[2015]-[药物分析]-[0]-离子色谱法检测三磷酸胞苷二钠注射液含量及有关物质

表1 Tab． 1
时间 （ time） / min 0 1 6． 5 10 13 16 16． 01 20
症、 脑出血后遗症 、 植物 神 经 紊 乱 、 神经官能症以 及 心 功 能 不 全、 进 行 性 心 肌 萎 缩、 肝炎等疾病的 辅助治疗 。 CTP － Na 2 注 射 液 国 家 标 准 的 含 量 测 定 方 法 为纸电 泳 法
、 紫外 － 可见分光光度法
［7］
Hale Waihona Puke 和重量比KOH 浓度（ KOH concentration） / （ mmol · L － 1） 10 10 48 48 80 80 10 10
［8 － 11］
但未同 等对 CTP 进 行 定 量 的 文 献 报 道 ， 采用离子对 试 剂 的 方 法 利 用 HPLC － UV

2． 2 2． 2． 1
溶液制备
CDP － 对照品溶液 精密称取 CTP － Na2 、 Na2 、 CMP － Na2 的对照品适量， 分别用超纯水制成每
1． 0 mL 中约含 2． 0 mg 的溶液， 摇匀， 即得。 2． 2． 2 含量测定用溶液 取样品适量， 加超纯水定 量稀 释 成 每 1 mL 中 约 含 1． 0 mg 的 溶 液， 摇 匀，
mm × 250 mm） 色谱柱， · min － 1 ， 以氢氧化钾为淋洗液， 采用梯度洗脱， 流速为 1． 0 mL 进样量 10 μL， 以带 DIONEX AEＲS 500 4 － mm 抑制器的电导检测器进行检测， 三磷酸胞苷二钠注射液的含量按峰面积以外标法计算， 主要降解杂质（ 二磷酸胞苷二 · mL － 1 范围内线 钠、 单磷酸胞苷二钠） 按加校正因子的主成分自身对照法计算 。结果： 三磷酸胞苷二钠在 0． 000 164 ～ 1． 60 mg n = 6 ） ； 平均加样回收率（ n = 9 ） 为 100． 1% ； 三磷酸胞苷二钠对照品溶液在 24 h 内的稳定性良好 性关系良好（ r = 0． 999 8 ， （ ＲSD = 1． 3% ） ； 三磷酸胞苷二钠（ CTP － Na2 ） 及主要降解杂质二磷酸胞苷二钠（ CDP － Na2 ） 、 单磷酸胞苷二钠（ CMP － Na2 ） 的 4． 57 、 6． 0 ng， 1． 48 、 1． 88 ng。结论： 本方法适用于三磷酸胞苷二钠注射液的质量 方法定量限分别为 1． 6 、 检出限分别为 0． 50 、 控制。 关键词： 三磷酸胞苷二钠（ CTP － Na2 ） ； 二磷酸胞苷二钠（ CDP － Na2 ） ； 单磷酸胞苷二钠（ CMP － Na2 ） ； 含量测定； 离子色谱法； 电 导检测器 中图分类号： Ｒ 917 文献标识码： A 文章编号： 0254 － 1793 （ 2015 ） 02 － 0333 － 05
Chromeleon 7． 2 色谱工 液自动发生器（ EGC － 500 ） ， METTLEＲ TOLEDO 公 司 ） ； 作站 ） ； 天 平 （ XP205 ， Merck Millipore Milli － Q 超 纯 水 器 （ Integral 10 ， 公司） 。 CTP － Na2 对照品： 中国食品药品检定研究院， 批号 140758 － 201101 ， 纯度 92． 9% ； CDP － Na2 对照 品： 芜 湖 华 仁 科 技 有 限 公 司， 批 号 11042913 ， 纯度 98． 6% ， 水分 2． 3% ； CMP － Na2 对照品： SIGMA， 批号 070M1493V， 纯度 99． 7% ， 水分 22． 4% 。 CTP － Na2 批号 注射 液 为 市 售 样 品， 规 格 为 2 mL： 40 mg， 20131101 、 20131102 、 20131103 。 水 为 超 纯 水， 其他 试剂为分析纯。
（ 1． Institute of Medicinal Biotechnology， Chinese Academy of Medical Sciences， Beijing 100050 ， China； 2． Yantai Dongcheng Pharmaceutical Group Co． ， LTD， Yantai 264006 China； 3． Beijing Institute for Drug Control， Beijing 100035 ， China； 4． College of Medicine， Liaoning Medical University， Jinzhou 121000 ， China）
＊ ＊ 通信作者
— 334 —
35 （ 2 ） 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015 ，
Keywords： cytidine disodium triphosphate（ CTP － Na2 ） ； cytidine disodium diphosphate（ CDP － Na2 ） ； cytidine disodium monophosphate （ CMP － Na2 ） ； determination of content； ion chromatography ； conductivity detector 三 磷 酸 胞 苷 二 钠 （ cytidine disodium triphosphate ， CTP － Na 2 ） 注 射 液 是 一 种 核 苷 酸 类 药 物 ， 其主要药 效 成 分 三 磷 酸 胞 苷 在 机 体 参 与 核 酸 及 磷 脂 的 合 成 代 谢， 促 进 蛋 白 质 的 合 成， 能够穿过 血 － 脑脊液屏障 ， 是脑磷脂合成与核酸代谢的中 间产物 和 能 量 来 源
*
科技部新药创制重大专项平台（ 2012ZX09301002 － 001 － 019 ） Tel： （ 010 ） 63021345 ； E － mail ： shanguangzhi@ imb． pumc． edu． cn 宗艳平 王 晓 Tel： 18210982499 ； E － mail： zongyanping123@ sina． com Tel： 13562516601 ； E － mail： wangjing_3503@ 126． com 第一作者
Ion chromatography for content determination and assay of related substances in cytidine disodium triphosphate injection*
4 ZONG Yan － ping1， ， WANG Xiao2 ， ZHANG Tong3 ， LU Jing － hua4 ， SHAN Guang － zhi1 ＊＊
［1］
2 2． 1
方法和结果
色谱条件 TM 分析 柱： Thermo Dionex IonPac AS11 － HC 色 谱柱（ 4 mm × 250 mm ） ； 保护柱： Thermo Dionex Ion-
。该药用于脑震荡及后 遗
Pac TM AG11 － HC 色谱柱 （ 4 mm × 50 mm ） ； 淋洗条 件： 带连续再生阴离子捕获柱 （ CＲ － TC ） 装置的淋 洗液自动发生器 （ EGC － 500 ） 产生氢氧化钾， 梯度 －1 1 ， 1． 0 mL · min ； ： 25 ℃； 淋洗程序见表 流速 柱温 进样量： 10 μL； 检测方式： 抑制性电导检测， 采用自 循 环 模 式 的 阴 离 子 电 解 再 生 抑 制 器， 抑制电流 198 mA。
［2 － 4］
， 该 方 法 不 使 用 CTP － Na 2 对 照
品， 操作烦琐 ， 结果的准 确 度 较 低 ， 且该标准没有 对 有 关 物 质 进 行 控 制； 此 外， 还有采用其他电泳 方法 法
［5 － 6］
梯度淋洗程序
Gradient elution program
梯度曲线类型 （ gradient curve type） — — 5 — 5 — 5 —
时 对 有 关 物 质 进 行 定 量。 近 年 来 有 有 关 文 献
［12 － 13］
对 CTP － Na 2 在 280 nm 波长下进行含量及有关物 但 检 出 成 分 不 全 面， 仅能对特定波长物 质 检 测， 质响应 ， 且流动相配制过程烦琐 。 离子色 谱 法 流 动 相 简 单 ， 灵 敏 度 高， 环保无 污染 ， 采用在线淋洗液 发 生 器 ， 大大简化了操作， 增强了 方 法 重 现 性 等 优 点 。 本 文 建 立 了 CTP － Na 2 注射液含量测定 和 有 关 物 质 检 查 的 离 子 色 谱 方法 。 1 仪器与试药 Thermo dionex ICS － 5000 + 型离子色谱仪 （ 电导 DIONEX AEＲS 500 4 － mm 抑制器， 检测器， 淋洗
Abstract
Objective ： To establish a new method for determination and assay of cytidine disodium triphosphate
（ CTP － Na2 ） injection and related substances by ion chromatography． Methods： The IonPac AS11 － HC column （ 4 mm × 250 mm） was adopted with KOH solution of gradient elution at the flow rate of 1． 0 mL · min － 1 ． The injection volume was 10 μL， and the substances were detected conductively with the DIONEX AEＲS 500 4 － mm suppressor． The content computation was performed with the peak area external reference method． The main degradation impurities（ cytidine disodium diphosphate （ CDP － Na2 ） and cytidine disodium monophosphate （ CMP － Na2 ） ） were determined with the correction factor comparison method to calculate principal components． Ｒesults： The linear range of cytidine disodium triphosphate was 0． 000 164 － 1． 60 mg · mL － 1 （ r = 0． 999 8 ， n = 6 ） ． The average recovery （ n = 9 ） was 100． 1% ． The solution of CTP － Na2 reference substance was stable within 24 hours（ ＲSD = 1． 3% ） ， the limits of quantitation of CTP － Na2 and the main degradation impurities CDP － Na2 ， CMP － Na2 were 1． 6 ng， 4． 57 ng， 6． 0 ng； the limits of detection were 0． 50 ng， 1． 48 ng， 1． 88 ng． Conclusion： The developed method can be applied to quality control of cytidine disodium triphosphate．