第17章液相色谱法S
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液相色谱操作范文液相色谱(HPLC)是一种常用的分离和分析技术,主要用于化学分析、药物分析、食品分析和环境监测等领域。
液相色谱的基本原理是将待分离物质溶解在流动相中,通过与固定相的相互作用来实现分离。
一、液相色谱的基本原理液相色谱的分离原理是利用固定相与流动相中成分的相互作用来实现的。
固定相可以是多种材料,如吸附剂、离子交换剂和分子筛等。
流动相可以是有机溶剂、水或它们的混合物。
待分离物质在流动相中溶解后,通过与固定相的相互作用来实现分离,不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,从而实现分离。
液相色谱通常包含以下几个基本部分:进样系统、柱子、检测器和数据分析系统。
进样系统负责将待分离物质注入到流动相中;柱子是液相色谱的核心部件,其中填充有固定相,用于分离待分离物质;检测器可以通过测量吸收度、荧光强度或电导率等来监测待分离物质的浓度;数据分析系统用于处理和分析检测到的信号,得到定量或定性结果。
二、液相色谱的操作步骤1.准备工作:首先检查液相色谱仪是否正常工作,确认流动相和固定相的可用性和质量。
根据实验要求准备样品,并将其溶解在适当的溶剂中。
2.预洗柱子:将柱子连接到液相色谱仪上,用一些纯溶剂通过柱子预洗,以去除柱子中的杂质和残留物。
3.进样:将待分离的样品通过自动或手动进样系统注入流动相中,控制样品的进样量和进样速度。
4.运行液相色谱:首先进行梯度洗脱或等温洗脱,根据实验要求调整流动相的组成和流速。
在色谱柱柱头位置,质谱柱附近安装检测器,以实时监测待分离物质的浓度。
5.数据分析:通过检测器获得的信号,使用数据分析系统处理和分析数据,得到待分离物质的浓度和组成。
6.清洗柱子:运行完液相色谱之后,将柱子从系统中取下,并用适当的溶剂清洗柱子,以去除附着在柱子上的待分离物质和杂质。
三、液相色谱的常见应用1.化学分析:液相色谱在药物、农药、生物学和材料科学等领域中被广泛应用,可以分析和鉴定待分离物质的成分和结构。
第十七章合成抗菌药物的分析(一)最佳选择题1.下列能作为测定左氧氟沙星中光学异构体的HPLC流动相添加剂使用的金属离子是()A. Cu2+ B. Fe3+ C. Co2+ D. Na+ E. Au3+2.《中国药典》(2010年版)鉴别诺氟沙星采用的方法是()A.紫外分光光度法B.气相色谱法C.高效液相色谱法D.化学反应鉴别法E.红外分光光度法3.具有丙二酸呈色反应的药物是()A.诺氟沙垦B.磺胺嘧啶C.磺胺甲嗯唑D.司可巴比妥E.盐酸氯丙嗪4.《中国药典》(2010年版)氧氟沙星中“有关物质”检查采用的方法是()A.紫外分光光度法B.薄层色谱法C.高效液相色谱法D.气相色谱法E.毛细管电泳法5.《中国药典》(2010年版)对于盐酸洛美沙星片的含量测定采用的方法是()A.紫外分光光度法B.非水溶液滴定法C.离子对高效液相色谱法D.气相色谱法E.荧光分光光度法6.左氧氟沙星原料药的含量测定,《中国药典》(2010年版)采用的是离子对高效液相色谱法,其中所用的离子对试剂是()A.高氯酸钠B.乙二胺C.磷酸二氢钠D.庚烷磺酸钠盐E.氢氧化四丁基铵7.复方磺胺甲嗯唑中所包含的有效成分是()A.磺胺甲嗯唑和磺胺嘧啶B.磺胺嘧啶和对氨基苯磺酸C.磺胺异嗯唑和磺胺甲嗯唑D.磺胺甲嗯唑和甲氧苄啶E.磺胺和对氨基苯磺酸8.下列含量测定方法中,磺胺类药物未采用的方法是()A.沉淀滴定法B.溴酸钾法C.紫外分光光度法D.非水溶液滴定洼E.亚硝酸钠滴定法9.用亚硝酸钠滴定法测定磺胺甲噁唑含量时,ChP2010选用的指示剂或指示终点的方法是()A.永停法B.外指示剂法C.内指示剂法D.淀粉E.碘化钾-淀粉10.复方磺胺甲嚼唑注射液中磺胺、对氨基苯磺酸以及甲氧苄啶降解产物的检查.ChP2010采用的方法是()A.薄层色谱法B.紫外分光光度法C.高效液相色谱法D.比色法E.高效毛细管电泳法(二)配伍选择题[11—12]A.吸光度B.甲醇与乙醇C.光学异构体D.乙醚、乙醇与丙酮E.防腐剂11.除去吸光度外,诺氟沙星滴眼液应检查的是()12.左氧氟沙星应检查的是()[13—15]A.重氮化反应B.与生物碱沉淀剂反应C.铜盐反应D.A与B两项均有E.以上各项均没有13.利用磺胺类药物结构中的磺酰胺基进行鉴别的反应有()14.利用磺胺类药物结构中N1上具有嘧啶类取代基的分解产物,而进行鉴剔的反应有()15.利用磺胺类药物结构中N1上的含氮杂环取代基进行鉴别的反应有()[16—19]A.紫外分光光度法B.双波长分光光度法C.非水酸量法D.两步滴定法E.高效液相色谱法16. ChP2010复方磺胺嘧啶片中的甲氧苄啶含量测定采用()17. ChP2005复方磺胺甲嚼唑片中的甲氧苄啶含量测定采用()18. ChP2010中诺氟沙星乳膏的含量测定采用()19. ChP2010中磺胺异嗯唑的含量测定采用()[20—23]A.溴化钾B.盐酸C.NOBr D.快速重氮化法E.分子间反应用永停滴定法测定磺胺类药物含量时,反应条件为:20.为使反应速度加快,可加入21.为避免亚硝酸挥发与分解,缩短滴定时间,可采用()22.在酸性溶液中,溴化钾与亚硝酸反应可生成()23.重氮化反应为()(三)多项选择题24.喹诺酮类药物采用的鉴别反应或方法有()A.硫酴铜反应B.红外光谱法C.高效液相色谱法D.丙二酸反应E.紫外分光光度法25.喹诺酮类药物的含量测定方法有()A.非水溶液滴定法B.紫外分光光度法C.HPLC法D.荧光分光光度法E.配位滴定法26.磺胺类药物的鉴别方法有()A.红外光谱法B.烯丙基的反应C.与硫酸铜的反应D.三氯化铁反应E.芳香第一胺的反应27.测定磺胺类药物含量常用的方法有()A.电泳法B.紫外分光光度法C.非水溶液滴定法D.永停滴定法E.碘量法28.能与金属离子C02+反应显色的药物有()A.巴比妥B.磺胺嘧啶C.阿托品D.异烟肼E.氧氟沙星29.具有酸碱丙性的药物有()A.磺胺嘧啶B.磺胺异嗯唑C.吡哌酸D.依诺沙星E.硫喷妥钠30.复方磺胺甲嗯唑注射液中有关物质检查包括()A.磺胺B.对氨基苯磺酸C.甲氧苄啶降解产物D.光学杂质E.甲醇(四)是非判断题31.喹诺酮类药物有关物质的来源主要分为2个途径,一是工艺杂质,二是降解产物()32. ChP2010规定了左氧氟沙星原料药中右氧氟沙星的限量,采用手性色谱柱法测定()33.磺胺甲嗯唑用亚硝酸钠滴定法测定含量时,选用外指示剂法指示终点()34. ChP2010规定磺胺异嚼唑中有关物质检查采用薄层色谱法()35.磺胺类药物的含量测定方法有高效液相色谱法、滴定法(非水溶液滴定法、永停滴定法和络合滴定法)等()(五)计算题36.盐酸左氧氟沙星胶囊含量测定:取装量差异项下的内容物,混匀,精密称取适量(约相当于左氧氟沙星40mg),置100ml星瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过。
液相色谱质谱仪操作及原理一、液相色谱仪简介液相色谱仪,作为现代分析化学的重要工具,广泛应用于生物、医药、环境、食品等多个领域。
它根据固定相的不同,可分为液-液色谱(LLC)和液-固色谱(LSC)。
液相色谱仪主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器和信号记录系统等部分组成,具有高效、快速、灵敏等特点。
二、液相色谱仪的特点高压:液相色谱法使用液体作为流动相,为了迅速通过色谱柱,需要对载液施加高压,通常可达150~300×10^5Pa。
高速:流动相在柱内的流速远超经典色谱,一般可达1~10ml/min,因此分析时间大大缩短,通常少于1小时。
高灵敏度:液相色谱广泛采用高灵敏度的检测器,如荧光检测器,其灵敏度可达10^-11g。
此外,样品用量小,通常只需几个微升。
适应范围宽:与气相色谱法相比,液相色谱法不受试样挥发性的限制,只要试样能制成溶液,就可以进行分析。
三、液相色谱仪操作五步骤准备:准备好所需流动相并过滤、脱气,更换合适的色谱柱和定量环,配制样品标准溶液并过滤,检查仪器各部件连接情况。
开机:接通电源,依次打开检测器、输液泵等,更换流动相并排气泡,设定流速等参数。
设计参数:根据实验需求设定流速、波长等参数,启动数据采集系统,确保基线稳定后进行进样。
进样:将样品注入进样阀,进行在线工作站自动采集数据。
系统清洗:分析结束后,使用适当的溶剂清洗系统,关闭仪器。
四、液相色谱仪工作原理在液相色谱仪中,流动相被高压泵打入系统,携带样品溶液进入色谱柱。
由于各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同,在移动过程中会产生速度差异,从而实现组分的分离。
分离后的组分依次从柱内流出,通过检测器时转换为电信号,记录并打印出图谱。
高效液相色谱仪主要由进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成,可根据工作原理分为吸附柱色谱法、分配柱色谱法、离子交换柱色谱法和凝胶柱色谱法等。
五、质谱仪简介及工作原理质谱仪是一种测量离子质荷比(质量-电荷比)的分析仪器,广泛应用于化学、生物学、医学等领域。
第十五章思考题1.色谱法具有同时能进行分离和分析的特点而区别于其它方法,特别对复杂样品和多组份混合物的分离,色谱法的优势更为明显。
2.按固定相外形不同色谱法是如何分类的?是按色谱柱分类:①平面色谱法:薄层色谱法、纸色谱法②柱色谱法:填充柱法、毛细管柱色谱法3.什么是气相色谱法和液相色谱法?气体为流动相的色谱称为气相色谱。
液体为流动相的色谱称为液相色谱。
4.保留时间(tr)、死时间(t0)及调整保留时间(t’r)的关系是怎样的?t’r = tr - t05.从色谱流出曲线可以得到哪些信息?①根据色谱峰的个数可以判断样品中所含组分的最少个数;②根据色谱峰的保留值可以进行定性分析;③根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量分析;④色谱峰的保留值及其区域宽度是评价色谱柱分离效能的依据;⑤色谱峰两峰间的距离是评价固定相(或流动相)选择是否合适的依据。
6.分配系数在色谱分析中的意义是什么?①K值大的组分,在柱内移动的速度慢,滞留在固定相中的时间长,后流出柱子;②分配系数是色谱分离的依据;③柱温是影响分配系数的一个重要参数。
7.什么是选择因子?它表征的意义是什么?是A,B两组分的调整保留时间的比值α= t’r(B)/t’r(A)>1意义:表示两组分在给定柱子上的选择性,值越大说明柱子的选择性越好。
8.什么是分配比(即容量因子)?它表征的意义是什么?是指在一定温度和压力下,组分在两相分配达到平衡时,分配在固定相和流动相的质量比。
K=ms/mm意义:是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数;9. 理论塔板数是衡量柱效的指标,色谱柱的柱效随理论塔板数的增加而增加,随板高的增大而减小。
10.板高(理论塔板高度H/cm)、柱效(理论塔板数n)及柱长(L/cm)三者的关系(公式)?H=L / n11.利用色谱图如何计算理论塔板数和有效理论塔板数(公式)?12.同一色谱柱对不同物质的柱效能是否一样?同一色谱柱对不同物质的柱效能是不一样的13.塔板理论对色谱理论的主要贡献是怎样的?(1)塔板理论推导出的计算柱效率的公式用来评价色谱柱是成功的;(2)塔板理论指出理论塔板高度H 对色谱峰区域宽度的影响有重要意义。
液相色谱操作规程液相色谱是一种常用的分析与检测方法,广泛应用于生物、医药、环境、食品等领域。
为了确保操作的准确性和结果的可靠性,我们应该遵循一定的操作规程。
下面是关于液相色谱操作规程的详细说明。
一、实验前的准备工作1.根据实验需要,准备好所需的试剂、标准品和色谱柱等实验器材。
2.检查仪器设备是否正常运行,并进行必要的校准和调试。
3.检查色谱柱状态,确保柱头无损,无堵塞,检查流路是否通畅。
二、样品的准备1.根据实验目的和方法要求,准备好待测样品。
样品可以是复杂的混合物,也可以是单一的化合物。
2.根据样品特性和目的,选择合适的提取、净化和浓缩方法,将样品准备好。
三、仪器的准备1.打开仪器电源,并设置合适的工作参数,如流速、温度等。
2.根据实验方法要求,选择合适的检测波长和检测器灵敏度等参数。
3.将色谱柱连接好,确保连接部分无漏气现象。
四、样品的进样1.根据实验要求,选择合适的进样方式,如自动进样器、手动进样等。
2.将待测样品注入到进样器中,并确保进样量准确。
3.进行进样前的冲洗和平衡处理,确保样品能够均匀地进入柱床。
五、仪器的运行1.启动仪器,并设置好合适的流速、梯度等参数。
2.开始实验运行,并记录相关的运行条件和时间等数据。
六、结果的处理1.实时观察和记录示波器或检测器的输出信号,并按照实验方法进行相关的数据处理和计算。
2.根据需要和目的,可以进行色谱峰的定性和定量分析。
七、实验后的处理1.关闭仪器设备,进行必要的清洗和维护工作。
2.处理和储存实验数据,确保实验结果可靠和完整。
八、实验安全注意事项1.操作过程中要注意个人安全和实验室安全,遵守相关的防护规定。
2.注意化学品的存放和处置,防止意外事故的发生。
3.操作过程中要保持仪器设备的整洁和操作区域的干净,及时清除实验废物。
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC)是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用,使样品组分在柱子中发生分离,再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中,进样器将样品注入柱子中,柱子根据物理化学性质的差异,使不同组分发生分离,之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度,并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比,高效液相色谱法的流动相的流速更高,柱子填充物颗粒更小,从而大大提高了分离效率。
同时,高效液相色谱法对样品的需求量较小,具有较好的分析灵敏度。
因此,高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中,高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器,可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如,对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态,对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中,高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子,可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离,使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中,高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器,可以对复杂的食品样品进行分离和检测,以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中,高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
第十二章原子吸收分光光度法一、填空题1、外层电子;第一激发态;共振吸收线;共振线;2、32S1/2;32P1/2,32P3/2;3、光源、原子化器、单色器和检测系统;4、共振线;5、电离干扰、物理干扰、光学干扰和化学干扰。
6、主量子数n、角量子数l、自旋量子数n、内量子数j。
7、频率、半宽度、强度。
二、选择题AAB AAB三、简答题1、主要有Doppler线宽、Lorentz线宽、Holtsmark线宽和自然宽度。
在通常的原子吸收分光光度法条件下,吸收线线宽主要由Doppler变宽和Lorentz变宽控制,当局外元素浓度很小时,吸收线线宽主要由Doppler变宽控制。
2、特点:灵敏度高。
选择性好。
精密度高。
测量范围广。
局限性:标准曲线的线性范围窄。
测一种元素要使用一种元素灯,使用不方便。
3、(1)锐线光源、(2)发射线最大发射波长和吸收线的最大吸收波长必须重叠。
第十三章红外分光光度法第十四章核磁共振波谱法一、填空题1、ν照 = ν进△m=+ 12、一级;高级;△ν/J > 103、化学位移,偶合常数4、局部抗磁屏蔽;磁各相异性5、自旋-自旋偶合;偶合常数6、27、38、无线电波、核自旋能级分裂、1/29、7.1710、中心位置,峰裂距11、屏蔽效应,各向异性效应,氢键12、213、氢分布; 质子类型; 核间关系二、选择题ACCDD DBACB CD三、简答题1、所谓磁全同质子是指这些质子化学位移、与组外任何一核的偶合强弱相同,它们在核磁共振谱上不产生分裂 ,例如:2、烯烃处于C=C 双链的负屏蔽区,δ增大。
炔烃处于C ≡C 地正屏蔽区,δ减小3、(1) 12个氢处于完全相同的化学环境,只产生一个尖峰;(2)屏蔽强烈,共振频率最小,吸收峰在磁场强度高场,与有机化合物中的质子峰不重迭;(3)化学惰性;易溶于有机溶剂;沸点低,易回收。
四、解谱题1、 CH3COCH2COOCH2CH32、3、C 6H 5-C(CH 3)=CH-COOH4、 偶合系统为: AMX3系统 可能结构为:CH3–CHCH-COOH5、 CH H 3CCH 36、CH 3CH 2I7、 C C C H H H H H H O (1)(2)(3)(4)(5)(6)C O HH 3C O第十五章质谱一、填空题1、奇数、偶数;2、偶数;3、奇数;偶数;4、分子离子、碎片离子、重排离子、同位素离子、亚稳离子;5、峰弱、峰钝、质核比一般不是整数;6、峰强比;Cl、Br、S;7、均裂、异裂、半均裂;8、M+2、M+4、M+6;M:(M+2):(M+4):(M+6)≈27:27:9:1;二、简答题略;三、选择题ABDAC ACB四、解析题1、为3,3-二甲基-丁醇-22、解:m/z 69相当于M-29(C2H5质量),m/z 69是奇数,故m/z 98->m/z 69 是单纯开裂;m/z(偶数)相当于M-28(C2H4质量),系由McLafferty重排产生。