发酵染菌的检查

发酵生产中杂菌的检查与防治————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期:ﻩ第一节发酵生产中杂菌的检查与防治一染菌的检查与判断凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染,及早发现杂菌，及早采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。

因此检查的方法要求准确、快速。

目前发酵生产上常用的检查方法有下列几种：1．显微镜检查一般单染色后用油镜观察,凡是从视野中发现有形态与生产菌株不同的菌体都可认为是污染了杂菌。

优点:简便、快速，能及时检查出杂菌。

缺点:（1) 对固形物多的发酵液检查较困难;（２）对含杂菌少的样品不易得出正确结论,应多检查几个视野;（３) 由于菌体较小,本身又处于非同步状态，应注意区别不同生理状态下的生产菌与杂菌，必要时可用进行革蓝氏染色、芽孢染色等辅助方法进行鉴别。

2．平板检查若怀疑发酵液被细菌污染,可取少量待检发酵液涂布在肉汤平板上，在适宜条件下培养,若出现与生产菌株形态不一的菌落，就表明可能被杂菌污染;若要进一步确证,可配合显微镜形态观察，若个体形态与菌落形态都与生产菌相异，则可确认污染了杂菌。

优点：（１)适于固形物多的发酵液；（2)形象直观,肉眼可辩,不需仪器。

缺点:（１)所需时间较长，至少也需8小时；(２)无法区分形态（包括细胞形态与菌落形态）与生产菌相似的杂菌，如啤酒生产中污染野生酵母时,由于啤酒酵母与野生酵母很难从形态上加以区分，只能借助生理生化试验进行确认。

(3)检查过程需严格执行无菌操作技术。

3.肉汤培养检查法此法主要用于空气过滤系统和液体培养基的无菌检查。

具体方法是将葡萄糖酚红肉汤培养基（牛肉膏0.3％,蛋白胨０．8％,葡萄糖0.5%，氯化钠０.5%，1%酚红溶液0.4%,ｐＨ７.２）装在吸气瓶中，经灭菌后，置3７℃培养24小时,若培养液未变浑浊,表明吸气瓶中的培养液是无菌的,就可用于空气过滤系统的杂菌检查。

学生综述性论文题目：发酵过程中染菌的分析、检测及预防姓名：刘莉学号：2008132114专业：生物技术班级：083班课程名称：微生物工程指导教师：燕平梅课程学期：2010至2011学年第一学期发酵过程中染菌的分析、检测及预防姓名：刘莉指导老师：燕平梅（太原师范学院生物系083班学号：2008132114）摘要：通过分析发酵过程中染菌的各种原因，总结检测染菌的方法，并提出染菌后应采取哪些措施及预防染菌的方法。

关键词：发酵；染菌；危害；检查；预防前言：发酵工业生产中，污染杂菌造成发酵失败的事故时常发生，严重影响发酵生产，关于发酵过程是否污染杂菌，如何检测，染了菌后如何处理等等，这些问题的研究是十分有意义的。

内容：1发酵染菌的危害1.1不同种类的杂菌对发酵的影响青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大链霉素发酵：污染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌比粗大杆菌的危害大四环素发酵：污染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌的危害较大柠檬酸发酵：最怕污染青霉菌肌苷、肌苷酸发酵：污染芽孢杆菌的危害最大谷氨酸发酵：最怕污染噬菌体高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大1.2不同染菌时间对发酵的影响1.2.1种子培养期染菌菌体浓度低、培养基营养丰富1.2.2发酵前期染菌杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成1.2.3发酵中期染菌严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成1.2.4发酵后期染菌如杂菌量不大，可继续发酵。

如污染严重，可采取措施提前放罐1.3不同染菌途径对发酵的影响种子带菌：种子带菌可使发酵染菌具有延续性空气带菌：空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐培养基或设备灭菌不彻底：一般为孤立事件，不具有延续性设备渗漏：这种途径造成染菌的危害性较大1.4染菌对产物提取和产品质量的影响1.4.1对过滤的影响发酵液的粘度加大；菌体大多自溶；由于发酵不彻底，基质的残留浓度加度。

造成过滤时间拉长，影响设备的周转使用，破坏生产平衡；大幅度降低过滤收率。

染菌的检查、原因分析和防止措施染菌的检查、原因分析和防止措施1.染菌的检查与判断在发酵过程中对杂菌污染的及早发现，及时处理，是免除染菌造成严重损失的重要问题。

因此，要求有确切、迅速的方法来检出杂菌的污染，目前常用方法主要有以下几种：（1）显微镜检查通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。

对霉菌、酵母发酵，先用低倍显微镜观察生产菌的特征，然后再用高倍显微镜观察有否染菌存在，根据生产菌与杂菌的特征区别，判断是否染菌。

必要时，可进行芽孢和鞭毛染色。

（2）平板划线培养或斜面培养检查法先将经灭菌的固体培养基倒入灭菌的平板中置培养箱摄氏37度，保温24h检查无菌即可使用。

将需要检查的样品，在无菌平板上划线，分别置摄氏37度、摄氏27度培养，以适应嗜中菌和低温菌的生长，一般在8h后即可观察。

噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培养基，上层减少琼脂用量。

先将灭菌的底层培养基熔后倒平板，凝固后，将上层培养基熔解并保持摄氏40度，加生产菌作为指示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置培养箱保温培养，经12~20h培养，观察有无噬菌斑。

培养基（PH7.0）葡萄糖（%）牛肉膏（%）蛋白胨（%）氯化钠（%）琼脂（%）上层0.5 1.0 1.0 0.5 1.0下层0.5 1.0 1.0 0.5 2.0（3）肉汤培养检查法将需要检查样品接入经灭菌并经过检查无菌的肉汤培养基中，放置摄氏37度和摄氏27度分别培养24h，进行观察，并取样镜检。

此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也可用于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。

葡萄糖酚红肉汤培养基：牛肉膏0.3%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，蛋白胨0.8%，1%酚红溶液0.4%，PH7.2。

用以上的检查方法检查未发现污染，还不能肯定未被污染。

除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否染菌，如溶解氧、PH值、排气中CO2含量和菌体酶活力等变化来判断。

浅谈抗生素发酵染菌原因及预防方法生产抗生素通常采用微生物纯种培养，培养过程中只允许特定的微生物生长，如果发酵过程中除抗生素产生菌以外还有其他微生物存在(染菌)，就会影响抗生素产量和质量。

抗生素发酵在生产中常常因操作环节复杂而更容易染菌，笔者在长期的生产实践中积累了一些经验，对避免发酵染菌及查找染菌原因具有一定的指导作用。

1染菌的原因及预防方法1.1摇瓶(斜面)种子带菌导致一级种子罐染菌摇瓶(斜面)种子制备过程中.如果存在母瓶(母斜面)培养基和子瓶(子斜面)培养基灭菌不彻底或菌种操作人员在净化工作台中进行母瓶(母斜面), 子瓶(子斜面)接种及并瓶时无菌操作不规范或摇瓶种子培养环境不洁净等现象就会造成摇瓶(斜面)种子带菌而导致一级种子罐染菌。

预防方法：菌种制备过程中首先要保证配制的培养基没有较大颗粒，培养基灭菌时要保证蒸汽流动,做到压力计和温度计的准确一致性，防止假压形成。

为防止灭菌后培养基二次染菌，应尽量做到培养基即灭菌即使用。

无菌操作时保证无菌室用前彻底灭菌，所用器具不带菌。

操作时无菌物品在上风处，带菌(或可能带菌)物品在卜风处;操作人员少说话，避免咳嗽、打喷嚏及其他大幅度动作。

无菌室管理按照GMP有关洁净区的要求进行，定期检测沉降菌、浮游菌。

摇瓶间按洁净区管理。

摇瓶间是摇瓶种子母瓶、子瓶培养的场所在培养过程中瓶塞上往往会附着尘埃。

在接种、并瓶等无菌操作过程中拔瓶塞时灰尘很容易落进瓶内，造成种子带菌。

要想实现摇瓶种子无杂菌，保持摇瓶间的清洁是非常关键的。

应当把摇瓶间当做洁净区区进行管理:每日坚持用干净湿抹布擦拭摇瓶间的地而及墙而;在充分消除对培养种子影响的情况不定期用消毒液如双氧水等对摇瓶间进行消毒。

1.2一级种子管接种操作不当染菌火焰接种会导致一级种子罐染菌种子罐接种时，除按要求进行室内消毒外，还需要消毒人员与接种人员密切配合，快、准、稳地完成操作过程，否则易导致接种失败。

预防方法：进行一级种子罐接种:一是压差接种法，二是零磅接种法。

发酵大生产染菌11现象：一级种子罐连续染菌，菌型一致，均为芽孢杆菌，接种后24小时就当班片子种发现，量相当大。

5批染3－4批。

罐内无搅拌，夹套降温，罐内无结垢，可以说无死角。

2分析：母瓶无菌斜面正常，不接种的白料无菌试验罐也染菌（种子原因排除），消后无菌斜面正常，接种后12小时左右的斜面能镜检出杂菌（操作原因基本排除）。

罐体内只有一取样管和一空气管，较干净，蒸汽压力和仪表温度对应良好，消毒工都有十几年的工作经验，操作问题不大（为了排除操作问题，我和技术员和消毒工共同消了几个罐，无菌仍不正常）。

判断有罐体内可能有料垢和死角。

2采取措施：利用甲醛熏消，对罐体和阀门管道进行试漏，对过滤器进行更换消毒，没有发现太大问题，熏消后无菌正常一两批，随后仍然染菌，我们随后开始检修所有靠罐阀，也无问题。

直至有一次，对此罐进行无菌试验，消毒时发现其物料靠罐阀盘根处消毒时有渗水现象（正常运转时也有，量小，相当难发现),随即更换此阀门，无菌立刻好转。

3结论：根据我在生产中碰到和解决的无菌问题来看，靠罐阀的检修不到位造成的染菌站15％左右，包括密封垫脱落、老化，阀头脱落，外漏，内漏等等，作大生产，要不有钱买好设备，要没钱必须要有好的制度和好的操作工。

根据我的生产经验看，买好设备要划算的多，染一罐少则损失几百元，多则几十万。

抗生素发酵大生产染菌21现象：将近半年时间，菌种间歇染芽孢杆菌，在供种之前镜检时发现无菌不正常，有时镜检也不能发现，给生产造成极大影响。

怀疑几点:1培养基未消透2接种工具未消透3接种操作存在4操作间管理不善,洁净情况不好灭菌压力和温度正常,校对数次,无问题.121度20分钟.工具包装正常,工具灭菌时间更长每个员工都存在染菌,请经验丰富的老师傅看也没看出操作问题操作间尘降菌符合要求(平皿培养基无问题)2采取措施：更换超净工作台过滤，用多种消毒液对操作间进行消毒，对使用工具进行长时间灭菌消毒，对蒸汽灭菌柜作灭菌验证。

发酵染菌名词解释
发酵染菌（fermentation staining）是一种用于观察细菌发酵能
力的染色方法。

在这个过程中，细菌会通过代谢过程产生酸性或碱性物质，这些物质会改变染色试剂的颜色，从而显示细菌的发酵能力。

常用的发酵染菌方法包括：
1. 洗涤胆盐蓝染色法（Wurtz's method）：将细菌培养物与洗
涤胆盐蓝（Wurtz's reagent）混合，在酸性条件下，如果细菌
能够通过发酵代谢产生酸性物质，染色试剂将变成黄色。

2. 红素染色法（Andrade's method）：将细菌培养物与红素（Andrade's indicator）混合，如果细菌能够通过发酵代谢产生
酸性物质，染色试剂将变成红色。

通过发酵染菌方法，可以区分细菌的发酵能力，通常用于鉴定、分类细菌和检测细菌菌株的特定代谢能力。

发酵生产中染菌的主要原因及检查方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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浅析发酵中的染菌问题一．染菌问题的影响几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。

染菌的结果，轻者影响产量或产品质量，重者可能导致倒罐，甚至停产。

防止杂菌污染是任何发酵工程的一项重要工作内容。

尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。

发酵设备、空气除菌系统和培养基灭菌系统等的有关设备以及管道的配置都必须严格符合无菌要求。

如果设备结构和管道配置不合理，制造、安装不注意或在发酵过程中操作不慎就会使发酵液污染杂菌，导致产量下降甚至得不到产品。

1.染菌对不同发酵过程的影响（1）青霉素发酵过程：由于许多杂菌都能产生青霉素酶，因此不管染菌是发生在发酵前期、中期或后期，都会使青霉素迅速分解破坏，使目的产物得率降低，危害十分严重。

（2）核苷或核苷酸发酵过程：由于所用的生产菌种是多种营养缺陷型微生物，其生长能力差，所需的培养基营养丰富，因此容易受到杂菌的污染，且染菌后，培养基中的营养成分迅速被消耗，严重抑制了生产菌的生长和代谢产物的生成。

（3）柠檬酸等有机酸发酵过程：一般在产酸后发酵液的pH值比较低，杂菌生长十分困难，在发酵中、后期不太会发生染菌，主要是要预防发酵前期染菌。

（4）谷氨酸发酵：周期短，生产菌繁殖快，培养基不太丰富，一般较少污染杂菌，但噬菌体污染对谷氨酸发酵的影响较大。

2.染菌发生的不同时间对发酵的影响（1）种子培养期染菌：由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。

因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。

如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。

（2）发酵前期染菌：发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。

如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。

（3）发酵中期染菌：发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。

杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。

发酵生产中杂菌的检查与防治一染菌的检查与判断凡是在发酵液或发酵容器中侵入了非接种的微生物统称为杂菌污染，及早发现杂菌，及早采取相应措施，对减少由杂菌污染造成的损失至关重要。

因此检查的方法要求准确、快速。

目前发酵生产上常用的检查方法有下列几种：1．显微镜检查一般单染色后用油镜观察，凡是从视野中发现有形态与生产菌株不同的菌体都可认为是污染了杂菌。

优点：简便、快速，能及时检查出杂菌。

缺点：（1）对固形物多的发酵液检查较困难；（2）对含杂菌少的样品不易得出正确结论，应多检查几个视野；（3）由于菌体较小，本身又处于非同步状态，应注意区别不同生理状态下的生产菌与杂菌，必要时可用进行革蓝氏染色、芽孢染色等辅助方法进行鉴别。

2．平板检查若怀疑发酵液被细菌污染，可取少量待检发酵液涂布在肉汤平板上，在适宜条件下培养，若出现与生产菌株形态不一的菌落，就表明可能被杂菌污染；若要进一步确证，可配合显微镜形态观察，若个体形态与菌落形态都与生产菌相异，则可确认污染了杂菌。

优点：（1）适于固形物多的发酵液；（2）形象直观，肉眼可辩，不需仪器。

缺点：（1）所需时间较长，至少也需8小时；（2）无法区分形态（包括细胞形态与菌落形态）与生产菌相似的杂菌，如啤酒生产中污染野生酵母时，由于啤酒酵母与野生酵母很难从形态上加以区分，只能借助生理生化试验进行确认。

（3）检查过程需严格执行无菌操作技术。

3．肉汤培养检查法此法主要用于空气过滤系统和液体培养基的无菌检查。

具体方法是将葡萄糖酚红肉汤培养基（牛肉膏0.3%，蛋白胨0.8%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，1%酚红溶液0.4%，pH7.2）装在吸气瓶中，经灭菌后，置37℃培养24小时，若培养液未变浑浊，表明吸气瓶中的培养液是无菌的，就可用于空气过滤系统的杂菌检查。

把过滤后的空气引入吸气瓶的培养液中，经培养后，若培养液变混，表明过滤后的空气中仍有杂菌，说明过滤系统有问题，若培养液未变混，说明空气无菌。

发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法（原创实用版3篇）《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇1发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 采集样本：采集发酵大肠杆菌染杂菌的样本，例如发酵液或菌落，进行检测。

2. 分离和纯化：将样本中的杂菌分离出来，并进行纯化培养，得到单个菌落。

3. 鉴定菌种：通过菌落形态、生长特性、生化反应等方法，对分离出来的单个菌落进行鉴定，确定其菌种。

4. 检测发酵大肠杆菌的活性：通过检测发酵大肠杆菌的代谢产物、酶活性等指标，确定其活性是否受到杂菌的影响。

常用的检测方法包括微生物学检测方法、分子生物学检测方法等。

《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇2发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 菌落形态观察：将发酵大肠杆菌染杂菌样本涂布在含有伊红美蓝指示剂的培养基上，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

2. 涂片镜检：将发酵大肠杆菌染杂菌样本涂片，用荧光显微镜观察，可以看到菌体周围有弯曲的菌毛和鞭毛。

3. 培养特性检测：将发酵大肠杆菌染杂菌样本分别接种在含不同糖类的培养基上，观察其生长情况。

发酵大肠杆菌能在含有乳糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的培养基上生长，而其他细菌则不能。

4. 生化反应测试：将发酵大肠杆菌染杂菌样本分别进行糖类发酵试验、靛基质试验、脲酶试验等生化反应测试，根据反应结果进行鉴定。

5. 16S rRNA 基因序列分析：对于难以通过上述方法鉴定的菌株，可以进行16S rRNA 基因序列分析，通过比对序列确定其属于哪一类菌株。

《发酵大肠杆菌染杂菌鉴定方法》篇3发酵大肠杆菌染杂菌的鉴定方法通常包括以下步骤：1. 菌落形态观察：将发酵大肠杆菌样品涂布在含有伊红美蓝指示剂的培养基上，菌落呈深紫色，并有金属光泽。

而杂菌菌落则呈淡紫色或无色，无金属光泽。

2. 涂片镜检：将发酵大肠杆菌样品涂布在载玻片上，加入适量的生理盐水，盖上盖玻片，在显微镜下观察。

发酵大肠杆菌的细胞呈短杆状，两端钝圆，单个存在。