免疫球蛋白M(IgM)测定标准操作程序SOP文件

—————————————————————————鸡免疫球蛋白M（IgM）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书仅供科研使用，不得用于医学诊断。

使用前仔细阅读本说明书。

用途：用于定量检测鸡血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M（IgM）的含量。

工作原理本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法（ELISA），测定样品中鸡免疫球蛋白M（IgM）的水平。

向预先包被鸡免疫球蛋白M（IgM）抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的免疫球蛋白M（IgM）抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅与样品中鸡免疫球蛋白M（IgM）的浓度呈正相关。

试剂盒组成30、15、7.25、3.62、1.81需要而未提供的试剂和器材1． 37℃恒温箱。

2．标准规格酶标仪。

3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差3．建议所有标准品、样本都做双份检测。

4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

6．不用的其它试剂应包装好或盖好。

不同批号的试剂不要混用。

保质前使用。

7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。

洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。

根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

巨细胞病毒IGM抗体测体测定操作规程用途：通过检测人血清样本中是否含有巨细胞病毒IGM抗体，用于辅助诊断患者近期感染了巨细胞病毒。

基本原理：本试剂盒采用鼠抗人IGM单克隆抗体包被微孔条，辣根过氧化物酶标记基因工程重组表达的巨细胞病毒特异性原原为示踪物，TMB显示系统，EIA捕获一步法检测人血中抗巨细胞IGM抗体。

试剂：巨细胞病毒IGM抗体检测试剂盒仪器：酶标检测仪样本要求：血清标本按常规方法由静脉采集，血浆标本可采用常规用量的肝素或枸橼酸钠抗凝，5天内测定的标本可以放置4℃保存。

标本放置在-20℃至少可以保存3个月。

标本避免溶血或反复冻溶，混浊或有沉淀的标本应离心或过滤澄清后再检测。

需保存的血清在采集、保存过程中应注意无菌操作。

试验方法：1、平衡：将试剂盒从冷藏环境中取出，置室温平衡30分钟后使用。

2、配液：将浓缩洗液用蒸馏水或去离子水20稀释备用。

3、设定：每次试验应预设空白对照1孔（暂不加任何液体），阴性对照3孔，阳对照2孔。

4、加样：按顺序在各反应孔中分别加入20υL待检标本和阴、阳性对照。

5、加酶：依次向每孔加入100υL酶结合物（空白对照不加），振荡混匀。

6、温育：在反应板上加盖封板膜，置37℃温箱或水浴锅中，反应60分钟。

7、洗板：将孔内液体甩干，在各反应孔加入稀释后的洗涤液300υL，静置15秒钟，甩弃洗涤洗涤液：如此洗涤5遍，最后一次扣干反应板。

8、显色：每孔依次加入底物A、B液务50υL（包括空白对照孔），加盖封板膜，振荡混匀，37℃避光显色15分钟。

9、终止：每孔加入终止液50υL（包括空白对照孔），振荡混匀终止反应。

10、测定：用空白对照孔调零，并尽快用酶标仪单波长450 nm测定各孔OD值。

也用双波长450nm/630-690nm测定各孔OD值。

结果解释1、临界值（CUT-OFF值）计算：临界值=0.10+阴性对照OD平均值（阴性对照OD平均值≤0. 05按0. 05计算）。

免疫球蛋白IgM测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2原理免疫透射比浊法抗免疫球蛋白M抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。

通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。

3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置―150C――200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgM试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER 5724-2014）4.1.1 试剂组成R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。

R2:抗人免疫球蛋白M抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。

机上稳定期：90天。

4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。

4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgM校准品对自动分析仪进行校准4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。

免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。

抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。

散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。

标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。

避免反复冻融。

标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。

试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。

8.1.2空白缓冲液：液体待用。

8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。

定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。

8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。

8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。

8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。

下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。

8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。

8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。

9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。

临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。

免疫球蛋白IgM操作程序1.目的规范免疫球蛋白IgM检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。

3.术语4．测定原理人血清中的IgM与试剂中适量的特异性抗体发生反应,形成不溶性的免疫复合物,使反应液产生浊度,在抗体量一定的情况下,在340nm处浊度变化的高低与血清中的IgM浓度成正比关系5. 标本采集与处理5.1病人准备：采血前不作剧烈运动。

5.2标本类型：无溶血的血清，凝固后尽快分离血清，标本严格避免溶血。

5.3标本稳定性：血清中C4活力在室温保存可稳定3天, 2～8℃可稳定7天，-20℃可稳定30天。

6. 试剂6.1试剂：本科使用伊利康试剂盒，即用式液体试剂。

试剂内主要成分如下：规格: R1 1×60ml R2 1×20ml6．2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用。

6．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。

试剂开瓶载机2～8℃稳定30天。

7.仪器参数设定AU2700参数设定：伊利康试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。

8.1.2仪器经过大保养后。

8.1.3挪动仪器的安装地点。

8.1.4更换试剂批号。

8.1.5室内质控失控。

8．2 AU2700伊利康试剂系统的校准：8.2.1 准备：伊利康配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期。

8.2.3保存位置：2号冰箱。

8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。

9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。

斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T0.06ng/ml – 2.5ng/ml使用目的：本试剂盒用于测定斑马鱼血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白M（IgM）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）水平。

用纯化的斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白M（IgM），再与HRP标记的免疫球蛋白M（IgM）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中斑马鱼免疫球蛋白M（IgM）浓度。

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测作业指导书1 检验目的规范免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2 测定方法免疫透射比浊法。

3 检测原理样品中的免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）抗原分别与试剂中的IgG、IgA、IgM抗体发生免疫反应，生成免疫复合物，形成一定浊度，其浊度与免疫球蛋白的含量成正比。

与通过同样处理的校准液比较，即可计算出样品中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的含量。

4 样本血清处理方法见生化标本采集程序。

稳定性：2～8℃稳定4天。

5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800全自动生化仪。

5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。

5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。

5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。

6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。

6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。

7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。

8 参考范围IgG： 7～16.5g/L，IgA： 0.59～3.5g/L，IgM： 0.48～2.12g/L。

9 警告/危急值未规定。

10 性能指标10.1 线形上限：IgG ≤32g/L，IgA ≤7 g/L，IgM≤24g/L。

10.2 精密度：批内CV ≤4%,批间CV≤8%。

10.3 准确度:不准确度≤8%。

10.4试剂贮存:试剂密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月。

11 干扰因素及变异的潜在来源标本出现溶血对测定结果有一定影响。

12 临床意义12.1 免疫球蛋白增高：12.1.1 各种感染，特别是慢性细菌感染如骨髓炎、慢性肺脓肿等，血Ig可升高。

免疫球蛋白（IgM）测定标准操作程序1.摘要本试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清中免疫球蛋白IgM的含量。

IgM的主要功能是与抗原结合，并进一步触发抗原的分解。

IgM是初次接触新抗原后首先合成的免疫球蛋白。

2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中IgM的浓度。

3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定IgM浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的免疫球蛋白（IgM）试剂盒采用的是免疫透射比浊法。

5.原理样本中的IgM与试剂中相应的抗体相遇，立即形成抗原抗体免疫复合物，在特定的缓冲环境中形成浊度，其浊度在合适的抗体浓度存在时与抗原含量成正比，与相同条件下操作的校准品比较，即可求出样品中IgM的含量。

6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：磷酸缓冲液（PH7.2）、Tween20、PEG、NaN3、羊抗人IgM抗体。

7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。

试剂不可冰冻。

R1、R2：打开后冷藏于分析仪中可稳定28天。

7.4试剂准备：试剂为即用式。

8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用上海科华生物工程股份有限公司试剂盒内提供的标准品对自动分析仪进行校准。

由a、b、c、d、e五只组成，浓度见瓶签。

校准品可溯源至国际参考物质ERM470。

8.2质控品使用某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控结果进行转换，对质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。

肺炎支原体IgM抗体检测SOP一、检验目的规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性。

二、预期用途该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。

是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎。

主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人。

MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势。

人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗体。

IgM 抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低。

再次感染或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。

MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。

血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。

三、检验原理本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中，若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。

四、主要组成成份1、试剂盒组分包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液。

1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体；硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）免疫球蛋白M（IgM）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被免疫球蛋白M（IgM）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、100、200、400、800、1600μg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

麻疹igm操作规程麻疹(病毒性麻疹)是由麻疹病毒引起的一种急性传染病，主要通过空气飞沫传播。

IGM抗体是机体刚感染病毒后产生的特异性抗体，可以用来诊断麻疹病毒感染。

下面是麻疹IGM操作规程的详细内容。

一、实验室准备1. 麻疹IGM试剂盒：包括麻疹IGM抗体试剂、酶标试剂、洗涤缓冲液、色素底物、停止液等。

2. 高速离心机、微量移液器、洗板仪、免疫分析仪等仪器设备。

3. 试剂保存条件符合要求，避光、避热。

二、标本采集及处理1. 采集患者血液标本，一般是静脉全血或血浆。

2. 采用无菌技术操作，避免污染。

3. 血样采集后，立即分离血清或血浆并分装保存在-20℃以下的冰箱中。

三、试剂配置1. 将试剂盒中的酶标试剂A和酶标试剂B分别按照说明书中的要求稀释，制成工作液。

2. 将洗涤缓冲液配制成所需体积。

四、操作步骤1. 取出所需数量的微孔板，并加标本。

2. 加样本前，将微孔板孔底清洗3次，每次用洗涤缓冲液充分清洗孔底，并在吸干。

3. 加标本时，每孔加样150μl，须以洗涤缓冲液作空白对照。

4. 加样本后，将盖板盖上，并在37℃恒温箱中孵育1小时。

5. 孵育完后，将盖板去掉，将孔底液全部倒掉，并在洗涤缓冲液中洗涤板底3次，每次充分洗涤。

6. 在每孔中加入150μl稀释过的酶标试剂A，盖上盖板，在37℃恒温箱中孵育30分钟。

7. 孵育完后，将盖板去掉，将孔底液全部倒掉，并在洗涤缓冲液中洗涤板底3次，每次充分洗涤。

8. 在每孔中加入150μl稀释过的酶标试剂B，盖上盖板，在37℃恒温箱中孵育30分钟。

9. 孵育完后，将盖板去掉，将孔底液全部倒掉，并在洗涤缓冲液中洗涤板底3次，每次充分洗涤。

10. 在每孔中加入150μl色素底物，盖上盖板，暗处在室温下反应15-30分钟，必要时用蓝色滤光片遮光。

11. 反应结束后，在每孔中加入50μl停止液，用洗板仪在450nm波长下立即读取吸光度(OD值)。

12. 符合条件的样品进行结果判读和分析。

甲型肝炎病毒IgM抗体检测试(北京现代)一、检验目的规范实验室人员操作，保证检验结果的准确性二、预期用途本试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆样本中甲型肝炎病毒的特异性IgM抗体。

人群未注射甲肝疫苗者对HAV普遍易感，在我国,15岁以下的儿童及青少年最容易患甲型肝炎，而患过甲型肝炎或感染过甲型肝炎病毒的人可以获得持久的免疫力。

甲型肝炎的潜伏期为15-45天，主要表现为急性肝炎，仅少数表现为急性甲型肝炎而出现发热、畏寒、食欲下降、乏力、肝肿大及肝功能异常等症状。

特异性血清学检测抗HAV-IgM抗体是早期确诊甲型肝炎的重要指标。

三、检验原理本试剂盒利用免疫层析作用原理，在硝酸纤维素膜的检测线处包被鼠抗人IgM单克隆抗体，在质控线处包被兔抗HAV抗体，在金标垫上固定胶体金标记细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)".检测时，如为阳性样本，样本中的抗HAV-igM抗体可与金标垫上的胶体金标记的HAV-Ag发生结合，形成免疫复合物,并在层析作用下沿膜移动，经过检测线时与预包被的鼠抗人IgM单克隆抗体发生结合而凝聚显色，游离的胶体金标记HAV-Ag在质控线处与兔抗HAV抗体发生结合而凝聚显色。

如为阴性样本，则只在质控线处发生结合而凝聚显色。

四、主要组成成分1、检测卡/条主要组分a、硝酸纤维素膜( NC膜)b、金标垫c、鼠抗人IgM单克隆抗体d、细胞培养的纯化甲肝病毒抗原(HAV-Ag)e、兔抗HAV抗体2,样本稀释液：1瓶，主要组分为0.05M PBS缓冲液(pH 7.4).五、储存条件及有效期4~30℃避光密封干燥保存，有效期为12个月。

生产日期及失效日期详见标签。

检测卡/条开封后，相对湿度低于40%时，需在60分钟内检测；相对湿度高于40%时，开封即用。

六、样本要求样本应为血清或者血浆。

血清样本按常规方法由静脉采集制作。

适用于本试剂盒检测的血浆样本需采用肝素、枸橼酸钠或EDTA进行处理。

5天内检测的样本可放置4℃保存，5天后检测的样本需放置在-20℃以下冷冻保存。

巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程血清抗巨细胞病毒IgM抗体测定操作规程1、检测目的规范巨细胞病毒IgM抗体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。

2、检测方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测IgM抗体。

3、检测原理采用捕获法原理检测人血清或血浆样品中人类巨细胞病毒IgM抗体（HCMV-IgM），微孔中预包被鼠抗人-IgM（u链），首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的IgM抗体都可被捕获，未结合的其他成份（包括特异的IgG抗体）将被洗涤除去；第二步，加入酶标记物，酶标记物是辣根过氧化物酶（HRP）标记的基因重组抗原HCMVrp52-65。

被捕获的IgM中的HCMV-IgM会与辣根过氧化物标记的HCMV重组抗原特异性的结合，洗去其他未结合物，最后用TMB底物显色。

通过酶标仪检测吸光度（A值）从而判定样品中HCMV-IgM抗体的存在与否。

4、实验条件（1）实验室应具有空调、离心机、加样水浴锅，酶标仪等设备。

（2）检验人员应经过操作前培训。

（3）用酶标仪测定。

5、操作程序（1）样本采集。

无抗凝静脉血2ml，当日不做的标本4℃保存，必要时，-20℃冻存。

（2）操作步骤。

参照试剂盒说明书进行操作。

一肌步骤如下：①取出已包被HCMV 抗原的微孔反应条板。

稀释待测血清(血清1ul加稀释液200u1)，加至微孔中，每孔100ul。

将强阳性、弱阳性、阴性对照各100ul加至相应孔内。

②37℃温育30分钟；弃去孔内液，每孔加200--300ul洗涤液，共洗5次。

每次弃去孔内液体后均需在滤纸上拍于(下同)。

③每孔加酶标记抗体100ul，37℃，30分钟。

洗板同上。

④加酶底物／色原溶液(OPD／TMB)，每孔100ul37℃，15分钟。

⑤加终止液(2mo1／L H2SO4)，每孔50ul。

于酶标仪上读取吸光度(A)值。

(3)结果判定：①阴性对照平均A值必须小于0 .2；弱阳性对照平均A值在0 .20～0 .65；弱阳性对照与阴性对照平均A值之比必须大于或等于2。

离石区人民医院检验科作业指导书主题内容血清IgM标准操作规程文件编号：MY-SOP-012版本:B/1生效日期：2011-10-01页码：第1页，共6页1、临床意义IgM占血清免疫球蛋白总量的6%主要存在血管内，是机体受抗原刺激后最先产生的抗体，起“先锋免疫”，具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性，由于IgM主要存在血管内，是抗血管内感染的第一线抗体，对防止败血症的发生有重要作用。

IgM升高见于：系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎、硬皮病、急慢性肝病、弓形体病、4乙型脑炎等；降低见于：原发性无丙种球蛋白血症、非IgA和IgG型多发性骨髓瘤、霍奇金病、慢性淋巴细胞白血病、蛋白丧失性胃肠病等。

2、检测原理人血清或血浆中免疫球蛋白M与其相应抗体（羊抗人免疫球蛋白M抗体）在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。

与通过同样处理的校准品比较，即可计算出样本中免疫球蛋白M含量。

3、样品准备样品为空腹血清；血浆（肝素抗凝，0.1mg肝素可抗凝1.0ml血液；EDTA抗凝，1.8mg EDTA可抗凝1.0ml血液）样品稳定性：样品应在低温条件下运输保存，样品中免疫球蛋白M在2～8℃密闭可稳定7天。

-20℃保存可稳定3个月。

样品不宜反复冻融，以免影响测定结果4、试剂4.1、试剂组成R1：检测试剂1磷酸盐缓冲液PEG消脂剂防腐剂R2：检测试剂2磷酸盐缓冲液羊抗人IgM抗体防腐剂4.2、试剂准备R1试剂为即用型液体试剂,开瓶装载即可使用。

R2试剂为即用型液体试剂,开瓶装载即可使用。

4.3、试剂稳定性未开瓶试剂2～8℃储存可稳定至标签标明的失效期。

R1试剂开瓶后，在2～8℃保存时，请于1个月以内使用；R2试剂开瓶后，在2～8℃保存时，请于1个月以内使用。

4.4、试剂规格商品货号、试剂规格商品货号试剂规格使用规格（√）CH0101308 R1 60ml×3 R2 45ml×1CH0103308 R1 40ml×1 R2 10ml×1CH0105308 R1 40ml×2 R2 10ml×25、操作基本参数：方法：终点法样品/试剂： 1/100主波长： 340nm 反应温度： 37℃副波长： 700nm 反应时间： 10min操作：测定（U）校准（C1）校准（C2）校准（C3）校准（C4）空白（B）样品（ul） 3 -- -- -- -- -- 校准液（ul）-- 3 3 3 3 -- 蒸馏水（ul）-- -- -- -- -- 3试剂R1（ul）240 240 240 240 240 240 混匀，37℃恒温5分钟，340nm空白管调零，测定吸光度A1试剂R2（ul）60 60 60 60 60 60 混匀，37℃恒温5分钟，340nm，空白管调零，测定各管吸光度A2。

血清免疫球蛋白M测定【基本信息】[简要描述]·免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)是初次免疫应答反应中的免疫球蛋白(Ig)，也是相对分子质量最大的Ig，约占血清总Ig的5%-10%。

·IgM测定用于体液免疫活性、子宫感染可能性或急性感染评价，IgM型多发性骨髓瘤和华氏巨球蛋白血症诊断和治疗检测。

[其他名称]IgM【测定方法及参考值范围】可通过单向免疫扩散法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法测定。

参考值范围：成人血清IgM为0.5-2.6g/L；新生儿为0.01-0.06g/L。

【结果及临床意义】[增高]◇疾病因素·华氏巨球蛋白血症注释：IgM呈单克隆性明显增高。

·IgM型多发性骨髓瘤·初期病毒性肝炎(A型病毒性肝炎急性早期等)·类风湿关节炎·系统性红斑狼疮·宫内感染注释：宫内感染可能引起IgM浓度急剧升高，若脐血中IgM＞0.2g/L时，表示有宫内感染。

·慢性感染·淋巴瘤·肝硬化(原发性胆汁性肝硬化的早期等)·B型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。

·C型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。

·慢性肝病·类狼疮性肝炎注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。

·肝细胞癌注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。

·链球菌感染·传染性单核细胞增多症·肾病综合征微小病变型恶化时·浆细胞骨髓瘤·施尼茨勒综合征注释：表现为慢性荨麻疹、不明原因发热、骨关节痛、骨硬化X线像。

·伴性IgM增高免疫球蛋白缺乏症·先天性高IgM综合征[降低]◇疾病因素·IgG型重链病·IgA型多发性骨髓瘤·先天性免疫缺陷症(原发性无丙种球蛋白血症、网状细胞异常形成症等)注释：网状细胞异常形成症属于复合性免疫缺陷症的一种类型，T、B和NK细胞显著减少，免疫球蛋白减少以至IgA和IgM多有测不出的程度。