海南省番石榴根结线虫病病原的种类鉴定 及其寄主范围的测试
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珍珠番石榴根结线虫病及其防治摘要珍珠番石榴是海南省近年来发展比较迅速的果树之一,但由于根结线虫病的影响,普遍存在果树减产甚至死亡的现象,严重影响果树栽培的经济效益。
总结了番石榴根结线虫病的传播途径和发病条件,针对其为害特点,提出防治方法。
关键词珍珠番石榴;根结线虫病;发生;防治番石榴为热带果树,属桃金娘科番石榴属,是常绿小乔木或灌木,俗称拔子、那拔、巴乐。
原产热带美洲,现今在热带和亚热带地区均有栽培。
从20世纪80年代末开始,海南及华南各地很多地方从台湾引进包括珍珠番石榴、台湾水晶无核番石榴、台湾新世纪番石榴等在内的很多番石榴新品种,经过多年试验,海南地区以珍珠番石榴种植面积最大。
但由于番石榴根结线虫病的危害,给珍珠番石榴的种植业造成重大损失。
1主要症状根结线虫病是世界性分布的植物土传病害,寄主范围广,黄瓜、苦瓜、西瓜、丝瓜、南瓜、冬瓜和葫芦瓜等葫芦科作物,番茄、茄子和辣椒等茄科作物,菜豆、豇豆和扁豆等豆科作物,西洋芹、菠菜、香菜、萝卜和胡萝卜等绿叶蔬菜作物,以及胡椒等热带作物均有线虫病发生,在温带和热带区域为害普遍而且比较严重。
据调查,危害番石榴的线虫主要是南方根结线虫和爪哇根结线虫,前者是优势虫种。
受根结线虫病危害的珍珠番石榴果树常表现生长树势衰弱,又易与干旱、缺肥水的症状相似,新芽变黑,新叶变小、转绿慢或发黄,有微量元素缺乏现象,无光泽,叶缘黄萎干枯,易落叶,枝条枯萎,甚至全株枯死。
发病较重的果苗叶色萎黄,叶片稀少,生长缓慢,冬天整株叶片呈紫红色。
检查根部,可以看到根系受害的症状。
病株根系肿胀呈鸡爪状,表皮变褐,主根肿大腐烂,须根着生大大小小的肿瘤,变粗变短,结成根团,新根易断碎,无正常根系的色泽。
吸收根(白根)可见细小如针头大的侵入点,最后整个根系腐烂,失去生命力,地上部分随即枯死。
受害或结成大小不等的根瘤,甚至在支干根上结瘤、腐烂坏死。
高温干旱时症状最明显,病情更严重,重病株严重矮化、叶片发黄下垂以至枯死。
一种鉴定4种根结线虫的PCR方法景晓辉;吴伦英;汪军;黄俊生【摘要】A rapid and sensitive polymerase chain reaction (PCR) method for the detection and identification of four most common and economically important Meloidogyne spp. was developed. By using previously published primer #C2F3/#1108, fragments of three sizes were detected. The M. incognita and M. javanica reactions produced a 1.7 kb fragment; the M. arenaria reaction, a 1.1 kb fragment; and the M. hapla reaction resulted in a O.S kb fragment. Based on the sequence of oesophageal gland protein gene SEC-1, specific primer MI-F/MI-R was designed and tested for its amplification specificity and efficiency against populations of M. incognita. This resulted in two pairs of primers that were used in combination to reliably identify Meloidogyne incognita, M. arenaria, M. javanica and M. hapla.%根结线虫(Meloidogyne spp.)是威胁全球农业生产的重要病原物,每年给农业生产造成巨大的经济损失.利用两对引物#C2F3/#1108和MI-F/MI-R建立了一种适用于4种根结线虫分子鉴定的技术.结果表明:引物#C2F3/#1108可将根结线虫分为南方根结线虫或爪哇根结线虫、花生根结线虫和北方根结线虫;引物MI-F/MIR可用于特异性区分南方根结线虫和爪哇根结线虫.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2013(034)003【总页数】3页(P433-435)【关键词】聚合酶链式反应;食管腺蛋白基因;根结线虫;鉴定【作者】景晓辉;吴伦英;汪军;黄俊生【作者单位】中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海南省热带作物病虫害生物防治工程技术研究中心海南海口 571101【正文语种】中文【中图分类】S432根结线虫(Meloidogyne species)是一类危害非常严重的植物病原线虫,广泛分布于世界各地,危害超过3 000种植物[1]。
海南省象耳豆根结线虫的鉴定研究作者:龙海波孙艳芳白成郭建荣曾凡云来源:《热带作物学报》2015年第02期摘要象耳豆根结线虫寄主范围广、致病力强以及能在携带Mi抗性基因的作物上寄生繁殖,是热区最具危害性的病原根结线虫种类之一。
应用比较形态学,结合mtDNA序列分析、IGS序列分析和进化发育树等分子生物学方法对海南省18个市县的根结线虫进行鉴定,确定象耳豆根结线虫在蔬菜、番石榴、哈密瓜和枣树等作物上广泛发生为害,其中枣树为首次发现的象耳豆根结线虫新寄主。
研究结果表明,象耳豆根结线虫已成为海南省蔬菜作物上重要的病原根结线虫种,并有进一步扩散加重为害的趋势。
关键词象耳豆根结线虫;鉴定;会阴花纹;线粒体DNA;进化分析中图分类号 S436.3 文献标识码A象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)是近几年引起广泛关注和重视的一个热带根结线虫新种,在亚洲、非洲、欧洲以及北美热带和亚热带地区均有发生分布[1]。
该线虫具有极其广泛的寄主范围,包括豆科、茄科、葫芦科中的多种蔬菜,以及大豆、玉米、棉花、烟草、番石榴和荔枝等重要粮食和经济作物[2-3]。
与南方根结线虫(M. incognita)和爪哇根结线虫(M. javanica)等主要根结线虫种类不同的是,象耳豆根结线虫能够克服Mi、N和Rk等抗线虫基因介导的抗性反应,在抗性番茄、辣椒和豇豆等蔬菜上寄生繁殖,造成的产量损失可达到65%以上[1,4]。
此外,象耳豆根结线虫被证实与在欧洲和美国广泛发生的玛雅古根结线虫(M. mayaguensis)为同种异名[5]。
目前,象耳豆根结线虫已被国际上公认为最具危害性的植物病原线虫之一,欧洲和地中海植物保护组织将其列入了A2警报名录[6]。
象耳豆根结线虫最早在海南儋州象耳豆树上发现,自1983年首次报道后的20多年时间内一直被认为是少数种或次要种而受到长期忽视[7]。
近年来,陆续有报道象耳豆根结线虫在海南儋州、三亚、琼海、澄迈、陵水等市县的蔬菜和水果上发生为害[8-10]。
番石榴病害的发生症状与防治作者:毕志兼来源:《农家科技下旬刊》2017年第05期摘要:目前的番石榴经济栽培品种皆无抗病性,但为害番石榴的害虫种类较多,番石榴果树一旦感染病菌和虫害后,可能停止生长。
本文介绍了番石榴的主要病虫害防治措施,为番石榴产业化生产提供科学合理依据。
关键词:番石榴果;发病规律;病虫害防治番石榴为热带果树,原产热带美洲,属桃金娘科番石榴,是常绿小乔木或灌木,俗称拔番石榴子、那拔。
因其来自国外,故名为番石榴,是亚热带名优水果品种之一。
番石榴生长适应性强,不择土壤,栽培容易。
但在种植过程中病虫害发生频率高,严重影响品质和产量,甚至严重时可致绝产甚至全树枯死。
因此,对番石榴病虫害综合防治方法总结非常重要。
一、番石榴病害症状与防治措施番石榴主要病害有叶枯病、假尾孢褐斑病、炭疽病、根结线虫病、果腐病和日灼病等。
1.番石榴叶枯病(真菌病害)(1)症状。
主要为害叶片,叶斑圆形或不规则形。
初褐色,后期中央淡褐色,病健交界明显,边缘具红褐色至暗褐色的坏死线最后变成枯斑。
感病嫩叶叶尖、叶缘枯死。
(2)发病规律。
以分生孢子器在病斑上或随病残体在土壤内及地表越冬,翌年遇雨及灌溉水放射出分生孢子,侵染寄主,引起病害的发生和流行。
病菌主要靠雨水和气流传播,气温上升至20℃以上易发病。
(3)防治方法。
①结合修剪清园,将病枝、病叶及病果清出园外烧掉,减少病源。
②发现病害后及时喷洒75%百菌清可湿性粉剂500倍液、36%甲基硫菌灵悬浮剂500倍液、1:1:200倍式波尔多液等,隔7~10d一次,连续用药2~3次。
2.番石榴假尾孢褐斑病(真菌病害)(1)症状。
为害叶和果实。
叶片染病,生暗褐色至红褐色不规则形病斑,无明显边缘,叶背生灰色霉状物(病菌子实体)。
果实染病,果斑呈暗褐色至黑色小点,中央凹陷,边缘红褐色,潮湿时也生霉状物。
台湾番石榴发病率可达40%以上。
(2)发病规律。
病原菌以菌丝体和分生孢子在病树上辗转传播扩散,条件适宜时产生大量分生孢子,借风雨传播进行初侵染和多次再侵染,雨水多或湿度大易发病。
辣椒根结线虫病及其抗病性研究进展郑井元;朱春晖【摘要】It summarized the damages of root-knot nematode of capsicum and the identification of disease resistance of capsicum to root-knot nematode in recent years. Moreover, the prospects of breeding capsicum varieties which resist to root-knot nematode were viewed. The root-knot nematode mainly damages the roots of capsicum, and it will form a root knot on lateral root when it invaded into capsicum, thereby damaging the absorbing ability of host plant to nutrition and water. The first choice for identifying disease resistance of capsicum to root-knot nematode is inoculation method in seedling stage, and the classification of anti-infective indexes mainly has three methods, including egg mass index, root nodule index and propagation coefficient. There are a lot of nematode resistant gene resources in wild capsicum resources, and at least 10 single dominant genes had been found to control the resistance of capsicum to root-knot nematode.%对辣椒根结线虫病的危害及其近年来有关辣椒根结线虫病抗病性鉴定和抗病性研究等方面进行了综述,并对辣椒根结线虫病的抗性育种研究进行了展望。
象耳豆根结线虫两个新基因(MeActin和MeHsp70)象耳豆根结线虫两个新基因(MeActin和MeHsp70)象耳豆根结线虫两个新基因(MeActin和MeHsp70)的克隆与特性研究根结线虫(Meloidogyne spp.)为植物根系内寄生物,可对农作物造成严重的危害。
在国内约30多种根结线虫中,象耳豆根结线虫(M. enterolobii Yang and Eisenback, 1983)在海南岛已普遍分布,广东省也有发现。
通过海南岛茄果类蔬菜根结线虫种类鉴定,发现该种群已进一步扩散,正在显示出取代南方根结线虫M. incognita,而成为我国热带亚热带地区最重要根结线虫种类的趋势。
近年来对该线虫的研究备受关注,但对于其功能基因及功能基因组等分子生物学研究报道很少。
本研究以该线虫为材料,采用RT-PCR、cDNA 末端快速扩增法(RACE),克隆得到M. enterolobii的Actin基因和Hsp70基因的全长cDNA序列,并对它们进行了生物信息学分析以及MeHsp70原核表达分析。
主要研究结果如下:(1)MeActin基因全长cDNA序列为1298bp,包含一个全长1125bp的开放阅读框ORF,编码375个氨基酸,起始密码子在82位,终止密码子在1207位(GenBank 登录号KF534787),与已知的其它物种的Actin具有高度的保守性,与马铃薯腐烂茎线虫D. destructorto和松才线虫B. xylophilus Actin的同源性分别为99.20%和98.67%,与秀丽隐杆线虫C. elegans、人类H. sapiens相似性分别达到98.67%和97.33%。
系统发育分析表明,MeActin可能是β-Actin,同时也发现了MeActin与人类的胞质Actin(β-Actin)更相似。
MeActin基因的分离为M. enterolobii其它基因的表达和调控研究提供了内参基因。
根结线虫防治研究进展摘要概述了国内外根结线虫病农业防治、物理防治、化学防治、生物防治、微生物源及植物源农药防治的研究进展,分析了该病的防治现状,并展望了生物防治、微生物源及植物源农药防治的前景。
关键词根结线虫;种类;防治;研究进展;展望根结线虫(Meloidogyne spp.)是寄生于作物根部,严重危害世界农业生产的一类植物病原物。
其寄主植物超过3 000种,分属于114科,包括水稻、花生、烟草、茶叶、果树、蔬菜、花卉、药材等,其中以茄科、葫芦科、十字花科等植物受害尤为严重[1]。
温带、亚热带、热带地区的植物受害比其他地区更为严重,病害可造成作物减产10%~20%,严重时可达75%以上[2]。
笔者综述了国内外根结线虫病防治研究的现状,并展望了生物防治、微生物源及植物源农药防治的前景。
1农业防治1.1土壤有机改良土壤施入某些有机物能够增强土壤微生物的活性,影响土壤病原菌的活力和残存数量,可以有效降低根结线虫的数量,还能调节作物生长,改良土壤,增加肥效,改良品质。
目前,用于土壤处理添加的成分主要有甲壳类物质(主要是甲壳索)、粪肥和植物有机体等。
郭玉莲[3]利用鸡粪防治温室蔬菜根结线虫病,发现鸡粪水能够抑制根结线虫卵的孵化。
房华等[4]研究表明,茶树菇(Ligrocybe aegerita(Briganti)Singer)的菌渣能减少南方根结线虫对番茄(Lycopersicon Miller)的侵染。
1.2轮作利用根结线虫的寄生范围局限性原理进行合理轮作能有效地防治根结线虫,在作物种植过程中与根结线虫不易繁殖的禾本科(Gramineae)作物轮作,轮作年限越长,效果越好,有条件的地区可实施水旱轮作。
吴家琴等[5]用木薯(Manihot centa Crantz)和甘蔗(Saccharum spp.)与红麻(Hibiscus cannabinus Linn)轮作,发现2种作物对红麻上的根结线虫种类均具有免疫性。
海南省番石榴根结线虫病病原的种类鉴定及其寄主范围的测试刘昊1,龙海1,鄢小宁2,徐建华13(11南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室,江苏南京210095;21中国热带农业科学院环境与植物保护研究所,海南儋州571737)摘要:对源自海南省3地侵染番石榴的9个根结线虫群体进行了形态观察和同工酶分析,对4个代表性群体在10种常见经济作物15个品种上的繁殖力进行了测试。
同工酶鉴定结果表明,病原线虫为象耳豆根结线虫(M eloidogyne enterolo 2bii )。
生物测试发现或证实:携带M i 基因的抗性番茄以及菜豆、豇豆、茄子、黄瓜、西瓜、辣椒、烟草为供试象耳豆根结线虫群体的高度适宜寄主,大豆为低度适宜寄主,棉花为非寄主。
寄主范围的测试结果提示,象耳豆根结线虫可潜在地对农业生产造成巨大的经济损失。
关键词:番石榴;象耳豆根结线虫;同工酶谱;寄主范围中图分类号:S43214+5 文献标识码:A 文章编号:10002030(2005)04005505Speci es i denti fi cati on and host range testi n g of a root 2knot ne matodei n fecti n g guava i n Ha i n an Provi n ceL I U Hao 1,LONG Hai 1,Y AN Xiao 2ning 2,XU J ian 2hua13(11Key Laborat ory of Monit oring and M anage ment of Plant D iseases and I nsects,M inistry of Agriculture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;21I nstitute of Envir on mental Sciences and Plant Pr otecti on,Chinese Acade my of Tr op ical Agricultural Sciences,Danzhou 571737,China )Abstract:T o deter m ine the s pecies identity and evaluate the potential econom ic i m portance of a r oot 2knot ne mat ode infecting guava (Psidium guaj ava )in Hainan Pr ovince,we observed the fe male perineal patterns and is ozy me phenotypes of 9M eloidogyne popula 2ti ons collected fr om infected guava fr om three l ocati ons,and tested the rep r oducti on potential of 4rep resentative populati ons on 15cultivars of 10econom ic cr op s .Is ozy me phenotyp ing deter m ined that the pathogen was M eloidogyne enterolobii .B i otesting revealedor confir med that t omat o carrying the resistance gene M i ,kidney bean,cowpea,eggp lant,cucu mber,water mel on,pepper and t obacco were good hosts of the M 1enterolobii populati ons tested .Soybean was a poor host,and cott on was a non 2host .The resultsuggests that M.enterolobii has the potential t o cause great econom ic l osses in agriculture .Key words:Psidium guajava;M eloidogyne enterolobii ;is ozy me phenotypes;host range根结线虫(M eloidogyne s pp.)为植物根系的专性内寄生物,其侵染性二龄幼虫侵入寄主根系,迁移至维管束后固定取食并发育成成虫。
线虫的持续取食干扰了寄主根系的正常生理过程,致使寄主植物显现特异性的根结病害症状[1]。
受害作物的产量损失可达70%以上[2]。
根结线虫多为广寄主病原物,但种间乃至种内存在一定的寄主专化性。
目前控制农作物根结线虫病的途径主要有实施植物检疫、建立无病种苗生产基地、选种抗性品种、采用轮作和合理使用化学杀线虫剂。
而对于非化学性防治措施的有效实施,目标线虫群体种类的准确鉴定及其寄主范围的界定是前提条件。
近年来,海南省各地种植的番石榴树(Psidium guajava )普遍发生根结线虫病,给当地的生产造成了较大的经济损失[3,4]。
有研究者依据形态特征将病原鉴定为南方根结线虫(M.incognita )[3,4],但由于根结线虫的形态特征有时不稳定,有必要对病原线虫的种类进行确认。
基于以上背景,本研究对采自 收稿日期:20041220 基金项目:国家自然科学基金项目(30471141);国家863研究计划项目(2001AA249021) 作者简介:刘昊(1978),硕士研究生。
3通讯作者Corres ponding author:徐建华(1964),教授,从事植物线虫学研究,E 2mail:jianhuaxu@njau 1edu 1cn 。
南京农业大学学报 2005,28(4):55~59Journal of N anjing A gricultural U niversity海南省3地侵染番石榴的9个根结线虫群体进行了形态观察和同工酶分析,同时针对常见经济作物进行了病原线虫寄主范围的测试,目的是明确海南省番石榴根结线虫病病原的种类,评估病原线虫的潜在经济危害性,为病原线虫的有效治理提供依据。
1 材料与方法111 线虫群体线虫样本采自海南省儋州、琼海和澄迈3地显现根结症状的番石榴植株(表1)。
将田间采集的根结线虫样本接种于感病番茄品种江蔬3号上,经单卵块法纯化后于温室中(20~28℃)繁殖备用。
表1 供试根结线虫群体Table 1 M eloidogyne popul a ti on s used i n th is study线虫群体Populati on 采集地Locati on同工酶表型Is ozy me phenotypes Mdh Est 线虫群体Populati on 采集地Locati on同工酶表型Is ozy me phenotypes Mdh Est MEHN1儋州Danzhou N1a VS1S1MEHN6琼海Q i onghai N1a VS1S1MEHN2儋州Danzhou N1a VS1S1MEHN7琼海Q i onghai N1a VS1S1MEHN3儋州Danzhou N1a VS1S1MEHN8琼海Q i onghai N1a VS1S1MEHN4儋州Danzhou N1a VS1S1MEHN9澄迈Cheng maiN1aVS1S1MEHN5琼海Q i onghaiN1aVS1S1 注:Mdh:苹果酸脱氢酶Malate dehydr ogenase;Est:酯酶Esterase112 雌虫会阴花纹形态的观察选取各线虫群体的成熟雌虫10条,置于有机玻璃片上的蒸馏水滴中,用解剖刀切取会阴部角质膜,将其转移至45%乳酸液中剔除杂物并进行修切,最后将角质膜块置于甘油中制成会阴花纹永久玻片。
在光学显微镜(800×)下观察各线虫群体的会阴花纹特征并拍照。
113 同工酶分析线虫的苹果酸脱氢酶(Mdh )和酯酶(Est )同工酶的活性分析参照Esbenshade 等[5]的程序。
采用7%聚丙烯酰胺胶垂直电泳,每孔加样4条雌虫的酶提取物。
电泳后,将胶在苹果酸脱氢酶染液中染色5~10m in 至出现清晰的酶条带,然后将同一胶在酯酶染色液中染色20~30m in 至出现清晰的酶条带为止。
以已鉴定的爪哇根结线虫(M.javanica )样本作为参照系。
苹果酸脱氢酶和酯酶表型的命名按照Esbenshade 等[6]的方法。
114 寄主范围测试选取4个代表性病原线虫群体,即MEHN1、MEHN2、MEHN5和MEHN9,测定其在番茄等10种常见经济作物的15个品种(表2)上的繁殖力。
其中,番茄品种Ne marex 携带有抗南方、爪哇和花生根结线虫的基因M i ,烟草品种NC95对多数南方根结线虫群体表现抗性。
将供试作物品种播种于灭菌土中,出苗后选取长势一致的植株移栽于装有灭菌土、直径为6c m 的塑料杯中,在温室中培育2周。
从繁殖有供试线虫群体的感病番茄江蔬3号的根系表面挑取线虫卵块,置于灭菌水中在25℃的生物培养箱中孵化48h,将新鲜孵化得到的二龄幼虫配制成50条・mL -1的二龄幼虫水悬浮液。
按每株100条幼虫的接种量将各线虫群体的二龄幼虫悬浮液分别滴注于杯栽植株的根部,以感病番茄品种江蔬3号为对照,各处理重复4次。
接种后,将各植株随机排列于温室内的平台上。
于20~28℃下培育60d 后,缓慢取出植株的根系,在水中洗净后置于体视显微镜下观察记录各株根表形成的线虫卵块数。
计算各供试线虫群体在待测作物品种上形成的卵块数与在感病番茄江蔬3号上形成的卵块数的比值(即繁殖指数),并按Duncan 氏新复极差法测验各处理间的差异显著性。
以繁殖指数为标准判断各作物品种对供试线虫群体的寄主适宜性,同时观察线虫群体间是否存在致病性变异。
2 结果与分析211 形态鉴定显微观察显示,海南省儋州、琼海和澄迈3地侵染番石榴植株的9个纯化的根结线虫群体的雌虫会・65・ 南 京 农 业 大 学 学 报 第28卷阴花纹形态在群体内均呈现一定的变异性,但群体间具有高度的相似性,可能属于同一种类。
其主要特征为:整体呈卵圆形至椭圆形,线纹较平滑;背弓常较高,呈方形或近圆形;无明显侧线;阴门区一般无线纹(图1A 至图1D )。
根据这些会阴花纹特征,可大致判断9个根结线虫群体与已知种南方根结线虫(M.incognita )、花生根结线虫(M.arenaria )或象耳豆根结线虫(M.enterolobii )近似[7]。