AD模型及检测方法

AD小鼠模型介绍AD小鼠模型，即阿尔茨海默病小鼠模型，是一种用于研究阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的动物模型。

阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病，主要表现为认知功能障碍和记忆力丧失。

目前还没有有效的治疗方法，因此研究AD的机制和治疗方法变得至关重要。

AD小鼠模型是研究该疾病的重要工具之一AD小鼠模型通常通过基因工程技术构建，根据不同的基因突变或操纵来模拟AD发病机制和临床表现。

这些小鼠通常表现出与人类AD患者相似的一些病理特征，如神经元损伤、β淀粉样蛋白沉积、tau蛋白磷酸化等。

通过对这些AD小鼠模型的研究，科学家可以更好地了解AD的发病机制，寻找新的治疗方法和药物靶点。

目前，AD小鼠模型已经被广泛应用于AD病理生理学研究、新药筛选和临床药物评估等领域。

下面将介绍一些常见的AD小鼠模型及其特点：1. APP/PS1双转基因小鼠：这是最常见的AD小鼠模型之一，它通过表达人类APP（β淀粉样前体蛋白）和PS1（presenilin-1）基因，模拟AD的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。

这种模型通常表现出记忆力损失、神经退化等AD病理生理学特征。

2. 3xTg-AD小鼠：这是一种同时表达人类APP、PS1和tau蛋白P301L基因的三转基因小鼠。

该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出早期记忆障碍和晚期神经元损伤等表型。

3.Tg2576小鼠：这是一种表达人类APP基因的转基因小鼠模型。

该模型主要用于研究β淀粉样蛋白在AD发病中的作用，通常表现出大量的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。

4. 5xFAD小鼠：这是一种表达人类APP、PS1和tau蛋白基因的五转基因小鼠模型。

该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出更加严重的神经元损伤和认知功能障碍等表型。

除了以上几种常见的AD小鼠模型外，还有许多其他基因操纵小鼠模型被用于AD的研究。

阿尔兹海默症小鼠评价指标和实验方法阿尔兹海默症（Alzheimer's Disease，AD）小鼠的常用评价指标和实验方法主要包括以下几种：1. 条件性恐惧实验：这是一种基于巴普洛夫的条件反射原理设计的实验，可用于评估小鼠对特定环境刺激的记忆能力。

实验中，小鼠被置于特定环境中，并给予一个声音信号作为条件刺激，紧接着给予电击作为非条件刺激。

小鼠在恐惧时会出现静止状态，即除了呼吸之外无其他任何活动的防御姿势。

随后在相同或不同的环境中测试小鼠静止状态的持续时间，以评估其条件恐惧程度和记忆能力。

该实验对于评估AD动物模型的焦虑状态和环境条件刺激记忆功能具有良好效果。

2. 放射状迷宫（八臂迷宫）实验：这是一种用于评估小鼠空间学习和记忆能力的实验方法。

在一个八臂迷宫中，小鼠需要通过探索各个臂来找到食物。

通过比较造模前后小鼠在迷宫中的表现，可以评估其空间学习和记忆能力。

该实验可以用于检测AD模型小鼠的空间认知障碍。

3. Morris水迷宫实验：这是一种评估小鼠学习和记忆能力的行为学实验。

在一个圆形水池中，小鼠需要寻找一个隐藏的平台以逃离水面。

通过记录小鼠寻找平台的时间和路径，可以评估其空间学习和记忆能力。

该实验可以用于检测AD模型小鼠的空间认知障碍。

4. 一般行为学观察：包括观察小鼠的精神状态、毛发、饮食以及开场行为（在新环境中的探究活动）等变化。

这些观察可以提供有关小鼠整体健康状况和行为表现的信息，有助于发现与AD相关的非认知行为变化。

5. 生物标志物检测：通过检测小鼠脑组织中淀粉样蛋白（Aβ）和tau蛋白等生物标志物的含量和分布，可以评估AD的病理进展。

这些标志物在AD 患者脑中沉积形成老年斑和神经纤维缠结，导致神经元死亡和认知障碍。

检测这些标志物可以帮助了解AD模型小鼠的病理状态，并可作为药物筛选的指标之一。

6. 神经电生理检测：通过记录小鼠脑电波活动和神经元放电情况，可以评估其神经功能和信息处理能力。

家族性ad 常染色体显性遗传<65岁发病21号染色体的淀粉样前体蛋白（APP）基因、14号染色体的早老素1（PS1）基因、1号染色体的早老素（PS2）基因散发性ad（占90%）载脂蛋白APOE基因β-淀粉样蛋白（Aβ）瀑布理论Aβ生成与清除失衡导致神经元变性家族性ad三种基因突变均可导致Aβ过度生成Down综合征患者体内多了一个APP基因早年即出现Aβ沉积斑块tau蛋白学说过度磷酸化的tau蛋白影响了神经元骨架微管蛋白的稳定性，导致神经原纤维缠结形成大体改变体积小、重量轻、沟深宽、回萎缩病理改变（确诊）神经炎性斑（NP）：嗜银神经轴索突起包绕Aβ形成神经原纤维缠结(NFT)：过度磷酸化的微管tau蛋白于神经元内高度螺旋化形成神经元缺失和胶质增生痴呆前阶段痴呆阶段轻度记忆障碍中度记忆障碍加重，工作、学习新知识和社会接触能力减退，特别是原已掌握的知识或技巧出现明显的衰退重度情感淡漠，哭笑无常，言语能力丧失，不能自理1、100nM Ab(beta)1-42处理星型角质细胞制作AD模型3、我用的细胞是SHSY5Y，未分化。

常见的孵育方法：HFIP-DMSO-PBS稀释-4℃孵育60h，然而处理细胞48h后并未见显著性差异。

细胞接种密度是2000/孔。

接种24h 后加Abeta。

这样的细胞72h后孔内密度已经达到几乎95%。

2、首先先提出一些疑问：1、为何文献中一般只说用多少浓度的Aβ作用于细胞多长时间，建立模型，但都没有说如何检验模型是否成功呢？检测的标准又是什么。

2、用于造模的细胞分化程度也不描述（PC12）不同分化得多细胞培养条件及对药物的敏感性差异不同。

3、种板时（96孔）文献中的密度大致都为10000左右/孔，细胞这么多真的合理吗，药物的损伤作用真的这么强吗？4、Aβ老化后如何检验其成为寡聚体了？投射电镜？老化后就一定有毒性吗？老化的时间五花八门哪个更合理？5、我做MTT筛选Aβ浓度时，细胞形态明显变差，但测OD值还是很高不知大家是否也遇到过这种情况，这些都是我做实验时的一些疑问，还请有经验的战友多多指点。

D-半乳糖法制备AD动物模型的分类总结与初步评判随着人类寿命的延长和老龄化社会的来临，老年痴呆症（Alzheimer's Disease，AD）成为全球性健康难题。

AD是一种进行性、不行逆性的神经系统退行性疾病，其主要特征是智力和记忆功能的进行性丢失，最终导致个体平时活动能力和社会功能的完全丢失。

目前，AD的发病机制尚不极其清晰，但许多探究表明淀粉样蛋白β（Amyloid β，Aβ）的异常代谢和神经纤维缠结是AD的主要病理生理学特征。

为了探究AD的发病机制以及开展相关的药物筛选和治疗探究，科学家们屡屡使用动物模型。

近年来，以D-半乳糖法制备AD动物模型备受探究者的关注。

D-半乳糖是一种具有亲脑特性的糖类物质，通过饮食方式赐予小鼠高剂量D-半乳糖可以模拟AD过程中异常Aβ代谢的一些特征。

依据D-半乳糖赐予的时间长短和赐予的剂量不同，可以将D-半乳糖法制备的AD动物模型分为多个亚型。

以下是一些常见的亚型分类及其初步评判：1. 长期低剂量赐予亚型：该亚型的试验条件是赐予小鼠长期低剂量的D-半乳糖，以模拟AD发病过程中Aβ蓄积的特点。

探究显示，这种亚型的AD动物模型能够模拟出Aβ和tau蛋白的异常聚集，以及突触功能障碍等病理生理学特征。

此外，这种模型还可以观察到记忆毁伤和进修能力下降等AD 的临床表现。

2. 短期高剂量赐予亚型：这种亚型的试验条件是赐予小鼠短期高剂量的D-半乳糖，以模拟AD早期病理过程中Aβ的大量产生。

初步评判结果显示，这种亚型的AD动物模型能够复制出Aβ的高水平积累，并且在行为学测试中表现出明显的记忆和进修障碍。

此外，该模型还呈现出炎症反应的增加和神经元毁伤的特征。

3. 短期低剂量赐予亚型：这种亚型的试验条件是赐予小鼠短期低剂量的D-半乳糖，以模拟AD中期疾病过程中Aβ的代谢紊乱特点。

初步评判结果显示，这种亚型的AD动物模型能够模拟出Aβ的产生和蓄积，以及突触功能受损等病理生理学特征。

老年痴呆模型(AD)制作因AD病因复杂，故相应的也缺乏严格意义的AD体内外模型，现在国内外大部分体内、外实验只能反映AD某一部分的改变，因而不应称为AD模型。

近年来许多学者正致力于寻找和研究AD动物模型，对AD模型报道也较多，虽然分类各有不同，但大致可分为以下几类（一）胆碱能损伤致痴呆模型1．穹窿-海马伞切断致痴呆大鼠模型该模型是建立在AD认知障碍的胆碱能假说基础上，较好地模拟了AD前脑胆碱能系统的损害，而且造成了神经损伤，可用于观察拟胆碱药物的药效学评价，还可观察药物对神经功能损伤的修复作用，是老年性痴呆临床前药效学研究的重要模型。

2．基底前脑注射鹅蒿蕈氨酸（ibotenic acid ,IBO）致痴呆模型大鼠该模型属兴奋性毒素致基底核损害模型。

通过该模型可反映导致学习记忆功能下降的病理基础-基底前脑胆碱能神经元缺失，因而也是广泛应用的模型。

该类模型的缺陷是不能反映AD发生的病因，不能产生AD的病理学特征，因此不如IBO应用广泛。

3．东莨菪碱致胆碱能损伤拟痴呆小鼠东莨菪碱为M胆碱能受体阻断剂，可阻断乙酰胆碱对M受体的激动作用，造成了学习记忆功能障碍。

但是该模型不直接引起胆碱能神经缺失，而且缺乏研究AD病理生理所必需的特征，如AD是一种进行性不可逆变性，而该模型为化学性模型，恢复快是其局限性，可用于早期药物的筛选。

（二）老化致痴呆模型1．自然衰老动物较常用的是自然衰老大鼠，24月龄以上，另外也有采用老年狗或猴者，该模型是较为接近AD实际病理改变的动物模型，在此基础上观察老年性痴呆治疗药物能较好地反映药物的作用机理和效果。

2．快速老化小鼠（SAM）快速老化小鼠分为快速老化亚系（senescence accelerated mouse/prone,SAM-P）及抗快速老化亚系（senescence accelerated mouse/resistance,SAM-R），它是由日本京都大学首次培育成功，经20多代交配近繁，获得了遗传性与病理表型一致，符合近交系标准的新系列。

AD小鼠模型介绍AD小鼠模型，即阿尔茨海默病小鼠模型，是研究阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，简称AD）的常用动物模型。

阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病，以认知障碍和记忆损害为主要特征，对患者的生活质量和家庭经济状况产生巨大影响。

转基因AD小鼠模型最早由L. Mucke团队于1995年创建。

这些转基因小鼠是通过将人源的突变前体蛋白质（amyloid precursor protein，APP）或其酶切产物的基因导入小鼠胚胎中，使其在大脑中过度表达β-淀粉样蛋白（amyloid-beta，Aβ），从而模拟AD患者大脑中β-淀粉样物质的沉积。

这些模型具有遗传稳定、可重现性好、Aβ沉积明显等特点，适用于研究Aβ沉积的动态变化和与其相关的病理生理学改变。

但由于转基因技术的限制，这些模型在建模之前就存在人为设计的缺陷，不完全反映人类疾病的自然历程，并且建模以及后续研究成本较高。

诱导AD小鼠模型是通过给予小鼠β-淀粉样蛋白前体的特定片段、神经毒性物质或化学药物等来诱导Aβ的沉积。

例如，诱导小鼠模型中最为常用的是通过给予β-胰岛素A肽（amylin）而诱导Aβ的形成。

这类模型具有好的可控性，可以通过调整给药剂量和方法来模拟AD的不同发展阶段，但模型建立和操作过程相对复杂，且一些诱导方式可能会导致非特异性的神经损伤。

1. 病理特征和病理生理学改变：通过观察模型小鼠大脑中Aβ的沉积情况、Tau蛋白的磷酸化等病理改变，以及相关神经元损伤和炎症反应等，揭示AD发病机制。

2.认知和行为表现：通过行为学测试，评估模型小鼠的认知和学习能力、空间记忆和工作记忆等，以反映AD小鼠模型的行为改变，从而评估新药对这些行为的干预效果。

3.药物疗效评价：通过给予模型小鼠潜在的抗AD药物，观察其对病理特征、记忆损害和认知功能的影响，评价药物的疗效，以及探讨药物的作用机制。

尽管AD小鼠模型在阿尔茨海默病研究中发挥了重要作用，但由于其与人类疾病的差异以及实验条件的限制，模型存在一定的局限性。

AD 实验报告一、实验背景AD（阿尔茨海默病）是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。

临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征，病因迄今未明。

随着人口老龄化的加剧，AD 的发病率逐年上升，给社会和家庭带来了沉重的负担。

因此，深入研究 AD 的发病机制和寻找有效的治疗方法具有重要的现实意义。

本次实验旨在探究某种新型药物对 AD 模型小鼠认知功能的改善作用，为 AD 的治疗提供新的思路和依据。

二、实验材料与方法（一）实验动物选用健康的雄性 C57BL/6 小鼠，8 周龄，体重 20-25g。

将小鼠随机分为三组：正常对照组（Control 组）、AD 模型组（Model 组）和药物治疗组（Treatment 组），每组 10 只。

（二）AD 模型的建立采用双侧海马注射Aβ1-42 寡聚体的方法建立 AD 模型。

具体操作如下：小鼠腹腔注射 1%戊巴比妥钠（40mg/kg）进行麻醉，固定于立体定位仪上。

参照小鼠脑立体定位图谱，以前囟为零点，在双侧海马（AP：－20mm，ML：±15mm，DV：－20mm）缓慢注射Aβ1-42 寡聚体（5μl/侧，1μg/μl），注射速度为05μl/min，留针 5min 后缓慢拔出针头，缝合头皮。

（三）药物治疗Treatment 组小鼠在模型建立后第7 天开始给予新型药物灌胃治疗，剂量为 10mg/kg，每天 1 次，连续治疗 4 周。

Control 组和 Model 组小鼠给予等体积的生理盐水灌胃。

（四）行为学检测1、水迷宫实验在药物治疗 4 周后，进行水迷宫实验检测小鼠的空间学习和记忆能力。

实验分为定位航行实验和空间探索实验。

定位航行实验：将小鼠从不同的入水点放入水中，记录小鼠找到隐藏平台的时间（逃避潜伏期），每天训练 4 次，连续训练 5 天。

空间探索实验：在第 6 天撤去平台，记录小鼠在目标象限（原平台所在象限）的停留时间和穿越原平台位置的次数。

ad动物模型建立方法
动物模型是指将动物的生物结构、生理特征以及行为特征等在一定程度上反映在实验模型中，用于研究与动物相关的科学问题。

建立动物模型的方法主要有以下几种：
1.基因突变：通过人工改变动物体内的基因序列，使其表达特
定的基因突变，从而模拟人类遗传性疾病或相关疾病的动物模型。

这种方法常用于研究基因功能和疾病机制。

2.化学诱导：通过给予动物某种化学物质，如药物、毒物等，
来引发某种疾病或模拟疾病的症状。

这种方法常用于研究药物的疗效、药物毒性以及疾病发生机制等。

3.生理手术：通过手术操作改变动物的器官功能或组织结构，
从而产生特定的疾病模型。

常见的包括心脏病模型、肿瘤模型等。

这种方法常用于研究疾病发生机制和治疗方法。

4.遗传选育：通过选择繁殖带有特定特征的动物个体，逐代传
递并提高该特征的表达水平，从而得到具有特定性状的动物模型。

这种方法常用于研究与遗传性疾病相关的基因功能和疾病机制。

5.转基因技术：通过将外源基因（一般是小鼠表达的人类基因）导入动物体内，使其表达具有特定功能的人类蛋白，从而产生与人类疾病相关的动物模型。

这种方法常用于研究基因功能和疾病机制，以及开发新的治疗方法。

值得注意的是，建立动物模型时需要考虑伦理道德问题，并且模型的可靠性和可重复性也是需要严格把控的关键点。

因此在科学研究中，选择合适的建模方法，并且进行严密的实验设计和数据分析非常重要。

ad模块原理
AD模块的原理是通过对输入信号进行采样和转换，将模拟信
号转换为数字信号，并进行数字处理和分析。

具体的原理如下：
1. 采样：AD模块首先对模拟信号进行采样，即按照一定的时
间间隔对模拟信号的数值进行测量。

采样过程中需要注意选择合适的采样频率，以保证信号的完整性和准确性。

2. 量化：采样后的模拟信号需要进行量化处理，将连续的模拟信号转换为离散的数字信号。

量化过程中需要确定合适的量化精度，即将模拟信号的幅度范围分为多个等间隔的离散数值。

3. 编码：经过量化后的信号需要进行编码，将离散的数值转换为二进制形式的数字信号。

编码方式通常使用二进制编码（如二进制补码），以表示不同的离散数值。

4. 数字处理：通过编码后的数字信号，可以对信号进行各种数字处理，比如滤波、降噪、放大、采样率转换等。

数字处理可以利用计算机数字信号处理算法进行，以完成对信号的处理和分析。

5. 存储和传输：经过数字处理后的信号可以存储在内存或者传输给其他设备进行进一步处理或显示。

存储和传输可以利用各种数字存储介质和通信接口实现。

整个AD模块的原理就是将模拟信号转换为数字信号，并通过数字处理实现对信号的处理和分析。