抗生素知识培训知识讲解

3、陶瓦盖
内径约103mm，外径108mm，平坦，吸水 性强，应定期清洗、干燥。
4、钢管（牛津杯）
每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内 浸泡2个小时以上，进行灭菌后再进行洗涤， 在150℃-160 ℃干热灭菌2小时备用。
使用同一批次的钢管。钢管内外壁要求清 洁光滑，两端面应平坦光洁，管壁应厚薄 一致，重量差异不超过0.05g
6.培养
加液完毕后，用陶瓦盖覆盖，平稳地移 入培养箱中，至35-37 ℃培养至所需的时间。
双碟在培养时，不易使双碟靠近培养箱 热源较近处，以免造成培养温度不均匀， 使同一双碟上细菌生长速度不一致，造成 抑菌圈变小或抑菌圈不圆。
7、抑菌圈测量
从培养箱中取出培养皿，将钢管倒入盛有 1：1000新洁尔灭或其他消毒液内，盖上玻 璃盖。用抑菌圈测量仪或者游标卡尺测量， 然后按生物统计法测定其效价。
• 3.抑菌（bacteriostasis）：抑制人体内部 或外部细菌生长繁殖的。
• 4.防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细 菌繁殖的方法。
5.无菌（asepsis）：不存在任何活菌。
6.无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品 的操作技术。
7.清洁：能减少微生物附着在无机物体表面 的数量的方法。
5、钢管放置器：
有全自动和半自动之分，一般为四孔，要 求钢管下落时应垂直平稳、位置正确。应 定期用75%酒精擦拭。
如果没有钢管放置器，也可用干热灭菌过 的镊子放置钢管。
6、恒温培养箱：
有隔水式、电热式。要求温度控制在35 ℃ -37 ℃，隔板要求水平，用于细菌培养。
7、抑菌圈测定仪： 用于测定细菌所致抑菌圈直径，也可以用 游标卡尺进行测量直径。
2、特定单位
如粘菌素理论值为每1mg相当于30000粘 菌素单位（2003版p191）。
杆菌肽锌原料效价要求每1mg不少于40杆 菌肽单位。
3、半合成青霉素类：
如氨苄西林、阿莫西林等都是以百分含量 计算。
以阿莫西林（p115）为例，原料要求以无 水物计算，含C16H19N3O5S不得少于95.0%.
三、四环素类：
包括土霉素、盐酸土霉素、四环素、 盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西 环素等。
四、大环内酯类：
包括红霉素、乳糖酸红霉素、硫氰酸红霉 素、吉他霉素、酒石酸吉他霉素、泰乐菌 素、酒石酸泰乐菌素、磷酸泰乐菌素、酒 石酸泰万菌素、替米考星、泰拉霉素等。
五、酰胺醇类 包括 甲砜霉素、氟苯尼考等。
液体制剂量取供试品体积的方法，粘稠的 液体不便量取时，可采取称重，然后测定 相对密度，折算称体积。
2.稀释
稀释标准品和供试品所用的缓冲液应用 同一瓶内或同一次制备和缓冲液几瓶混匀 后使用。为避免抗生素被玻璃吸附，在量 取溶液时，要用被量取的溶液流洗3次。
3.制备底层
用灭菌的吸管吸取已融化的培养20ml 注入培养皿中，稍后盖上陶瓦盖吸收水蒸 汽，以免培养基温度过高，加盖陶瓦盖后 冷凝水影响菌层的表面平整性（由于冷凝 水的局部冷却和稀释作用，可使菌层培养 基凝固后表面不平）。
二、抗原虫药（抗球虫药）
包括 莫能菌素、莫能菌素钠、盐霉素钠、 拉沙洛西钠、甲基盐霉素、马杜米星铵、 海南霉素钠、赛杜霉素钠等。
第二部分：微生物试验相关知识
一、名称解释
• 1.消毒（disinfection）：杀死物体上或者 环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞 或非病原微生物的方法。
• 2.灭菌（sterilization）：杀死物体上所有 微生物的方法（病原微生物，非病原微生 物）。
• 5.有机物 有机物可消耗消毒剂，
•
降低消毒剂浓度
第三部分：抗生素微生物检定法
一、概述： 抗生素微生物检定法是利用抗生素在低
微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特 点，以抗生素的抗菌活性为指标，来衡量 抗生素中的有效成分效力的方法。该方法 是与临床要求相符，更能确定抗生素的临 床医疗价值。
抗生素微生物检定法分为稀释法、浊度 法和琼脂扩散法（管碟法），每种方法的 试验操作差别较大，但相同之处都是将标 准和供试品两者的抗菌效力比较。
4.制备菌层
取出试验菌悬液，吸取已试验妥的菌
量加入已融化并保温在水浴中（一般细菌 48℃，芽孢60 ℃），摇匀作为菌层培养基。 然后吸取菌层培养基5ml，使其均匀摊在底 层培养基上，置水平台上，用陶瓦盖覆盖， 放置20-30分钟，备用。
5. 滴加抗生素溶液至小钢管
采用胶头滴管或者定量加液器向钢管中 加溶液。 由于滴加先后顺序及时间的不同， 抗生素在培养基内扩散有差异。在滴加抗 生素溶液时采用S2→T2→S1→T1（标准品 高浓度、样品高浓度、标准品低浓度、样 品低浓度）的顺序滴加，以减少试验误差。
• 3.生物学消毒灭菌法
• 1）抗生素 临床治疗
• 2）细菌素 为微生物代谢产物，破坏同源 性细菌。
• 3）噬菌体 感染细菌、真菌、放线菌、螺 旋体等微
•
生物的病毒。
• 4）中草药
• 三、影响消毒灭菌效果的因素
• 1.消毒剂的性质、浓度与作用时间
• 2.微生物的种类与数量
• 3.温度
• 4.酸碱度
琼脂扩散法(管碟法）：
是使用固体培养基，在培养基凝固前，将试 验菌混进去，采用一定的方法，将含有抗生素的 物质与含菌的培养基表面接触。目前，国际上采 用将抗生素加入到特定的小钢管中，使小钢管中 的抗生素与培养基表面接触，此方法称为“管碟 法”。经过培养后，由于抗生素不断向培养基中 扩散，凡抑菌浓度能到达之处，试验菌不能生长， 从而形成透明的抑菌范围，此范围一般都呈圆形， 称为“抑菌圈”。
林钠、海他西林、阿莫西林、阿莫西林钠、苯唑 西林钠、氯唑西林钠、苄星氯唑西林、普鲁卡因 青霉素、苄星青霉素等
（二）头孢菌素类 包括 头孢噻呋、盐酸头孢噻呋、头孢噻呋钠、 头孢氨苄、头孢维星钠、硫酸头孢喹肟等。
二、氨基糖苷类：
包括：硫酸链霉素、硫酸双氢链霉素、硫 酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、 盐酸大观霉素、硫酸大观霉素、硫酸庆大 小诺霉素、硫酸安普霉素等。
二、管碟法材料、仪器及试剂的准备及基本 要求
1、操作间：要求净化级别达到万级， 安装紫外线杀菌灯，安装空调设备，能控 制室温在20-25度之间。
2、双碟
为硬质玻璃或塑料培养平皿，内径约 90mm，高16-17mm，碟底厚度均匀一致。 使用前应清洗干净后置150℃-160 ℃干热灭 菌2小时或者121 ℃高压蒸汽灭菌30分钟。
相关知识
一、抗生素含量表示方法
1、重量单位：以抗生素中所含特定的 抗菌活性部分的重量作为效价单位，一般 以1mg相当于1000单位计算，但由于抗生 素多以盐的成分存在。红霉素标准品的理 论效价为1000单位/mg，但实际生产中红霉 素（p97）效价不低于920红霉素单位/mg 、 硫氰酸红霉素（p288）效价不低于750红霉 素单位/mg。
10、培养基：
尽量购置质量稳定的干粉培养基（如中 国兽药药品监察所、中国药品生物制品监 察所等生产的培养基）。
常用的培养基有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号等 培养基，用前应按使用说明书进行配制， 注意调节培养基pH值。
11、菌种： 菌种应由中国兽医药品监察所和中国药品
生物制品检定所等国家法定的菌种保藏中 心提供。 常用的菌种包括：
三、管碟法操作步骤
1、称量：标准品从冰箱内取出后，应放置 至室温后称取。标准品的称取量往往少于 100mg，需选用十万分之一的分析天平精 密称量，称取量应大于10mg，并且为了减 少实验误差，应使用小烧杯或特制的称量 壶作为称量容器。
• 供试品称取量若少于100 mg，称取方法同 标准品；供试品取量若多于100 mg，可直 接使用称量纸在万分之一的分析天平上精 密称量。称量过程中，不能裸手接触称量 纸或称量容器。
8.净化：能显著减少或破坏一定空间中微生 物数量和生物活性的方法。
• 二、消毒灭菌方法：
• 1.物理消毒灭菌法 • 2.化学消毒灭菌法 • 3.生物学消毒灭菌法
• 1.物理消毒灭菌法
• 1）热力灭菌法
• ①干热灭菌法 ②湿热灭菌法
• 焚烧
巴氏消毒法
• 烧灼
煮沸法
• 干烤
高压蒸气灭菌法
• 红外线
• 湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下： • ①湿热情况下菌体蛋白容易凝固; • ②湿热穿透力比干热大； • ③湿热的蒸汽具有潜热。
枯草芽孢杆菌（CMCC63501)、 短小芽孢杆菌（CMCC63202）、 藤黄微球菌（CMCC28001)、 金黄色葡萄球菌（CMCC26003）等。
12、标准品
标准品是指用于生物检定、抗生素或生化 药品中含量或者效价测定的标准物质，一 般以效价单位标示，标准品应由国家法定 的单位制备、标定和供应，一般常用的标 准品来源于中国兽医药品监察所和中国药 品生物制品检定所。
4、重量折算单位:
以青霉素钠（P121)为例，原料要求，以 无水物计算，含C16H17N2NaON4S不少于 96.0%。注射用青霉素钠标示量却以单位计， 每1mg青霉素钠相当于1670青霉素单位。
二、抗生素制剂投料的问题： 1、考虑制剂的标示量的方式。 2、考虑水分、杂质等占的比例。 3、考虑原料的实际含量（效价）
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• 2.化学消毒灭菌法
• 化学消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。
如：二氧化氯、戊二醛等。
• 防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。
如：苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠等 。
• 化学治疗剂：用于治疗传染病的化学药物，可选
择性地作用于细菌代谢不同环节，杀灭或抑制病 原菌，对宿主无毒或很低，如异烟肼、无环鸟苷 等。
初级代谢：指生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢 和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过 程，称为初级代谢。