水提醇沉法提取半枝莲粗多糖中总糖含量的最佳工艺研究

《半枝莲多糖提取纯化与组成分析及抗肝癌活性研究》一、引言半枝莲作为一种传统中药材，具有广泛的药用价值。

多糖是半枝莲的主要生物活性成分之一，其具有显著的抗癌、抗氧化等生物活性。

然而，目前对于半枝莲多糖的提取纯化工艺、组成分析及其抗肝癌活性的研究尚不够深入。

因此，本研究旨在通过提取纯化半枝莲多糖，分析其组成，并探讨其抗肝癌活性，为半枝莲多糖的开发利用提供理论依据。

二、材料与方法1. 材料本研究所用半枝莲购自当地药材市场，经鉴定为正品。

所用试剂均为分析纯。

2. 方法（1）半枝莲多糖的提取与纯化采用热水浸提法提取半枝莲中的多糖，通过乙醇沉淀、透析、冻干等步骤进行纯化。

（2）多糖的组成分析利用红外光谱、核磁共振等手段对纯化后的多糖进行组成分析。

（3）抗肝癌活性研究采用体外细胞培养及MTT法检测半枝莲多糖对肝癌细胞的抑制作用。

三、结果与分析1. 半枝莲多糖的提取与纯化通过热水浸提法，我们成功提取了半枝莲中的多糖。

经过乙醇沉淀、透析、冻干等步骤，得到了纯度较高的半枝莲多糖。

2. 多糖的组成分析红外光谱和核磁共振结果显示，半枝莲多糖主要由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有典型的糖类结构特征。

此外，还发现半枝莲多糖中存在一些特殊的糖苷键和支链结构。

3. 抗肝癌活性研究体外细胞培养及MTT法检测结果显示，半枝莲多糖对肝癌细胞具有显著的抑制作用。

随着多糖浓度的增加，肝癌细胞的抑制率逐渐提高。

此外，我们还发现半枝莲多糖对正常细胞的影响较小，显示出较好的选择性。

四、讨论本研究成功提取纯化了半枝莲多糖，并对其组成进行了分析。

结果显示，半枝莲多糖主要由葡萄糖、甘露糖等单糖组成，具有典型的糖类结构特征。

此外，我们还发现半枝莲多糖中存在一些特殊的糖苷键和支链结构，这些结构可能与其生物活性有关。

关于半枝莲多糖的抗肝癌活性，我们的研究结果表明，半枝莲多糖对肝癌细胞具有显著的抑制作用，且对正常细胞的影响较小。

这一结果提示我们，半枝莲多糖可能成为一种具有潜在应用价值的抗肝癌药物。

水提-醇沉法提取大黄多糖工艺优化研究作者：孙莹纪跃芝马爱民纪耀华来源：《中国实用医药》2010年第18期【摘要】目的确定大黄多糖的最佳提取条件。

方法以大黄多糖的含量为指标,以提取温度、提取时间、提取次数、料液比为因素,利用正交试验法进行试验设计,对传统水提-醇沉法提取大黄多糖的工艺进行优化研究。

结果大黄粗多糖得率最高的提取条件是:提取时间3 h,提取温度95℃,料液比1︰30;大黄粗多糖纯度最高的条件是:提取时间1 h,提取温度95℃,料液比1︰10;乙醇沉淀大黄多糖的最佳浓度是80%。

结论本方法实验结果可作为提取大黄多糖的工艺制定的依据。

【关键词】大黄;多糖;水提-醇沉法;工艺研究Studies on the process of rhubarb thick polysaccharide tradition through the traditional water solution and alcohol sedimentationSUN Ying,JI Yue-zhi,MA AI-ming,et al.Changchun Medical College, Changchun 130031,China【Abstract】 Objective To determine the optimum extracting conditions of rhubarb polysaccharide.Methods By orthogonal test, take the content of rhubarb polysaccharide as standards, extraction temperature, extraction time,extraction times and ratio of material to liquid as factors, to optimize and study the process of extracting rhubarb polysaccharide through the traditional water solution and alcohol sedimentation.Results The optimum extraction condition of rhubarb thick polysaccharide has been established as follows:extraction time was 3.0 hours,extraction temperature was 95 ℃, and ratio of material to liquid 1:30.The optimum purity condition of rhubarb thick polysaccharide had been established as follows:extraction time was 1.0 h,extraction temperature was 95 ℃, and ratio of material to liquid 1:10.The best density of ethanol depositing rhubarb polysaccharide was 80%. Conclusion The experimental result of this method can be the basis of extracting rhubarb polysaccharide process.【Key words】 Rhubarb;Polysaccharidek;Water solution and alcohol sedimentation;The process study大黄为廖科植物掌叶大黄(RheumpalmatumL.),唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim. ExBalf)或药用大黄(RheumofficinaleBaill)的干燥根及根茎,作为传统中药在临床上应用具有悠久的历史,其功效为泻下、健胃、清热解毒等。

植物多糖提取方法的研究进展作者：张黎明李英英唐静来源：《科学导报·学术》2017年第08期摘要: 植物多糖具有较强的抗氧化性、延缓衰老、增强免疫能力、降血糖血脂等生物活性。

本文介绍了植物多糖的各种提取方法，为植物多糖的进步一提取纯化及应用提供一定基础。

关键词: 植物；多糖；提取【中图分类号】J522.3【文献标识码】B【文章编号】2236-1879(2017)08-0286-01多糖(Polysaccharide)是一种含有多羟基的大分子物质，也是一类具有较高营养价值的天然混合物。

现代研究表明，多糖具有较强的抗氧化性、延缓衰老、增强免疫能力、降血糖血脂等生物活性［1-2］，在医药和保健方面的发展都有重要的作用。

随着分子量的增加，多糖的化学性质与单糖的差异逐渐显著。

多糖一般是非晶体形态，没有甜味，较难溶于冷水或能溶于热水形成胶体溶液。

为了研究多糖的性质，越来越多的多糖从各种植物的种子、皮、花、叶和根莲中被提取、分离出来，同时，所采用的提取分离技术也在不断进步。

对于植物多糖，由于其在医药等方面的重要作用，近年来研究者对从天然植物中提取多糖表现出极大地兴趣，同时提取分离的技术也在不断的发展创新。

下面是几种常用的多糖提取方法的介绍。

1水提醇沉法水提醇沉法是最传统的提取植物多糖的方法，主要是利用多糖比较易溶于热水中。

张彩莹［3］等利用水提醇沉法提取山茱萸多糖，发现提取温度是最主要的影响因素，结合单因素试验和均匀设计实验优化山茱萸多糖的提取条件，优化得到的最佳条件为：提取温度100℃、液料比36：1(mL/g)和提取时间3h，并验证得到此条件下山茱萸多糖的提取率为19.94%。

2酶解提取法酶解提取多糖的方法是由于酶反应具有高度的专一性，利用可以分解植物细胞壁的酶，破坏细胞壁使更多的多糖得到充分溶出。

王宗君［4］研究茶树菇多糖的提取，采用单因素试验得出，酶用量0.08%，温度45℃，酶解时间4h，料液比1：20，此条件下茶树菇多糖的提取率达到57.69%。

作者简介：朱晓霞（１９８２－），女（汉），硕士研究生，从事天然生物大分子研究。

糖类物质是地球上数量最多的一类有机化合物，是生命物质的组成成分之一。

糖类物质广泛地存在于生物界，特别是植物界。

糖类物质按干重计占植物的８３％～９０％，占细菌的１０％～３０％，动物的小于２％。

大量药理及临床研究证实：多糖有调节免疫、抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂等生理功能，可广泛应用于医药、保健品及功能食品，作为绿色生物医药产品具有广阔的市场前景。

目前多糖产品开发相当热门，也卓有成效。

多糖的生理功能与其纯度和化学结构有着重要的关系，多糖的提取纯化是其研究的基础。

因此科学高效地从动植物及微生物中提取、纯化其中的多糖成分是目前的核心问题。

本文对多糖制备常用提取与纯化方法，特别是一些新技术的应用进展进行了综述。

１多糖的提取纯化１．１常规方法提取１．１．１原料预处理提取前，必须破坏或抑制共存的水解酶，可采用丙酮、乙醚、乙醇等低极性溶剂，以破坏水解酶并分离脂溶性杂质。

１．１．２浸提一般采用不同温度的水或稀碱溶液提取。

浸提参数中，温度是影响多糖提取的主要因素，另外浸提固液比、浸提时间均影响提取率，可根据需要选取最佳工艺参数。

１．１．３过滤或离心分离提取液有的可以直接过滤，有的因提取液较黏稠不易过滤，往往用离心法除去不溶物。

１．１．４有机溶剂沉淀提取所得的滤液或上清液浓缩，加２～５倍量的有机溶剂，得粗多糖沉淀。

常用有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇及丙酮。

现有很多植物多糖的提取研究都是采取的常规水提法：大麦［１］中活性多糖提取、大枣［２］多糖提取、老头草［３］中多糖的含量测定、乌龙茶［４］多糖提取等。

朱晓霞，罗学刚（西南科技大学材料科学与工程学院，四川绵阳６２１０１０）多糖提取与纯化技术应用进展摘要：多糖由于它们独特的功能和低毒性，在保健食品和药品发展方面具有广阔的应用前景。

提取和纯化是制备多糖的关键。

目前用的提取方法有：常规水提法、超声波、微波辅助提取、超临界流体萃取；分离纯化技术有：色谱、膜分离。

粗多糖水提醇沉提取方法第一种方法：（1）玉米须原料用80%乙醇在78℃提取三次，去除色素、单糖和脂溶成分。

过滤，合并滤渣，使乙醇挥发干净，粉碎滤渣。

用100℃热水浸提干燥玉米须一小时，料液比1：15，提取三次。

合并提取液、过滤和浓缩，利用三倍体积80%乙醇醇沉。

（2）离心收集醇沉物(3000 ×g，10min)，然后用水溶解，并利用Sevag 方法去除游离蛋白质。

（3）脱去蛋白质的溶液再次用80%乙醇醇沉。

收集沉淀，先后用无水乙醇和丙酮溶液冲洗三次。

最后冷冻干燥，获得玉米须粗多糖。

Hot water extraction of crude polysaccharidesAll the corn silk raw materials were immersed in 80% (v/v) ethanol at 78℃ for three times to remove colored materials, monosaccharide and liposoluble constituents. The organic solvent was volatilized and the pretreated corn silk was obtained to crush. Dried ground corn silk (100 g) was extracted with water at 100℃(1:15 (w/v), 1 h, 3 times). The ext raction solutions were combined, filtered and concentrated, precipitate d by the addition of anhydrous ethanol to a final concentration of 80% (v/v). Precipitates were collected by centrifugation (3000 × g, 10 min), then dissolved with water, and subjected to the Savage method (chlorofor m: butyl alcohol, 4:1) to remove free proteins. The deproteinized solutio n was re-precipitated in 80% (v/v) ethanol. The precipitates were collect ed and successively washed with anhydrous ethanol and acetone. After freezing dried, the hot water extraction corn silk polysaccharides (PS) we re obtained.第二种方法Preparation of ILPSThe preparation of crude ILPS was carried out according to thereported method with some modifications (Xu e t al., 2012). Briefly,the powder of I. latifolia Thunb was pre-extract ed two times with85% aqueous ethanol solution (v/v) in a ratio of 1:15 (materialto ethanol solution, g/mL) at 80◦C for 1 h each, and the super-natant (containing colored materials, oligosaccharides and s mallmolecule compounds) was removed. The resulting residues were extracted three times with distilled water in a ratio of materialto wa ter 1:20 (g/mL) at 90◦C for 3 h each, and the extracts werecentrifu ged at 5000 rpm for 15 min. The supernatants were com-bined and concentrated by a rotary evaporator to a proper volume.The resulti ng concentrate was mixed with three times volume ofabsolute ethan ol, stirred vigorously and kept overnight at 4◦C. Theprecipitates wer e then collected by centrifugation at 5000 rpm for15 min, dissolved in distilled water, dialyzed 透析against distilled waterand lyophiliz ed, affording the crude ILPS.纯化：The crude ILPS was purified by chromatography of DEAEcellu lose-52 according to the reported method (Qiao et al., 2009a;Ye, W ang, Zhou, Liu, & Zeng, 2008). Briefly, 150 mg of crude ILPS wa s dissolved in 7.5 mL deionized water, and the solution was filtere d through a 0.45 _m membrane filter. The resulting ILPS solution wasthen loaded onto a column (2.6 cm ×30 cm) of DEAE cellu lose-52,and the column was stepwise eluted with deionized water, 0. 1,0.3 and 0.5 M sodium chloride (NaCl) solution at a flow rate of1.0 mL/min. The eluate was collected automatically (10 mL/tube)and the carbohydrate in each tube was determined by the phenol-sulfuric acid method (Dubois, Gilles, Hamilton, Rebers, & Smith,1956). The resulting fractions were pooled, concentrated, dialyzed 透析against deionized water and lyophilized, respectively, affording four fracti ons, named ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3 and ILPS-4.2.3。

水提-醇沉法提取大黄多糖工艺优化研究【摘要】目的确定大黄多糖的最佳提取条件。

方法以大黄多糖的含量为指标,以提取温度、提取时间、提取次数、料液比为因素,利用正交试验法进行试验设计,对传统水提-醇沉法提取大黄多糖的工艺进行优化研究。

结果大黄粗多糖得率最高的提取条件是:提取时间3 h,提取温度95℃,料液比1︰30;大黄粗多糖纯度最高的条件是:提取时间1 h,提取温度95℃,料液比1︰10;乙醇沉淀大黄多糖的最佳浓度是80%。

结论本方法实验结果可作为提取大黄多糖的工艺制定的依据。

【Abstract】Objective To determine the optimum extracting conditions of rhubarb polysaccharide.Methods By orthogonal test, take the content of rhubarb polysaccharide as standards, extraction temperature, extraction time,extraction times and ratio of material to liquid as factors, to optimize and study the process of extracting rhubarb polysaccharide through the traditional water solution and alcohol sedimentation.Results The optimum extraction condition of rhubarb thick polysaccharide has been established as follows:extraction time was 3.0 hours,extraction temperature was 95 ℃, and ratio of material to liquid 1:30.The optimum purity condition of rhubarb thick polysaccharide had been established as follows:extraction time was 1.0 h,extraction temperature was 95 ℃, and ratio of material to liquid 1:10.The best density of ethanol depositing rhubarb polysaccharide was 80%. Conclusion The experimental result of this method can be the basis of extracting rhubarb polysaccharide process.【Key words】Rhubarb;Polysaccharidek;Water solution and alcohol sedimentation;The process study大黄为廖科植物掌叶大黄(RheumpalmatumL.),唐古特大黄(Rheum tanguticumMaxim. ExBalf)或药用大黄(RheumofficinaleBaill)的干燥根及根茎,作为传统中药在临床上应用具有悠久的历史,其功效为泻下、健胃、清热解毒等。

专利名称：一种从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：苗明三
申请号：CN201310421147.3
申请日：20130916
公开号：CN103432202A
公开日：
20131211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及从半枝莲中提取降糖物质的方法及其应用，有效解决从半枝莲提取用于制备降糖药物的物质，方法是，将半枝莲粉碎成药粉，用8倍药粉重量的、体积浓度为75%的乙醇浸泡0.5h，回流提取2次，弃去滤渣，得提取液，提取液减压浓缩至无醇味，用乙醇调整药液醇浓度为95%，静置12h，沉淀弃去；上清液浓缩至无醇味，调整药液浓度为相当于含生药0.6g/ml，得样品液；样品液上AB-8型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，得洗脱液Ⅰ弃去；续用体积浓度为10%的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅱ弃去；继续用体积浓度为80%的乙醇洗脱，得洗脱液Ⅲ，减压回收乙醇，浓缩干燥，得半枝莲总黄酮，本发明原料丰富，制备方法简单，制备的半枝莲总黄酮具有降糖作用，有效用于制备降糖药物。

申请人：河南中医学院
地址：450008 河南省郑州市金水区金水路1号
国籍：CN
代理机构：郑州天阳专利事务所(普通合伙)
代理人：聂孟民
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半枝莲化学成分的提取和含量测定方法研究
杨连梅;刘量;胡荣;卜平
【期刊名称】《江苏中医药》
【年(卷),期】2010(042)002
【摘要】半枝莲的主要生理活性物质为黄酮类化合物,其中含量最多的是野黄芩苷.对其化学成分的提取方法最为传统的是溶剂提取法,随着中药现代化的发展,越来越多的新技术,如微波技术、超临界二氧化碳萃取法、大孔吸附树脂技术,也相继用于半枝莲化学成分的提取.时半枝莲化学成分的含量测定方法也很多,传统方法包括紫外分光光度法、比色法,许多新的技术也普遍用于含量测定,如HPLC法、毛细管电泳法、原子吸收光谱法等,在实践中取得了满意的结果.今后应充分利用现代分析方法与分离技术,同时与现代细胞学与分子生物学结合起来,重视多种技术的联合应用,加强对半枝莲不同生物活性提取物及其作用机制和靶点的研究,为充分利用半枝莲资源,进行创新药物的研究和开发奠定基础.
【总页数】3页(P78-80)
【作者】杨连梅;刘量;胡荣;卜平
【作者单位】扬州大学医学院,江苏,扬州,225001;扬州大学医学院,江苏,扬
州,225001;扬州大学医学院,江苏,扬州,225001;扬州大学医学院,江苏,扬州,225001【正文语种】中文
【中图分类】R282.71
【相关文献】
1.半枝莲粗多糖的提取及总糖的含量测定 [J], 邢文善;纪耀华;张彦彤;王秋香
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3.半枝莲化学成分及提取物抗肿瘤作用的研究现状 [J], 张秀娟;杨姗姗
4.中药半枝莲有效成分的提取及含量测定 [J], 何文涓;俞佳慧
5.半枝莲中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定 [J], 薛梅;王自军;周静
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