异物、死亡细胞和各种病原体的清除起到了重要作用。

此次实验成功观察了巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬过程，并初步探究了其机制，这对于深入了解细胞免疫机制具有重要意义。

一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬过程，加深对细胞吞噬作用机制的理解。

2. 测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，评估其非特异性免疫功能。

二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质的过程。

在高等动物体内，巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用是非特异性免疫的重要组成部分。

巨噬细胞能够识别并结合病原体、凋亡细胞及其它异物，通过胞吞作用将其吞噬并消化。

三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠若干。

2. 仪器：显微镜、离心机、无菌操作台等。

3. 试剂：大肠杆菌悬液、生理盐水、甲醛固定液、姬姆萨染液等。

四、实验步骤1. 制备腹腔巨噬细胞悬液：- 将小鼠麻醉后，无菌操作下取其腹腔液。

- 将腹腔液离心，弃去上清液，沉淀即为腹腔巨噬细胞。

- 用生理盐水洗涤腹腔巨噬细胞，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为纯化的腹腔巨噬细胞悬液。

2. 制备大肠杆菌悬液：- 将大肠杆菌接种于生理盐水中，37℃培养过夜。

- 将过夜培养的大肠杆菌用生理盐水洗涤，重复洗涤2次，弃去上清液，沉淀即为大肠杆菌悬液。

3. 实验分组：- 将纯化的腹腔巨噬细胞悬液分为实验组和对照组。

- 实验组：将腹腔巨噬细胞悬液与大肠杆菌悬液混合，37℃孵育30分钟。

- 对照组：将腹腔巨噬细胞悬液与生理盐水混合，37℃孵育30分钟。

4. 制片与染色：- 将实验组和对照组的细胞悬液分别制片。

- 用姬姆萨染液染色，显微镜下观察细胞形态和吞噬现象。

5. 结果分析：- 计算吞噬百分率和吞噬指数。

- 吞噬百分率 = 吞噬有细菌的巨噬细胞数 / 巨噬细胞总数× 100%- 吞噬指数 = 吞噬的细菌总数 / 吞噬有细菌的巨噬细胞数五、实验结果实验结果显示，实验组巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组，表明小鼠腹腔巨噬细胞具有较强的吞噬功能。

六、讨论1. 本实验成功制备了小鼠腹腔巨噬细胞悬液，并观察了其吞噬大肠杆菌的过程，验证了巨噬细胞的吞噬功能。

实验目的：1. 观察并理解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的全过程。

2. 深入了解巨噬细胞在非特异性免疫中的作用。

3. 学习巨噬细胞吞噬功能的测定方法。

实验原理：吞噬作用，也称为胞吞作用，是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质的过程。

在高等动物体内，巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用是非特异性免疫的重要组成部分。

巨噬细胞表面有识别病原体、凋亡细胞及其它异物的受体，可以识别并结合这些物质，进而引发吞噬作用。

实验材料与试剂：1. 实验动物：清洁级小鼠2. 仪器设备：显微镜、注射器、载玻片、盖玻片、生理盐水、鸡红细胞悬液、台盼蓝染色液等实验步骤：1. 选取健康清洁级小鼠，将其麻醉后进行腹部手术，收集腹腔巨噬细胞。

2. 将收集到的腹腔巨噬细胞与鸡红细胞悬液混合，在显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。

3. 使用台盼蓝染色液对吞噬细胞进行染色，观察吞噬细胞内台盼蓝颗粒的分布情况。

4. 对吞噬细胞进行计数，计算吞噬百分率和吞噬指数。

实验结果：1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞能够吞噬鸡红细胞，形成吞噬体。

2. 使用台盼蓝染色后，吞噬细胞内台盼蓝颗粒主要分布在溶酶体中。

3. 通过计数，得到吞噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。

结果分析：1. 巨噬细胞在非特异性免疫中发挥着重要作用，能够吞噬病原体、凋亡细胞及其它异物，从而清除体内的有害物质。

2. 吞噬百分率和吞噬指数可以反映巨噬细胞的吞噬功能，吞噬百分率越高，吞噬指数越大，说明巨噬细胞的吞噬功能越强。

实验讨论：1. 巨噬细胞的吞噬功能受到多种因素的影响，如细胞表面受体的种类和数量、吞噬细胞的活化状态等。

2. 本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程，加深了对巨噬细胞吞噬作用的理解。

3. 吞噬功能的测定方法在免疫学研究中具有重要意义，可以用于评估机体免疫功能的变化。

实验结论：通过本次实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活动，加深了对巨噬细胞吞噬作用的理解，并掌握了巨噬细胞吞噬功能的测定方法。

巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。

2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。

3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。

二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。

连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。

活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。

巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。

是一种溶酶体染色的方法。

3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。

b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。

c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。

按摩小鼠腹部。

d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。

e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。

g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。

2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。

注意避免玻片液体干涸。

五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。