BD流式细胞仪原理与典型故障分析

FACSCount流式细胞仪常见故障及排除流式细胞术自70年代中期就成为研究细胞生物学的重要技术，至今己被广泛应用于肿瘤学、免疫学、血液学、药物学等领域[1]。

FACSCount 系统是美国BD公司专门为辅助性T淋巴细胞（CD4细胞）监测而设计的一台经济普及型流式细胞仪，用来计数未裂解全血中的CD4，CD8和CD3T淋巴细胞绝对数值，与传统的流式细胞仪相比，具有完善的CD4、CD8、CD3绝对计数系统；最简化的样本处理过程，全血标本，不需要额外的裂解和洗涤步骤；完善的软件功能，实现样本采集、结果分析和打印的全程自动化；严格完整的质控和对照系统，具有SFDA认证等特点，在CD4+T 细胞监测领域已得到广泛应用和开展。

但应用FACSCount流式细胞仪有一个最大的问题，一些标本在FACSCount系统检测不出结果，最终显示为XXXX，这是我们在实际工作中经常遇到和头疼的地方。

1 FACSCount流式细胞仪常见故障原因分析1.1 环境因素FACSCount流式细胞仪对环境要求非常高，最适宜环境为温度20-25℃，湿度68-77%RH。

在南方，湿度过大会导致仪器软盘磁性丧失，仪器不能进入系统正常运转，实验室内应配置冷暖空调和除湿机。

在北方，湿度不够会使过滤泵干燥或上样针结晶，实验室内应配置冷暖空调和加湿器。

仪器安装应接单独可靠地线，接地电阻小于1欧姆，电阻过大会导致流式细胞仪的激光器损坏，同时要可持续电源、稳压器，防止突然断电导致数据丢失、仪器损坏。

1.2 样本因素1.2.1 标本数值超出系统检测可检测范围1.2.2 严重溶血、凝血或坏死，因为死细胞增强标本对荧光染料的非特异性染色，这使背景荧光增多，干扰真正的荧光信号；1.2.3 样品内存在干扰因素，黄疸指数过高、吸毒人员的血样、抗凝剂运用不对等；1.3 操作因素1.3.1 进样时，样品液面没有因为上样而变少，屏幕显示数值缓慢降为0，最终出现XXXX的结果。

流式细胞仪常见故障维修处理方法
流式细胞仪常见故障维修处理方法包括以下几点：
1. 仪器无法打开或无法正常运行：首先检查电源线是否插紧，确保电源供电正常。

同时确认电源开关是否打开。

如果仪器仍无法正常运行，可尝试重新安装软件或重启系统。

2. 数据无法读取或显示错误：检查数据线是否插紧，并确保与计算机的连接稳定。

同时检查仪器软件是否最新版本，可尝试重新安装驱动程序或软件。

3. 样品无法通过流式细胞仪：首先检查样品是否准备好并合适。

确保样品的浓度适当，含有足够的细胞数量。

检查流式细胞仪的流速设置是否正确，可尝试调整流速。

同时检查光源是否正常工作和传感器是否干净，如有需要可以进行清洁或更换。

4. 检测结果与预期不符：首先检查实验条件是否正确设置，包括抗体浓度、荧光染料浓度、细胞浓度等。

确认仪器的设置是否正确，包括激光的波长和光滤波器的选择。

如果结果仍不符合预期，可尝试更换抗体或染料，并重新确定实验参数。

5. 仪器噪音或信号干扰：检查光源和光学系统是否干净，可以使用专业的清洁剂进行清洁。

确保仪器的温度和湿度控制正常，避免影响仪器的稳定运行。

如果仍有噪音或信号干扰，可以尝试更换光源或传感器。

6. 其他故障：如果以上处理方法仍无法解决问题，建议联系仪器制造商或专业维修人员进行维修或咨询。

流式细胞仪工作原理流式细胞仪（Flow Cytometry）是一种广泛应用于生物医学研究领域的仪器，它能够对单个细胞进行快速、高效的分析和排序。

流式细胞仪的工作原理是利用激光照射细胞，测量细胞在流动状态下的荧光和散射信号，从而获取细胞的多种特征信息。

本文将详细介绍流式细胞仪的工作原理，以及其在生物医学研究中的应用。

首先，流式细胞仪的工作原理基于细胞在流动状态下对激光的反射和荧光发射。

当细胞悬浮在流体中通过激光束时，细胞会散射激光光线并发出荧光信号。

流式细胞仪通过收集这些散射光和荧光光信号，并对其进行检测和分析，从而获得细胞的多种信息，如大小、形状、表面标记物、细胞器的含量等。

其次，流式细胞仪的核心部件包括激光系统、光学系统、流体系统和信号检测系统。

激光系统用于产生激光束，不同波长的激光可用于激发不同荧光染料；光学系统用于聚焦激光束和收集散射光和荧光光信号；流体系统用于将细胞悬浮液以单个细胞的方式输送到激光束中；信号检测系统则用于检测和记录细胞发射的光信号。

这些部件协同工作，使得流式细胞仪能够高效地对细胞进行分析和排序。

流式细胞仪在生物医学研究中有着广泛的应用。

首先，它可以用于表征和分析不同类型的细胞。

通过对细胞的大小、形状、表面标记物等特征进行分析，可以帮助科研人员更好地了解细胞的功能和特性。

其次，流式细胞仪还可以用于细胞的分选和分离。

科研人员可以根据细胞的特征，利用流式细胞仪将不同类型的细胞进行分选和分离，从而获得纯度较高的细胞群。

此外，流式细胞仪还可以用于检测和分析细胞内的蛋白质、核酸和其他生物分子，对于疾病诊断、药物筛选等方面有着重要的应用价值。

总之，流式细胞仪通过激光照射细胞，测量细胞在流动状态下的荧光和散射信号，从而获取细胞的多种特征信息。

它在生物医学研究中有着广泛的应用，可以帮助科研人员更好地了解细胞的特性，进行细胞的分选和分离，以及分析细胞内的生物分子。

随着技术的不断进步，流式细胞仪将在生物医学研究领域发挥越来越重要的作用。

BD（FACSCalibur）流式细胞仪常见故障分析及处理于双白安徽省宿州市立医院（安徽宿州 234000）【摘要】内容提要：为了保障检验科室工作，提高设备使用率，降低医院维护成本，对流式细胞仪常见故障的维修方向及方法进行简单介绍，保障设备的维修及时性。

【期刊名称】《中国医疗器械信息》【年(卷),期】2019(025)017【总页数】2【关键词】关键词：流式细胞仪 BDPAC check 蠕动泵样本运行随着医院的发展，医疗设备的维修在医院运行中作用越发明显。

对于设备的维修，首先医疗设备维修工程师要明白医疗设备的运行原理、工作流程和操作方法。

只有明确这些在实际维修工作中才能思路清晰，设备故障判断准确，从而起到提高工作效率，为医院节省成本的作用。

针对这一现象，本文就流式细胞仪（Flow Cytonletry，FCM）进行简单原理介绍和故障分析。

1.流式细胞仪的概念及发展趋势流式细胞仪是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。

概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分析和分选的技术。

主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。

随着科技的发展，临床流式细胞术发展趋势可归纳为：①流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪；②对流式细胞术检测荧光参数，从采用荧光单色、双色分析发展为多色分析，目前最多可同时检测15种荧光信号；③从检测参数的相对定量发展为绝对定量；④从检测参数的手动人工分析发展为计算机软件的自动分析；⑤所采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂。

而这一切，就要求流式细胞仪使用者和科研人员一定要不断地有意识地学习上述各门学科知识，只有这样才能更好地将流式细胞术应用到生物医学的临床实践和基础科学研究工作中去。

流式细胞仪荧光结果分析中的常见问题及解决方法流式细胞仪是一种用于细胞分析的实验室仪器，它能够对单个细胞进行快速而精确的定量和质量分析。

它主要通过将细胞悬浮液注入到仪器中，利用激光器照射细胞并检测经过细胞的光线散射和荧光信号，从而获取大量有关细胞形态、大小、复杂度、表面标记以及内部分子的信息。

它可同时测量多个参数，并具备高通量性能，能够快速分析数以万计的细胞，并提供详细的统计学数据。

它广泛应用于免疫学、细胞生物学、药理学、肿瘤学等领域的研究和实验中。

然而，在分析流式细胞仪得到的荧光结果时，常常会遇到一些问题，如信号强度弱、背景高、细胞群分布异常等。

本文将介绍常见问题，并提供相应的解决方法。

一、信号强度弱1. 信号补偿不正确：检查流式细胞仪上的单色阳性对照是否设置正确，并确保门控和补偿设置正确。

2. 用于检测的抗体不足：增加抗体的量或浓度。

二、荧光强度高1. 抗体浓度过高：减少每个样本中添加的抗体量。

2. 过量抗体被捕获：洗涤步骤要充分，并在洗涤缓冲液中加入吐温或Triton，以保持细胞的透化作用。

3. 封闭不足：在抗体混合液中加入1%-3%的封闭剂，并增加封闭步骤。

三、背景高/阳性细胞百分比高1. 增益设置过高/补偿过低：使用阳性对照正确设置流式细胞仪，并使用补偿减少小颗粒背景信号和降低增益。

2. 抗体过量：降低抗体的浓度，并在洗涤缓冲液中加入去污剂，确保洗去过量的抗体。

四、在应该只有一个细胞群的情况下观察到两个或多个细胞群1. 表达靶蛋白的细胞群不止一个：检查样本中包含的细胞类型预期的蛋白表达水平，并确保细胞充分分离。

2. 出现细胞双峰：细胞双峰显示为第二大细胞群，其荧光强度大约是单细胞荧光强度的两倍。

在染色前用移液枪将细胞轻柔混匀，并在细胞仪中运行之前再次混匀。

五、侧向散射背景偏高（来自小颗粒）1. 细胞裂解：确保样本中的细胞没有裂解和破碎，样本应新鲜并正确制备，避免高速离心或激烈涡旋的操作。

bd流式细胞仪原理
BD流式细胞仪是一种常用的细胞分析仪器，原理主要包括荧
光信号的激发、细胞悬浮液的传递和荧光信号的检测三个部分。

1. 荧光信号的激发：通过激光器（通常为氩离子激光器）产生高能的激光束，通过透镜系统将激光束汇聚到待测样品（细胞）上。

激光束与细胞接触后的发生相互作用，激发细胞内所标记的荧光染料或表达的荧光蛋白，使其发出荧光信号。

2. 细胞悬浮液的传递：细胞悬浮液通过压力或重力传递到流动池中，并按单个细胞顺序通过激光束的焦点区域。

为了使细胞单独通过，可通过流速控制或产生涡流效应避免细胞之间的相互干扰。

3. 荧光信号的检测：细胞通过激光束的焦点时，荧光信号被收集和分析。

通常通过使用多个荧光滤光片或光栅分光器将发射光分成不同的波长范围，然后由光电倍增管或光电二极管（PMT或APD）接收并将荧光信号转化为电信号。

电信号经
放大和转换后，可以由计算机进行数字化处理和分析。

综上所述，BD流式细胞仪通过激发荧光信号、传递细胞悬浮
液和检测荧光信号的方式，实现对细胞的多参数分析，如细胞数量、大小、表面标记物的表达水平等。

该原理在免疫学、细胞生物学等领域具有广泛的应用。