紫外吸收法实验报告

实验9 紫外吸收法测定蛋白质含量

（一）原 理

蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基，它们的结构中具有共轭双键，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。在此波长附近，蛋白质溶液的光吸收值与其含量（范围是0.1~1.0mg/ml）成正比，因此，280nm的吸光度可用作蛋白质的定量测定。若将已知不同浓度的蛋白质标准溶液在280nm处测定，并作标准曲线，即可求得未知溶液的蛋白质浓度。此法测定迅速，用量较少，而且不消耗样品和试剂。但若样品中含有其他在280nm吸收的物质，如嘌呤嘧啶等化合物时，就有干扰作用。

（二）试剂及器材

（1）标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清白蛋白，配制成浓度为1mg/ml的溶液。

（2）待测蛋白质溶液：浓度为1mg/ml左右的蛋白质溶液。

（三）操作

1. 280nm的光吸收法

（1）标准曲线的绘制：取8支试管，编号后按下表加入试剂。

管号

试剂(ml) 1 2 3 4 5 6 7 8

标准蛋白质溶液 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0

蒸馏水 4 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0

蛋白质浓度（mg/ml） 0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.0

OD280

混匀，选用光程为1cm的石英比色杯，在紫外分光光度计280nm波长处以0号管调“零”分别测定各管溶液的光密度（OD280）。以纵坐标为光密度值，横坐标为蛋白质浓度绘出标准曲线。

（2）样品测定：取待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，混匀，按上述方法测定280nm波长处的光密度值，并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

2．280nm和260nm的吸收差法 将待测的蛋白质溶液稀释到光密度在0.2~2.0之间，在波长280nm和260nm处以相应的溶液作空白对照，分别测得待测样品的光密度值（OD280和OD260）。应用280nm和260nm的吸收差法经验公式直接计算出蛋白质浓度。

一、实验目的

1. 熟悉紫外-可见分光光度计的仪器结构和工作原理。

2. 掌握紫外-可见吸收光谱的基本概念和知识。

3. 学习利用紫外-可见分光光度计进行样品定量分析的方法。

4. 了解紫外吸收法在生物化学和材料科学中的应用。

二、实验原理

紫外-可见分光光度法（Ultraviolet-Visible Spectrophotometry，UV-Vis

Spectrophotometry）是基于物质分子对紫外光和可见光的选择性吸收而建立起来的分析方法。当分子吸收特定波长的光时，分子中的电子从基态跃迁到激发态。紫外-可见光谱分析主要用于定量和定性分析，特别是在生物化学和材料科学领域。

三、实验仪器与试剂

1. 仪器：紫外-可见分光光度计、样品池、移液器、电子天平、蒸馏水、标准溶液、待测样品等。

2. 试剂：待测样品溶液、标准溶液、无水乙醇、缓冲液等。

四、实验步骤

1. 样品准备：根据实验需求，将待测样品溶液稀释至合适浓度。

2. 标准曲线制作：

a. 准备一系列已知浓度的标准溶液。

b. 将标准溶液分别置于样品池中，用紫外-可见分光光度计在特定波长下测定吸光度。

c. 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

3. 待测样品测定：

a. 将待测样品溶液置于样品池中。

b. 在标准曲线对应的波长下，用紫外-可见分光光度计测定待测样品的吸光度。

c. 根据标准曲线，计算待测样品的浓度。 4. 数据处理与分析：

a. 记录实验数据，包括吸光度、浓度等。

b. 对实验数据进行统计分析，如计算标准偏差、相关系数等。

c. 分析实验结果，讨论紫外吸收法在待测样品分析中的应用。

五、实验结果与分析

1. 标准曲线：根据实验数据绘制标准曲线，结果显示吸光度与浓度呈线性关系，相关系数R²>0.99。

2. 待测样品测定：根据标准曲线，计算待测样品的浓度为X mg/mL。

有机化合物的紫外吸收光谱实验报告

实验目的：

1. 了解有机化合物紫外吸收光谱的基本原理以及使用方法。

2. 掌握实验操作的基本技能，正确操作分光光度计。

3. 通过实验，了解有机化合物的分子结构与紫外吸收光谱之间的关系，为分析有机分子结构提供基础。

实验原理：

有机化合物的紫外吸收光谱可以为有机分子结构的研究提供很大的帮助。在紫外光谱中，通常对于各种功能团体都存在特定的波长范围的吸收峰。通过分析有机化合物在特定波长的紫外吸收峰的大小以及形状，我们就能够推断出分子中存在的功能团体。

实验步骤：

1. 准备实验所需物品：分光光度计、苯甲酸溶液、四乙酸酯溶液、环己酮溶液等。

2. 打开分光光度计，调试好仪器，使其能夠正常工作。

3. 取一定量苯甲酸溶液，加入分光光度计比色皿中，并做好参照物质的设置。

4. 按照波长扫描模式，设定扫描范围，并进行扫描。

5. 记录下吸收峰的最大吸收波长及吸光度值，并对红外光谱进行分析解释。

6. 重复上述实验步骤，分别对于四乙酸酯溶液和环己酮溶液进行的操作。

7. 对实验结果进行分析，分别阐明各个实验组操作中存在的异同之处，并对每种化合物的分子结构和吸收峰进行解释。

实验结果分析：

通过实验，我们得到了三种不同有机化合物的紫外吸收光谱，并对各个实验组操作中存在的异同之处进行了分析。对于苯甲酸、四乙酸酯和环己酮这三种化合物，它们的特定吸收峰分别对应的波长区间如下：

1. 苯甲酸：250nm至270nm

2. 四乙酸酯：270nm至290nm

3. 环己酮： 230nm至255nm 可以看出，这三种化合物的吸收峰波长的区间是不同的，这表现出不同化合物分子结构之间的差异。我们还可以通过分析各个吸收峰的峰值和峰形，来推断出分子中存在的官能团体，这也有利于我们理解化合物分子结构和有机分子之间的结构相互关系。

江南大学实验报告

实验名称 紫外吸收光谱法测定苯的含量

一、实验目的

1、了解紫外光谱法测定苯的原理及方法。

2、了解TU-1901双光束紫外可见分光光度计的使用。

3、学习利用吸收光谱曲线进行化合物鉴定和纯度检查。

二、实验原理

许多有机化合物或其衍生物，在可见光或紫外光区有吸收光谱，各种物质分子有其特征的吸收光谱。吸收光谱的形状和物质的特性有关，可作为定型鉴定的依据，而在某选定的波长下，测量其吸收光度即可对物质进行定量分析。紫外吸收光谱用于定量分析时，符合朗伯比尔定律，即A=κbc，式中A为吸光度，κ为摩尔吸收系数，b为液层厚度。

三、仪器和试剂

1、仪器

TU-1901型紫外-可见分光光度计，1cm石英比色皿，5ml吸量管，10ml容量瓶。

2、试剂

苯（色谱纯），乙醇（AR、95%），0.1g/L苯标准溶液。

四、实验步骤

1、吸收曲线的绘制

将装有参比溶液和标准试样的比色皿放入光路中，在紫外分光光度计上，从波长200-300nm，每隔0.5nm扫描出苯的吸收曲线。指出苯的B吸收带，找出B吸收带的最大吸收波长。

2、试样中苯含量的测定

（1）苯标准曲线的绘制 分别吸取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml0.1g/l的苯标准溶液于5只10ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。用1ml石英比色皿，以乙醇做参比溶液，在最大吸收波长处分别测定其吸光度。

以吸光度为纵坐标，苯的含量为横坐标绘制标准曲线。

（2）测定乙醇试样中苯的含量 准确吸取含苯的试样5ml于10ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，用1cm石英比色皿，以乙醇做参比溶液，在最大吸收波长处测定试样溶液的吸光度，根据苯标准曲线查的相应的样品浓度。

3、结束工作

（1）实验结束，关闭紫外工作软件、电脑电源。

（2）取出吸收池，清洗晾干放入盒内保存。

（3）清理台面，填写仪器使用记录。

五、实验结果