分子克隆技术
一、填空题
1.PCR反应中加入矿物油的作用是___________________________。
2.分子克隆实验中外源DNA和载体片段连接之前，要对载体进行去磷酸化处理，我
们在本次试验中去磷酸化使用的碱性磷酸酶是___________________________。它
的目的是___________________________。
3.用α互补筛选转化子是，带有外源片段的菌落显___________________________色。
4.Southern杂交中进行与杂交的目的是___________________________。
5.凝胶糖凝胶电泳时加入loading buffer作用是___________________________和
___________________________。
6.影响琼脂糖凝胶电泳的因素主要有___________________________、
___________________________、___________________________、
___________________________、___________________________。
二、简答题
1.简述PCR反应体系中都有哪些成分及各成分的作用。
2.为得到质量较好的水稻RNA，抽提前应做如何准备？RNA抽提过程中、RNA的
保存及以后对RNA的操作过程中应特别注意什么？
3.简述为防止放射性同位素外照射及内照射对人体造成伤害，在操作放射性同位素
时，我们可以采取哪些措施进行防护？
4.简述影响电转化感受态细胞转化效率的因素有哪些？
5.质粒抽提时用到的SolutionI，SolutionII，SolutionIII及异丙醇分别起什么作用？操
作时应注意什么？
三、分析问答题
1.描述并图示pUC19载体DNA及其在HindIII位点克隆了外源DNA片段的质粒DNA
和水稻总DNA及它们的HindIII和BamH1酶切产物在琼脂糖凝胶电泳时的带型。
2.利用质粒载体克隆外源DNA片段主要包括哪些步骤？涉及到哪些工具酶？要获得
理想的结果，各步骤操作中应主要注意哪些事项？
3.在Southern杂交实验中，同一根杂交管内的膜曝光的····（原卷此处不清晰）冲
洗后，有些组X光片信号很强，有些组信号很弱，有的样品点样孔附近有较强的
信号，但是有的地方信号较弱，请分析造成这种结果的可能原因。
4.下面是本次课生物技术班某组β-active基因RT-PCR（反转录前没有对总RNA进
行去除DNA 的处理）试验的琼脂糖凝胶电泳图，凝胶上共点了6个样，PCR使用
的模板从左至右分别是：该组提取的水稻总DNA，该组提取的水稻总RNA，该组
的4个反转录产物。（原卷本题图不清晰）
请问：
提取的RNA的质量如何？
RT-PCR是否成功？为什么会出现这样的结果？
有哪些地方需要改进？
