LC-MS定性定量方法与技术

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液相色谱质谱联用仪技术指标

垦利区检验检测中心食品检测能力提升项目参数液相色谱质谱联用仪技术指标1. 设备名称液相色谱质谱联用仪（LC-MS-MS）2、主要用途用于农副产品、食品、植物样品、动物组织、水产品、环境等样品中农药、兽药、食品添加剂、生物毒素等3000以下分子量的化学污染物定性定量分析。

3、工作条件工作条件及安全性符合中国及国际有关标准或规定3.1 工作电源电压: AC 220V±53.2 工作环境温度: 16～25℃3.3 工作环境相对湿度: 40～80%4、技术指标4.1 硬件4.1.1 超高效（快速高分辨）液相色谱部分4.1.1.1 多元高压梯度系统*4.1.1.1.1 流速范围：大于0 ml/min～5.0 mL/min。

*4.1.1.1.2 流量精度：RSD≤0.05%。

4.1.1.1.3 最高操作压力：大于14000psi。

4.1.1.1.4 延迟体积：≤40µL4.1.1.1.5 溶剂数量：44.1.1.1.6 混合方式：高压混合4.1.1.2 样品管理系统*4.1.1.2.1 自动进样器：2ml样品瓶最少能放105个以上4.1.1.2.2 进样范围：0.01-100ul，增量0.1 ul；可选配更多进样体积4.1.1.2.3 进样精度：RSD≤0.2%。

4.1.1.2.4 自动进样器温控范围：大于4-40摄氏度。

4.1.1.2.5 样品残留：<0.002%。

*4.1.1.2.6均采用避光盖板，便于光敏感样品的长时间放置；具有泄漏传感器，有样品盘和样品自动识别功能。

*4.1.1.2.7 可进行编程进样，用于进行自动柱前衍生，柱前样品自动稀释，自动混合等复杂进样方式。

4.1.1.3 柱温箱系统*4.1.1.3.1 柱温箱温控范围：大于5-90℃。

4.1.1.3.2 柱温箱控温精度：±0.1摄氏度。

4.1.1.3.3 柱容量：大于3根色谱柱，最长可安装30cm色谱柱。

液相色谱——串联质谱法

液相色谱——串联质谱法液相色谱——串联质谱法1. 概述液相色谱——串联质谱法（LC-MS）是一种用于快速鉴定和定量分析大量小分子物质和链状有机化合物的一种惰性重排技术。

这种技术通过将液相色谱和质谱两大仪器技术的优越性能有机结合，实现了液体中微量物质的快速鉴定、分离和测定。

这套技术比单独使用液相色谱成像分析，可以提高检测限下限，解决液相色谱分离后质谱加速定性分析的问题，因而更加实用。

2. 技术原理LC-MS系统由液相色谱分离柱，检测装置，与两个机构负责操纵液相色谱组分提取等主要部件组成。

样品分离和分析步骤就是将样品溶解在适当的溶剂中，经液相色谱－质谱就可以分析出单分子组分的物化性质和表观分子量，以及细微程度的组成差别。

检测装置实现了LC-MS连续启动程序，得到样品组分的全谱图谱，获取检测信息，实现LS-MS技术的数据处理，实现样品鉴别，定量计算，同时获取实时的检测数据，保证检测的准确性和准确度。

3. 优势（1）具备高敏感性和低检出限，可以检测非常稀少的物质，提高检测的灵敏度。

（2）可以实现快速和自动化操作，大大提高测定速度。

（3）LC-MS能实现样品分离前质谱加速定性分析、消除高纯度物质混杂分离困难、采样测定对比分析等特点，从而提高检索精确度和结果准确度。

（4）结合液相色谱分离和双离子检测质谱技术，可以自动化连续运行，来自动调整参数实现高灵敏度测定和高分辨率分离。

4. 应用领域LC-MS主要用于有机物、抗生素、毒素、毒物、化合物的研究以及在生物信息学和医学方面的研究等。

当前有机物、抗生素、毒素、毒物在药物研究、毒理、环境污染检测和药物开发等领域都有广泛的应用，以及药剂学、兽医学、分子毒理学和菌类学领域的研究。

5. 结论液相色谱——串联质谱法（LC-MS）是一种结合液相色谱和质谱技术，可以用于鉴定薄分子物质和链状有机化合物的惰性重排技术。

该技术可以飞快地连续运行，自动调整参数，从而实现了高灵敏度测定和高分辨率分离，同时也可以检测非常稀少的物质，具有广泛的应用领域。

LC-MSMS 定量分析优化技巧

●样品预处理各步不能随意省略，如萃取、分离、去盐等。

某些化合物必须进行化学衍生化以适应LC-MS 要求，如磷酸酯水解。

●若MS 信号实在太低，考虑更换样品前处理方法。

●浓度非常低的样品不能保存太长时间，容器吸附、分解等原因使样品浓度降低，标准品工作液现配现用。

3Date |AB CONFIDENTIAL Opportunities in the Services and System Solutions Market ©2006 Applied Biosystems离子化方法选择：根据样品性质确定离子化方式适合ESI(IS)的样品类型：–高极性化合物、蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子；–胺类、季铵盐等；–含杂原子的化合物，如氨基甲酸酯等适合APCI的样品类型：–弱极性/中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等–含杂原子的化合物，如氨基甲酸酯、脲等ESI 不适合的化合物：极端非极性化合物如苯等；APCI 不适合的化合物：非挥发性样品、热稳定性差的样品4Date |AB CONFIDENTIAL Opportunities in the Services and System Solutions Market©2006 Applied Biosystems一般情况下●碱性化合物宜用正离子方式●酸性化合物宜用负离子方式●不明确的化合物，优先试用正离子方式●如未知，可能正、负都要试●有些化合物正、负模式都出峰，选择灵敏度高的方式，离子化方法选择：5Date |AB CONFIDENTIAL Opportunities in the Services and System Solutions Market ©2006 Applied BiosystemsLC 条件的选择：●根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水●某些化合物只有某种流动相体系才出峰●一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好些●通常有机相比例高些，离子化效率高●梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响很大，相应源参数也应该改变，所以当恒定比例流动相(即等度分离)能满足分离分析要求时，尽量不用梯度，尤其定量分析时●有时，流动相中加入微量的甲酸或乙酸铵等，可提高正离子化效率6Date |AB CONFIDENTIAL Opportunities in the Services and System Solutions Market©2006 Applied Biosystems●是否加酸不是绝对的，具体应根据LC 的分离情况、样品在酸性条件下的稳定性等决定●通常pH 值低时，[M+H]+比率高；pH 值高时，[M+Na] + 、[M+K]+，或[M+NH 4] +比率会比较高●定性分析时，有时加一些NH 4+，Li +等，可帮助确定判断母离子，对碎片较少的化合物，可以增加其质谱特征性，但会使生物大分子的质谱复杂化。

定量蛋白质组学LC-MS-MS

百泰派克生物科技
定量蛋白质组学LC-MS-MS
定量蛋白质组学是蛋白质组学的一个重要分支，这个概念的提出使蛋白质组学的研究内容从定性向精确含量鉴定方向进一步发展。

目前，常用的蛋白质组学定量技术是基于质谱的技术，根据其是否使用同位素标记又分为标记策略（Label）和非标
记策略（Label Free），标记策略如TMT、iTRAQ和SILAC等。

LC-MS-MS即液相色
谱-串联质谱技术，是各种蛋白质质谱定量技术中所不可缺少的分析技术，也是实
现蛋白质定量的关键步骤。

其将经过不同标记或处理得到的蛋白肽段利用液相色谱进行分离后再进行多级质谱分析，根据肽段离子的质谱信号如离子峰强度等结合生物信息学分析手段计算各肽段的含量，从而实现整个蛋白质的含量鉴定。

百泰派克生物科技采用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪结合Nano-LC纳升色谱技术，提供高效精准的定量蛋白质组学LC-MS-MS服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的细胞寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括细胞培养、细胞标记、蛋白提取、蛋白酶切、肽段分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析。

液相色谱-质谱联用技术

液相色谱-质谱联用技术液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱两种技术的分析方法。

它通过液相色谱的分离能力和质谱的物质鉴定能力，可以同时获得化合物的分离和结构信息，适用于复杂样品的定性和定量分析。

液相色谱（LC）是一种基于不同化合物在液相中的分离速度差异来分离化合物的方法。

它具有高分离能力、高选择性和易于操作等特点，广泛应用于生物、制药、环境和食品等领域。

液相色谱的核心是通过固定相和流动相之间的相互作用来实现化合物的分离。

而质谱（MS）则是一种基于化合物的质量与电荷比（m/z）来确定化合物结构和组成的方法。

质谱利用化合物在质谱仪内的质荷比来生成化合物的质谱图谱，从而实现化合物的鉴定和定量分析。

LC-MS联用技术的基本原理是将液相色谱与质谱相连接，通过在液相色谱柱出口处将待分析的化合物分子引入质谱仪中进行分析。

这样一来，通过液相色谱对样品进行分离，可以避免复杂样品矩阵的干扰，并使待分析化合物逐一进入质谱仪进行离子化和探测。

质谱仪将产生的质谱信号转化为质谱图谱，进而进行化合物的鉴定和定量分析。

整个过程中，液相色谱和质谱的运行参数需要相互匹配和优化，以保证良好的分离效果和质谱信号。

LC-MS联用技术具有许多优点。

首先，它能够提供化合物的分离和结构信息，有效地应对样品复杂性的挑战。

其次，它能够对目标化合物进行快速定性和定量分析，为化合物的鉴定和生物活性评估提供支持。

此外，LC-MS联用技术还具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，可以检测并鉴定一些浓度较低的化合物，如药物代谢产物和生物标志物。

此外，LC-MS联用技术还适用于多种化合物类别的分析，如有机物、无机物、生物大分子和药物等。

在实际应用中，LC-MS联用技术被广泛用于药物研究和开发、环境监测、食品安全和生物科学等领域。

例如，在药物研究中，LC-MS联用技术可以用于药物的代谢研究、药物动力学研究、药物质量控制和药物残留分析等。

液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的各种模式探索

实验七液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索093858 张亚辉一、实验目的1、了解LC-MS的主要构造和基本原理；2、学习LC-MS的基本操作方法；3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。

二、实验原理1、液质基本原理及模式介绍液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。

但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。

LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。

现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS已经成为最重要研究方法之一。

质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。

（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。

实例：（Q1 = 100-259m/z）（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。

主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。

实例：（Q1 =259m/z）本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：质量分析器），由于多了Q2、Q3的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：（三）子离子扫描模式（Product Scan）：第一个质量分析器固定扫描电压，选择某一质量离子（母离子）进入碰撞室，发生碰撞解离产生碎片离子，第二个质量分析器进行全扫描，得到的所有碎片离子都是由选定的母离子产生的子离子，没有其它的干扰。

LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍

LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍LC-MS是液相色谱-质谱联用技术，是将液相色谱（LC）与质谱（MS）两种分析技术结合起来，对化合物进行分离和定性定量分析。

液相色谱将混合物中的化合物分离开来，而质谱则对分离后的单个化合物进行分子结构和组成的分析。

LC-MS的原理是首先通过液相色谱将混合物中的化合物分离开来。

液相色谱采用一个固定相（如柱子内的填料）和一个移动相（溶剂），将待分离的化合物通过不同的亲和性与固定相进行交互，从而使化合物逐步分离。

分离后的化合物进入质谱部分进行分析。

质谱主要是通过离子化技术将分离后的化合物转化为离子，并在电场作用下进行分离和检测。

常见的离子化技术包括电喷雾离子源（ESI）和化学电离（CI）等。

在质谱仪中，离子化的化合物被加速到一定能量，通过一个磁场进行分离，根据离子的质量与荷比（m/z）比值，可以得到化合物的分子质量。

LC-MS的基础知识包括液相色谱和质谱。

液相色谱（LC）：液相色谱是一种在液体流动相中通过固定相分离化合物的技术。

在液相色谱中，通过调节流动相的组成、温度、流速等参数，可以改变溶剂在固定相上的极性和亲和力，从而实现化合物的分离。

常见的液相色谱技术包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、离子色谱（IC）等。

质谱（MS）：质谱是一种通过分析分子离子的质荷比来确定化合物的结构和组成的分析技术。

质谱主要包括离子化、质量分析和信号检测等步骤。

离子化可以通过不同的技术实现，如电喷雾离子源（ESI）、化学电离（CI）等。

质量分析部分主要通过加速离子，使其通过磁场分离，根据离子质量与荷比，可以得到化合物的质量。

信号检测主要是在质谱仪内部检测加速离子之后的荷电粒子。

LC-MS在许多领域中有广泛的应用。

例如，在生物医药领域，LC-MS 可以用于药物代谢和药物残留的研究；在环境科学中，LC-MS可以用于检测水体和土壤中的有机污染物；在食品安全监测中，LC-MS可以用于检测食品中的农药残留和添加剂等。

色谱定性定量分析方法

⑥稳定性（stability）：
意义：考察分析样品与试剂在一定时间内稳定性。内容：
根据样品与试剂测定时实际可能所处的环境进行考察。
⑦耐用性（ robustness ）：
意义：考察测定条件发生小变动时测定结果的变化。
内容：
流动相的组成和pH、商品柱的品牌尺寸、柱温等
广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定
重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度 1、色谱信号的测量:
意义：待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围；
相对保留值 α, (t-t0)/(tr -t0）
2、选择合适的离子源，利用LC-MS获得杂质的准分量不同浓度的对照品，比较测定值和加入值确定。
ELSD响应的自然对数与样品的浓度或质量呈线性关系；
质谱（MS-ESI）检测器高浓度时的响应与样品的质量可能呈二次或更复杂的方式。
四、色谱分析方法验证
目的：
证明所采用的色谱分析方法适合于相应的检验要求，判断能否用于药品分析。
效能指标：评价分析方法的尺度
效能指标包括: 精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、
tr
内容： LC-ESI-MS的
要求，判断能否用于药品分析。内容：药物制剂含量测定时的专属性考察内容：
重复性广药泛品用质于量药标物准中分的析杂方质法:、验体证内外代同谢产一物的实结构验鉴定室,同一人多次测定的精密度
中间精密度 2药、品选质择量合标适准的分离析子方源法，验利证用LC:-MS同获得一杂质实的准验分子室离子，峰。不同人，不同仪器测定的精密度
线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等
不同分析测定方法的要求
药品质量标准分析方法验证药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验

液质联用分析实验报告

液质联用分析实验报告液质联用分析实验报告一、实验目的本实验旨在掌握液质联用（LC-MS）分析方法，了解其在实际样品分析中的应用。

通过液质联用技术，对目标化合物进行定性和定量分析，提高分析的灵敏度、准确性和可靠性。

二、实验原理液质联用（LC-MS）是一种将液相色谱（LC）与质谱（MS）技术相结合的分离分析方法。

液相色谱主要用于分离复杂的混合物，通过选择合适的色谱条件，将目标化合物与干扰物分离。

质谱则用于鉴定和测量化合物的分子量和分子结构，通过离子化样品并测量其质荷比，获得样品的分子信息。

液质联用技术将液相色谱的高分离能力与质谱的高鉴别能力相结合，适用于复杂混合物中目标化合物的定性和定量分析。

三、实验步骤1.样品准备：称取适量样品，进行适当处理（如萃取、浓缩等），制备成适合液质联用的溶液。

2.液相色谱条件设置：根据目标化合物的性质选择合适的色谱柱、流动相、流速等条件。

3.质谱条件设置：调整质谱仪的参数，如扫描范围、离子源温度、碰撞能量等，以获得最佳的检测效果。

4.液质联用分析：将样品溶液通过液相色谱与质谱联用系统进行分离和检测，获取样品的色谱图和质谱图。

5.定性分析：根据获得的质谱图，通过对比标准品或查阅文献等方法，确定目标化合物的分子结构和分子量。

6.定量分析：根据目标化合物的色谱峰面积或峰高，结合标准曲线或标准品浓度，计算样品中目标化合物的含量。

四、实验结果及数据分析1.定性分析结果：通过对比标准品和查阅文献等方法，确定目标化合物为XXX（分子量：XXX）。

其质谱图如下：（请在此处插入目标化合物的质谱图）2.定量分析结果：根据目标化合物的色谱峰面积或峰高，结合标准曲线或标准品浓度，计算得出样品中目标化合物的含量为XXX%。

具体数据如下：（请在此处插入定量分析数据表）3.结果分析：通过液质联用技术，成功地分离和检测了样品中的目标化合物XXX。

定量分析结果表明，该化合物在样品中的含量为XXX%。

该方法具有较高的灵敏度和准确性，为复杂混合物中目标化合物的分析提供了有力支持。

LC-MS法测定维C银翘片中有效组分含量

关键词：Ｃ— ＳＬＭ法；ｃ银翘片；维药物分析
中图分类号：２４１Ｒ８．１ — １２０１０ — ６７２１）５０４ — ４
ＤｅｅｍｉｔｏｆＥｆｅｔｖｎｔｔｅｔｎＶｉａｉＣｎｑａｂｌｔｂｙＬＣ —ＭＳａｔｒｎａｉｎｏｆｃｉｅＣｏｓｉｕｎｓｉｔｍｎＹｉｉｏＴａｅ
俞志东，于湘
５５０）２００
（东石油化工学￣４＿与环境工程学院，广东茂名广Ｌｘ－
摘要：Ｌ — Ｓ以ＣＭ为分析手段，建立了中药复方制剂维ｃ银翘片中有效组分对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的定性和定量
检测方法。在样品分离阶段，采用等梯度洗脱方式在Ｈｐｉ—ＯＳｙｓｌＤ色谱柱（．ｍ× ５ｍ，．ｍ，Ａｉｎ）进行分离；４６ｍ２０ｍ５０Ｉｘｇｌｔ上ｅ在定性和定量方法上，确定了每个分析物的保留时间和一级质谱特征离子为定性参数，以紫外色谱峰面积为定量参数。结果表明：该方法对于２种有效组分对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的线性相关系数（）ｒ分别为０９９０和０９９８平均加标回收率分别为９．％和．９９．９９，９６９．％，８０相对标准偏差（Ｓ分别为０３％和０７％，ＲＤ）．６．２最低检测限（Ｏ）ＬＤ分别为００ｇ・和００ｇ・～。同时，方法对．２ＩｍＬｘ．５ｍＬ该维Ｃ银翘片中另外两种有效组分绿原酸和连翘苷也可以进行定性鉴定。

代谢组学lc-ms

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代谢组学lc-ms
代谢组学旨在通过定性和定量表征细胞、组织、器官或生物体的内源性小分子代谢产物揭示机体生理和病理生物学过程的代谢通路和分子机理，帮助我们更好的认识生命活动的规律。

LC-MS（Liquid Chromatography-Mass Spectroscopy）液相色谱-串联质谱技术是
代谢组学常见的分析方法，该技术可以实现多种代谢产物的定性和定量鉴定。

通常所提取的组织代谢物包含多种不同的代谢产物，甚至含有其他杂质，液相色谱技术在去除杂质的基础上还可分离各代谢产物。

经色谱分离的代谢产物再进行质谱分析，根据质谱数据如质荷比进行定性鉴定，再利用质荷比的强度进行定量或半定量分析。

LC-MS灵敏度高、分辨率好，适用于分析热不稳定性、不易衍生化以及分子量较大
的代谢物，如氨基酸、糖类、醇类、有机酸、胺类、三羧酸循环中间体等水溶性小分子以及脂质大分子等，在靶向和非靶向代谢组学研究中广泛应用。

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF质谱平台结合Nano-LC色谱，提供可靠、快速且经济高效的代谢组学LC-MS服务技术包裹，您只需要将您的实验目的告诉我们并将您的样品寄给我们，我们会负责项目后续所有事宜，包括样品收集、代谢物提取与分离、质谱分析、质谱原始数据分析、生物信息学分析，欢迎免费咨询。

LC-MS原理以及应用-(1)

15 CH3
CH2 CH2 CH2 CH2 CH3
2、α―断裂
BAZ
R CH2 OH R CH2 OR' R CH2 NR'2 R CH2 SR'
AZ + B
CH2 OH + R CH2 OR' + R CH2 NR'2+ R CH2 SR' + R
NH2
Mol. Wt.: 131.26
30
Mol. Wt.: 71.14
+
NH2
Mol. Wt.: 30.05
71 131
30 60 100 130
m/z
最大烷基丢失规律分子离子或其他离子以同一种裂解方式进行时，总是失去较大基团的裂解过程占优势，形成的产物离子丰度较大。
2-已酮在进行a-裂解时，丢失丁基自由基产生100%的CH3CO+，而丢失甲基产生C4H9CO+的丰度只有2%。
• 适用范围：电喷雾有利于分析极性大的小分子和生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性较
LCMS
Drying
gas
From
LC
Nebuliz er Gas
分液聚焦镜
CDL Q- 器八极 array
入口镜前杆
四极杆
ESI/APCI
隔离板
废液旋转 TMP 1 管泵
TMP
2
A+B
正
15 29
43 57
71
己烷
H3C CH2 CH2 CH2 CH2 CH3
71 57 43 29
15
71 H3C CH2 CH2 CH2 CH2

lc-ms

LC-MS可以通过采集质谱得到总离子色谱图。

由于电喷雾是一种软电离源,通常很少或没有碎片,谱图中只有准分子离子，因而只能提供未知化合物的分子量信息，不能提供结构信息。

很难用来做定性分析，可以用来定量分析。

但单级MS如果不用软电离源，而是EI之类的话，就有碎片峰，可以提供分子结构信息。

1.应该用的是Thermo公司的高分辨质谱（Orbi系列）采集的一级质谱图；2.纵坐标显示的是相对强度，可以改变显示方式，变成绝对强度，当然跟你定量没太大关系，因为定量一般用的是峰面积，而不是离子强度。

直接回答问题：LC-MS定量方法也就是内标法或外标法（跟其他分析方法一样，此处不说了），拿到定量值，就需要有标准品，建立标准曲线，横坐标是浓度，纵坐标是峰面积（或者峰面积比值，内标法），一级质谱定量用的峰面积一般就是提取离子流图（在总离子流图基础上进行数据处理，软件很简单操作）的峰，积分获得峰面积。

而组成这个峰的每一个点就是同志在纠结的待测组分会有很多时间点的质谱图，每张质谱图中的峰强度就是提取离子流图上对应时刻的点的峰强度。

LC-MS 定量比HPLC定量有个好处，液相可以不基线分离，通过提取离子流的方式，将待测化合物与其它组分分开，当然啦，方法开发还是要考虑基质效益的影响。

LC-MS如何进行定量分析？请问液质联用中质谱跑出来用于定性的图谱是什么样的，既然是用质谱来进行定量的话，那色谱本身配置的紫外检测器跑出来的图谱用于何用？液质联用有SIM和全扫描的，那么一般在药物代谢动力学试验中一般用哪一种呢？尤其是在对体内药物分析时，内标法用于定量的质谱图是什么样的？质谱定量分析，使用的一般是LC-MS/MS,不使用LC-MS, 看一下质荷比，推测下分子量。

UV可以用来定量，但是在有紫外吸收的干扰峰的时候，定量是不准的。

LC-MS/MS使用母离子/子离子来进行定量，相对来说，干扰要少的多，也比较准确，在PK/TK的应用很广泛。

蛋白质组学定量分析的方法

蛋白质组学定量分析的方法
蛋白质组学定量分析的方法主要有两种：定性分析和定量分析。

1. 定性分析：常用的定性分析方法有蛋白质质谱技术，如蛋白质液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）。

这些方法能够对样品中的蛋白质进行分离、鉴定和定性分析，可以确定蛋白质的氨基酸序列和特定的修饰情况。

2. 定量分析：常用的定量分析方法有标记蛋白质定量和非标记蛋白质定量。

标记蛋白质定量方法包括同位素标记法和化学标记法。

同位素标记法主要包括稳定同位素标记法（如氘代谱标法）和放射性同位素标记法（如放射性同位素测量法）。

化学标记法主要包括功能分子标记法（如荧光标记法和生物素标记法）和反应性标记法（如对硝基苯甲酸标记法和丙煮醛标记法）。

非标记蛋白质定量方法常用的有相对定量法和绝对定量法。

相对定量法主要通过蛋白质相关的性质，在样品中不同蛋白质的含量所具有的差别来进行定量。

常用的相对定量方法有比较蛋白质的荧光标记法、差减荧光凝胶法和差异凝胶电泳法等。

绝对定量法主要使用内标法，通过加入已知浓度的内标蛋白质来计算目标蛋白质的浓度。

常用的绝对定量方法有多重反应监测法（MRM）和定量蛋白质标准曲线法等。

LCMS定性定量方法与技术

高分辨质谱法也提高了目标化合物筛选和定量测定的选择性。
同位素丰度
• 绝大多数元素在自然界以同位素混合物存在，如天然的碳是98.90%的12C和1.10%的13C的混合物。
• 由于元素的同位素的存在，所以质谱峰呈现为同位素峰簇，是各种元素及其同位素组成的表现，他们提供了另一重要性息。
• 在质量测定的准确度有限时，根据同位素丰度数据有可量能均限为1定4元0 u素，组而成其。在例m如/z1，41C处10H的20同和位C8H素12峰O2相的对名于义质 m/z140峰的强度分别为11%和8.8%，这是由13C存在的机率所确定的，因而可区分这两个离子。应该注意低丰度同位素峰的测定误差较大，还可能有其他成分的离子与之重叠，所以实际应用有一定限制。
a “Atomic Weights of the Elements 1987,” Pure Appl. Chem. 1988，60：841 括号内的数值为测不准水平，主要是同位素丰度的自然变化。例如，氢原子量为1.00794±0.00007
同位素 1H 2H 12C 13C 14N 15N 16O 17O 18O 19F 23Na 28Si 29Si 30Si 31P 32S 33S 34S 36S 35Cl 37Cl 39K 40K 41K 79Br 81Br 127I
分子量信息
天然丰度（%）b 99.985 0.015 98.9 1.1 99.63 0.37 99.76 0.04 0.2 100 100 92.23 4.67 3.1 100 95.02 0.75 4.21 0.02 75.77 24.23 93.2581 0.012 6.7302 50.69 49.31 100
122
100
N
NH N

色谱定性和定量分析方法

Identification
2019/9/22
二、色谱定量分析方法 1. 峰面积的测量
（1）峰高（h）乘半峰宽（Y 1/2）法：近似将色谱峰当作等腰三角形。此法算出的面积是实际峰面积的0.94倍：
A = 1.064 h·Y1/2 （2）峰高乘平均峰宽法：当峰形不对称时，可在峰高0.15和0.85处分别测定峰宽，由下式计算峰面积：
fi' Ai
f
' s
AS
ci
%

mi W
100
ms
fi' Ai
f
' s
AS
W
100
ms W

fi' Ai
f
' s
AS
100
2019/9/22
内标法特点
(1) 内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对定量结果的影响不大。
(2) 每个试样的分析，都要进行两次称量，不适合大批量试样的快速分析。 (3)若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则：
Ai Ai
)
100
i 1
特点及要求：归一化法简便、准确；进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大；仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。
2019/9/22
（2）外标法
外标法也称为标准曲线法。特点及要求：外标法不使用校正因子，准确性较高，操作条件变化对结果准确性影响较大。对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。
1.0 DEG/MI N
HEWLET PTACKAR
5972A
D
Mass Selectiv eDetecto r

LCMS仪器方法优化流程及注意事项

大气压化学电离（ Atmospheric Pressure Chemical Ionization， APCI）
APCI是Horning 等创导的，当时称为API并首次实现了与HPLC的连接。样品的离子化在处于大气压下的离子化室中完成。结构与ESI大致相同，不同之处在于APCI喷嘴的下游放置一个针状放电电极，通过放电电极的高压放电，使空气中某些中性分子电离，产生H3O+，N2+，O2+ 和O+ 等离子，溶剂分子也会被电离，这些离子与分析物分子进行离子-分子反应，使分析物分子离子化。
Mass Spectrum •定量分析 •定性分析（结构分析）
数据分析处理系统 Bioinformatics
4
常用术语
质荷比（m/z）：是离子的质量和该离子所带静电单位数的比值。基峰与相对强度
基峰（base peak）是质谱图中的最强峰。质谱峰的强度常以相对强度（relative intensity）衡量。以基峰的强度为100，算出各个质谱峰的相对百分强度。
-ESI：+Cl（35），+HCOOH（45），+CH3COO（59）
与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在3～8和10-14,21,25之间均不可能 ,则说明是碎片或杂质
+TOF MS: 7.699 to 7.976 min from Irgonax 1010 2.wiff Agilent 2.5e5 2.4e5 2.2e5 2.0e5 1.8e5 1199.7727 Max. 2.5e5 counts.
27
LC/MS/MS 定量方法开发流程
1 电离模式的选择 2 MRM 参数优化使用标准品优化 fragmentor 和collision energy 3 离子源参数的优化 4 LC分离方法的优化

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a “Atomic Weights of the Elements 1987,” Pure Appl. Chem. 1988，60：841 括号内的数值为测不准水平，主要是同位素丰度的自然变化。例如，氢原子量为1.00794±0.00007
同位素 1H 2H 12C 13C 14N 15N 16O 17O 18O 19F 23Na 28Si 29Si 30Si 31P 32S 33S 34S 36S 35Cl 37Cl 39K 40K 41K 79Br 81Br 127I
• 质谱解析的经典著作是McLafferty的《Interpretation of Mass Spectra》，另外，也有商品化的解析软件《Mass Frontier》等。
基本的偶电子离子裂解反应（1）
单键裂解伴随电荷的迁移
CH3-CH2-OH2+ → CH3-CH2+ + H2O
键的裂解伴随环化及电荷的迁移
LC/MS定性定量方法与技术
盛龙生
中国药科大学南京 210009 E-mail:shenglsh@
LC-MS定性定量方法与技术
本讲内容：
1. LC/MS的基本数据与信息 2. LC/MS定性分析技术 3. LC/MS定量分析技术
LC/MS的基本数据与信息
LC/MS的基本数据与信息基于： MS质谱峰的m/z和强度 LC色谱峰的保留数据与面积
O
S O+
NH2
NH2
磺胺类药物的MS/MS
m/z 156.0119
NH2
O S O+
m/z 156.0773
H3C O
N H3C
O
N NH3+
x10 1 + Product Ion (0.820-0.966 min, 10 scans) (311.08060[z=1] -> **) sulfas_10ng_4GHz-016.d 9.5 9 8.5
因为每个元素均有特定的准确质量，因此，如能准确测定离子的或质分量分子别的为质1量8，0.1就75可3和以1计80算.1其87元9u素，组相成差。0.0例1如26Cu1，3H为24和了C分12离H2这2N 两个化合物，仪器的分辨率m/Δm应为14300，为了区分他们，质量测定应准确到小数点后4位有效数字。但是，随着待测物质质量的增加，由各种元素组合成该质量的可能性迅速增加，而且其中某些组合的质量的差别可能很小，因此，对仪器的分辨率及质量测定的准确度的要求更高。
• 用LC/MS鉴定化合物鉴定时，以质谱全扫描作为搜索扫描，触发MS/MS扫描。在总离子流或基峰离子流中发现化合物，用产物离子谱进行结构鉴定。
• 分析同类化合物中的未知物时，可用已知的裂解途径，进行母离子扫描（PI）或中性丢失扫描（NL）以发现未知物，然后采集产物离子谱进行结构鉴定。
单同位素分子量（mono isotopic molecular mass）由分子中各元素
中丰度最高（最
轻）的同位素的
（相对）原子量计算所得
高分辨质谱和元素组成
如果离子质量测定的准确度足够高，则可以得到该离子确定的元素组成。对于未知物分析，这个方法非常重要，常常称为 “高分辨质谱”。其实，仪器的分辨率和质量测定的准确度显然是两个不同的概念。但是，通常，质谱的准确质量测定是以高分辨率为前提的。如果仪器的分辨率不高，不能分离名义质量（整数质量）相同而准确质量稍有差别的离子，则质谱测定的是由不同离子重叠而成的质谱峰的质量。
形成B、Y的机制
形成A、X的机制
黄酮苷产生的离子的命名
化合物鉴定
• 用LC/MS 鉴定化合物通常分两个步骤：
– 在样品中发现化合物； – 采集产物离子谱鉴定化合物
• 在复杂样品中鉴定化合物，有一定挑战性，低浓度的化合物常被基质抑制或掩盖。
化合物鉴定
—基于四极仪器的方法技术
• 如前所述，目前用得最多的还是基于四极原理的质谱仪，如 QMS、 TSQMS、QTrap 、ITMS，这些仪器为扫描仪器。此处，主要讨论MS/MS 的方法。
高分辨质谱和元素组成
用质谱仪的应用程序，根据仪器测定的质量及离子或分子中可能存在的元素，可计算出在一定测定误差范围内分子或离子的各种可能的元素组成，即实验式。用准确质量计算元素组成时，不能忽略电子的质量。质量测定的误差越小，可能的元素组成越少。确定待测物质的实验式或元素组成时，应考虑质谱法及其他理化方法提供的各种信息。
LC/MS定性定量分析数据
定性数据
• TIC（或BPC，EIC 等）色谱峰的保留时间（tR ） • 质谱及m/z测定数据 • 化合物或离子的分子量、实验式、不饱和度 • 质谱峰的同位素丰度比 • MSn （ CID）结构信息 • “氮规律”
定量数据
• 质谱峰強度，色谱峰的面积
LC/MS提供的信息
质量a 1.007825035 2.014101779 12 13.00335483 14.003074 15.00010897 15.99491463 16.9991312 17.9991603 18.99840322 22.9896767 27.9769271 28.9764949 29.9737701 30.973762 31.9720707 32.97145843 33.96786665 35.96708062 34.96885273 36.96590262 38.9637074 39.9639992 40.9618254 78.9183361 80.916289 126.904473
环状离子断裂两个键，电荷保留
基本的偶电子离子裂解反应（2）
两个键的断裂，伴随着重排
基本的偶电子离子裂解反应（3）
如烷链较长，通过六元环的γ位氢重排为优势过程，这是发生在偶电子离子上的 McLafferty重排
肽产生的离子的命名
寡核苷酸产生的离子的命名
磷酸二酯键的4种可能的裂解产生8种离子，含5’-OH的离子称an 、bn 、cn 和dn而含3’-OH的离子称wn 、xn 、yn和zn。下标n指示其裂解位置。碱基的进一步丢失用括号表示，如a3-B3（A）表示键的开裂发生在3位的磷酸二酯基的核糖碳原子和氧原子之间并在同一位置进一步丢失了腺苷碱基。
TIC
BPC
磺胺类药物的LC/MS
TIC
EIC m/z 311.0805
磺胺类药物的MS/MS
H3C O
N H3C O
NO NH2+S O
H3C O
N H3C
O
N NH3+
specific to sulfadimethoxine
NH2
O
H3N+
S O
common to all sulfonamides
• 在质谱法中，此式只适用于分子离子M＋·。偶电子离子同理，，如由CHM3++比HC+计H4算少所1个得氢的，中故性导分致子DMB的E出DB现E应半加整0数.5。； (M-H)-计算得到的M的DBE应减去0.5。
“氮规律”，奇电子离子，偶电子离子
• 氮规律指出：含偶数氮原子或不含氮原子的分子其分子量为偶数。这是因为氮的质量是偶数（14），而价态为奇数。而其他元素的质量和价态要么均为偶数，要么均为奇数。
ESI/MS全扫描图（Buspirone）
100
(M+H)+ 386
N
O
NN
N N
75
O
Buspirone
C21H31N5O2
50
MW = 385
Relative Abundance
25
(M+Na)+
408
150
200
250
300
350
400
450
500
m/z
Buspirone产物离子谱
Re度
• 如果分子或碎片的元素组成己知，可计算其不饱和度，包括环、双健和叁键，故又称双键相等数（ double bond equivalents, DBE）。
• 设分子式的通式为CxHyNzOn,, 则： DBE=x-(1/2y)+(1/2z)+1
• 卤素等取代一个H的元素计作H，S计作O, P计作N，Si 计作C。
156.07604 12184
4 GHz
8
7.5
7
6.5
6 5.5
Resolution 12184
5
4.5
4
3.5
3
156.01087 12238
2.5
2
1.5
1
156.11226
0.5
9868
0 155.78 155.8 155.82 155.84 155.86 155.88 155.9 155.92 155.94 155.96 155.98 156 156.02 156.04 156.06 156.08 156.1 156.12 156.14 156.16 156.18 156.2 156.22 156.24 156.26 156.28 156.3 156.32 156.34 Counts (%) vs. Mass-to-Charge (m/z)
裂解途径
为了解释互补离子an-Bn和wn的形成，提出了几种裂解途径，例如：
上述裂解途径中首先通过1，2消除丢失碱基。这一消除可能是由于分子间的碱催化产生的（3’磷酸酯基的带负电的氧原子）。然后，由这一中间体通过磷酸二酯基的3’C-O键的开裂产生an-Bn和wn碎片。
寡糖产生的离子的命名
电荷保留在非还原端的碎片称A、B、C，而电荷保留在还原端的碎片称X、Y、Z。
高分辨质谱法也提高了目标化合物筛选和定量测定的选择性。