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第21卷第2期分析测试学报VoI.21No.22002年3月FENXI CESHI XUEBAO(JournaI of InstrumentaI AnaIysis)Mar.2002喜树叶中喜树碱含量的高效液相色谱分析阎秀峰，王洋，于涛，张玉红，殷丽君（东北林业大学森林植物生态学开放研究实验室，黑龙江哈尔滨150040）摘要：建立了一种简便、快速、准确的喜树叶片中喜树碱含量的高效液相色谱分析方法；采用英国HPLC TechnoIogy公司的Techsphere ODS柱（25cm X4.6mm ID，5!m），流动相乙腈-水（体积比416），流速1.0 mL·min-1，检测波长254nm，柱温25C，进样量10!L；样品制备方法以61!（!）乙醇为溶剂，50C下超声提取喜树叶粉10min；HPLC法测定喜树碱的含量；该法的RSD为2.5!（I=6），平均回收率为96!。
关键词：高效液相色谱法；喜树；叶片；喜树碱中图分类号：@946.88；@949.761.8文献标识码：A文章编号：1004-4957(2002)02-0015-03喜树碱（camptothecin，CPT）是我国特有树种喜树（Camptotheca acumiIata Decne.，珙桐科）中所含的一种生物碱[1]，具有显著的抗肿瘤活性，其抗癌机理独特，是迄今为止发现的唯一专门通过抑制拓扑异构酶"发挥细胞毒性的天然植物活性成分[2]，目前已有TPT、CPT-11等喜树碱类药物（喜树碱衍生物）获得美国FDA批准用于临床治疗癌症。
喜树中的喜树碱含量很低，一般仅为0.01!~0.1!，很多研究工作集中在探求高喜树碱含量的喜树原料上[3,4]，但对喜树碱含量的测定方法尤其是供试样品的制备方法则很少深入探讨。
已有的喜树碱含量测定方法中均以甲醇或乙醇浸提数次的方法来提取喜树碱[3~5]，提取时间长，且不易提取完全。
本文系统地探讨了高效液相色谱法测定喜树叶中喜树碱含量的样品制备方法，提出了将原料保存于提取液体系中一次超声提取以获得待分析样品的技术路线，建立了一种简单、快速、可靠的喜树碱含量分析方法。
喜树碱在喜树体内分布及在有害生物防治上的应用吴海霞;洪仁辉;苟志辉;陈国德;吴挺佳;黄丹慜【摘要】喜树碱为重要的抗癌药物和植物源杀虫剂,主要存在于珙桐科的喜树植株体内.该文从季节性、植株组织、产地、栽培密度及环境胁迫等方面分析影响喜树碱在喜树植株中的分布情况,并对其作为杀虫剂和杀菌剂的使用情况进行了综合阐述.【期刊名称】《热带林业》【年(卷),期】2014(042)004【总页数】4页(P39-42)【关键词】喜树碱;喜树;分布;植物源杀虫剂【作者】吴海霞;洪仁辉;苟志辉;陈国德;吴挺佳;黄丹慜【作者单位】海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山572200;海南省林业科学研究所,海南海口571100;海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山572200;海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山572200;海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山572200;海南省林业科学研究所通什分所,海南五指山572200【正文语种】中文【中图分类】S476喜树碱（camptothecin，喜树碱）为一种吡咯喹啉生物碱，是从山茱萸目（Cornales）珙桐科（Nyssacea）喜树（Camptotheca acuminata Decaisne）的嫩叶、果实、树皮和根中提取得到的次生活性物质，是美国化学家Wall Me和Wani MC在1966年分离提取出一种生物碱[1]。
由于喜树碱在医学和害虫防治上的巨大作用，科研工作者已经开始喜树碱的大量提取和合成工作，该文将在查阅相关文献的基础上，对喜树植株中喜树碱的分布情况及其在害虫防治上的应用进行综述，以期为喜树碱的大量获取和应用提供参考。
喜树的植株器官中均含有喜树碱，且各器官中喜树碱的含量差异较大。
不同学者的对此研究的结果也不一致，这可能与于采样的时间、部位、环境条件以及分析方法不同有关，现综述如下。
1.1 喜树碱在植株中的季节性变化张显强等（2004）研究结果表明，喜树植株中各部位的喜树碱含量在不同月份会产生变化。
植物学通报 2005, 22 (5): 584￣589①陕西省教育厅产业化培育项目(03JC39)和西北大学科研基金项目(02NW10)资助。
②通讯作者。
Author for correspondence. E-mail: lwenzhe@ 收稿日期: 2004-12-19 接受日期: 2005-02-28 责任编辑: 于昕不同种源喜树幼枝中喜树碱的含量①王玲丽 刘文哲②(西北大学生命科学学院 西安 710069)摘要 通过HPLC 测定了喜树(Camptotheca acuminata )不同器官及不同种源幼枝中喜树碱的含量。
结果表明, 喜树碱含量在叶、种子和幼枝(幼叶和幼茎)中较高, 木质部中较少, 髓中最低。
不同种源的幼枝中, 来自成都种源喜树的喜树碱含量最高。
通过比较, 两年生喜树各器官中喜树碱含量普遍比一年生高, 幼枝中顶枝的喜树碱含量比侧枝高。
关键词 喜树, 喜树碱, 幼枝, 种源Contents of Camptothecin in Camptotheca acuminatafrom Different ProvenancesWANG Ling-Li LIU Wen-Zhe ②(College of Life Science, Northwest University, Xi’an 710069 )Abstract Camptothecin (CPT) content in organs of Camptotheca acuminata and young shoots from different areas of China was determined by HPLC. CPT content in leaves, seeds and young shoots was higher than that in xylem, lowest in piths and highest in young shoots from Sichuan province. CPT content in young biennial shoots was higher than that in annual shoots and that in caulody was higher than that in subbranches.Key words Camptotheca acuminata , Camptothecin, Young shoot , Provenance喜树(Camptotheca acuminata ), 为珙桐科(Nyssaceae)喜树属多年生亚热带落叶阔叶乔木, 是我国特有树种, 主要分布在长江流域及西南各省(中国科学院中国植物志编辑委员会,1983)。
紫外分光光度法测定原料药喜树碱含量分析李家敏;周秀玲;王金华;张兵锋【摘要】由于喜树碱内酯环开环后在254 nm波长下紫外吸收增强,而开环的喜树碱毒副作用大.鉴于目前喜树碱含量测定均采用254 nm,且喜树碱在大多数溶剂中溶解性较差,为更准确便捷地检测喜树碱原料药的含量,有必要探索在新的波长下测定喜树碱含量的方法.将喜树碱在200～400 nm扫描,发现在367 nm处有较大吸收,且溶剂二甲基亚砜无干扰.因此采用367 nm波长下测定喜树碱含量,并进行含量测定方法学考察.喜树碱的标准曲线方程为y=0.0423x+0.0132,r=0.9996,浓度在4～20μg/mL与其吸光度呈现良好的线性关系.平均加样回收率为101.76％,RSD 为0.75％,结果重现性良好,符合方法学要求.在367 nm波长下测定喜树碱含量,所受干扰较小,测定结果可信度高.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2018(057)021【总页数】3页(P109-111)【关键词】喜树碱;紫外分光光度法;二甲基亚砜【作者】李家敏;周秀玲;王金华;张兵锋【作者单位】宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春 336000;宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春 336000;宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春 336000;宜春学院化学与生物工程学院,江西宜春 336000【正文语种】中文【中图分类】O657.32喜树碱（Camptothecin，CPT）是一种抗癌植物药，是含有喹啉环的生物碱。
其最早是在1966年，由美国化学家从喜树中分离提取而得到纯度较高的喜树碱单体［1］。
喜树碱具有广谱的抗癌功效、一定的免疫抑制作用以及抗病毒疗效［2］。
喜树碱主要是作用于I型拓扑异构酶，通过抑制DNA代谢过程，发挥抗肿瘤活性［3，4］。
喜树碱的水溶性较差，在临床上应用有一定的限制。
当前采用紫外分光光度法测定喜树碱原料药的含量时，一般采用254 nm波长。
HPLC法测定复方喜树碱贴膏中喜树碱的含量刘伟林【摘要】本文利用反相高效液相色谱仪(RP- HPLC)建立了测定复方喜树碱贴膏中喜树碱含量方法.Inertsil ODS -3 C18色谱柱(250mm ×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-10％四氢呋喃(48∶ 52),紫外检测波长254nm,理论板数(以喜树碱计)3000.实验结果:喜树碱在0.03987～0.319μg范围内线性关系良好,r=1.0000,回收率97.8％.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2012(021)002【总页数】2页(P32-33)【关键词】复方喜树碱贴膏;喜树碱;高效液相色谱法【作者】刘伟林【作者单位】广西壮族自治区食品药品检验所,广西南宁530021【正文语种】中文【中图分类】R284.1喜树碱 (Camptothecine)为具抗肿瘤活性，为植物喜树的果实中提取的生物碱，其注射液作为抗恶性肿瘤药已在临床上应用。
复方喜树碱贴膏为喜树碱、山苍子油、冰片等的复方橡胶制剂，为角质促成剂，减少局部皮肤角质增生，主要用于斑块状，寻常型银屑病。
其主要有效成分为喜树碱，具有抗肿瘤活性，故对其进行含量测定是产品质量控制的关键。
该制剂原含量测定方法为紫外导数光谱法，是测定共轭体系的吸收光谱，而复方喜树碱贴膏除含喜树碱外，还共存有10-羟基喜树碱 (10-hgdroxg Camptothecine)、10-甲氧基喜树碱 (10-methoxy Camptothecine)等同系物，因此其测定受到干扰。
现采用HPLC法，将喜树碱与其他干扰成分分离，结果满意。
我们采用高效液相色谱法，对喜树碱进行含量测定方法研究，经方法学考察，其准确性、精密度、重现性均较好，可用于产品的质量控制。
1 仪器与试药仪器①Waters高效液相色谱仪 (1、600E泵，2487紫外检测器，717自动进样器;2、515泵×2，996二极管阵列检测器，717自动进样器)，Millennium32色谱工作站，Inertsil ODS-3 C18色谱柱，4.6×250mm，5μm; ② SartoriusBP211D电子天平。
不同时间采摘的喜树嫩叶中喜树碱含量的HPLC 分析李红英,向极钎,曾凡忠,黄建民 (湖北省恩施州农业科学院植物园艺研究所,湖北恩施445000)摘要 [目的]探讨喜树碱含量最高的喜树叶片的最佳采摘时间。
[方法]采用高效液相色谱法研究同一地区不同时间采摘的喜树嫩叶中的喜树碱含量差别。
[结果]高效液相色谱的条件为:Krom asil C18柱(250m m ×4.6mm ,5μm ),流动相为:甲醇∶水=6∶4(体积比),流速1.0m l /min ,检测波长为254n m ,柱温为室温,进样量20μl 。
样品制备条件:以甲醇为溶剂,60℃下超声提取1h 。
高效液相色谱法测定喜树嫩叶中喜树碱最高含量为3.25‰。
喜树嫩叶在4月中旬到4月末这段时间,喜树碱的含量是最高的,它比喜树果和喜树成叶都高,因此喜树嫩叶可作为喜树碱的生产原料。
[结论]该研究为喜树碱的工业化生产奠定了基础。
关键词 喜树;喜树嫩叶;喜树碱;高效液相色谱法中图分类号 S 794.9 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2009)13-05825-01A na lysis on the C ontents of C a m ptothecin in Y oung Camp totheca acu mina te Lea ves Picked in Different D ates by H PLC LI Hong -ying et al (Institute of Plant H orticulture ,Ens hi Acade my of Agricultural Sciences in H ubei Province ,E nshi ,Hubei 445000)A bstract [Objecti ve ]Th e ai m was to discuss the opti mu m p ick time of Ca m ptot heca acu minat e leaves with highest camptothecin con ten t .[Method ]The difference of cam ptot hecin content from you ng leaves of C .acu min ate picked in different ti me at the s ame area was studied by HPLC .[Res ult ]The HPLC con dition s were as follows :Kromasil C18colu mn (250m m ×4.6m m ,5μm ),mobile phase was m ethan ol water =6∶4(volu me ratio ),flow rate was 1.0ml /min ,d etermining wavelengt h was 254n m ,colum n tem perature was room tem perature an d injection volu me was 20μl .The sa mple preparation con -d itions were as follo ws :m eth an ol was taken as solvent an d ultrasonic extractionwas taken for 1h at 60℃.The highest content of cam ptoth ecin from youn g leaves of C .acum inate was 3.25‰,whic h was determ in ed by H PL C .The cam ptothecin content of youn g leaves of C .a cum inate was highest from the m id April to the en d of April ,which was higher than t hat from th e fruit and mature leaves of C .acu minate .So young leaves of C .acu min ate could be taken as materials for cam ptot hecin production .[Conclusion ]The research laid the foundation for the indus trial production of cam ptoth ecin .Key w ords Ca m ptot heca a cumin ate ;Tender leaves of C .acu min ate ;Camptothecin ;H PLC基金项目 恩施州农业科学院资助项目。
作者简介 李红英(1982-),女,湖北利川人,助理工程师,从事植物提取研究。
收稿日期 2009-02-16 喜树(C amptothec a acu minata )属珙桐科(N yssac eae )多年生落叶乔木,是我国特有树种[1]。
喜树碱是喜树中所含的吲哚生物碱[2],具有显著的抗癌活性,抗癌机理独特,是迄今为止发现唯一专门通过抑制拓扑异构酶I 发挥细胞毒性的天然植物活性成分[3]。
据报道福建地区所产喜树果中喜树碱的含量比其他省的(1.00‰～1.30‰)均高,为1.69‰[4]。
有报道已对喜树的成叶和嫩叶中喜树碱含量做了对比试验[5],结果是嫩叶中喜树碱含量显著高于成叶的,而且最佳的是广西产喜树嫩叶的含量(1.69‰)。
笔者主要研究了同一地区不同采摘时间对喜树碱含量的影响,探索最佳采摘时间,为大量生产提供了可靠依据。
1 材料与方法1.1 仪器与试剂 SY -8100高压输液泵;SY -8200紫外分光检测器;HT -220色谱柱恒温箱;Ve rsion 5.12色谱工作站;喜树碱标准品,由上海龙翔生物公司提供,纯度98.8%;喜树嫩叶样品采集自湖北省恩施州建始县。
1.2 试验方法1.2.1 色谱条件。
Kr omasil C18柱(250mm ×4.6mm ,5μm ),流动相:甲醇∶水=60∶40(体积比),流速1.0ml /min ,检测波长254n m ,柱温:室温,进样量20μl 。
1.2.2 标准溶液的制备。
精密称取喜树碱标准品10.0mg 于100ml 容量瓶中,以甲醇(色谱纯)为溶剂超声溶解并定容至刻度,摇匀备用。
临用时取5ml 备用液于50ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即可。
1.2.3 样品溶液的制备。
精密称取喜树嫩叶粉末(过60目筛)1g 于100ml 容量瓶中,加入80ml 甲醇(分析纯),60℃下超声提取1h ,冷至室温,加甲醇稀释至刻度,摇匀,用针头式过滤膜过滤提取液,取过滤液20μl 进样。
1.2.4 干燥方法。
采集一定数量的喜树嫩叶,于60℃的恒温干燥箱中干燥至恒重即可。
2 结果与分析2.1 流动相的选择 分别以不同比例的甲醇-水为流动相,分析表明流动相甲醇-水体系在体积比为5∶5～7∶3时喜树碱的保留时间为3.90～7.59min ,峰形良好且可保证提取样品的喜树碱与相邻组分良好分离,理论塔板数按喜树碱峰计算不低于4000,喜树碱峰与相邻峰的分离度大于1.5。
为了提高分离速度,该试验选择了体积比6∶4的甲醇-水作为流动相。
得出的喜树碱标样和喜树嫩叶的图谱如图1、2所示。
图1 喜树碱标样Fig .1 The s ta nda rd sa mple o f cam pto theci n2.2 不同采摘时间对嫩叶中喜树碱含量的影响 采用上述分析方法对采自同一地区不同时间的喜树嫩叶进行了喜树碱含量分析,结果表明:3月28日采的喜树碱含量为0.63‰,4月1日的为0.91‰,4月15日的为3.25‰,4月30日的为2.09‰,5月15日的为0.70‰,5月30日的为0.67‰,6月15日的为0.61‰,6月30日的为0.58‰;喜树果的含量为0.41‰。
传统喜树碱生产均以喜树果为原料,从上述测定结果可以看出,喜树嫩叶在4月中旬到4月末这段时间,喜树碱的含量最高,且与以往的报道不同,它比喜树果和喜树成叶(下转第5827页)安徽农业科学,Journal of An hu i Agri .Sci .2009,37(13):5825,5827 责任编辑 罗芸 责任校对 卢瑶供试液的1、2、6号峰对应,说明有3个热淋清颗粒的原型成分吸收入血,其中一个为槲皮素;而热淋清颗粒含药血浆和图1 空白血浆样品色谱图Fi g .1 H PL C chroma tog ram o f bla nk plasma图2 热淋清颗粒含药血浆样品色谱图Fi g .2 H PLC chroma to g ra m o f plas ma sa mples with Relin qing granule图3 热淋清颗粒样品色谱图Fig .3 HPLC c hro ma to gra m o f Reli nqing granule图4 对照品色谱图Fig .4 HPLC ch ro ma to gra m o f reference su bs ta nce空白血浆在色谱图上未出现没食子酸与槲皮苷峰,说明热淋清颗粒中的没食子酸与槲皮苷没有被吸收入血,或者被代谢成其他成分。
而在图3中的3、4、5号峰是热淋清颗粒含药血浆的特有峰,可能是热淋清颗粒在大鼠体内的代谢产物。
分别采用30%乙醇、80%乙醇、30%甲醇、80%甲醇、乙醇和甲醇提取制备热淋清颗粒供试液。
通过比较发现,其中80%甲醇提取效果较为理想。
因此,采用80%甲醇提取法制备热淋清颗粒供试液。
同时,对供试液的稳定性、仪器的精密度和测定方法的重现性进行了考察,均符合相关要求。
3 结论与讨论试验中分别采用甲醇沉淀法、乙腈沉淀法对血浆样品进行处理,从对待测组分的影响、干扰情况及对色谱分析条件的影响等方面进行考虑,确定采用乙腈沉淀法处理血浆样品。
目前,主要通过测定槲皮素或没食子酸的含量来评价热淋清制剂及其原料头花蓼药材的质量[1-2]。
但笔者的试验结果表明,由单味药材头花蓼提取制成的单方制剂热淋清颗粒的含药血浆中发现了6个入血成分,说明控制药材及其制剂的质量仅测定个别指标的做法有待商榷。
参考文献[1]龙凤荣,孙敏.HPLC 测定热淋清胶囊中槲皮素的含量[J ].中成药,2007,29(4):613-615.[2]王祥培,万德光,王强,等.HPLC 测定不同产地的头花蓼中没食子酸的含量[J ].华西药学杂志,2007,22(2):204-205.[3]王喜军.中药血清药物化学的研究动态及发展趋势[J ].中国中药杂志,2006,31(10):789-792,835.(上接第5825页)图2 喜树嫩叶图谱Fig .2 T he atlas of tender lea ves o f C amp totheca acumi nata都高,因此,喜树嫩叶亦可作为喜树碱的生产原料,可为喜树碱的工业化生产提供丰富的资源。
