Waters_e2695_Alliance_HPLC操作手册
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Waters_e2695_Alliance_HPLC操作⼿册
1.0Review and Approval
审核与批准Written By: ________________________________ Date: ____________________ 起草⼈⽇期
Approved By: ________________________________ Date: ____________________ 批准⼈ Department Head orDesignee ⽇期
部门负责⼈或指定⼈员Approved By:________________________________ Date: ____________________ 批准⼈ Quality Assurance ⽇期
质量保证部2.0Purpose
⽬的2.1本标准规定了的Waters e2695型液相⾊谱仪的使⽤、维护保养和校验。
3.0Scope
范围3.1本标准适⽤于位于XXXXXXXQC实验室的的使⽤、维护保养及校验。
4.0Responsibilities
职责4.1QC⼈员对系统的维护以及本规程的使⽤负责。
5.0References/Associated Documents
参考⽂件/相关⽂件5.1Waters e2695操作员指南
5.2Waters2998操作员指南
5.3Waters2489操作员指南
5.4Empower⼯作站使⽤⼿册
6.0Definitions
定义N/A
7.0Procedure
规程7.1设备
7.1.1四元泵，Waters e2695
7.1.2控温⾃动进样器
7.1.3紫外可见光检测器，Waters2489
7.1.4⼆级阵列管检测器，Waters2998
7.1.5柱温箱7.1.6溶剂脱⽓机
7.1.7装有Empower⼯作站的电脑
7.2维护
7.2.1灌装及清洗系统
7.2.1.1当真空脱⽓机第⼀次使⽤或当真空管是空的，或当改变溶剂，且当前
溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗系统7.2.1.2如果使⽤易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关机（⽐
如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在⾼⽔平（3-5ml/min）。7.2.1.3使⽤注射器灌装系统（⼲灌装）：点击仪器⾯板上“Menu/status”按
钮，选择“Direct Function”,然后点击“dry prime”选择欲灌装的通道并
逆时针⽅向旋开灌装/排放阀，将专⽤注射器插⼊灌装/排放阀⼊⼝
内，拉动注射器活塞吸⼊⼤约10毫升灌装液或直到管路中不在有⽓
泡为⽌。灌装完成后顺时针⽅向拧紧灌装/排放阀。7.2.1.4⾸次灌装系统时，使⽤⼲灌装并使⽤异丙醇、甲醇、⼄醇作为灌装溶
剂。7.2.1.5置换管路中的流动相，使⽤湿灌装：点击仪器⾯板“Menu/status”按
钮，选择“Direct Function”,然后点击“wet prime”选择欲灌装的通道。7.2.1.6如果当前管路中溶剂是有机的或⽔⽽当前流动相也为有机溶剂或为
⽔，在能互相溶解的情况下，⽤流动相作为灌装溶剂。7.2.1.7如果当前管路中溶剂是有机的或⽔⽽当前流动相也为有机溶剂或为
⽔，但不能互相溶解的情况下，使⽤异丙醇灌装系统。7.2.1.8如果管路中溶剂为有机的⽽当前流动相为缓冲盐或管路中为缓冲盐⽽
流动相为有机溶剂时，使⽤10%异丙醇、甲醇、⼄醇灌装系统。7.3优化泵的性能7.3.1总是把存放溶剂瓶的溶剂瓶架放在泵的顶部（或在相对于泵较⾼的位置）。
7.3.2当使⽤盐溶液的时候，常需要⽤⽔冲洗所有流路。这样就可以将阀门端⼝的沉
淀的盐冲洗掉。在运⾏泵之前，⽤⾄少两倍体积（30ml）的⽔冲洗真空脱⽓
机，特别是当泵关闭较长时间时或者通道中使⽤易挥发混合溶剂时。7.3.3当基线长时间不能处于稳定状态时，通常情况下应考虑溶剂进⼝过滤器是否堵
塞。当溶剂过滤器堵塞时，应将其从溶剂瓶中取出并将其放⼊30%硝酸溶液中
超声清洗30min。在将其重新装⼊溶剂瓶之前，必须⽤MillQ⽔对其进⾏彻底
的清洗。长期处于⽔或缓冲液中的过滤器常因为溶剂中藻类等微⽣物的⽣长，
造成过滤器的堵塞。因此建议在使⽤完此类流动相后，⽤50%⼄腈清洗溶剂过
滤器。7.3.4当使⽤缓冲溶液时，在关闭系统前必须将通道中的溶剂置换成50%⼄腈，以防
⽌藻类等微⽣物的⽣长。7.4使⽤Empower⾊谱⼯作站
7.4.1双击电脑桌⾯上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗⼝。输⼊
⽤户名与密码，点击“OK”进⼊Empower⼯作站。
7.4.1.1输⼊正确的⽤户名与密码后，点击“Advanced”，在出现的对话框中选择
你需要的⽤户类型和操作界⾯。可选的⽤户类型和操作界⾯取决于你的⽤
户权限。下⾯以“QuickStart Interface”界⾯为操作界⾯制定本SOP。
7.4.2在出现的对话框中的左侧选择需要的“Project”；在右侧选择需要的系统，点
击“OK”。“”
7.4.3创建分析⽅法
7.4.3.1创建仪器⽅法：在出现的操作视窗中点击“Instrument”进⼊仪器⽅
法设置窗⼝。
7.4.3.1.1设置输液系统参数：点击“W2690/5”图标进⼊输液系统
设置，根据需要设置相关参数。如在“General”中设置“Stroke Volume”为“100ul（flow rate ＜＝
10.000ml/min”表⽰泵每分钟的最⼤泵液量为10.000ml。
需要注意的是，分析⽅法中需要的流速“Total Flow”必
须⼩于设置的“Stroke Volume”，在“Need wash time”
对应的下拉菜单中选择“Double”表⽰采⽤相对于仪器默
认洗针体积的双倍来清洗⾃动进样针；在“Flow”选项下
设置仪器的最⾼压⼒（通常选择默认的4000psi），最低
压⼒，洗脱模式-等度（Isocratic）或梯度（Gra dient）,流
速“Total Flow”，通道以及各通道内的溶剂的⽐例(如100.0%A表⽰使⽤A通道，A通道的溶剂⽐例占总流量的
100.0%)；在“Temperature”中设置柱温箱温度及⾃动进
样器温度（如适⽤）；在“Solvents”选项下的各通道内
备注各通道内溶剂的组成（必须和流动相标签保持⼀
致），其他选项如⽆特殊规定使⽤默认值。7.4.3.1.2设置检测器参数，根据7.4.2选择的系统，将出现不同的
检测器图标。7.4.3.1.2.1系统选择为“2695-2998”将出现
“W2998”的图标，点击“W2998”图标出现W2998检测器的设置窗⼝。根据需要
设置相关参数。如在窗⼝中的“General”
选项中勾选“Lamp On”(若为关机⽅法则
不勾选，检测器将会将氘灯关闭但不断开
电源)，勾选“Enable 3D Date”（三维数
据采集，如不需要可以不勾选），在波长
范围中输⼊起始和截⽌波长（如210nm to400nm表⽰检测器将从210nm波长开始对
样品进⾏扫描直到400nm波长为⽌），选
择分辨率“Resolution”（通常选择最⼩的1.2nm，其将会获得较为全⾯的扫描信
息）；在“2D Channels”选项中选择信息
采集通道如“Channel 1 or 2 and other”、
数据模式“Date Mode”如吸光度“Absorbance”、波长、分辨率如1.2nm；在其他选项中如⽆特殊规定选择默认值。
7.4.3.1.2.2系统选择为“2695-2489”将出现
“W2489”的图标，点击“W2489”图标出现W22489检测器的设置窗⼝。根据需
要设置相关参数。如在窗⼝中的“ChannelA”选项中勾选“Lamp On”(若为关机⽅
法则不勾选，检测器将会将氘灯关闭但不
断开电源)，在波长“Wavelength”中输⼊
需要的波长，选择数据模式“Date Mode”
如吸光度“Absorbance”，在采样速率“Sampling Rate”下拉菜单中选择速率，
通常情况下选择2，勾选在进样开始前归
零选项“Auto Zero On Inject Start”；在其他选项中如⽆特殊规定选择默认值。
7.4.3.1.2.1保存⽅法：点击“保存”在出现的对话
框中输⼊仪器⽅法名称。再点击“保存⽅
法组”，在出现的对话框中输⼊⽅法组
名称。7.4.4平衡⾊谱系统：7.4.4.1在操作视窗中点击平衡系统快捷按钮“”在出现的的对话框中
选择建⽴好的仪器分析⽅法，点击“Equilibrate/Monitor”开始系统平衡。
7.4.5数据采集：
7.4.5.1输⼊样品信息：点击“Sample Queue”，在视窗中点击“Samples”，输⼊
进样位置“Vial”、进样量“Inj vol (ul)”、进样次数“#ofInjs”、样品名称“Sample Name”、运⾏时间“Run time”，选择下拉菜单中的样品分析⽅
法“Method Set/Report Method ”，其他选项⼀般情况下设置为默认。
7.4.5.2保存样品信息：点击“保存样品表”，并在出现的对话框中输⼊样品表名
称。7.4.5.3运⾏样品：在确保系统基线稳定后，点击运⾏样品组“”快捷按钮。
7.4.5.4插⼊样品：在样品表运⾏过程中，如有需要添加的样品可以点击菜单栏中
的编辑选项“Edit”，在出现的下拉菜单中选择插⼊正在运⾏的样品“AlterRunning Sample”，在操作窗⼝中输⼊样品信息，输⼊完成后，再次保存样
品表。并再次点击运⾏样品组“”快捷按钮。7.4.6数据处理：
7.4.6.1选择数据：在样品运⾏完成后，点击浏览项⽬“Browse Project”，在随后
出现的操作窗⼝中，选择通道“Channels”，在通道选项下的操作窗⼝内找
到欲处理的数据。单击右键，选择查看“Review”。
7.4.6.2建⽴数据处理⽅法：
7.4.6.2.1三维数据：点击菜单栏中的处理“Process”在出现的下拉
菜单中选择提取⾊谱图“Extract Chromatogram”命令，并
设定处理波长。7.4.6.2.2⼆维数据：直接跳过7.4.6.2.1⼩节。
