细菌感染的病原学诊断

二、标本的处理
1.标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。 脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培 养的标本保存时间不应超过24h。对环 境敏感的细菌应保温并立即送检。
2.标本中可能含有致病菌，必须注意安全 防护。切勿污染环境。对于烈性传染病 标本运送时更要由专人运送，严格按规 定包装。
3.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管 内运送，有时可直接用抽取标本的注射 器运送。
二、不染色细菌标本检查
1.主要用于检查生活状态下细菌的 动力及运动状况。可对某些病原 菌作出初步鉴定，如霍乱菌。
2.螺旋体由于不易着色并有形态特 征，故多用不染色标本作暗视野 显微镜检查。
三、细菌染色标本的检查
细菌标本经染色后，除能清楚看 到细菌的形态、大小、排列方式外， 还可根据染色反应将细菌进行分类。
(一)常用染料
分为碱性和酸性两大类。此外，还有复 合染料。 1．碱性染料 电离后显色离子带正电荷，
易与带负电荷的被染物结合。由于细菌 均带负电荷，易与染料结合而着色。常 用的有碱性复红、结晶紫、美蓝等。
2．酸性染料 电离后显色离子带负电荷， 易与带正电荷的被染物结合。细菌都带有 负电荷故不易着色。通常用来染细胞浆， 而很少用于细菌的染色。常用的酸性染料 有伊红、刚果红等。
第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的，要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验，达
第二章细菌感染实验诊断

（二）常用的染色方法 1．革兰染色（gram stain）
革兰阳性球菌
革兰阴性杆菌
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第二节 细菌的形态学检查
2．抗酸染色 （acid-fast stain） 可将细菌分为两大类： 即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌
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第二节 细菌的形态学检查
3．荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察
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第四节 细菌的非培养检测方法
二、分子生物学检测 （一）核酸杂交
1. 探针的种类 （1）全染色体DNA探针 （2）染色体克隆片段DNA探针 （3）质粒DNA探针 （4）rRNA基因探针 （5）寡核苷酸探针
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第四节 细菌的非培养检测方法
2．核酸杂交在临床细菌检测中的应用 （1）细菌分类鉴定 （2）细菌快速鉴定 （3）细菌耐药性的检测 （4）细菌毒素的检测 （5）细菌流行病学调查
结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白
喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。
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第二节 细菌的形态学检查
4.鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数
量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中 很重要。 5.异染颗粒染色
用于白喉棒状杆菌染色。
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
（三）培养基的选择 从血液、骨髓中
分离病原菌用血液增 菌培养基
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第三节 细菌的分离培养和鉴定
二、分离及培养 （一）细菌的分离
1．平板划线分离法 2．斜面接种法 3．液体接种法

主要用于肠杆菌科细菌中属及种的鉴别
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明胶液化试验
明胶
胞外酶 分解
氨基酸
失去凝固力
液态明胶
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别 2019 也用于鉴别- 炭疽杆菌（+）和类炭疽杆菌 68
苯丙氨酸
苯丙氨酸脱氨酶 脱氨基
苯丙酮酸 +
氯化铁
绿色
主要用于肠杆菌科细菌的鉴别
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氨基酸脱羧酶试验
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一、检查方法
（一）不染色标本检查法
主要用于观察生活状态下微生物某些形态 特点及运动性
‫٭‬常用的方法有压滴法和悬滴法
如:用压滴法观察霍乱弧菌的“鱼群样运动”
悬滴法观察霍乱弧菌的“穿梭样运动”
如在同一方法制作的另一标本中加入效价≥1:64
霍乱多价血清则穿梭样运动停止并发生凝集,则为制
2动019 试验(+)
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二氧化碳培养箱
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2、烛缸法:
3、化学法： 按每升容积重碳酸钠
0.4g与1mol/L盐酸 0.35ml比例放入标本 缸,密封后倾斜容器使 两者接触产生CO2
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烛缸二氧化碳培养法
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★厌氧培养法：厌氧罐培育法和厌氧袋法 1、厌氧罐培育法：用理化方法除去密
闭容器中的氧，造成无氧环境，以利于专 性厌氧菌生长。
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（7）鸡蛋和动物血清:虽然不是构成培养基 的基本成分,但却是某些细菌生长所必需的营养物 质,所以仅用于制备一些特殊的培养基。
（8）生长因子：是细菌生长所必需的，但需 要量很小。在制备培养基时，常加入维生素、氨 基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。

临床医学检验学主治医师：细菌感染的病原学诊断三1、单选利用实验动物分离鉴定病原菌时，首选的动物是（）.A.雌性动物B.雄性动物C.健康的动物D.体重相近的动物E.对病原菌最敏感的动物正确答案：E2、（江南博哥）单选下列哪个不是细菌生长所需要的营养物质（）.A.蛋白质B.肉浸液C.牛肉膏D.琼脂E.血液正确答案：D参考解析：制备培养基时，需要在液体中加入凝固物质，最常用的是琼脂，是一种理想的固体培养基赋形剂，因其不被细菌分解利用，故无营养作用。

3、单选破伤风梭菌应选用的培养基是（）.A.普通琼脂斜面培养基B.鲍-金培养基C.吕氏血清斜面培养基D.罗-琴培养基E.庖肉培养基正确答案：E参考解析：结核分支杆菌应选用的培养基是罗-琴培养基；白喉棒状杆菌应选用的培养基是吕氏血清斜面培养基：破伤风梭菌厌氧芽孢杆菌应选用的培养基是庖肉培养基。

4、单选培养肠道致病菌常用的选择性培养基是（）.A.LB培养基B.巧克力培养基C.醋酸铅琼脂培养基D.葡萄糖半固体培养基E.SS培养基正确答案：E参考解析：SS琼脂有较强的抑制力，用于志贺菌和沙门菌的分离。

5、单选甲基红试验的基本原理是（）.A.检测细菌对尿素的分解能力B.检测细菌对色氨酸的分解能力C.检测细菌对糖的分解能力D.检测细菌对蛋白胨的分解能力E.检测细菌对含硫氨基酸的分解能力正确答案：C参考解析：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降至4.5以下，当加入甲基红试剂则呈红色，为甲基红试验阳性。

6、单选对实验动物进行接种的方法是（）.A.皮内注射法和皮下注射法B.腹腔注射法和肌内注射法C.静脉注射法和足掌接种法D.脑内注射法和鼻内接种法E.以上均是正确答案：E7、单选甲基红试验阳性结果是（）.A.黄色B.红色C.黑色D.绿色E.蓝色正确答案：B8、单选用于接种胆汁标本的培养基不包括（）.A.血平板B.厌氧平板C.麦康凯平板D.SS平板E.增菌肉汤正确答案：D参考解析：胆汁标本除一般培养外还需加厌氧培养及增菌培养。