体内药物分析常用的分析方法

体内药物分析体内药物分析是通过分析的手段了解药物在体内（包括实验动物等机体）数量与质量的变化，获得各种药物代谢动力学的各种参数和转变、代谢的方式、途径等信息。

从而有助于药物生产、实验、研究、临床等各个方面对所研究的药物作出估计与评价，以及对药物的改进和发展作出贡献。

体内药物分析任务和对象的特点：1、被测定的药物和代谢物的浓度或活性极低；2、样品中存在各种直接或间接影响测定结果的物质，大多需要分离和净化；3、样品量少，尤其是连续测定时，很难再度获得完全相同的样品；4、工作量较大，随着工作的深入开展，会成倍地甚或按指数级数增加；5、往往要求很快地提供结果，尤其在毒物检测工作中；6、实验室应有多种检测手段，可进行多项分析工作；7、测定数据的处理和阐明有时不太容易。

样品的种类、采集和储存一、样品的种类和选取原则：（一）血样：血浆(plasma)和血清(serum)是体内药物分析最常采用的样本，其中选用最多的是血浆。

因血浆中的药浓可反映药物在体内（靶器管）的状况。

而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。

血浆是全血(whole blood)在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离心后分取，量约为全血的一半。

血清则是在血液中纤维蛋白元等影响下，引起析出血块，离心取得。

血块凝结时往往易造成药物吸附损失。

全血也应加入抗凝剂混匀，以防凝血。

对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据，而全血的净化较血浆与血清麻烦，尤其是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。

但是一些可与红血球结合或药物在血浆和血球的分配比率因不同病人而异的情况下，则宜采用全血。

血样采取量会受到一定的限制，血样取样时间间隔问题也常随测定目的不同而异。

目前大都是测定原型药物总量。

当药物与血清蛋白结合率稳定时，血药总浓度可以有效表示游离药物的浓度。

但对低蛋白症或尿毒症患者，药物结合率降低，则在通常安全有效的血药总浓度中，游离型药物浓度可显著增加。

体内药物分析(2)
生物样品的前处理方法
(一)去除蛋白质
在测定血样时，首先应去除蛋白质。

去除蛋白质可使结合型的药物游离出来，以便测定药物的总浓度;去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能(如保护HPLC柱不被沾污)，延长使用期限。

去除蛋白法有以下几种。

1.加入与水相混溶的有机溶剂
可使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化而使蛋白质凝聚，使与蛋白质结合的药物释放出来。

常用的水溶性有机溶
剂有：乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、四氢呋喃等。

2.加入中性盐
使溶液的离子强度发生变化。

中性盐能将与蛋白质水合的水置换出来，从而使蛋白质脱水而沉淀。

常用的中性盐有：饱和硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等。

体内药物分析的方法和重要性————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：2浙江大学远程教育学院本科生毕业论文（设计）开题报告题目体内药物分析的方法和重要性专业药学学习中心衢州姓名袁奕艺学号710013222002指导教师周新高2012 年03月24日一、文献综述体内药物分析是指通过分析手段了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内转变、代谢的方式、途径等信息。

从而为药物的生产、医疗临床、实验研究等方面对所研究的药物做出估计与评价，对药物改进和发展做出贡献。

随着体内药物分析的深入，必将对药物和人的内在关系作出更准确的表达和描述。

体内药物分析的首要任务是为临床药学和临床实际工作提供分析数据，这就决定了其独特的分析方法。

1样品必须净化。

供分析的样品来自不同生物体，组成复杂，干扰物质多。

如体液和组织中的内源性物质的成分可以与药物结合，且干扰测定。

因此测定前需进行不同程度分离、纯化，方可进行测定。

2样品浓缩。

一般而言，能供分析的样品量较少，其中所含药物及其衍生物的量更少，实际进行的是微量分析，另外，样品不易重新获得，所以经进化后的样品还应进行必要浓缩。

3方法简便、快速和准确。

样品若是临床药物浓度监测的分析，由于工作量大，故分析方法越简单越好；若为有关科研提供数据，则要准确性高；若与中毒解救有关，则要求越迅速越佳。

4还需有一定为检测服务的仪器设备。

总之体内药物分析的首要是适合体内样品中药物的灵敏性高、选择性好、准确可靠地分析方法。

生物样品经过适当的前处理后，选择合适的方法进行定性定量分析。

常用的体内药物分析方法包括：色谱法、各种联用技术、免疫分析法、光谱分析法、放射性核素标记法和微生物法等，其中色谱法和色—质联用技术是体内药物分析的最常用方法。

1色谱法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法等，是分析混合组分最有效的方法，尤其是当色谱与质谱、色谱与核磁共振波谱联用时，更显示出其强大的分离分析、定性定量的功能。

体内药物分析体内药物分析是通过分析的手段了解药物在体内（包括实验动物等机体）数量与质量的变化，获得各种药物代谢动力学的各种参数和转变、代谢的方式、途径等信息。

从而有助于药物生产、实验、研究、临床等各个方面对所研究的药物作出估计与评价，以及对药物的改进和发展作出贡献。

体内药物分析任务和对象的特点：1、被测定的药物和代谢物的浓度或活性极低；2、样品中存在各种直接或间接影响测定结果的物质，大多需要分离和净化；3、样品量少，尤其是连续测定时，很难再度获得完全相同的样品；4、工作量较大，随着工作的深入开展，会成倍地甚或按指数级数增加；5、往往要求很快地提供结果，尤其在毒物检测工作中；6、实验室应有多种检测手段，可进行多项分析工作；7、测定数据的处理和阐明有时不太容易。

样品的种类、采集和储存一、样品的种类和选取原则：（一）血样：血浆(plasma)和血清(serum)是体内药物分析最常采用的样本，其中选用最多的是血浆。

因血浆中的药浓可反映药物在体内（靶器管）的状况。

而且血浆中药物浓度的数据报道较多，可供借鉴。

血浆是全血(whole blood)在加肝素、枸橼酸、草酸盐等抗凝剂的全血经离心后分取，量约为全血的一半。

血清则是在血液中纤维蛋白元等影响下，引起析出血块，离心取得。

血块凝结时往往易造成药物吸附损失。

全血也应加入抗凝剂混匀，以防凝血。

对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据，而全血的净化较血浆与血清麻烦，尤其是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。

但是一些可与红血球结合或药物在血浆和血球的分配比率因不同病人而异的情况下，则宜采用全血。

血样采取量会受到一定的限制，血样取样时间间隔问题也常随测定目的不同而异。

目前大都是测定原型药物总量。

当药物与血清蛋白结合率稳定时，血药总浓度可以有效表示游离药物的浓度。

但对低蛋白症或尿毒症患者，药物结合率降低，则在通常安全有效的血药总浓度中，游离型药物浓度可显著增加。

体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证1.血浆血浆样品处理方法主要包括离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取。

首先，通过离心将血清和细胞分离，并将上清液收集。

然后，使用超滤技术去除高分子物质，如蛋白质，以得到更纯净的血浆样品。

接下来，可以使用蛋白沉淀方法去除血浆中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

最后，固相萃取是常用的药物浓度测定方法，可以通过固相材料吸附目标药物，然后用洗脱液洗脱和浓缩样品，最后定量分析。

2.尿液尿液样品处理方法常采用固相萃取、pH调节、加入稳定剂等技术。

固相萃取可以去除尿液中的杂质，并将药物萃取到固相材料上，然后用洗脱剂将药物洗脱出来。

pH调节可以使药物离子化或去离子化，以提高其固相萃取的效率。

此外，加入稳定剂可以保持样品的稳定性，防止药物分解或降解。

3.组织和细胞组织和细胞样品处理方法包括离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等技术。

首先，通过离心将组织或细胞分离，并收集上清液。

然后，使用组织切割技术将组织样品切成适当的大小。

对于细胞样品，可以使用细胞溶解剂将细胞完全裂解。

最后，蛋白沉淀可以去除样品中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。

方法学验证是为了确保分析方法的准确性和可靠性而进行的步骤和操作流程的验证。

主要包括以下几个方面：1.线性范围验证：验证方法在一定浓度范围内，药物浓度与测定结果之间的关系是否呈线性。

2.灵敏度验证：验证方法的最低检测限、最低定量限和测定范围等指标，以评估方法对药物浓度的敏感度。

3.精密度和准确度验证：通过重复测定和与参考方法比较等方法验证方法的重复性和准确性。

4.选择性验证：验证方法对样品中其他可能存在的干扰物的选择性，以保证药物的测定不受干扰。

5.稳定性验证：验证样品在不同温度、时间、pH条件下的稳定性，以评估样品的保存期限和条件。

综上所述，体内药物分析常用的生物样品处理方法包括血浆的离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取，尿液的固相萃取、pH调节和加入稳定剂，组织和细胞的离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等。

体内药物分析（1）2.治疗药物监测：以药动学药效学为理论为基础，应用现代分析技术，测定体液中的药物浓度，研究药物浓度和与疗效和毒性之间的关系，为临床给药方案个体化提供科学依据。

8.质控样品QC：是指在空白生物介质中加入已知量待测物标准物质制成的样品，用于监测生物分析方法的重复性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性。

10.分析批：包括待测样品、适当数目的标准样品和QC样品的完整系列。

12.定量下限：是指符合准确度和精密度要求的生物样品中药物的最低定量浓度，其反映了方法的灵敏度。

13:高效液相色谱法：是在经典液相色谱的基础上，以高压泵输送流动相，采用高效微粒型固定相及高灵敏度检测器，发展而成的现代分离分析技术。

14.等度洗脱：在同一分析周期内流动相组成比例保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。

15.梯度洗脱：是在一个分析周期内程序控制改变流动相的组成比例，适合于分析组分数目多，性质差别较大的复杂试样。

16.提取回收率：系指从生物样本基质中回收得到分析物质的响应值与标准物质的响应值之比，也称萃取回收率或绝对回收率。

18.非临床药代动力学：通过对动物体内、外和人体外研究方法，揭示药物在体内的动态变化规律，获得药物的基本药代动力学参数，阐明药物的吸收，分布，代谢和排泄的过程和特点。

19.临床药代动力学：阐明药物在人体内的吸收，分布，代谢和排泄的动态变化规律。

20.生物等效性：是指一种药物的不同制剂在相同的实验条件下，给以相同的剂量，其活性成分吸收速率和程度的差异无统计学意义。

21.群体药代动力学：通过定量考察群体患者中血药浓度和效应的决定因素，研究给予标准剂量药物时个体间血药浓度、药物效应的变异性。

22.治疗窗：把最低有效浓度作为治疗浓度的下限，最小中毒浓度作为治疗的上限，这个范围称为治疗窗。

23.室内质控：是指在实验室内部针对某一监测药物，采用同一质控样品反复进行测定，对其误差作长期连续的评价和监督，以达到使分析结果在实验室内部保持最小偏差。

体内药物与毒物分析体内药物和毒物分析是一种关键性的检测方法，它可以揭示该个体体内药物和毒物的负荷，并应用于药代动力学和药物安全性评价等方面。

在本篇文章中，我们将探讨体内药物和毒物分析的基本原理、常见方法以及其相关应用。

一、体内药物分析体内药物分析主要应用于以下方面：（1）药代动力学，即药物在体内的过程；（2）药物安全性评价，即药物在体内的剂量与毒性；（3）药物疗效评价，即药物在体内的作用机制及有效性。

体内药物分析的主要方法包括：（1）毛细管电泳；（2）气相色谱质谱联用（GC-MS）；（3）高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）；（4）放射性同位素标记法。

在体内药物分析中，常用的指标包括Cmax、AUC、T1/2、CL、Vd等。

其含义分别为：最高血药浓度、药物曲线下面积、半衰期、清除率和分布容积。

二、体内毒物分析体内毒物分析主要应用于以下方面：（1）毒物监测，即对个体体内毒物负荷的监测；（2）毒物剂量评估，即毒物在体内的剂量与毒性；（3）毒物治疗，即通过毒物分析进行毒物治疗的规划和实施。

体内毒物分析的主要方法包括：（1）毛细管电泳；（2）气相色谱质谱联用（GC-MS）；（3）高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）；（4）放射性同位素标记法。

在体内毒物分析中，常用的指标包括LD50、ED50、TD50、NOAEL等。

其含义分别为：半数致死剂量、半数有效剂量、半数中毒剂量和无不良毒性的最高剂量。

三、体内药物与毒物分析的应用体内药物和毒物分析在临床和药物开发中有广泛的应用。

在临床中，它可用于评估药物的安全性、疗效和药代动力学。

在药物开发中，它可用于药物的代谢和毒性评估、体内药物分布和药物动力学分析等。

最近，体内药物和毒物分析还被用于新型药物的研发中。

例如，基因编辑药物的安全性评估和代谢动力学分析已成为该领域的热点。

此外，基于群体药代动力学研究和药物安全性评价等方面的新兴分析方法也日益被广泛应用。

总之，体内药物和毒物分析是一种关键性的检测方法，它可以揭示个体体内药物和毒物的负荷，并应用于药代动力学和药物安全性评价等方面。

体内药物分析中的现代分析方法与技术简介药学院彭彦内容一、体内药物分析二、色谱－质谱联用技术三、手性色谱法四、高效毛细管电泳法一、体内药物分析评价药物的安全性（临床前研究）——动物评价药物的有效性（临床研究）——人体（健康志愿者或患者）评价用药的安全、有效与合理——人体（患者TDM 、兴奋剂检测）1. 生物样本的特点药物浓度——低干扰物质——多2. 样品制备分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进行化学衍生化，以适应分析方法要求3. 分析方法的要求检测方法的高灵敏度——最低检测量10-9~10-7g或10-15~10-12g 分离方法的高选择性、高专属性4. 常用的分析方法色谱法——GC、HPLC、HPCE免疫分析法——RIA、EIA联用技术——GC-MS、LC-MS二、色谱－质谱联用技术（一）气相色谱-质谱联用Gas Chromatography-Mass Spectrometry•利用气相色谱仪作为质谱仪的进样和分离系统，把质谱仪作为色谱仪的检测器。

•被分析的样品首先要离子化，然后利用不同离子在电场或磁场的运动行为的不同，把离子按质荷比（m/z）分开而得到质谱，通过样品的质谱和相关信息，可以得到样品的定性定量结果。

GC-MS仪气相色谱单元、接口、质谱单元特点：装置结构简单，容易维护，试样传输率达到100％，但它无浓缩作用。

喷射式浓缩型接口•轻分子的载气在喷射过程中偏离接口而被除去，重分子的待测组分进入接口，而得到浓缩。

•特点：体积小，试样在分离器内停留时间短。

••是一种软离子化技术。

通过样品分子与试剂离子发生碰撞实现样品离子化。

•常用的试剂为烷烃（如：CH4、N2）。

化学离子化（chemical ionization, CI）稳定区的离子——共振离子沿轴方向飞行达到检测器不稳定区离子运动时撞到某一电极上，而不会达到检测器Ion trap）（二）液相色谱-质谱联用Liqud Chromatography-Mass Spectrometry•LC-MS联用可分离极性的、离子化的、不易挥发的高分子质量和热不稳定的化合物，并具高分辨能力，高灵敏度，应用范围更广和具有极强的专属性。