乳中三聚氰胺的测定

乳品中三聚氰胺快速检测解决方案

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来源：《食品安全导刊》 2010年第11期

张德红 扶胜 杜祥乐 北京望尔生物技术有限公司

自2008年三聚氰胺事件爆发以来，乳品安全直备受关注。为了加大对乳品行业的监管力度，使中国乳品行业迅速恢复元气，相关职能部、]出台了多项措施：在质量控制方面，要求对奶源做到严格把关，有效提高乳品质量安全系数。因此，在奶站收奶环节，企业对原料奶的检测把关显得尤为重要，同时为保证牛奶不发生腐败变质的现象，必须在最短的时间内对其进行检测并立即入罐冷藏，这些都对乳品的检测技术提出了挑战。常规的三聚氰胺残留量检测方法主要有液相色谱／质谱法(LC-MS)、高效液相色谱(HPLC)、液相色谱串联质谱( LC-MS-MS)等，这些方法因为存在仪器设备昂贵、检测过程繁琐、检测时间太长和对检验人员的技能要求高等局限，所以不适合现场监控和大量样品的筛查，在鲜奶收购环节使用不现实。鉴于此，如何选择 种快速、低成本的检测方法，构建从奶站、企业到政府监管的安全检测网络已成为当前迫切需要解决的问题。

目前，快速筛查技术主要有两大类：生物分析技术和化学分析技术。生物分析技术又包含免疫学方法，该方法具有检出限低、准确性好、灵敏度高、重现性好等特点，是现在和未来快速筛查技术发展的主流技术，非常适合对原料乳的快速检测。依托此项技术，北京望尔生物技术有限公司（以下简称北京望尔）开发出三聚氰胺酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡等检测产品，为广大乳品企业及相关机构提供了有效的三聚氰胺快速检测方案。

三聚氰胺试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体，在加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。 牛奶样本前处理：吸取牛奶液体400uL加入800uL提取液，涡动，取上层清液10 0111加入500uL稀释液混匀用于检测。

高效液相色谱(HPLC-UV)法测定奶粉中三聚氰胺的含量

一、实验目的：

测量奶粉中三聚氰胺的含量是否达标。

二、仪器：

高效液相色谱仪，离心机，固相萃取装置，柱温箱，紫外检测器，C18柱，超声波清洗器，pH 计，电子天平，氮气吹干仪，涡旋混合器；5mL移液管1支,1mL刻度移液管1支，25mL容量瓶1个，100mL容量瓶6个，100mL烧杯1个，微量进样器一支。

三、试剂：

三聚氰胺标准品，1%三氯乙酸，氨水，柠檬酸，庚烷磺酸钠（色谱纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），二次水，甲醇水溶液（准确量取50mL甲醇和50mL水，混合备用），5%氨化甲醇（量取5mL氨水和95mL甲醇混合备用），离子对缓冲溶液（准确称取柠檬酸和庚烷磺酸钠加水溶解后调节pH=3，定容至1L备用），三聚氰胺储备液（准确称取100mg三聚氰胺，在100mL容量瓶中用甲醇水溶液定容），净化柱（固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯），氮气。

四、实验步骤：

1.样品预处理：

准确称取2g样品，用10mL 1%三氯乙酸溶解后转移至25ml容量瓶中，乙腈定容。超声提取10分钟后离心，干过滤。用5mL移液管准确移取5mL过滤后的溶液过净化柱，依次用3mL水和3mL甲醇洗涤并抽干后后用约6mL 5%氨化甲醇洗脱。洗脱液用氮气吹干后用1mL流动相定容，涡旋混合1分钟后经 μm有机相滤膜过滤后进样。

2.色谱条件：

C18 色谱柱（150 mm× mm，5 μm），以离子对缓冲溶液+乙腈（85+15）作为流动相，流量为 ml/min，柱温为35 ℃，检测波长为240 nm，进样量为20 μl。

3. 标准曲线的绘制：

将三聚氰胺标准储备液（×10^3 mg/L）用甲醇-水溶液（1+1） 逐级稀释得到浓度为、、、、、 mg/L的标准系列溶液，以峰面积（y）对浓度（x）绘制标准曲线。

4.回收率实验：

称取2g样品，用10mL 1%三氯乙酸溶解后转移至25ml容量瓶中，用5mL刻度移液管准确移取 10μg/mL三聚氰胺溶液至容量瓶中，后续处理与1相同，进样。测量回收率。

乳与乳制品三聚氰胺检测方法的探讨

____梁宝爱（山西省食品质量监督检验中心）

三聚氰胺(cyanuramide)，分子式C3H6N6，又称蜜胺，2，4，6一三氩基一1，3，5一三嚎，白色单斜棱晶。三聚氰胺作为一种化工原料，在塑料，涂料，粘合剂等行业广泛应用，三聚氰胺是某些农药和化肥的原料和代谢产物，也是食品包装材料的原料。根据世界卫生组织 专家估计和我国已有检测结果，采用三聚氰胺—甲醛树脂制作的食品餐具在与食品接触时会有微量的三聚氰胺迁移出来，因此，三聚氰胺在环境中存在。以上这些因素均可导致食品中可能含有微量三聚氰胺。三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加剂，严禁人为添加到食品中。人为在食品中添加三聚氰胺是一种违法行为。鹿牌婴幼儿奶粉事件"的发生就是不法分子在原料乳中 掺水，以增加重量牟取非法利益的后果。奶掺水后会造 成原料乳中蛋白质含量下降，为掩盖非法行为，虚增牛 奶中蛋白质检出量，不法分子人为在原料乳中加入三聚 氰胺。临床调查发现，三聚氰胺对人体的影响是有可能 在泌尿系统形成泥沙样结晶或结石。如果摄入的三聚氰 胺量大，时间长。可能会在泌尿系统如膀胱和肾脏形成 泥沙样结晶或结石。由于婴幼儿生理结构和饮食结构与 成人明显不同，含三聚氰胺的奶粉对不同人群健康的影 响也不同。婴幼儿比较容易引起泌尿系统结石，而成人 摄入三聚氰胺引起泌尿系统结石的可能性很小。 2008年10月7日，卫生部等5部门联合发布公告， 确定了乳与乳制品中三聚氰胺临时管理限量值，即婴幼 儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1 mg/kg，液态奶(包 括原料乳)，奶粉，其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5 mg/kg。目前，我国对三聚氰胺检测规定了3种方法，分别是高效液相色谱法(HPLC)，气相色谱一质谱 法 (GC—MS) 和液相色谱一质谱/质谱法

(LC—MS/MS)，其定量限(精确度)分别为2 mg/kg，0.05 mg/kg，0.01 mg/kg。只要检验样品中三聚氰胺真实含量在检测方法定量限以上，检测方法就能准确检出。企业和监管机构应根据检测对象及临时管理限量值要求，选用与其相适应的检测方法。但实验发现，样品前处理十分关键，直接影响其准确度及时效性。下面就高效液 相色谱法(HPLC)的3种前处理方法进行比较，供各实验室参考。

牛奶中三聚氰胺的检测方法

牛奶是我们日常生活中常见的食品之一，而牛奶中是否含有三聚氰胺成为了人们关注的焦点。三聚氰胺是一种有毒化学物质，长期摄入可能对人体健康造成危害，因此对牛奶中三聚氰胺的检测成为了必不可少的工作。

一、高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）。

HPLC-MS技术是目前较为常用的牛奶中三聚氰胺检测方法之一。该技术结合了高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）两种分析手段，能够对样品中的三聚氰胺进行高效、快速、准确的检测。首先通过色谱柱将样品中的混合物分离，然后再通过质谱进行定性和定量分析，能够有效地避免其他成分对三聚氰胺检测的干扰，提高了检测的准确性和可靠性。

二、酶联免疫吸附法（ELISA）。

ELISA法是一种常用的免疫学分析方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。该方法利用酶标记抗体与待检测物发生特异性反应，再通过底物显色从而对三聚氰胺进行定性或定量检测。ELISA法具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，但也存在着对样品的预处理要求较为严格、易受其他成分干扰等缺点。

三、红外光谱法。

红外光谱法是一种基于样品对红外辐射的吸收、散射、透射等现象进行分析的方法，也可以用于牛奶中三聚氰胺的检测。通过测定样品在红外光谱区的吸收峰，可以得到样品中三聚氰胺的含量信息。该方法操作简便、分析速度快，但对仪器的精度要求较高，且受样品基质的影响较大。

四、原子吸收光谱法。

原子吸收光谱法是一种常用的重金属元素分析方法，也可以用于三聚氰胺的检测。该方法通过样品中三聚氰胺原子吸收光谱的特征进行定性和定量分析，具有操作简便、分析速度快的优点。但是该方法对样品的预处理要求较高，且仪器设备成本较高。

在进行牛奶中三聚氰胺检测时，应根据实际情况选择合适的检测方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。同时，加强对牛奶生产企业的监督检查，提高牛奶质量安全水平，对保障消费者的健康具有重要意义。