丙二醛MDA酶联免疫分析

丙二醛（MDA）检测试剂盒（TBA微板法）丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 微板法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。

丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA 在内的复杂化合物，此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。

丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 微板法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，特别适用于微量样本的检测。

丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，MDA-TBA 加合物在535nm 处有最大吸收，据此可以通过比色法进行检测。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、样本处理：①血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。

②组织、细胞等样本：组织或细胞可以使用PBS 或Leagene Western 及IP 细胞裂解液等进行匀浆或裂解。

匀浆或裂解组织时，组织重量占匀浆液或裂解液的比例应为10%；对于细胞，每106个细胞使用0.1ml 裂解液或匀浆液。

匀浆或裂解后，取上清用于后续测定。

匀浆或裂解等样品制备步骤宜在冰浴或4℃进行操作。

样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的MDA 含量。

编号名称TO1011 100T Storage试剂(A): TBA 40mg RT 避光试剂(C): 抗氧化剂300μl RT 避光试剂(D): MDA 标准品(1mmol/L) 200μl -20℃ 避光试剂(E): MDA 检测液 100mlRT 避光使用说明书1份本试剂盒对于样品中的常见化学成分的兼容性参考下表：试剂类别化学成分是否干扰缓冲液HEPES (100mM) 否Borate (50mM) 否Phosphate (100mM) 否Tris (25mM) 否去垢剂CHAPS (≤1%) 否Triton X-100 (≤1%) 否Tween 20 (≤1%) 否抑制剂/螯合剂PMSF (≤200μM) 否EDTA (≤1mM) 否EGTA (≤1mM) 否Antipain (≤100μg/ml) 否Chymostatin (≤10μg/ml) 否Leupeptin (≤10μg/ml) 否Trypsin (≤10μg/ml) 否其他Glycerol (≤10%) 否Sucrose (250mM) 是2、TBA工作液的配制：BA工作液。

丙二醛、超氧化物歧化酶和活性氧对2型糖尿病患者胰岛β细胞功能的影响【摘要】目的：探讨2型糖尿病患者胰岛β细胞功能与氧化应激的关系。

方法2013年1月至2014年10月2型糖尿病患者100例为DM组、糖耐量受损的患者55例为IGT组和健康就诊者30例为对照组，测定3组血浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD)和活性氧（ROS)水平，采用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素分泌指数(HOMA-β)以及胰岛素敏感指数(ISI)评价胰岛β细胞功能。

结果： GDM组患者MDA、ROS 、OMA-IR、HOMA-IR水平明显高于IGT组和对照组，IGT组和对照组HDL-C、SOD、HOMA-β、IS I水平明显低于GDM组，差异均有明显的统计学意义（p＜0.05），HOMA-IR与MDA和ROS呈现明显的正相关（p＜0.01）,与SOD呈现明显的负相关（p＜0.01）；HOMA-β与MDA和ROS呈现明显的负相关（p＜0.01）,与SOD呈现明显的正相关（p＜0.01），IS I与MDA和ROS呈现明显的负相关（p＜0.01）,与SOD呈现明显的正相关（p＜0.01）；Logistic 回归分析显示：FINS，MDA，SOD，ROS是影响胰岛β细胞功能的主要因素。

结论：2型糖尿病患者胰岛β细胞功能受损可能与氧化应激有关。

【关键词】：2型糖尿病患者；氧化性应激；胰岛β细胞Influence of MDA 、SOD and ROS on islet beta-cell function of type 2 diabetic patients【abstract】Objective: To explore the relationship between islet beta-cell function and oxidative stress.Methods：The plasma malondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD)and reactive oxygen species (ROS) level of 100 patients with type 2 diabetes mellitus （DM group ），55 patients with impaired glucose tolerance（IGT group）and 30 normal persons (control group) were compared from January 2013 to October 2014。

小鼠丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒说明书小鼠丙二醛（MDA）ELISA检测试剂盒说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被丙二醛（MDA）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。

颜色的深浅和样品中的丙二醛（MDA）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。

试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。

严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。

全部液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8nmol/ml试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法)简介：动物或植物细胞发生氧化应激(oxidative stress)时，会发生脂质氧化。

丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一种生物体脂质氧化的天然产物，一些脂肪酸氧化后逐渐分解为一系列包括MDA 在内的复杂化合物，此时通过检测MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平，因此MDA 的测定被广泛用作脂质氧化的指标。

生物体内的一些其它生化反应也会产生MDA ，例如thromboxane synthase 也可以催化产生，但只要在测定时设置适当对照即可观察到脂质氧化水平的变化。

丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA 荧光法，MDA Assay Kit)又称脂质氧化(MDA)检测试剂盒，是采用一种基于MDA 和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反应产生红色产物的显色反应，随后通过荧光比色法用于对血浆、血清、尿液、动植物组织或细胞裂解液中MDA 进行定量检测，广泛用于脂质氧化(lipid peroxidation)水平检测。

丙二醛在较高温度及酸性环境中可与TBA 发生反应，形成红色的MDA-TBA 加合物，MDA-TBA 加合物在处有最大吸收，以为激发光，据此可以通过荧光比色法进行检测。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管、小试管或96孔板3、 荧光分光光度计或荧光酶标仪4、 水浴锅或恒温箱5、 离心机操作步骤(仅供参考)：1、 样本处理：①血清、血浆、尿液、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血。

取待编号 名称TO1015 50T TO1015 100T Storage试剂(A): TBA 0.4g 0.8g RT 避光 试剂(B): TBA 稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(C): 抗氧化剂2.5ml 5ml 4℃ 试剂(D): MDA 标准品(1mmol/L) 0.2ml0.4ml-20℃ 避光使用说明书说明书测液体样本，加入MDA沉淀，混匀，室温静置，离心，弃上清。

大鼠丙二醛（MDA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：156pmol/ml-10000pmol/ml最低检测限：39pmol/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠MDA，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中MDA 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗MDA抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗MDA抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的MDA呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

丙二醛，大鼠MDAELISA试剂盒kit技术资料检测方法：ELISA适用范围：科研用检测试剂检测范围及灵敏度：见说明书保存与运输：短期4℃/长期-20℃保存丙二醛，大鼠MDAELISA试剂盒kit技术资料衡量特异性通常以交叉反应率来表示。

交叉反应率可用竞争抑制试验测定。

以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。

Elisa试剂盒液体类样本之尿液：用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照此实行。

第二抗体是能和抗体结合的，即抗体的抗体。

主要用于检测抗体的存在。

2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。

然后洗涤。

（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。

其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

在测量过程中，采用适当的控制样品来对测量系统的漂移进行随时校正，也对测量溯源性与准确性的保持非常有帮助。

对于实验室自行研制的设备，可能会存在检定、校准方面的困难，在这种情况下，应使用标准物质或开展比对测量来证明该设备测量结果的有效性。

丙二醛，大鼠MDAELISA试剂盒kit技术资料应用领域：ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。

也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，根据已经使用的结果，认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。

不仅适用于临床标本的检查，而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此，也适合于血清流行病学调查。

植物生理学实验课件丙二醛（MDA）含量的测定丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。

植物在逆境下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。

原理•植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。

其中丙二醛氧化物丙二醛乙烷等其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之因此可通过测过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。

定膜系统受损程度植物的抗逆性仪器设备1.分光光度计；2.研钵；3.剪刀；4.恒温水浴；55.试管：20 mL×4 6.离心机。

试剂1. 5 %三氯醋酸；2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，3005l磷酸缓冲液pH 7.8。

材料•正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。

方法与步骤取小麦植株上不同叶位的叶片35片洗净擦干剪成1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm 长的小段，混匀。

2．称取叶片切段0.3 g ，放入冰浴的研钵中，加入少许石g 英砂和2 mL 0.05 mol ·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。

将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol ·L-1磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。

缓冲液分次冲洗研钵合并提取液3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。

4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min ，（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）到时间后立即将试管取出并放出现小气泡开始计时）。

到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。

5．待试管内溶液冷却后，3000×离心15 min ，取上清液并其体硫代妥酸溶液为空白g 液并量其体积。