食品微生物实验 微生物分离

实验五微生物的分离、接种及培养法一目的要求1.掌握倒平板的方法、划线分离法、稀释平板分离法和菌落（活菌）计数法。

2.熟练掌握微生物的接种技术，学会微生物的一般培养方法和无菌操作技术。

二实验原理从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的分离方法有： 1) 平板划线分离法；2）稀释平板分离法。

在食品发酵工业中，通过微生物的分离、纯化，选育优良的微生物菌种，以提高产品的质量和产量；在食品卫生管理方面，需要进行微生物检测，必须将微生物单一分离出来，加以鉴别和研究。

土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。

因此土壤是微生物多样性的重要场所，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。

微生物的分离和接种是微生物学中重要的技术之一，需要严格的无菌操作，否则使得微生物实验毫无意义。

三实验材料1.菌种：葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、酵母菌、毛霉、曲霉、青霉等含菌样品。

2.培养基：肉汤蛋白胨培养基（斜面、平板）、肉汤蛋白胨液体培养基、蔡氏琼脂培养基（斜面、平板）。

3.土壤（自带）或其他物品；无菌水，无菌培养基，无菌吸管，无菌三角瓶等。

四实验内容与步骤（一）微生物的分离技术1. 平板划线分离法借助划线使混杂的微生物在平板的表面分散开，以获得单个菌落，从而达到分离的目的。

具体方法如下：倒制平板→制备含菌样品稀释液→划线→倒置适温培养→观察记录（1)倒制平板：将固体培养基熔化→冷却至 50-55℃→注入培养皿内 15ml（无菌操作）→旋匀→静置凝固→即成平板→在皿盖边贴标。

（2)含菌样液制备：样品少许（1-10g），加入盛有无菌水的试管内，摇匀，制成菌悬液即可，能直接划线的样品（如体液、黏液、污水等），可省去这操作。

（3)划线：左手持平板，接种环经灼烧灭菌后，以无菌操作取样，迅速将接种环伸入培养皿，轻轻划线（切勿把平板表面划破）。

然后将培养皿倒置放入恒温培养箱37℃，培养24-48 小时，观察平板上出现的现象，注意菌落的形状，并做记录。

161综述随着社会的进步与发展，人们生活水平与理念的提升，许多食品安全问题不断被揭露出来，对于食品安全问题的关注度也显著增加。

食品检验是对食品安全的一个重大保障，只有达到标准的食品才能进入市场。

在食品安全问题中，微生物是对食品安全问题造成威胁的主要来源。

微生物是一种肉眼看不见的生物，如果在食品加工或运输过程中，不严格按照标准进行，就很容易被微生物污染，而微生物污染过的食品就会对人体健康安全造成威胁。

因此，做好食品检验工作，为食品安全提供有力保障。

1.食品微生物检验的内容1.1细菌总数的鉴定。

细菌菌落总数是指食品检验经处理，在一定条件下培养后所得1g食品或1ml食品或1cm2食品表面积上所含有的细菌菌落总数。

食品微生物中细菌总数的检验是衡量食品污染程度的指标。

通常是对生活中的食品或水通过特殊的物理、化学和生物的方法进行处理，在特定的培养条件下进行培养，得到细菌总数。

食品中细菌数量越多，腐败速度越快，甚至会对人体健康造成影响。

因此，细菌总数可以作为一个衡量食品安全的标准。

虽然细菌总数的并不能直接反映致病菌的多数量，但在一定程度上，二者是呈现正相关性的。

1.2大肠杆菌群数。

一定范围的大肠杆菌数能够维持人体内的正常菌群，但大肠杆菌菌群包含有多种肠道致病菌，超过范围就会对人造成危害。

在食品微生物检测过程中，待测样品中含有超标的大肠杆菌，很可能表明该待测样品直接或间接接触过粪便感染，当人们食用了这样的食品，其肠道致病菌感染的可能性大大增加。

大肠菌群MPN值是指1g或1ml待测样品中大肠菌群最可能数。

因此，大肠菌群MPN值可以作为粪便污染食品的指示菌。

1.3霉菌和酵母群数。

霉菌和酵母菌也是常见的食品微生物，起初酵母菌用于面包制造，酿酒等生产中，而霉菌也用于酿酒、制酱等一些食品生产中。

但是这一些腐生型酵母菌会使食物腐败变质，对于常见的面包而言，他主要含有淀粉，因此更容易滋生霉菌，霉菌则会分解淀粉，从而产生有毒黄曲霉素，是强致癌物质。

一、实验方案
1. 实验现象与结果
2. 本实验的关键环节及改进措施
⑴、接种环的灭菌操作要到位:接种环使用前, 直接在酒精灯上烧灼灭菌, 把环和金属丝烧红即可。

接种环使用后, 先在火焰周围把环上标本烤干, 再烧灼灭菌, 以免标本汽化, 爆烈四溅, 污染环境。

金属杆快速通过火焰2－3次, 杀灭表面微生物。

⑵、划线技术要很娴熟,具体要求参照上图。

⑶、整个过程要严格防止实验中被污染,每个阶梯稀释换新的移液管,要等平板冷却后再倒置。

思考题
1.食品中微生物为何繁殖迅速、种类繁多？
2.食品被微生物污染后有哪些危害？
3、检样稀释时, 每个稀释度都要更换刻度吸管, 为什么？
1.答:因为食品中含有大量的淀粉、蛋白质、糖类、脂肪等有机物, 且无机盐含量相对较低, 食品中含有一定的水分, 并且食品包装后容易使内部升温, 这些都是很适合微生物(细菌、原虫、病毒)生长繁殖的情况, 因此食品中的微生物能够繁殖迅速且种类繁多。

所以很多食物要严格灭菌或者添加防腐剂、干燥剂、脱氧剂等, 或者真空包装。

2.答:⑴、降低食品的营养；
⑵、引起食品腐败变质；
⑶、引起呕吐、中毒或者某些疾病(如痢疾、腹泻、呼吸道感染等)和潜在性的慢性危
害等。

3.答: 每个稀释度都要更换刻度吸管可以在一定程度上保证不会沾有上一个稀释度得溶液, 且减少污染, 使浓度稀释得更加准确, 增加实验结果的准确性。

指导教师评语及评分:
签名: 年月日。

⾷品微⽣物实验报告霉菌的培养与形态学观察实验⼀真菌培养基的配制与灭菌实验⽬的：（1）了解培养基的配置原理和⽅法，掌握分离培养微⽣物的有关准备⼯作。

（2）掌握⾼压灭菌⽅法及原理实验原理：（1）培养基的制备原理：1. 培养基是供微⽣物⽣长、繁殖、代谢的混合养料。

2. 从营养⾓度分析：营养：碳源、氮源、能源、⽣长素、⽔分和⽆机盐等；适宜的酸碱度(pH值)和⼀定缓冲能⼒；⼀定的氧化还原电位；合适的渗透压。

琼脂是从⽯花菜等海藻中提取的胶体物质，是应⽤最⼴的凝固剂。

加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微⽣物污染。

但多次反复融化，其凝固性降低。

（2）湿热灭菌原理－⾼压蒸汽灭菌在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压⼒不断上升，使⽔的沸点不断提⾼，从⽽锅内温度也随之增加。

在0.1MPa的压⼒下，锅内温度达121℃。

在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其⾼度耐热的芽孢。

实验材料与⽅法配制培养基所需器材实验设备：⾼压蒸汽灭菌器。

实验器材：500ml三⾓烧瓶、蓝盖瓶、5ml刻度吸管、培养基、天平、砝码、称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、⽜⽪纸、硫酸纸、橡⽪筋、铁丝筐、平⽫、剪⼑等。

培养基等集中放讲台前⾼压桶内，送到洗刷室统⼀⾼压灭菌条件及注意事项⾼压灭菌条件：121.3℃，15min 。

含糖培养基113 ℃，15min 。

倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平⽫包装倒平板（10块）注意事项：空⽓环境⽆菌（应在酒精灯⽕焰周围⽆菌区）。

a.在酒精灯⽕焰处，倾斜打开瓶⼝。

b.瓶⼝要过⽕焰。

c.左⼿掀开平⽫⼩⼝。

d.倾注满⽫底再多⼀点，约10ml（7cm直径平⽫）。

e.推放⼀边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。

f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备⽤。

分析与讨论（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养⼀周左右进⾏检查。

实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。

2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。

[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。

2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。

3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。

4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。

经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。

少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。

有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。

二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。

三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。

高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。

其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。

把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。

一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。

灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。

干热灭菌法也叫热空气灭菌法。

实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。

此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。

其优点是灭菌器皿保持干燥。

但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。

食品加工中的微生物分离技术食品加工过程中的微生物检测和分离是保障食品安全的关键环节之一。

微生物是一类细小但强大的生命体，有些能够生长在食品中，产生毒素，对人体健康造成危害。

因此，采用适宜的微生物检测和分离技术可以帮助食品企业及时掌握食品质量，确保食品的健康和安全。

一、微生物的检测和分离技术1. 培养检测法: 培养检测法是最常用的一种微生物检测方法，利用营养富集培养基来寻找可能存在的微生物。

但缺点是有些微生物会被掩盖，无法检测到。

2. 分子诊断法: 分子诊断法是一种通过分析微生物的核酸(DNA、RNA)来确定它们的数量和种类的方法。

优点是准确性高、速度快，但成本较高。

3. 免疫学方法: 免疫学方法利用抗原与抗体之间特异性互相结合的原理，通过检测特定抗原或抗体来检测微生物的存在。

但有些微生物的抗原或抗体水平极低，很难检测出来。

4. 生物传感器技术: 生物传感器技术是一种检测微生物的新型方法，它可以通过测量微生物与生物材料的相互作用来检测微生物的存在。

二、微生物分离技术微生物分离是将微生物从样品中分离出来以便进行下一步的检测和分析。

这个过程中，需要先确定分离的微生物种类，再选择相应的分离技术。

1. 培养法: 培养法是一种传统的微生物分离方法，通过将样品分别接种在营养富集培养基上来寻找微生物。

优点是应用广泛，但繁琐、耗时、有时会产生误差。

2. 过滤法: 过滤法是通过将待检样品过滤来分离微生物，通常与细胞数统计配合使用。

3. 凝胶扩散法: 凝胶扩散法是一种通过凝胶扩散的原理来分离微生物的方法。

4. 核磁共振技术: 核磁共振技术是一种无损检测微生物的方法，可以通过核磁共振图谱来快速分离、鉴定微生物。

三、微生物分离技术的应用微生物分离技术的应用范围很广，特别是在食品加工中，常用于食品样品的检测和分离。

1. 牛奶中的微生物分离: 牛奶中可能含有多种有害微生物，使用适当的微生物分离技术，可以使各种微生物得到完整分离。

广州大学综合设计性实验报告学院生命科学学院課程微生物学实验实验项目实验五食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定实验题目商中奶茶中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定专业生物科学年级、班别生科141姓名学号任课教师实验五食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定—商中奶茶中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定【摘要】目的通过对商中奶茶中微生物的检测来提高人们对饮食健康的进一步的认识，加强人们的卫生意识，也对我们日常饮用品中的微生物的含量有清晰的认识。

方法本实验应用平板菌落记数技术测定奶茶中细菌总数和进行生理生化鉴定。

由于奶茶中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是饮料中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值。

本实验采用普通营养琼脂培养基、PCA培养基、孟加拉红培养基，该类培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。

所谓细菌总数，指1毫升检样中所含的细菌菌落的总数。

还有就是通过革兰氏染色以及芽孢染色等初步的鉴定试验来进行检测。

结果通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为每毫升奶茶中600个细菌菌落。

结论饭店饮用水虽然符合国家卫生标准，但其中细菌含量还是较多，我们应当慎重饮用，或使用前进行加热处理。

【关键词】：奶茶微生物检测分离鉴定【前言】目的1. 检索并了解国家相关的食品卫生标准，了解细菌总数，霉菌总数、母菌总数，大肠菌群数在食品卫生学评价中的意义；2. 学习并完成实验设计；3．应用细菌的分离和活菌计数的基本方法、掌握相关原理；4 ．对分离到的微生物（细菌，霉菌）进行初步的形态学观察，对分离的细菌进行鉴别染色以及生化鉴定；5. 学习和掌握快速大肠菌群检测纸片的检测方法；6. 了解常用的菌种保藏方法意义：随着环境污染问题的日益严重，水中的生物污染也日益严重，公众对影响健康的病原微生物更加关注。