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乌头注射液对膝关节骨性关节炎模型兔体内COMP、p53蛋白、BMP-2等因子的影响作者：柳晓峰安玉芳崔立建来源：《中国药房》2020年第06期摘要目的：考察乌头注射液对膝关节骨性关节炎（KOA）模型兔体内软骨寡聚基质蛋白（COMP）、抑癌基因p53编码蛋白（p53蛋白）、骨形成蛋白2（BMP-2）等因子的影响，探讨该注射液治疗KOA的作用机制。
方法：将24只兔随机分为空白组、模型组、玻璃酸钠组、乌头注射液组，每组6只。
除空白组兔不作任何处理外，分别在第1、4、7天时于模型组、玻璃酸钠组、乌头注射液组兔关节腔注射2%木瓜蛋白酶溶液-0.03 mol/L L-半胱氨酸溶液以建立KOA模型;在造模成功后第1、4、7天时，分别于其关节腔注射生理盐水、玻璃酸钠注射液、乌头注射液各0.1 mL/kg。
上述4组兔分别在给药结束后抽取关节液，采用酶联免疫吸附法测定COMP和p53蛋白含量;肉眼观察兔膝关节软骨形态;取膝关节软骨组织，采用苏木精-伊红法染色后于光镜下观察组织形态学改变并进行Mankin评分;采用PV二步法制作膝关节软骨组织的免疫组化标本，检测BMP-2的相对表达量。
结果：与空白组比较，模型组兔膝关节软骨边缘破坏，软骨面有缺损;组织形态学观察结果显示，膝关节软骨组织结构明显不规则，软骨细胞可见明显扩大，有白泡样改变，细胞间分布紊乱，且Mankin评分显著升高（P0.05）。
结论：乌头注射液具有改善KOA模型兔膝关节滑膜炎症、延缓关节软骨退变、保护关节的作用;其机制可能与抑制COMP分泌、降低p53蛋白表达、促进BMP-2释放有关。
关键词乌头注射液;膝关节骨性关节炎;软骨寡聚基质蛋白;p53蛋白;骨形态发生蛋白2;兔ABSTRACT OBJECTIVE： To investigate the effects of Aconitum injection on cartilage oligomeric matrix protein（COMP）， encoded protein by tumor suppressor gene p53 （p53 protein） and bone morphogenetic protein 2（BMP-2） in knee osteoarthritis （KOA） model rabbit， so as to explore the mechanism of the injection in the treatment of KOA. METHODS：Totally 24 rabbits were randomly divided into blank group，model group， Sodium hyaluronate group and Aconitum injection group， with 6 rabbits in each group. KOA model was established by injecting 2% papain-0.03 mol/L L-cysteine solution into the articular cavity of rabbits in model group， sodium hyaluronate group and Aconitum injection group at the 1st， 4th and 7th day，respectively， except the blank group. At the 1st， 4th and 7th day after modeling succeeded， 0.1 mL/kg of normal saline， Sodium hyaluronate injection and Aconitum injection were injected into the articular cavity of rabbits， respectively. The cartilage tissue of knee joint was taken from above 4 groups， and the contents of COMP and p53 protein were detected by ELISA. The cartilage morphology of rabbit knee joint was observed by naked eye. The cartilage of the knee joint was collected and stained by HE staining， and then the histomorphology changes were observed by light microscope; Mankin scoring was conducted. The two-step method of PV was used to make the immunohistochemical specimens of knee joint cartilage， and the relative expression of BMP-2 was detected. RESULTS： Compared with blank group， the edge of cartilage was damaged and the cartilage surface was damaged in the model group. The results of histomorphology observation showed that the joint tissue structure was obviously irregular， the distribution of chondrocytes was disordered with morphological changes， and the Mankin score was significantly increased（P0.05）. CONCLUSIONS： Aconitum injection can improve synovitis inflammation，delay articular cartilage degeneration，promote cartilage repair and protect joints of KOA model rabbits.The mechanism may be related to inhibiting COMP secretion， decreasing p53 protein expression and promoting BMP-2 release.KEYWORDS Aconitum injection; Knee osteoarthritis; Cartilage oligomeric matrix protein; p53 protein; Bone morphogenetic protein 2; Rabbit骨性关节炎（OA）又称为退行性关节炎，是一种软骨退变损伤、关节边缘和软骨下骨反应性增生的退行性病变，多以关节肿胀、疼痛、畸形、活动受限为主要临床表现[1]。
十味接骨药对家兔骨折骨细胞生长机理的实验研究【摘要】目的研究十味接骨药对家兔骨折骨细胞生长修复过程中骨痂中TGF-β1,羟脯氨酸、钙、磷;血清中碱性磷酸酶、钙、磷的变化和作用机理。
方法实验用健康日本大白兔81只5~6月龄造成双侧前肢0.7 cm横断性骨缺损,保留尺骨完整,并分成三组,对照组和实验组,空白组不用药,实验组给十味接骨药,对照组给骨折挫伤散。
2周、5周、8周分别取材,观察十味接骨药对骨折修复的影响。
结果实验组骨痂中TGF-β1、HRP先升高后递减;血中骨痂中Ca、P峰值提前出现,血中ALP随骨生长逐渐升高。
与对照组相比较统计学*P＜0.01,**P＜0.001。
结论十味接骨药对骨折的愈合修复有显著促进作用。
【Abstract】Objective To study the effect of SHI-WEI-JIE-GU-YAO in the healing process of fracture. Methods Eighty-one rabbits, aged 5-6 months, had been made experimental fractures at the middle shaft of the humerus bilaterally and divided into 3 groups randomly: the blank control group, fed with common forage; the experimental group, fed with SHI-WEI-JIE-GU-YAO additionally; the drug control group, fed with GU-ZHE-CUO-SHANG-SAN. The specimens were taken out 2, 5, and 8 weeks after operation. The contents of TGF-β1、hydroxyproline、calcium、phosphorus in callus and alkaline phosphatase、calcium、phosphorus in serum were tested respectively. Results All the data showed that TGF-β1, hydroxyproline in calluses of experimental group were raised firstly and descended afterwards, the peak value of calcium and phosphorus appeared in advance compared with other groups (P ＜0.01); alkaline phosphatase (ALP) raised gradually in concomitancy with the growth of the calluses and the peak value of calcium and phosphorus appeared in advance compared with other groups in serum (P＜0.001).Conclusion SHI-WEI-JIE-GU-YAO is able to improve the process of fracture healing.【Key words】Fracture healing; Bone cell growth ;SHI-WEI-JIE-GU-YAO本院采用活血化瘀加合成微量元素(钙、锌、锰、锡、铜等组成)十味接骨药,临床用于治疗骨折和延迟骨折愈合取得良好的疗效。
活血补肾方药对家兔创伤性骨折愈合的实验研究的开题报告一、选题背景及研究意义家兔是人类经常使用的实验动物之一。
由于其生殖周期短、营养需要少等优势，以及与人类生理系统相似的特点，因此家兔的临床应用价值较高。
在家兔饲养过程中，由于环境、饲料、运动等原因，存在着创伤性骨折的情况。
而创伤性骨折会给家兔的生活及实验带来不小的影响，因此如何有效地促进其愈合，尤为重要。
目前常规的骨折治疗方法有保守治疗和手术治疗，但对于家兔而言，手术治疗的费用较高、难度较大，保守治疗也存在着往往时间周期长、容易出现不骨愈合等弊端。
因此，寻找一种治疗骨折的新方法，显得尤为重要。
据理论论证，活血补肾方药对于创伤性骨折愈合辅助治疗有着积极的作用。
因此，运用活血补肾方药作为新型的骨折辅助治疗方法，进行实验研究具有积极的研究意义。
二、研究方法及流程1.实验对象选择：选择30只体重在2~3kg的家兔作为实验对象，按照随机数表方法分成两组，对照组和实验组。
2.建立创伤性骨折模型：为每只实验对象制造创伤性骨折，手术方法为平跖骨后方行长约2cm的皮肤横向切口取样，以锤打方式制造骨折。
每只家兔制造同一类骨折。
3.治疗方案制定：将实验组分为两组，即给予活血补肾方药治疗组和生理盐水对照组。
活血补肾方药组采用连续口服给药，每天2次，每次0.2ml/kg.d；生理盐水对照组给予相应剂量的生理盐水，同样采用每天2次的方式口服。
4.实验指标测定：观察并记录每只家兔骨折部位的红肿状态及伤口愈合情况，检测血液中TGF-β1和FGF-2水平的变化，在实验结束后对每只家兔进行骨钙素定量测定，比较两组之间的差异。
三、研究预期成果通过该研究，我们预计能够得出以下结论：1. 活血补肾方药治疗组的家兔骨折愈合时间将较对照组缩短。
2. 活血补肾方药治疗组的家兔伤口愈合情况更好，红肿现象较轻。
3. 活血补肾方药治疗组的家兔骨钙素定量测定结果将更高。
通过以上结论，我们可以初步验证活血补肾方药在促进家兔创伤性骨折愈合中的疗效，拓宽新型骨折治疗的新途径，为临床应用以及科研积累经验。
活血补肾方剂对家兔创伤性骨折愈合的实验研究的开题报告一、研究背景家兔是广泛应用于生物医学科学研究的实验动物，其骨折模型是研究创伤性骨折愈合的重要手段。
目前，临床上应用的药物主要以激素和抗生素为主，但随着人们对中药的认识逐渐加深，越来越多的中药也被应用于临床医疗和科学研究中。
活血补肾方剂是一种具有促进血液循环和促进骨骼生长的中药方剂，对创伤性骨折愈合可能具有积极的作用。
因此，本研究旨在探讨活血补肾方剂对家兔创伤性骨折愈合的实验研究。
二、研究目的本研究旨在探讨活血补肾方剂对家兔创伤性骨折愈合的实验研究。
通过对比不同剂量的活血补肾方剂对骨折家兔的生化指标、组织学变化及行为学表现的影响，探讨活血补肾方剂对家兔创伤性骨折愈合的效果及其作用机制。
三、研究内容及方法1.动物实验选用健康雄性家兔50只，随机分为5组，每组10只。
其中，第一组为对照组，不予任何处理；第二组为模型组，采用压迫法制造创伤性骨折模型；第三组为低剂量组，创伤后口服活血补肾方剂；第四组为中剂量组，创伤后口服活血补肾方剂；第五组为高剂量组，创伤后口服活血补肾方剂。
对照组、模型组、实验组动物每日给予相等量的蒸馏水。
2.生化指标测定观察各组动物的血清中的天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）及钙、磷含量，并比较各组差异。
3.组织学变化观察于创伤后2、4、6周时分别选取各组动物骨折处进行组织学检查，比较各组之间的组织学变化及差异。
4.行为学表现评估于创伤后3、5周时分别采用大鼠捻挫伤模型评估各组动物的痛觉反应和运动功能恢复情况。
四、研究意义本研究对于探索中药对创伤性骨折愈合的影响具有重要意义。
研究结果可为寻找更加有效的药物治疗和预防骨折提供新思路和依据，同时也可为国内中药研究提供实验依据。
一剂复方中药对家兔骨骼愈合的影响曲伟杰;李进军;王生奎【摘要】The pathways of Chinese herbal medicine in fracture healing are not very well understood. Therefore, the objective of the present study was to evaluate the effects of one compound Chinese herbal medicine on rabbits radius fracture healing using indexes(such as the serum Ca. P, serum ALP, and X-ray of bone fracture). 48 healthy mature rabbits were selected to build standard defect models, and randomly divided into experimental groups and control groups. The control rabbits were given standard diet. Experimental rabbits were fed with standard diet plus Chinese herbal medicine (2. 5 g/kg) every day. The detection was performed on the 2,4,6 and 8 weeks after operation. The results of the study showed that the level of serum Ca, P, the activity of AKP and X-ray appearances for taking Chinese herbal medicine after fracture were significantly higher than that of the control. In conclusion, composite Chinese herbs might shorten the time to union, improve the quality of fracture healing and be beneficial to the fracture healing.%复方中药对骨折愈合的作用机制目前尚不明确,本试验通过观察复方中药对家兔桡骨骨折后血清钙、磷、碱性磷酸酶和X线影像学等指标的影响,分析该中药促骨愈合的效能及其可能作用机理.试验选用48只成年家兔,制成骨缺损标准模型,随机分为试验组和空白对照组,试验组每日在饲料中添加复方中药2.5 g/kg饲喂,对照组给予普通饲料.分别于术后2、4、6、8周进行生化指标和X线影像学检测.试验结果表明,试验组血清钙、血清磷、血清碱性磷酸酶及X线片评分骨折后明显高于对照组.该复方中药能缩短骨折愈合过程所需时间,提高骨折愈合质量,有利于骨折愈合.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)007【总页数】4页(P215-218)【关键词】中药;骨折愈合;家兔;血液生化指标;X线【作者】曲伟杰;李进军;王生奎【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南昆明650201【正文语种】中文【中图分类】S853.42骨折愈合为机体损伤后复杂有序的生物学修复过程(宋亚文等,2005)。
麝香乌龙丸对兔实验骨折BMD、BMC、BMP的作用研究3王志文 张爱国 袁 强 赵文毅 孙丽丽 李曙光华北煤炭医学院附属医院(河北唐山063000) 摘要:目的:探讨麝香乌龙丸对兔实验骨折骨密度(BM D)、骨矿物质含量(BMC)、骨形态发生蛋白(BMP)的调节作用。
方法:120只日本大耳白兔制成横断骨折模型,随机分为模型对照组、麝香乌龙丸组、骨折挫伤散组,灌胃给药。
分别在骨折后1w、2w、3w、4w时每组各抽取10只进行骨痂BM D、BMC、BMP检测。
结果:麝香乌龙丸可调节BM D、BMC、BMP的水平,与模型对照组和骨折挫伤散组比较有统计学意义。
结论:麝香乌龙丸能促进骨痂的矿化,促进骨源性生长因子的分泌,缩短骨愈合时间,提高骨愈合质量,提示麝香乌龙丸能促进骨折愈合。
关键词:麝香乌龙丸 实验骨折 BM D BMC BMP 中图分类号:R28515 文献标识码:A 文章编号:100023649(2006)1220011202 麝香乌龙丸是在挖掘宋・许叔微《普济本事方》“麝香丸”的基础上,经多年临床应用和反复制剂工艺、质控标准研究而制成的纯中药制剂。
临床治疗类风湿性关节炎取得较好疗效[1],同时又发现该制剂有促进骨折愈合作用。
为求得实验依据,对大耳白兔横断骨折模型骨痂BM D、BMC、BMP进行了初步实验研究,结果如下。
1 实验材料与方法111 药物 麝香乌龙丸:华北煤炭医学院附属医院研制,由人工麝香、制川乌、地龙、全蝎等药物组成,批准文号为唐卫药剂字(93)普20032104(现为:冀药制字Z20051581)。
骨折挫伤散:哈尔滨华雨制药有限公司生产,批号为ZZ254322黑卫药准字(1989第3001272)。
112 动物 健康5月龄日本大耳白兔120只(由华北煤炭医学院实验动物中心提供),雌雄各半,体重218～312kg,合格证号:京动字0510062。
于室温分笼饲养,按顿供给标准颗粒饲料(由华北煤炭医学院实验动物中心提供),自由饮水。
113 仪器 计算机数字化X线成像系统(CR), NOR LANDX36骨密度仪,HPI AS2100高清晰度彩色病理图文分析系统(中国武汉)。
114 实验方法11411 造模 120只日本大耳白兔常规左膝周脱毛、碘伏消毒,闭合穿入2mm克氏针后,使用台钳样骨折器于左小腿中段制成闭合横断骨折模型[2],查CR 片,确定模型成功。
11412 动物分组 根据动物性别,随机分成三组: A1模型对照组,B1麝香乌龙丸组,C1骨折挫伤散组。
每组动物40只,雌雄各半。
11413 给药 B、C组每日1次,按成人每日每千克体重用药量的10倍剂量作为日本大耳兔每日每千克体重的等效剂量[3](B组110g/kg,C组01725g/kg),溶于5ml生理盐水中经胃管灌入;A组经胃管注入等量生理盐水。
各组动物单笼、常规饲养,自由饮水,待取材。
11414 标本采集及处理 分别于骨折后按1w、2w、3w、4w各时点每组随机抽取兔10只,雌雄各半,气栓法处死,行CR检查,拔除克氏针后以骨密度仪测定骨痂BM D;切取各兔骨痂制作免疫组化切片,采用病理图文分析系统检测BMP。
115 数据统计 A、B、C各组间及组内各时间点结果用 x±s表示,运用SPSS1115统计学软件进行各检测指标的单因素方差分析。
2 结 果211 骨密度(BM D) 三组BM D值进行性升高,均于3w升高达高峰,B组尤著,4w似有所减低。
1w 时三组值无差异,2w、3w、4w时B、C组均较A组值明显增高(P<0105),且3w、4w时B组较C组明显为高(P<0105)。
各组内各周间变化,A组3w、4w较1w增高(P<0101),4w较3w时为低(P< 0101);B、C组2w、3w、4w与1w间有差异(P< 0101),3w、4w间无差异。
结果见表1。
3 基金项目:河北省中医药管理局科研课题(编号:2004047)ated with the survival of ectopic stromal cells in endometriosis endocrinol[J]1 Reprod Biol Endocrinol,2004,2(1):69 [4]G oumenou AG,M atalliotakis I M,T zardi M,et al1Apoptosis and differential expression of apoptosis2related proteins in endometriotic glandular and stromal cells[J]1J S oc G ynecol Invest,2004,11(5):318～322 [5]M cLaren J,Prentice A,Charnock2Jones DS,et al1Immunolocalization of the apoptosis regulating proteins Bcl22and Bax in hu2 man endometrium and is olated peritoneal fluid macrophages in endometriosis [J]1Hum Reprod,1997,12(1):146～152 [6]I offe OB,Papadim itriou JC,Drachenberg C B1C orrelation of pro2 liferation indices,apoptosis,and related oncogene expression(bcl22and cerbB22)and p53in proliferative,hyperplastic,and malignant endometrium [J]1Hum Pathol,1998,29(10):1150～1159 [7]Suganuma N,Nawa A,Furuhashi M1Apoptosis in endometriosis [J]1Nippon Rinsho,2001,59(Suppl1):77～80(收稿日期 2006208226)・11・2006年第24卷第12期V ol124,N o112,2006四 川 中 医Journal of S ichuan of T raditional Chinese Medicine表1 各组不同时间点骨痂BMD 值( x ±s ,g/cm 2)组别动物数1w 2w 3w 4w A 1001335±010*******±010*******±010*******±01010B 1001345±010*******±010343301537±0101133△01500±0101433△△C1001350±0102701450±010133301476±010********±0101633 注:B 、C 组与A 组比较:3P <0105,33P <0101;B 组与C 组比较:△P <0105,△△P <0101212 骨矿物质含量(BMC ) 三组BMC 值也呈进行性升高,3w 均达高峰,B 组尤著,至4w 略有减低。
1w 时三组值无差异,2w 、3w 、4w 时B 、C 组均较A 组值明显增高(P <0101),且B 、C 组间值无差异(P >0105)。
观察各组内各周间变化,A 组2w 、3w 、4w 与1w ,3w 与4w 间均有差异(P <0101);B 、C 组2w 、3w 、4w 与1w 间有差异(P <0101),3w 、4w 间无差异(P >0105)。
结果见表2。
表2 各组不同时间点骨痂BMC 值( x ±s ,g)组别动物数1w 2w 3w 4w A 1001549±010*******±010*******±010*******±01010B 1001623±0114401977±010693311626±012343311169±0126733C1001614±0108901982±010223311516±012193311127±0105933 注:B 、C 组与A 组比较:33P <0101213 骨形态发生蛋白(BMP ) 1w 、2w 时B 、C 组明显高于A 组(P <0101),B 组高于C 组(P <0101),B 、C 组BMP 高峰出现于第2w ,A 组出现于第3w ,且B 、C 组间有差异。
4w 时,各组值进一步下降,但A 与B 组仍无差异(P >0105)。
结果见表3、表4。
表3 各组不同时间点骨痂中BMP 平均光密度值( x ±s ,/um 2)组别动物数1w 2w 3w 4w A 10011382±010*********±010*********±010*********±010084B 10012898±01020333△△014446±01013833△△013731±010*********±010099△△C10012355±01011333013836±01019633013446±01015333012879±01022533 注:B 、C 组与A 组比较:33P <0101;B 组与C 组比较:△△P <0101表4 各组不同时间点骨痂中BMP 平均积分光密度值( x ±s ,/102um 2)组别动物数1w 2w 3w 4w A 10414080±016077616780±013451817120±012249714420±015826B 10910300±01675133△△1016618±01637833△△810034±01365933△△615200±014332C10710540±01723833818040±01416633619940±01278633518100±1104063 注:B 、C 组与A 组比较:3P <0105,33P <0101;B 组与C 组比较:△△P <01013 讨 论 祖国医学认为骨愈合是一个“瘀去、新生、骨合”的过程,其实质就是机体调动一切积极因素,参与骨与周围组织损伤修复的过程。
