DNA定量筛查实验流程

DNA定量测定(二苯胺法)实验报告
实验目的：利用二苯胺法对DNA进行定量测定，获得DNA
的浓度信息。

实验原理：二苯胺法是一种常用的DNA定量测定方法。

其原
理是DNA与二苯胺反应生成发色产物，并在560 nm波长下
具有最大吸收量，通过测定吸光度来计算DNA的浓度。

在实
验中，先将待测的DNA样品与二苯胺溶液反应得到发色产物，然后通过比较其吸光度与已知浓度标准曲线的关系来计算待测样品的DNA浓度。

实验步骤：
1. 准备工作：将工作区域消毒，摆放实验所需仪器器材。

2. 制备标准曲线：依次稀释5 μg/mL的DNA溶液，得到一系
列不同浓度的DNA标准溶液。

将标准溶液与相同体积的二苯
胺溶液混合，反应10分钟。

然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度，并绘制标准曲线。

3. 处理待测样品：将待测样品与相同体积的二苯胺溶液混合，反应10分钟。

然后在560 nm波长下测定溶液的吸光度。

4. 计算DNA浓度：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代
入计算公式，得到DNA的浓度。

实验结果：
标准曲线数据：（以吸光度为横坐标，DNA浓度为纵坐标）
吸光度（A） DNA浓度（μg/mL）
0.1 1
0.2 2
0.3 3
0.4 4
0.5 5
待测样品数据：
吸光度（A） = 0.25
根据标准曲线计算得到的DNA浓度为2.5 μg/mL
实验结论：根据二苯胺法对DNA的定量测定结果，待测样品的DNA浓度为2.5 μg/mL。

实验八DNA的定量测定一、实验目的学习和掌握二苯胺法测定DNA含量的方法。

二、原理核酸含量的测定方法包括紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA 的颜色反应方法。

本实验采用针对DNA的二苯胺法测DNA的含量。

在酸性溶液中，DNA与二苯胺共热生成蓝色化合物，该物质在595nm有最大吸收，在40～400μg/mL范围内其峰值与DNA含量成正比。

DNA +三、试剂和器材1. 试剂200μg/mL DNA标准溶液、二苯胺试剂2. 器材可见分光光度计、恒温水浴锅、分析天平四、操作步骤1. 标准曲线的制作取12只试管分成6组，按下表操作。

取2管的平均值，以DNA浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线。

试管0 1 2 3 4 5标准DNA/mL 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸馏水/mL 2 1.6 1.2 0.8 0.4 04 4 4 4 4 4二苯胺试剂/mL60℃恒温水浴中保温1h，冷却，在595nm波长处比色2. 样品的测定取待测样品2mL，加入二苯胺溶液4mL，摇匀，60℃保温1h，然后在595nm波长出测定光密度值。

根据测得的光密度值，从标准曲线上查得相应的DNA 的ug数，按下式计算待测样品的DNA的含量。

DNA%＝待测样品中测得的DNA的mg数 X 100待测样品液中样品的mg数五、注意事项其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等都对实验有干扰，测定前应尽可能除去。

六、思考题1、DNA含量测定的方法有哪些？各有何优缺点？2、简述二苯胺法测DNA的基本原理。

外源DNA残留量测定（荧光定量PCR法）标准操作规程SOP外源性DNA残留量测定法（荧光定量PCR法）标准操作规程⽂件编码：XXXXXX⽬录1.⽬的 (1)2.范围 (1)3.职责 (1)4.依据 (1)5.定义 (1)6.内容 (1)6.1.原理 (1)6.2.实验材料 (1)6.3.操作步骤 (3)6.4.结果计算 (6)6.5.判定标准 (7)6.6.注意事项 (7)7.相关⽂件 (7)8.附件 (7)9.变更历史 (7)1.⽬的1.1.规范外源性DNA残留量测定法（荧光定量PCR法）的操作过程。

2.范围2.1.本规程适⽤于采⽤荧光定量PCR法对CHO细胞表达产品进⾏外源性DNA残留量的测定。

3.职责3.1.⽅法学研究员负责严格执⾏本规程规定；3.2.质量研究室负责⼈负责本规程的培训并监督本规程的执⾏。

4.依据4.1.DNA残留量检测样品处理试剂盒（PrepSEQ TM Residual DNA Sample Preparationkit，Applied Biosysterms）使⽤说明书。

5.定义5.1.LTR：long tandem repeat，长串联重复序列5.2.PCR：Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应5.3.Ct：阈值循环，即荧光信号强度超过设置的阈值强度时所经历的循环数6.内容6.1.原理CHO⼯程细胞所表达的蛋⽩质产品，其外源性DNA残留量的测定采⽤荧光定量PCR法。

该⽅法是以荧光定量PCR仪为设备平台基础，选择CHO细胞中含量较丰富的⼀段LTR（long tandem repeat，长串联重复序列）为靶标序列设计扩增引物，建⽴基于Taqman探针的定量检测实验。

⽤已知量的CHO细胞基因组DNA做标准曲线，通过对Ct值进⾏线性回归计算样品中DNA的含量。

6.2.实验材料6.2.1.试药与试液灭菌⽔使⽤电阻率不低于18.2MΩ·cm的超纯⽔，121℃灭菌20分钟以上。

荧光定量pcr实验步骤荧光定量PCR实验步骤引言：荧光定量PCR（qPCR）是一种广泛应用于生物学研究和临床诊断的技术，可用于准确、快速地定量检测DNA的含量。

本文将介绍荧光定量PCR实验的步骤，以及注意事项和数据分析方法。

一、实验准备1. 准备所需试剂和仪器：包括PCR反应体系的各种试剂（如引物、探针、酶等）和实时荧光定量PCR仪。

2. 根据实验设计，制定合适的实验方案。

确定需要扩增的目标序列，设计引物和探针。

二、样品处理1. 提取待测样品中的DNA，确保提取得到高质量的DNA。

可以使用商业DNA提取试剂盒进行提取，按照厂家说明进行操作。

2. 测定DNA的纯度和浓度，确保测量到的DNA适用于PCR扩增反应。

使用比色法或分光光度计检测DNA的纯度和浓度。

3. 对提取得到的DNA进行稀释，以便在PCR反应中使用。

确保稀释后的DNA浓度恰当，以避免PCR反应的干扰。

三、荧光定量PCR反应体系的准备1. 根据实验设计和目标序列的长度，计算出所需的试剂和反应体系的配比。

2. 根据计算结果，将引物、探针和模板DNA按照适当的比例加入PCR反应管中。

注意保持反应管的清洁和无菌。

3. 加入合适的PCR反应缓冲液、酶和核酸酶抑制剂等试剂。

根据实验设计的需要，可以在反应体系中添加适当的试剂，如酶切酶、胶束等。

四、PCR扩增反应1. 将PCR反应管放入实时荧光定量PCR仪中，设置好PCR反应的程序和参数。

通常包括预热、变性、退火和延伸等步骤。

2. 启动PCR反应，开始扩增。

在反应过程中，实时监测PCR产物的荧光信号强度，并记录下来。

五、数据分析与结果解读1. 在实时荧光定量PCR仪中，可以实时获得PCR反应体系中荧光信号的强度和变化趋势。

根据实验设计的需要，可以选择合适的荧光信号通道进行监测。

2. 根据荧光信号和PCR反应的周期数，可以绘制荧光增幅曲线。

通过观察曲线的形态和特征，可以初步判断PCR反应的特异性和效果。

DNA测序实验步骤大全(精华版)
本文档旨在提供一份DNA测序实验的步骤概述，以帮助研究
人员顺利完成实验。

下面是DNA测序实验的核心步骤：
1.DNA提取
选择适当的样本（例如细胞、组织、血液等），并使用DNA
提取试剂盒提取DNA。

遵循试剂盒说明书中的步骤，将样本溶解在适当的缓冲溶液中，并进行离心以分离DNA。

2.纯化和浓缩
使用DNA纯化试剂盒纯化提取得到的DNA，去除潜在的污染物。

对纯化后的DNA进行浓缩，以增加测序的效率和准确性。

3.DNA片段构建
利用DNA库制备试剂盒，将DNA片段和DNA连接酶一起反应。

反应后的DNA片段经过纯化步骤，去除未连接的DNA片段和连接酶。

4.测序PCR
将DNA片段进行PCR扩增，以得到足够量的DNA样本进行
测序。

使用DNA测序引物和聚合酶进行PCR扩增。

5.DNA测序
将PCR扩增的DNA提交给DNA测序服务提供商进行测序。

根据测序平台的要求，选择合适的测序方法（例如Sanger测序、___测序等）进行测序。

6.数据分析
在测序完成后，获得原始测序数据。

使用适当的软件和工具对测序数据进行处理和分析，以获得最终的DNA序列。

以上是DNA测序实验的核心步骤概述，具体实验细节应根据实验目的和设备进行调整和优化。

希望本文档对您的实验工作有所帮助。

注意：本文档旨在提供DNA测序实验步骤的概述，并没有进行详细解释和说明。

对于具体实验操作和方法，请参考相关文献和专业指南。

dna鉴定流程是什么有哪些步骤很多⼈都想知道dna鉴定流程是什么，下⾯⼩编整理了⼀些相关信息，供⼤家参考！如何做dna鉴定dna亲⼦鉴定的⼿续有两种：⼀个⼈鉴定，个⼈鉴定您可以⾃⼰采集样本，私下进⾏。

⾎痕采集：准备⽆菌纱布和针头，扎⼀下被鉴定⼈的⼿指、脚后跟或者⽿垂处挤出来5滴⾎滴在⼀块纱布上，每滴⾎有黄⾖⾯积，阴透3层纱布。

⾎痕保存：将带⾎纱布，在阴凉⼲净处⼲燥，然后放⼊纸质信封保存（⼀定不能放到塑料袋中），标记好样本姓名。

不要和其他⼈物质互相接触。

上述⽅法采集的样本，可以保存2-3个⽉。

⼆司法鉴定司法鉴定，必须都亲⾃到场。

⼤⼈提供⾝份证，孩⼦如果没有⾝份证，需要提供户⼝本。

现场采集照⽚，复印证件，然后采集样本。

dna鉴定有哪些步骤个⼈鉴定适合只希望了解真实的结果，不准备把鉴定结果应⽤于打官司的客户，只需要提供被检测⼈的样本即可。

样本可选择⾃⾏采样选择邮递或⾃⾏送样样式。

司法鉴定是指(上户⼝,办移民,打官司等)可直接作为法庭证据使⽤。

需当⾯采样，所有提供材料必须真实可靠。

需要准备相应的证件(⾝份证，户⼝簿，护照，军官证或者孩⼦的出⽣证等)及复印件。

1⼨证件照⽚各3张。

常规检测样本:(⾎痕、⼝腔拭⼦、带⽑囊头发)采样⽅法：1.⾎痕(指⾎)：中指或⽆名指尖内侧，半岁以下拇指或⾜部，消毒、穿刺、采⾎滴在纱布上，4-5滴/⼈;2.⼝腔拭⼦：⽤棉签贴住腮帮⼦(⼝腔内壁)轻轻旋转取⼝腔黏膜细胞4根/⼈;3.带⽑囊的头发5根/⼈;dna鉴定常见⽤途有哪些通常DNA亲⼦鉴定适⽤于认⼦(亲)相关的家族亲缘鉴定案例，如失散多年的⽗母⼦⼥等的认亲，这对于满⾜相关家庭的亲情需求起着⾄关重要的作⽤。

另外，还可⽤于以下⼀些案件中：1．户⼝申报中亲⽣⾎缘关系鉴定2．离婚、财产继承案中的亲⽣⾎缘关系鉴定3．婴⼉错抱案、拐卖⼉童案中⾝份的鉴定4．移民案中有关⼈员的亲缘关系鉴定5．致孕案中确定胎⼉的亲⽣⽗亲6. 因车祸丧⽣的⽆名⼫体认领，需要确定亲缘关系7. ⾮婚⽣育的⼦⼥或者是超⽣的⼦⼥需要上户⼝，需要先确定亲⼦关系8．其他⼀些需要确认争议个体间亲缘关系的鉴定胎⼉DNA亲⼦鉴定。

实验七 DNA的定量一、实验原理核酸分子（DNA或RNA）由于含有嘌吟环和嘧啶环的共轭双键，在260 nm 波长处有特异的紫外吸收峰，其吸收强度与核酸的浓度成正比，这个物理特性为测定核酸溶液浓度提供了基础。

1 OD260相当于dsDNA 50 ug/ml，ssDNA 33 ug/ml和ssRNA 40 ug/ml。

可以此来计算核酸样品的浓度。

紫外分光光度法不但能确定核酸的浓度，还可通过测定260nm和280nm的紫外线吸收值的比值（A260/A280）估计核酸的纯度，纯的DNA制品的比值为1.8，RNA的比值为2.0, 若DNA高于1.8,则可能有RNA污染，低于1.8则有蛋白质污染。

对于很稀的核酸溶液，可用荧光光度法进行测定。

DNA 本身并不产生荧光，但在荧光染料溴化乙锭（EB）插入DNA 的碱基对平面之间并与之结合后，DNA样品能在紫外光的激发下产生桔红色荧光。

荧光强度与被结合的EB的量成正比，而被结合的EB的量又与核酸分子长度和含量成正比，使用一系列已知的不同浓度DNA溶液作标准对照，可比较出被测DNA溶液的浓度。

灵敏度可达1～5ng。

由于是基于目测，所以是估计水平。

该方法经济简便，但准确性较低。

二、仪器及试剂1. 仪器：Amersham GeneQantTM Pro 紫外可见分光光度仪，琼脂糖凝胶电泳设备。

2. 试剂及配制：5×上样缓冲液：配制10 ml0.5 mol/L EDTA(pH8.0) 2 ml10% SDS 50 ul50% 甘油 2.5 ml0.2% 溴酚蓝 10 mg0.2% 二甲苯青FF 10 mg加去离子水至10 ml其它试剂：0.1×TE 、DNA标准液，EB储存液（10 mg/ml），三、实验步骤1.紫外分光光度法（1）用0.1×TE对待测DNA样品按1:20或合适的倍数稀释。

（2）开机，仪器会自动对光路及分析软件进行检测，待显示屏上出现“instrument Ready”时，进入核酸测定窗口（3）调零。

DNA测序实验室工作流程指南1. 实验室工作流程概述实验室工作流程是指在进行DNA测序实验时所需遵循的一系列步骤和规范。

本指南旨在为实验室工作人员提供DNA测序实验的工作流程指导，以确保实验的顺利进行。

2. 实验室工作流程步骤2.1 样品准备- 收集样品并记录相关信息，如样品来源、编号等。

- 确保样品存储条件符合要求，避免污染和降解。

- 检查样品质量并进行必要的前处理，如DNA提取、纯化等。

2.2 文库构建- 准备文库构建所需的试剂和材料。

- 按照文库构建方案进行操作，包括DNA片段剪切、连接适配体等步骤。

- 对文库构建产物进行质检，确保构建成功。

2.3 PCR扩增- 准备PCR反应所需的试剂和引物。

- 设置PCR反应条件，包括温度、时间等。

- 进行PCR扩增反应，并对扩增产物进行质检。

2.4 测序准备- 准备测序所需的试剂和测序芯片。

- 对文库进行纯化和浓度调整。

- 按照测序仪器的要求装载样品到测序芯片上。

2.5 数据分析- 将测序数据导入分析软件进行初步处理。

- 进行序列比对、变异检测等分析。

- 根据实验目的和需求，进行进一步的数据解读和解析。

3. 实验室安全与质量控制- 实验室工作人员应遵守实验室安全操作规范，包括戴手套、穿实验服等。

- 使用经过验证和质控的试剂和材料，确保实验结果的可靠性和准确性。

- 定期进行设备的维护和校准，确保设备正常工作。

- 记录实验过程和结果，以备查证和追溯。

4. 结束语本文档提供了DNA测序实验室工作流程的指南，旨在帮助实验室工作人员进行规范和高效的实验操作。

实验室工作人员应严格按照本指南的步骤进行实验，并遵守实验室安全和质量控制要求，以确保实验结果的准确性和可靠性。

人类基因有效DNA 浓度检测操作流程1.目的介绍使用实时PCR 技术对基因有效DNA 浓度进行定量、质控。

辅助EGFR/KRAS/BRAF 基因突变检测试剂盒的使用。

2.实验材料试剂供应商人类基因有效DNA 浓度定量检测试剂盒(荧光PCR 法)厦门艾德生物医药科技有限公司实时荧光PCR 仪–PCR96孔板或八联PCR 反应管–3.方法注意：每次实验均使用新鲜配制的基因组DNA 标准品。

3.1制备2.5ng/μL 标准DNA ：吸取2μL 基因组DNA （40ng/μL ）至30μL 超纯水中，振荡混匀。

3.2用20μL 标准DNA 和20μL 超纯水中制备2倍梯度稀释的标准品，每次加样后都应混匀。

浓度（ng/µL ）每反应加入总DNA 量（ng ）2.512.51.25 6.250.6253.1250.3121.56253.3按照表1制备预混液。

所有样品(DNA 样品、标准品、阴性对照)应当做两复孔或三复孔以提高标准曲线和定量结果的准确性。

3.4分装45µL 预混液至八联PCR 反应管中。

3.5加入5µLDNA 样品、标准品、水(NTC ，/阴性对照)至八联PCR 反应管内。

表1预混液配制各组份名称体积/反应(µL)反应混合液45Taq 酶0.25DNA53.6上qPCR 仪(MX3000P/MX3005P 或其它品牌)打开MXPro 软件，选择Quantitative PCR(Multiple Standards)输入样品编号4.数据分析4.1在Setup界面将标准品设置成“Standard”。

4.2输入相应的浓度值。

如下图：4.3选择“Analysis ”，“Standard Curve ”。

标准曲线的相关系数R 2应大于0.95。

4.4选择“Text report ”。

4.4导出定量结果。

4.5阴性对照收集到荧光信号，说明实验中发生了交叉污染，数据无效，需重复实验。

乙肝dna检测的操作规程
乙肝DNA检测的操作规程主要包括以下步骤：
1. 采集血液样本：通过抽取受检者的静脉血液来获取样本。

建议在空腹状态下进行抽血，以提高检测的准确性。

2. 提取DNA片段：利用特定的设备和技术，如EV卸电泳、PCR等，从血液样本中提取出乙肝病毒的DNA片段。

这一步骤是检测的关键环节，需要使用精密的仪器和专业的操作。

3. 比对和分析：将提取出的DNA片段与标准样本进行比对，通过特定的检测方法，如荧光定量PCR、基因测序等，分析DNA片段的特性和序列，以确定乙肝病毒的种类和复制程度。

4. 得出检测结果：根据比对和分析的结果，得出乙肝病毒DNA的定量或定性检测结果。

通常情况下，检测结果会以数字或阴阳性方式呈现。

5. 报告与解读：将检测结果整理成书面报告，并提供给医生或受检者。

医生根据检测结果判断受检者是否感染乙肝病毒，以及病毒的复制程度和传染性。

受检者应遵循医生的建议进行相应的治疗或监测。

需要注意的是，乙肝DNA检测是一项高技术含量的实验，需要由经过专业培训的医务人员进行操作。

同时，乙肝病毒的检测结果解读需要结合其他相关检查结果和临床表现进行综合分析，因此最好在医生的指导下进行。