药物分析讲稿-第十一章 维生素类药物的分析
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---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 药物分析讲稿-第十一章维生素类药物的分析第十一章维生素类药物的分析维生素是维持人体正常代谢功能所必需的生物活性物质。
从结构上看,它们并非同属于一类化合物。
其中,有些是醇、酚或酯,有些则是醛、胺或酸类,它们各自具有不同的理化性质和生理作用。
关于维生素的分类,迄今为止,仍沿用其在油脂中和水中的溶解度不同而分为脂溶性和水溶性两大类。
其中,属于脂溶性的有维生素 A、D、E 和 K 等;水溶性的有维生素 B 族、烟酸、泛酸、叶酸及抗坏血酸等。
本类药物的分析方法大多基于其生物特性及理化性质,可分别采用生物、微生物、化学和物理化学的方法进行分析,但目前常用的分析方法是化学和物理化学法。
本章不拟对所有的维生素类药物的分析方法逐一叙述,而只着重介绍维生素 A、E、B1 和 C 四种维生素药物的鉴别、检查和含量测定。
第一节维生素 A 的分析维生素 A(vitamin A),通常是指维生素 A1(视黄醇,retinol)。
维生素 Al 是一种不饱和脂肪醇,在自然界中,其天然产物主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油(即鱼肝油),其含量高达600000 国际单位/克(U/g),但目前主要采用人工合成方法制取。
1 / 18从鱼肝油中提取的维生素 A 多为各种酯类的混合物,其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯(表 ll-1)。
表 ll-l 天然维生素 A 的主要组分《中国药典》收载的维生素 A,是人工合成的维生素 A 醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液,其制剂有维生素 A 胶丸、维生素 AD 胶丸和维生素 AD 滴剂三个品种。
一、结构与性质 (一)结构维生素 A 的结构为具有一个共轭多烯侧链的环己烯,因而具有许多立体异构体。
第十一章维生素类药物的分析维生素是维持人体正常代谢功能所必需的生物活性物质。
从结构上看,它们并非同属于一类化合物。
其中,有些是醇、酚或酯,有些则是醛、胺或酸类,它们各自具有不同的理化性质和生理作用。
关于维生素的分类,迄今为止,仍沿用其在油脂中和水中的溶解度不同而分为脂溶性和水溶性两大类。
其中,属于脂溶性的有维生素A、D、E和K等;水溶性的有维生素B族、烟酸、泛酸、叶酸及抗坏血酸等。
本类药物的分析方法大多基于其生物特性及理化性质,可分别采用生物、微生物、化学和物理化学的方法进行分析,但目前常用的分析方法是化学和物理化学法。
本章不拟对所有的维生素类药物的分析方法逐一叙述,而只着重介绍维生素A、E、B1和C四种维生素药物的鉴别、检查和含量测定。
第一节维生素A的分析维生素A(vitamin A),通常是指维生素A1(视黄醇,retinol)。
维生素Al是一种不饱和脂肪醇,在自然界中,其天然产物主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油(即鱼肝油),其含量高达600000国际单位/克(U/g),但目前主要采用人工合成方法制取。
从鱼肝油中提取的维生素A多为各种酯类的混合物,其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯(表ll-1)。
表ll-l天然维生素A的主要组分《中国药典》收载的维生素A,是人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液,其制剂有维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂三个品种。
一、结构与性质(一)结构维生素A的结构为具有一个共轭多烯侧链的环己烯,因而具有许多立体异构体。
天然维生素A主要是全反式维生素A,尚有多种其它异构体,它们具有相似的化学性质,但各具不同的光谱特性和生物效价(见表)。
维生素A及其异构体性质此外,鱼肝油中尚含有:去氢维生素A(Dehydroretinol,维生素A2),其生物效价仅为维生素A1的40%;去水维生素A(Anhydroretinol,维生素A3),其效价亦低于维生素A1;鲸醇(Kitol)系维生素A醇的二聚体,无生物活性。
这些物质也有紫外吸收,并能与显色试剂产生相近颜色。
所以,在测定维生素A含量时必须考虑这些干扰因素。
去氢维生素A(A2,Dehydroretmol)(二)性质维生素A易溶于乙醚、氯仿、异丙醇、环己烷、脂肪和植物油,微溶于乙醇,在水中不溶。
中国药典收载的维生素A为合成维生素A醋酸酯结晶的精制植物油溶液。
维生素A能与三氯化锑作用呈色、在紫外光区呈强吸收,可用于鉴别和含量测定。
二、鉴别试验(一)三氯化锑反应1、原理三氯化锑反应又称Carr-Price反应,反应原理是在三氯甲烷中,维生素A与三氯化锑反应显蓝色,渐变为紫红色。
反应机理为维生素A和氯化锑(Ⅲ)中存在的亲电试剂氯化高锑(V)作用形成不稳定的蓝色正碳离子。
2、鉴别方法取维生素A 1滴,加三氯甲烷lOml振摇使溶解,取出2滴,加三氯甲烷2ml与25%三氯化锑的三氯甲烷溶液0.5ml,即显蓝色,渐变成紫红色。
3、注意事项反应需在无水、无醇条件下进行。
因为水可使三氯化锑水解成氯化氧锑(SbOCl),而乙醇可与正碳离子作用,使正电荷消失。
(二)紫外-可见分光光度法(三)薄层色谱法三、含量测定维生素A及其制剂的含量测定方法,最初采用生物学方法测定其生物活性,因该法操作繁琐费时、准确度与重现性差,后来被三氯化锑比色法所替代;而三氯化锑法的反应专属性差,呈色极不稳定,测定结果受水分和温度的影响较大,目前各国药典均收载紫外-可见分光光度法作为维生素A的含量测定方法。
下面主要介绍中国药典收载的紫外-可见分光光度法(三点校正法),并简要介绍高效液相色谱法。
(一)紫外-可见分光光度法维生素A在325~328nm波长范围内有最大吸收,可用于含量测定。
其最大吸收波长随溶剂的不同而变化,表11-2为维生素A醇及其醋酸酯在不同溶剂中的最大吸收波长、吸收系数和换算因数。
本法快速、准确,测定结果能较正确地反映出维生素A的生物效价。
由于维生素A原料中常混有其他物质,如多种异构体、合成中间体、副产物、氧化降解产物;维生素A制剂中含稀释用油。
这些杂质在325~328nm波长范围内也有吸收,对维生素A的测定产生干扰。
为消除非维生素A产生的无关吸收所带来的误差,应用“三点校正法”测定,即在三个波长处测定吸光度后,在规定的条件下用校正公式进行校正,然后计算。
1、方法原理三点校正法是在三个波长处测得吸光度,根据校正公式计算吸光度A校正值后,计算含量,因此称为“三点校正法”。
方法原理主要基于两点:(1)物质对光的吸收具有加和性,即在供试品的吸收曲线中,各波长处的吸光度是维生素A与无关吸收(杂质吸收)的代数和。
(2)杂质的无关吸收在310~340nm波长范围内可视为一条直线,且随波长的增大吸光度下降。
2、波长选择三点波长的选择原则:一点选择在维生素A的最大吸收波长处(即λ1);其余两点选择在λ1的两侧各选一点(λ2和λ3)。
(1)第一法:即等波长差法。
(2)第二法:即等吸收比法。
3、生物效价及换算因数(1)生物效价的定义维生素A的含量仍沿用生物效价(国际单位,U)表示。
效价(U/g)是指每克供试品中所含维生素A的国际单位数(U/g)维生素A的国际单位规定如下:1国际单位维生素A=0.300ug的全反式维生素A醇=0.344ug的全反式维生素A醋酸酯E与换算因数(见表1l-2)相乘,即得供试品的生物效价。
将计算出的供试品吸收系数%11cm(2)换算因数的含义E数值所相当的生物效价,即:换算因数是单位%11cm(3)维生素A醋酸酯换算因数的计算已知,0.344ug的维生素A醋酸酯相当于1个维生索A单位,则1g维生素A醋酸酯(纯品)所相当的维生素A单位数:又知,维生素A醋酸酯(纯品)的吸收系数E1%1cm (328,环已烷),为1530,则:4、测定方法中国药典视供试品的纯度,采用不同的测定方法及数据处理对维生素A原料及制剂的生物效价进行测定。
维生素A测定法有两种方法,即“第一法”和“第二法”。
合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A 均是维生素A酯,如果供试品中干扰测定的杂质较少,能符合第一法测定的规定时,可直接用溶剂溶解供试品后测定;否则应按第二法,经皂化提取除去干扰后测定。
(1)第一法(直接测定法)本法适用于纯度较高的维生素A醋酸酯。
取供试品(维生素A醋酸酯)适量,精密称定,加环己烷溶解并定量稀释成每lml 中含9~15U的溶液,照分光光度法,测定其吸收峰的波长,并在表11-3所列各波长处测定吸光度,计算各吸光度与波长328nm 处吸光度的比值和波长328nm 处的%11cm E 值(由公式,求得)。
①如果最大吸收波长在326~329nm 之间,且5个波长处的差值均不超过±0.02,用下式计算含量:维生素A 醋酸酯占标示量的百分含量:%标示量标示量%1001001900⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=W l WV n A例1:称取维生素A 供试品(标示量为100万单位/g )0.1128g ,用环己烷配成100ml 溶液,精密量取此溶液1ml ,用环己烷稀释至100ml ,在波长300,316,328,340和360nm 波长处测定吸收度,分别为0.332,0.533,0.587,0.477和0.176。
计算维生素A 相当于标示量的百分含量? 解:最大吸收波长在326~329nm 之间,且5个波长处的差值均不超过±0.02,用下式计算含量:%标示量标示量%1001001900⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=W l V n A%9.98100101128.0100119001001100587.06=⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=%含量% 答:维生素A 标示量%为98.9%。
②如果最大吸收波长在326~329nm 之间,分别计算5个波长处的差值,如有一个或一个以上超过±0.02,应按下式计算校正吸光度:(1l-3)然后,计算校正吸光度与(实测)吸光度之差对(实测)吸光度的相对偏差,即:(1l-4)再按以下方法计算含量:如果式(1l-4)的值未超过±3.0%(即在-3.0%~+3.0%范围内),则不用校正吸光度,而仍用A 328计算含量。
例2:现有标式量为1万/丸的VitA 胶丸(平均每丸内含物为0.2000克),今称取样品内含物0.1920克,溶于环己烷并稀释到1000ml,于下列波长测得吸收度为:波长(nm) 300 316 328 340 360 吸收度 0.265 0.450 0.500 0.410 0.150 求该丸剂中VitA 的标示量百分含量。
换算因素为1900。
解:(1) 波长(nm) 300 316 328 340 360 吸收度比值 0.530 0.907 1.000 0.820 0.300 规定的比值 0.555 0.907 1.000 0.811 0.229 二种比值之差 -0.025 -0.007 0.000 +0.009 +0.071(2)最大吸收波长在326~329nm 之间,分别计算5个波长处的差值,有一个或一个以上超过±0.02,按下式计算校正吸光度:A 328(校正) =3.52(2A 328 -A 316 -A 340 )=0.493 因为%%=测定测定校正4.1100328328328-⨯-A A A ,未超过-3.0%,故仍以A 328(测定) 计算含量。
(3)用下式计算含量:%标示量标示量%1001001900⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=W l WV n A %0.99100100001920.010012000.0190010001500.0=⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯⨯=%标示量% 答:该丸剂中VitA 的标示量百分含量为99.0%。
如果式(1l-4)的值在-15%~-3.0%之间,则以校正吸光度计算含量。
例3:维生素AD 胶丸的测定:精密称取维生素AD 胶丸装量差异项下的内容物重0.1287g (每丸内容物的平均装量0.07985g ),置10ml 烧杯中,加环己烷溶解并定量转移至50ml 量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀;精密量取2ml ,置另一50ml 量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀。
以环己烷为空白,测得最大吸收波长为328nm ,并分别于300、316、328、340和360nm 的波长处测得吸收度如下。
求胶丸中维生素A 占标示量的百分含量?已知标示量每丸含维生素A 10000单位。
波长(nm ) 300 316 328 340 360 测得吸收度(A ) 0.374 0.592 0.663 0.553 0.228解:最大吸收波长在326~329nm 之间,分别计算5个波长处的差值,有一个或一个以上超过±0.02,按下式计算校正吸光度:637.0)553.0592.0663.02(52.3328=--⨯=校A因为%%=测定测定校正9.3100328328328-⨯-A A A ,超过-3.0%,故以A 328(校正) 计算含量。