枸橼酸钠抗凝牛血

常用抗凝剂的配制及用法 Prepared on 22 November 2020在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。

对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。

一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。

（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液计)。

但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。

一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。

也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。

在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5～3．0mg/200～300g体质量，兔10mg ／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。

肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。

市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。

二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。

此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。

（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg，草酸钾0．8mg)。

根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。

如取0．5ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。

（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。

用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。

采血管中4种血液抗凝剂抗凝管是为防止血液凝固，经过抗凝剂处理过的试管，用于医疗，生物实验等方面。

医院用于抽血检查的抗凝管，不同颜色代表不同的用途，并含有不同的抗凝剂，但其中的抗凝原理你都知道吗?常规使用的抗凝管中的抗凝剂有四大类分别1.肝素肝素存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是动物体内一种天然抗凝血物质。

天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。

它是一种含硫酸基团的黏多糖，是分散物质。

肝素可加强抗凝血酶III(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。

随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。

2.乙二胺四乙酸乙二胺四乙酸、别称：（EDTA）。

乙二胺四乙酸有二钠、二钾和三钾盐，常温常压下为白色粉末。

均可与钙离子结合成螯合物，从而阻止血液凝固。

对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果。

其他抗凝剂不适合于血细胞计数。

3.柠檬酸钠：柠檬酸钠亦称（枸橼酸钠）可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。

柠檬酸钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性降低，故常用于凝血类的检查，也用于红细胞沉降率的测定。

同时柠檬酸钠是最重要的柠檬酸盐，主要由淀粉类物质经发酵生成柠檬酸，再跟碱类物质中和而产生，具有多种独特的优良性能。

由于制备柠檬酸钠的原料基本来源于粮食，因而绝对安全可靠，对人类健康不会产生危害。

联合国粮农与世界卫生组织对其每日摄入量不作任何限制，可认为该品属于无毒品。

4.草酸钾：草酸盐（草酸钾或草酸钠）抗凝的原理主要是和血液中的钙离子形成草酸钙沉淀，使其无凝血功能。

容易跟枸橼酸盐和EDTA同钙离子形成可溶性螯合物混淆。

草酸钾常用于检验用血液样品的抗凝。

在试管内加饱和草酸钾溶液2滴，轻轻敲击试管，使溶液分散到管壁四周，置80℃以下的烘箱中烤干，每管能使3~5ml血液不凝。

供钾、钙含量测定的血样不能用草酸钾抗凝。

大多数抗凝剂原理都是由于凝血过程中有一个凝血因子叫钙离子，它是参与凝血过程中的必须因子，这些抗凝剂原材料可以和它结合（夺走）就抑制了凝血过程。

综述——常用抗凝剂对临床检测结果的影响严俊当前在临床上抗凝剂的应用范围越来越广同时常用抗凝剂的选择和使用对临床检测有不同程度的影响。

包括对标本、仪器等的影响。

正确及合理的选择和使用抗凝剂已成为确保临床检测结果准确的重要前提抗凝剂的种类较多，如选择不当，会影响检验结果的准确性。

下面介绍几种生化检验常用的抗凝剂及其用途：（1）草酸钾：常用于尿素、肌酐、纤维蛋白原等测定，不能用钾、钙等测定，对LDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉酶有抑制作用。

（2）肝素：常用于电解质、血气分析、血氨等测定。

抗凝剂比例为50～61u肝素/5ml血。

注意钠盐可使淀粉酶升高。

（3）氟化钠：常用氟化钠—草酸钠混合抗凝剂作血糖测定的抗凝剂，氟化钠可以抑止烯醇化酶，它可避免血细胞葡萄糖酵解酶的作用，延长标本的保存时间。

（4）二乙胺四乙酸钠盐（EDTA-Na2）：生化常用的抗凝剂，但不能用于钙、钠、及含氮物质的测定，对淀粉酶、肌酸激酶、AKP、ALP、5’-核苷酸酶等可抑制，对丙酮酸激酶有明显升高的作用。

（5）枸橼酸钠，测定血沉用3.8%枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例为1：4，凝血试验需用3.2%枸橼酸钠抗凝，比例为1：9。

（6）实验室使用抗凝剂种类较多，血细胞分析及红细胞比积测定宜用EDTA·K2抗凝，保证室温下6小时RBC体积不变，抗凝剂比例为1.0～2.0mg/1ml血。

在使用全血细胞计数仪时，抗凝剂的选择对血小板和白细胞计数及分类影响很大。

本文就两种乙二胺四乙酸盐（EDTA）、肝素及草酸盐四种抗凝剂对全血细胞计数的影响进行了初探，现将实验结果报告分析如下。

四种抗凝剂对全血细胞分析结果影响的比较注：△淋巴细胞绝对计数值与对照组比较，*P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.005根据ICSH推荐，全血细胞分析仪采用EDTA-K2作为抗凝剂，但价格较贵。

实验结果（1）EDTA-Na2对细胞计数几乎没有影响，与EDTA-K2结果比较，七项结果P＞0.05，表明：并且试剂容易购到。

实验室常用血液抗凝剂的特点及应用在实验室检验中，有许多检测项目的血液标本是需要抗凝才可以检测的。

而抗凝剂种类较多，实际应用中要根据不同的需要进行选择，才能获得理想的效果。

实验室中常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸盐（EDTA盐）、枸橼酸盐、草酸盐等4种，现将它们的特点及应用分别叙述如下：一、肝素抗凝是用于血液化学成分检测的首选抗凝剂。

肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖，是分散相物质平均分子质量为15000。

其抗凝原理主要是通过与抗凝血酶Ⅲ结合引起抗凝血酶Ⅲ构型发生变化，加速凝血酶-凝血酶复合体形成而产生抗凝作用。

此外，肝素还能借助血浆辅助因子（肝素辅助因子Ⅱ）来抑制凝血酶。

常用肝素抗凝剂是肝素的钠、钾、锂、铵盐，其中以肝素锂最好，但其价格较贵，钠、钾盐会增加血液中的钠、钾含量，铵盐会增加尿素氮的含量。

通常用肝素抗凝的剂量为10.0～12.5 IU/ml血液。

肝素对血液成分干扰较少，不影响红细胞体积，不引起溶血，适用于做红细胞渗透性试验、血气、血浆渗透量、红细胞压积及普通生化测定。

但肝素具有抗凝血酶作用，不适合做血凝试验。

另外，肝素过量可引起白细胞聚集和血小板减少，所以不适合做白细胞分类和血小板计数，更不能用于止血检验。

此外，肝素抗凝血不能用于制作血涂片，因为Wright染色后出现深蓝色背景，影响显微镜减产。

肝素抗凝血应于短时间内使用，否则放置过久血液又可凝固。

二、乙二胺四乙酸盐(EDTA盐)EDTA能与血液中Ca2+结合成螯合物，凝血过程被阻断，血液不能发生凝固。

EDTA盐有钾、钠、锂盐，国际血液学标准化委员会推荐使用的是EDTA-K2，其溶解度最高，抗凝速度最快。

EDTA盐通常配成质量分数是15%的水溶液，每ml血液加1.2mgEDTA,即每5ml血液加0.04ml 15%EDTA溶液。

EDTA盐可在100℃下干燥，抗凝作用不变。

此抗凝剂不影响白细胞计数及大小，对红细胞形态影响最小，并且可以抑制血小板的聚集，适用于一般血液学检测。

常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。

对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。

一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时，常用它作动物全身抗凝剂,肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。

注意事项:做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！（2)配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液（按lmg等于125U，10～20U能抗1 ml血液计).但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。

一般可配成1％肝素生理盐溶液，用时取0．1毫升于试管内,100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。

也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。

在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2．5~3．0mg/200～300g体质量，兔10mg／kg体质量，狗5～10mg／kg体质量。

肝素可改变蛋白质等电点,因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时,不可采用肝素。

市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。

二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大,而草酸钾能使血细胞微缩小,因此草酸铵与草酸钾按3:2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。

此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。

（2）配制方法及用量草酸铵1．2g、草酸钾0．8g、福尔马林1．0ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂0．1ml(即相当草酸铵1．2mg,草酸钾0．8mg）。

根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。

如取0．5ml于试管,烘干后每管可使5ml血不凝固.（3)注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的.用时注意加的量应适中，不能过多,以免妨碍去蛋白质血滤液的制取.不适用于血液内钙或钾的测定,也不能用于血液非蛋白氮测定。

常用抗凝剂阻止血液凝固的原理抗凝----应用化学或物理学的方法，抑制或除去血液中的某些凝血因子以阻止血液凝固的方法。

抗凝剂----能阻止血液凝固的化学试剂。

一、枸橼酸钠【原理】枸橼酸钠（柠檬酸钠）是枸橼酸钠的三钠盐。

它能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。

【应用范围】血沉、凝血象、血小板功能检查及血液保养液。

【用量】凝血象: 109mmol/L水溶液,与血液之比为1:9；血沉: 106mmol/L水溶液,与血液之比为1:4。

二、乙二胺四乙酸盐【原理】乙二胺四乙酸（EDTA）盐可与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。

【应用范围】一般血液学检查和血液粘度测定。

不适于凝血象及血小板功能检查。

【用量】其有效抗凝浓度为1～2mg/ml血液。

血细胞分析仪用EDTA-K2作抗凝剂，用量为EDTA-K2•2H2O 1.5～2.2mg/ml血液。

三、肝素【原理】通过与抗凝血酶Ⅲ结合，增强抗凝血酶的作用，灭活丝氨酸蛋白酶，从而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集，阻止血液凝固。

【应用范围】血细胞比容测定、血液粘度测定和多种生化分析。

【用量】通常用肝素的钠盐或钾盐粉剂配成1g/L肝素水溶液。

取0.5ml置小瓶中，37～50℃烘干后，能抗凝5ml血液。

四、草酸盐草酸盐也是常用的抗凝剂，优点是溶解度大，作用原理是溶解后解离的草酸根与标本中的Ca2+形成草酸钙沉淀，使Ca2+失去凝血功能，凝血过程被阻断。

血液采集中用何种抗凝剂1、乙二胺四乙酸（EDTA）EDTA有二钠、二钾和三钾盐。

均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液Na2C10H14O8N2+CA2+CAC10H12O8N2+2NA++2H+ EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。

EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（International committee standard of hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为EDTA-K2。