从组学探讨中医证候本质的研究概况

・５０２・现代中西医结合杂志ＭｏｄｅｒｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１０Ｆｅｂ，１９（４）蛩乩｜。

ｌ誊褊ｋ电从组学探讨中医证候本质的研究概况丁海拔１，盛梅笑２（１．南京中医药大学，江苏南京２１００２９；２．南京中医药大学第一附属医院，江苏南京２１００２９）［关键词】中医证候学；基因组学；蛋白质组学；代谢组学；转录组学［中图分类号】Ｒ２—０３［文献标识码】Ａ［文章编号】１００８—８８４９｛２０１０）０４—０５０２—０３证候是中医学独有的概念，中医证的研究，尤其是客观化、标准化的研究白上世纪５０年代以来一直备受关注。

晚近兴起的组学是一门新型学科，是生命科学最活跃的领域之一，它所具有的多层次、多靶点的研究特点及其整体性、动态性、时空性和复杂性与中医证候有着某种程度的趋间。

借助组学研究的兴起，可以为中医证的研究开辟出一条新的路径。

现将近年来所开展的相关研究综述如下。

１中医证的研究意义与发展方向辨证论治是中医学之精髓。

证是对疾病发生和演变过程中某阶段本质的反映，它通过外在的某些相关脉证。

不同程度地揭示了疾病的病因、病位、病机与病势等，从而为治疗提供依据…。

但在实际临床工作中，对证候的判定常常会因为某些因素的影响，导致不同的人对同一客体所辨别出的证候类型有所差异。

另一方面，相对于西医对疾病的诊断和疗效评价更注重解剖、病理及生化检验的改变而言，中医学的证候就显得较为特殊，不容易为人所理解和接受。

然而，随着现代医学模式的转变，西医也逐渐重视起对人的总体功能活动、生存质量、心理状态等方面的评价，这与中医所强调的辨证论治与整体观有异曲同工之处。

所以，加强对中医证候学的研究是实现中医药现代化与科学化，使之走向世界，得到广泛认可和采纳的莺要途径。

长期以来，中医证的研究仍停留临床观察及经验性报道层面，研究结果常常带有一定的局限性，缺乏随机、对照、双盲的科研设计和大样本、多中心、前瞻性的研究，方法学上也缺乏一定的科学性。

概括起来，中医证的研究有以下３个方面：①文献研究，可以对证候名称、概念的内涵及外延、相关症状和体征的描述性用语进行规范和统一；②Ｉ临床流行病学研究，广泛收集中医临床最为常见的证候，包括证候类型、证候性质、主要症状和体征（包括舌苔、脉象），对症状范围、轻重程度进行量化（借助于数学方法，尤其是统计学），使其逐步从模糊走向精确；③积极探索将西医学的一些生化、病理指标引入证候诊断中，作为证候诊断和疗效评价的客观标准…。

相信通过上述研究，一定能使中医证的研究更加科学化、客观化和规范化，这对明确证的内涵与本质，建立起完善的辨证体系具有重要意义。

［通信作者】盛梅笑，主任医师。

硬士生导师。

Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｒ．ｓｎ＇ｌｘ＠１６３．ｔｏｍ２组学研究开辟了中医证候学研究的新途径对中医而言，证候诊断及疗效评价的客观化与标准化研究对实现中医药现代化至关重要，为此众多学者进行了不懈的探索，并试图将一些西医生化、病理指标引入证候诊断中来提高中医证候诊断及疗效评价的客观性，但这些微观指标的研究大多较为分散，特异性较差，难以全面、客观、真实地反映证候的本质。

而组学研究所具有的多层次、多靶点的研究特点及其整体性、动态性、时空性和复杂性与中医证候的特征有较多相似之处，为中医证的本质研究创造了较为有利的条件，有可能借此而揭示中医证候的科学内涵。

组学是研究核酸、蛋白质、代谢物等分子间网络及其相互作用的学科，目的在于对基因组、蛋白质组、代谢组及转录组等功能进行破译、解读、开发和利用。

从思维方法来看，基因组学、蛋白质组学、代谢组学、转录组学等组学与中医学的整体观有着共同的特征。

中医的整体观认为，人是一个有机的整体，构成人体的各脏腑经络在结构上相互联系、功能上相互协调、病理上相互影响。

而组学也是从整体上研究人体基因、蛋白质、代谢物等的结构与功能，如基因组学就是从整个基因组的层面来阐释所有基因在染色体上的位置、结构、基冈产物的功能以及基因之间关系的，也具有鲜明的整体性。

因此，如果将中医证的研究建立在现代科技的基础上，运用组学等技术从生物学的不同层面去探讨中医证的本质，必定会有新的发现。

３中医证候与组学相关性研究的现状３．１证候与基因组学的相关性研究基因组学是从整体对基因的活动规律进行探讨，研究内容涉及基因组的表达、基因的多样性、基因组功能的阐释及蛋白质产物的功能等，它从整个基因组的层面来阐释所有基因在染色体上的位置、结构、基因产物的功能及基因之间的关系。

在对中医证候与基因组学关系的研究中发现，基因表达差异及基因序列的多态性决定了个体的差异，在ｌ临床则表现为不同的证候群。

３．１．１证候与基因表达差异性的研究肖诚等旧３利用基因芯片检测和分析技术，探讨了ＲＦ阴性和ＲＦ阳性类风湿关节炎（类风关）寒热证候患者外周血ＣＤ＋４Ｔ细胞的基因表达差异，发现有５５条基因表达存在显著性差异，这些基因主要涉及免疫应答和信号传导，其中ＲＦ阳性类风关寒热证候患者之间有７１条基因异常表达，主要涉及功能代谢和免疫应答，ＲＦ阴性类风关寒热证候患者之间有７０条基因异常表达，与现代中西医结合杂志ＭｆｄｅｍＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎ∞ｅａｎｄＷ鹤ｔｅｒｎＭｅｄｉｃｉｎｅ２０１０Ｆｅｂ，１９（４）・５０３・上述ＲＦ阴性和ＲＦ阳性患者所表达的５５条基因没有重复，与ＲＦ阳性寒热证候所表达的７１条基因只有２条基因重复，主要涉及功能代谢。

表明类风关患者ＲＦ阴性和阳性之间的基因表达谱差异与寒热证候基因表达谱差异有所不同，提示了中医证候具有基因表达谱的依据。

刘小美等ｉ３】检测了Ｈ２２荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共３个阶段４个证候垂体基因表达的差异，结果筛选到１４个阳气虚证独特上调的基因，其中多数基因在正常小鼠及其他证候小鼠的垂体表达很低或几乎关闭，独特下调的基因有３个，表明Ｉ－ｔ２２荷瘤小鼠阳气虚证垂体基因表达与其他证候存在较大差异，其中部分可能是阳气虚证的标志基因。

杨丽萍等【４Ｊ以虚寒证家系成员为研究对象，应用基因芯片技术筛选差异表达基因谱，用ＡＮｏＶＡ方法分析获得的８９条差异表达基因，结果发现涉及新陈代谢有１６条基因，占７０．７％，其中与能量代谢相关基因６条，占新陈代谢基因的３７．５％，表明虚寒证的发生涉及多种基因的异常表达，主要与能量代谢异常相关。

吴元胜等【５Ｊ等用表达谱基因芯片筛选ＳＬＥ的差异基因，比较不同中医证型的基因表达，发现涉及细胞因子及其受体、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白、蛋白质翻译合成、离子通道和运输蛋白、细胞周期蛋白、ＤＮＡ和ＲＮＡ结合转录蛋白、细胞的外基质成分等１６大类５８０条基因有显著差异表达，其中热毒炽盛证和阴虚内热证ＳＬＥ的大部分基因，特别是与代谢相关的基因表达具有一致性，提示ＳＬＥ的发生是多基因共同作用的结果。

３．１．２证候与基因多态性的研究洪永敦等【６】采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）核普酸分型技术检测冠心病痰瘀证ＡｐｏＥ的基因型，发现痰证患者Ｅ３／４基因型和Ｅ４等位基因频率明显高于痰瘀证及瘀证患者（Ｐ均＜０．０５），而痰瘀证及瘀证患者Ｅ３／３基因型及Ｅ３等位基因频率高于痰证患者（Ｐ均＜０．０５），表明Ｅ４等位基因。

特别是Ｅ３“基因型可能是冠心病及中医痰证的主要易感基因。

涂晋文等…应用ＰＣＲ技术筛查了３８２例脑梗死患者和２００例健康人血管紧张素转化酶基因ＡＣＥ（Ｉ巾）多态性的分布情况，结果脑梗死组ＤＤ基因型高于健康对照组（聋＝４．４２，Ｐ＜ｏ．０５），并且Ｄ等位基因频率亦高于健康对照组（聋＝４．３７，Ｐ＜０．０５），其中风痰瘀血、痹阻脉络证及肝阳暴亢、风火上扰证２个证型与健康对照组比较，前者ＤＤ基因型较健康对照组显著增多（）（２＝４．７１，Ｐ＜０．０５），后者ＤＤ基因型与Ｄ等位基因频率较健康对照组多（聋＝６．７１，５．１７，Ｐ＜０．０１），提示ＡＣＥ—ＤＤ基因型或Ｄ等位基因是脑梗死的遗传易感因素，并与脑梗死肝阳暴亢、风火上扰证密切相关，该项研究还发现脑梗死组患者ＤＤ基因型患者血浆血管紧张素ＡｎｇＩＩ水平显著增高，在肝阳暴亢、风火上扰证患者中表现更为显著，认为ＤＤ基因型导致血浆ＡｎｇＩＩ水平增高可能是中医肝阳暴亢、风火上扰证诊断的遗传易感因素。

李赛美等［８Ｊ对糖尿病冠心病的中医证候与ＡＣＥ（Ｉ／Ｄ）基因多态性关系进行探讨，发现血瘀证组ＩＤ型频率高于肾阳虚证组（Ｐ＜０．０５），而ＤＤ型频率却低于肾阳虚证组（Ｐ＜０．０５），表明ＡＣＥ基因ＩＤ多态性分布与糖尿病冠心病的发病和病情转归有关，认为Ｄ型等位基因可能是糖尿病冠心病肾阳虚证发生的内在因素。

３．２证候与蛋白质组学的相关性研究蛋白质组学是指基因组表达的全部蛋白质或细胞、组织、机体在特定时间和空间所表达的所有蛋白质，它不同于传统的对一个或某一类蛋白质研究，是从整体角度分析蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质的功能与细胞生命活动的规律。

以蛋白质双向电泳和新型质谱分析为技术平台，研究不同条件和状态下蛋白质组的性质和变化规律，是后基因组时代的研究重点。

张娴等∽Ｊ采用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）模型。

应用双向凝胶电泳技术分析大鼠肝脏蛋白质组的变化，造模６周后，大鼠出现易激惹程度增高、饮水量增加等肝阳上亢证候的表现，结果Ｓ陬组和肝阳上亢组蛋白斑点总体分布相似，ＳＨＲ组共检测到蛋白质点数为（７１６±５８）个，肝阳上亢组为（８７５±１９）个，仪在肝阳上亢组表达的蛋白质有２７个，有２８个点在表达量上有明显变化（５倍以上），其中１５个点下调，１３个点上调，表明２组差异表达蛋白町能与高血压肝阳上亢证候的形成相关。

钟小兰等¨０Ｊ以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型，二维凝胶电泳（２一ＤＥ）分离大鼠血清蛋白质，获得差异表达蛋白质，利用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ—ＭＳ）和数据库分析鉴定差异表达蛋白质，发现９个具有明显表达差异的蛋白质斑点，经鉴定町确定的６个蛋白质分别为转甲状腺素蛋白（ＴＴＲ）、水解酶Ｂａｌ一６４７、血清白蛋白前体、抗乙酰胆碱受体抗体Ｆａｂ片段、Ｉ酚一２链Ｃ区和ｐ．球蛋白，所筛选出的差异表达蛋白质主要涉及免疫、神经内分泌和营养物质代谢方面，证实了从表达蛋白质组学的角度来进行中医证的实质研究是可行的。

赵慧辉等［１１］采用双向凝胶电泳和质谱技术寻找冠心病不稳定型心绞痛血瘀证的血浆差异蛋白，发现ａ，一酸性糖蛋白、结合珠蛋白ａｌ链、Ｏｔ，一抗胰蛋白酶、结合珠蛋白ｐ链、结合珠蛋白ａ２链在冠心病不稳定型心绞痛痰瘀互阻证和气虚血瘀证患者中水平升高，载脂蛋白ＡⅣ、载脂蛋白ＡＩ、甲状腺转运蛋白在冠心病不稳定型心绞痛痰瘀丐＝阻证和气虚血瘀证患者中水平降低，表明冠心病不稳定型心绞痛血瘀证可能属于一种炎症反应，且与脂质代谢紊乱有关，所发现的差异蛋白可为研究或发现抗心绞痛药物作用的新靶标提供线索。