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18生物化学实验--吴宪-Folin法测定血糖含量标题：18生物化学实验——吴宪-Folin法测定血糖含量一、实验目的1.掌握吴宪-Folin法测定血糖含量的原理和方法。
2.学习使用分光光度计测量样品吸光度。
3.了解血糖的生理意义及其调节机制。
二、实验原理吴宪-Folin法是一种利用邻甲苯胺和硫酸铜反应生成紫红色络合物的原理，通过测量该络合物在特定波长下的吸光度来测定血糖含量的方法。
由于葡萄糖分子中含有醛基，因此可以利用这一特性进行测定。
本实验采用吴宪-Folin法进行血糖含量的测定。
三、实验步骤1.样品准备：收集受试者在禁食12小时后的静脉血，分离血清备用。
2.试剂准备：将邻甲苯胺、硫酸铜、碳酸钠等试剂按照配方准确称量，溶解定容，现配现用。
3.测定步骤：将试剂和样品按照规定比例混合，在规定温度下静置一段时间，用分光光度计在特定波长下测量吸光度，记录数据。
4.数据处理：根据吸光度和标准曲线计算血糖浓度。
四、实验结果与数据分析1.数据记录：记录受试者血糖吸光度数据（表1）。
表1：血糖吸光度数据记录表表2：血糖浓度计算表3.数据统计：对所有受试者的血糖浓度进行平均值和标准差统计（表3）。
表3：血糖浓度统计表平均值：x̄= ΣC/n (mg/dl) 标准差：s= [Σ(C-x̄)²/n]½五、结论总结与讨论根据实验数据，我们得出以下结论：1.所有受试者的血糖浓度均处于正常范围内。
这表明受试者在禁食12小时后的血糖水平处于生理正常范围。
这一结果与我们所知的人体在禁食状态下的血糖调节机制相符。
当人体处于禁食状态时，胰高血糖素分泌增加，促进肝糖原分解，使血糖水平维持在正常范围。
2.实验结果存在一定差异。
这可能与个体差异、采血时间、实验操作等因素有关。
为了获得更为准确的数据，需要进一步改进实验方法，提高操作精度和标准化程度。
此外，对于不同个体之间的比较，应考虑个体差异对实验结果的影响。
3.吴宪-Folin法是一种灵敏度高、操作简便的血糖测定方法。
中国海洋大学实验报告姓名庞裕智专业年级生命基地班2011 题目血糖的定量测定(Folin-Wu法)学号************科目生物化学实验时间周一90节同组者田特一、实验目的1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。
2、学会制备无蛋白血滤液。
3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。
其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。
Cu2+(CuSO4) + 葡萄糖 Cu+ （Cu2O）无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物——钼蓝。
Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物 OD420比色血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。
可用比色法定量的测定。
三、实验仪器1、25mL血糖管×3支；2、血糖管橡胶塞×3个；3、1mL胖肚吸管×1支；4、100mL锥形瓶×2个；5、漏斗架×1个；6、普通漏斗×2个；7、水浴锅×1个；8、电炉×1个；9、移液管1mL×2支；2mL×3支；5mL×2支；10mL×1支；10、滤纸×1盒；11、吸耳球×2个；12、7200型分光光度计×1台；13、表面皿×1个。
四、实验试剂1、标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）(1)1%葡萄糖母液：称取1.000g葡萄糖，溶于蒸馏水，稀释并定容至100ml。
(2)葡萄糖标准液：取1.0ml葡萄糖母液于100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
2、10%钨酸钠溶液：称取钨酸钠10g，溶于蒸馏水并定容至100毫升。
3、0.33mol/L H2SO4溶液：于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。
蛋白质的定量测定――福林酚法(Folin―酚试剂法)实验原理Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法。
以后在生物化学领域得到广泛的应用。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这个方法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时较长，要严格控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
凡干扰双缩脲反应的基团，如 -CO-NH2, -CH2-NH2, CS-NH2以及Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物均可干扰Folin—酚反应，而且对后者的影响还要大得多。
此外，酚类、柠檬酸对此反应也有干扰作用。
Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。
蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。
乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。
此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。
此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。
本法可测定范围是25—250μg蛋白质。
试剂和器材一、试剂Folin—酚试剂:试剂甲：1) 4%碳酸钠溶液2) 0.2mol/L氢氧化钠溶液3) 1%硫酸铜溶液4) 2%酒石酸钾钠溶液。
临用前将（1）与（2）等体积配制碳酸钠—氢氧化钠溶液。
（3）与（4）等体积配制成硫酸铜—酒石酸钾钠溶液。
然后这两种试剂按50:1的比例配合，即成Folin—酚试剂甲。
此试剂临用前配制，一天内有效。
试剂乙：称钨酸钠（Na2WO2?2H2O）100g，钼酸钠（Na2MoO4?2H2O）25g置2000mL磨口回流装置内，加蒸馏水700mL，85%磷酸50mL和浓硫酸100mL。
充分混匀，使其溶解。
小火加热，回流10h（烧瓶内加小玻璃珠数颗，以防溶液溢出），再加入硫酸锂（LiSO4）150g，蒸馏水50mL及液溴数滴。
