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免疫组化技术原理抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。
众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。
免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，形成抗原-一抗-二抗复合物，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。
组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类（常用）1、免疫荧光方法最早建立的免疫组织化学技术。
它利用抗原抗体特异性结合的原理，先将已知抗体标上荧光素，以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原，在荧光显微镜下观察。
当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光，从而可确定组织中某种抗原的定位，进而还可进行定量分析。
由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便，所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。
2、免疫酶标方法免疫酶标方法是继免疫荧光后，于60年代发展起来的技术。
基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。
免疫1酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存，适合于光、电镜研究等。
免疫组化一抗二抗原理一、免疫组化技术原理免疫组化技术是一种重要的生物化学检测方法，通过使用一抗和二抗的相互作用，来检测目标物质在细胞或组织中的分布和定量。
其原理主要包括以下几个步骤：1. 抗原表达和固定：首先，需要提取或制备出待检测物质的抗原，并将其固定在载玻片或微孔板上。
2. 样品处理：将待检测的细胞或组织样品处理，使其表达出目标物质。
3. 一抗处理：将经过特异性识别的一抗加入样品中，一抗能够与目标物质发生特异性结合，并形成抗原-抗体复合物。
4. 二抗处理：加入与一抗来源物种不同的二抗，二抗能够与一抗发生特异性结合，并进一步增强抗原-抗体复合物的信号。
5. 检测信号放大：通过连接二抗的酶标记物或荧光标记物，可以进一步放大信号。
6. 显色或荧光检测：通过加入适当的显色剂或荧光探针，可以将特定信号转化为可见的颜色或荧光。
7. 显微镜观察：使用显微镜观察和分析样品中的标记信号分布情况，从而确定目标物质的位置和数量。
二、免疫组化技术应用免疫组化技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
具体应用包括：1. 细胞和组织定位：通过标记特定抗原或蛋白质，可以确定其在细胞或组织中的定位，帮助研究者了解其功能和相互作用。
2. 疾病诊断：免疫组化技术可以检测疾病标志物，如癌症标志物、病毒抗原等，用于早期诊断和病情监测。
3. 药物研发：免疫组化技术可用于评估药物在细胞或组织中的靶点表达和药效。
4. 免疫组织化学：通过标记细胞或组织中的特定分子，可以帮助鉴定组织类型、识别病理变化以及评估治疗效果。
5. 免疫组化芯片：免疫组化芯片技术结合了高通量技术和多路复用的优势，可以快速、准确地检测多个标志物，有望在个性化医疗中得到广泛应用。
三、免疫组化技术的发展前景随着生物技术和分子生物学的不断发展，免疫组化技术也在不断创新和改进。
未来的发展方向主要包括：1. 自动化和高通量：通过引入自动化设备和流程，提高实验的标准化和效率，同时实现多个标志物的高通量检测。
免疫组化免疫组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。
免疫组化试剂盒：Vector Laboratories公司VECTASTAIN@ ABC免疫组化试剂盒：Vector公司于1977年率先开发出了生物素-亲和素系统，该产品系列是检测方法上的重要革命。
其后，公司发展出ABC技术（Avidin : Biotinylated Enzyme Complex Technology，亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术），并建立了著名的VECTASTAIN®ABC系统，目前，该系统被视为最灵敏、最可靠与最有效的染色系统，并被广泛应用于免疫组织化学、免疫电镜、原位杂交与凝集素化学中。
ABC技术利用生物素和卵白素具有极高亲和性的生物学特征，将卵白素和生物素化辣根酶按照一定的比例混合，形成ABC复合物。
该法亦被称作三步法，第一步为biotin化二抗和一抗结合，第二步为avidin（亲和素，A液）和二抗上的biotin结合，第三步为HRP偶联的biotin（B液）和avidin结合，而HRP再催化底物显色完成染色。
试剂盒组份：2ml试剂A（Avidin DH溶液）2ml试剂B（生物素化的酶）1ml生物素化的二抗（1.5mg anti-IgG/0.5mg anti-IgM抗体/2.1mg通用抗体）3ml阻断血清其中standard试剂盒只含有试剂A和试剂BVECTASTAIN®ABC系列产品VECTASTAIN®ABC-HRP Kits（辣根过氧化物酶）最通用的系统，使用范围广VECTASTAIN®ABC-AP Kits（碱性磷酸酶）灵敏度较高，染色密度较低，适于形态学染色非常重要的组织VECTASTAIN®ABC-GO Kits（葡萄糖氧化酶）灵敏度较低，适用于组织内源性HRP或AP 含量比较高的组织，常与HRP或AP系统配合进行双染。
免疫组化ABC试剂盒(VECTOR)操作流程一、工作液准备1、封闭血清（黄色小瓶子）：3滴原液+10mL的缓冲液混合，装入黄色的大瓶子；2、生物素二抗（蓝色小瓶子）：1滴原液+10mL的缓冲液混合，装入蓝色的大瓶子；3、ABC复合物：2滴A液加入10mL的缓冲液混合后，加入2滴B液混匀后装入标有ABC 的大瓶子。
此处反应需要30min。
1滴大概50uL4、试剂（自备）二甲苯、PBS缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、一抗稀释液：3%BSA in TBS，pH7.4DAB工作液：1ml PBS加入50ul DAB stock solution 、50ul Hydrogen Peroxide solution充分混匀二、步骤1.脱蜡和水化脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。
1）组织切片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；2）无水乙醇中浸泡5min；3）95%乙醇中浸泡5min；4）70%乙醇中浸泡5min；2.PBS洗两次各5min。
3.抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片。
煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织切片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。
4.PBS洗5min。
5.用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10min，PBS洗3次，每次2min。
6.滴加封闭血清工作液，室温封闭20min，以减少非特异背景，无需冲洗只需吸去多余血清。
7.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。
8.PBS洗3次每次2min。
9.滴加生物素二抗工作液，室温度孵育30min。
10.PBS洗3次每次2min。
11.滴加ABC复合物（提前30min，A液与B液等量混合），室温孵育30min。
12.PBS洗3次每次2min。
13.DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
⼆步法抗兔、⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒FOR RESEARCH USE ONLY.Code No:GK500705Storage: Store vial at 2-8.℃Intended UseChemMate? EnVision? Detection Kit, Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse, is intended for use inimmunocytochemistry together with the TechMate? and Autostainer Instruments. The kit is employed in atwo-step procedure where the first step is incubation of the tissue with an optimally diluted primary rabbit ormouse antibody, and the second step is incubation with the ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse(ENV) reagent of the kit. This reagent is a peroxidase-conjugated polymer, which also carries antibodies torabbit and mouse immunoglobulins. The reaction is visualized by the ChemMate? DAB+ Chromogen alsoincluded in the kit.Reagents Materials providedBottle A ChemMate? DAKO EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV)5 mL, ready-to-useDextran coupled with peroxidase molecules and goat secondary antibody molecules against rabbit andmouse immunoglobulins. In buffered solution containing stabilizing protein and preservative.Bottle B ChemMate? Substrate Buffer2*6.25 mLBuffered solution containing hydrogen peroxide and preservative.Bottle C ChemMate? DAB+ Chromogen1*0.25mL, 50 x concentrated3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride in organic solvent. The colour of this reagent may vary from strongviolet to colourless without having any influence on the performance of the kit.Precautions ：1. Bottle A , ChemMate? EnVision?/HRP , Rabbit/Mouse (ENV), contains material of animal origin and it cannot be excluded that trace amounts of human material could be present due to manufacturing procedures. As with any product derived from biological sources, proper handling should be used.2. Do not expose Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen or the Substrate Working Solution (CHROM) to strong light.3. Bottle C , ChemMate? DAB+ Chromogen contains 1.5% 3,3’-diaminobenzidine tetrahydrochloride, and is labelled: Harmful.Storage ：Store the kit at 2-8 . The prepared Subs ℃trate Working Solution (CHROM) should be stored at 2-8 and used℃within 5 days.Quality Control ： Each staining run should include a known positive control specimen to ascertain a proper performance of all the applied reagents. If the positive control specimen fails to demonstrate positive staining, labelling of test specimens should be considered invalid. A negative control reagent should be used with each specimen to identify any non-specific staining. If non-specific staining cannot be clearly differentiated from the specific staining, the labelling of the test specimen should be considered invalid.Please contact us for more information about this product.EnVision? Detection Kit,Peroxidase/DAB, Rabbit/Mouse⼆步法抗兔/⿏通⽤型免疫组化检测试剂盒剂型：⼯作液编号：GK500705适⽤：⼀抗为兔抗或⼩⿏抗的免疫组化检测储存：2-8℃该试剂盒是⼀个特别敏感的⼆步法免疫组化试剂盒，适合与兔抗抗体或⼩⿏抗抗体配⽤。
常用免疫组化试剂介绍概述免疫组化（IHC）是一门通过检测特定抗原在组织切片中的表达程度来揭示组织形态和细胞化学等方面信息的技术。
由于IHC是一种定性分析技术，所以该方法需要与定量技术（如分子生物学）结合使用，从而得到更准确的数据。
IHC涉及到多种试剂，其标记原理和表现形式各异，能够检测的抗原种类也不同。
本文将对常用的IHC试剂进行介绍，以此为指导，让大家更好地了解和应用IHC技术。
常用的免疫组化试剂抗原修复试剂抗原修复试剂（Antigen Retrieval）用于在组织样本中使细胞内蛋白与抗体亲和性和特异性增加。
这种试剂可通过热处理（如高压）或化学处理（如酶样蛋白和酸性处理）来复原被检测抗原的结构和功能。
常用的抗原修复试剂包括：EDTA、Tris、Citrate等。
原位杂交试剂原位杂交试剂（In Situ Hybridization）可检查DNA或RNA分子的特异性结合情况。
这种试剂可将RNA等分子与特定热稳定的蛋白质结合，用于检测基因突变等。
常用的原位杂交试剂包括：流式胶体金试剂、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、双链RNA原位杂交等。
细胞计数试剂细胞计数试剂（Cell Counting）用于获得细胞数量或结构变化。
这种试剂通常用于确定某一类细胞的数量、细胞计数和分离、细胞生长和分裂的应用。
常用的细胞计数试剂包括：皮质醇、14C-labeled thymidine等。
细胞信号转导试剂细胞信号转导试剂（Cell Signaling）用于研究细胞分子级别的通讯系统，并采取措施以确定物质在细胞内的作用机理。
常用的细胞信号转导试剂包括：抗体、试剂原和阻断类似物等。
同型抑制剂同型抑制剂（Isotype Control）用于在IHC实验中作为实验设计的对照组，以检测所观察的抗原与探测剂结合的特异性表现。
常用的同型抑制剂包括：IgG1、IgG2a和IgG2b等。
情况控制试剂情况控制试剂（Condition Control）用于确定IHC试验的最佳条件，包括温度、缓冲液、酸碱程度等。
免疫组化操作步骤一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
（一）、仪器设备1. 18cm不锈钢高压锅或电炉或用微波炉.2.水浴锅（二）、试剂1. PBS缓冲液（ph7."2―7."4）：NaC137mmol/L，KCl2."7mmol/L ,Na2HPO44."3mmol/L, KH2PO41."4mmol/L.2．"0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液（CB,ph6."0,1000ml）：柠檬酸三钠3g,柠檬酸0."4g。
3．0."5mol/L EDTA缓冲液（ph8."0）：700ml水中溶解186."1g EDTA& 8226;2H2O,用10mmol/L NaOH调至ph 8."0,加水至1000ml.4. 1mol/L的TBS缓冲液（ph8."0）：在800ml水中溶解121gTris碱，用1N的HCl调至pH 8."0,加水1000ml。
5.酶消化液：a.0."1%胰蛋白酶:用0."1%CaCl 12(ph7."8)配制。
b.0."4%胃蛋白酶液：用0."1N的HCl配制。
6. 3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制7.风裱剂：a.甘油和0."5mmol/L碳酸盐缓冲液（pH9."0–9."5）等量混合b油和TBS(PBS)配制8．"TBS/PBS PH9."0–9."5,适用于荧光纤维镜标本;ph7."0-7."4适合光学纤维标本（三）、操作流程1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。
免疫组化原理步骤及试剂免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种广泛应用于生物医学领域的实验技术，用于检测组织切片中特定抗原的分布和表达水平。
它结合了免疫学和组织学的原理，能够在组织切片上定位和检测抗原，并通过染色方法将抗原可视化，从而实现对抗原的定性和定量分析。
免疫组化实验的步骤通常包括固定、脱脂、抗原修复、抗体和检测步骤。
下面将详细介绍每个步骤的操作和常用试剂。
1.组织固定：组织固定的目的是保持组织结构完整并固定细胞的抗原。
常用的固定试剂包括10%中性缓冲福尔马林（10% neutral buffered formalin，NBF）和乙醇等。
2.脱脂：脱脂是将组织切片中的脂质去除，以提高抗体对抗原的结合效率。
常用的脱脂试剂包括二甲苯、甲醛和乙醚等。
3.抗原修复：抗原修复是为了使被固定的组织恢复原样，增强抗原的可检测性。
抗原修复的方法包括热处理、酶解法和pH调整等。
常用的抗原修复试剂包括热解剂例如EDTA缓冲液、Tris-EDTA缓冲液，酶解剂例如胰蛋白酶和蛋白酶K，以及甲酸、盐酸等酸性溶液。
4.抗体：5.检测：检测步骤用于将抗原-抗体复合物可视化。
这通常通过染色方法完成。
常用的染色方法包括免疫酶标记、免疫荧光和免疫金标记等。
免疫组化实验所需的试剂种类繁多，下面列举一些常用的试剂：1. NBF（10% neutral buffered formalin）：用于组织固定，保持组织形态完整。
2.二甲苯：用于脱脂步骤，去除组织中的脂质。
3.甲醛：用于脱脂步骤。
4.乙醚：用于脱脂步骤。
5.EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
6. Tris-EDTA缓冲液：用于抗原修复的热解剂。
7.胰蛋白酶：用于抗原修复的酶解剂。
8.蛋白酶K：用于抗原修复的酶解剂。
9.盐酸：用于抗原修复的酸性溶液。
10.一抗：选择特异性良好的一抗抗体，常用的有多克隆和单克隆抗体。
11.二抗：用于检测一抗结合的抗体，常用的二抗有反兔、反小鼠或反人的多克隆抗体。
免疫细胞化学常用试剂介绍佚名一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。
但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。
某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。
因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。
另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4·2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。
第一抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。
种类包括单克隆抗体和多克隆抗体；第二抗体是能和抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。
二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。
用抗AIV H5亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体。
免疫组化是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。
样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
elisa（酶联免疫吸附试验）用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。
Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
western bolt先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
免疫学三大工具，免疫组化、Western、ELISA，分别用于定位，定性和定量。
以下western 和Elisa的区别不是原创，是找的资料。
western blotting 可以看到特异性的条带，但是定量比较烦elisa可以直接读出浓度，但是如果抗体有非特异性结合，那得到的数值就不可信。
WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。
II 型胶原免疫组化试剂盒型胶原免疫组化试剂盒（（IHC ） Collagen II IHC Assay说明书修订日期说明书修订日期：：2015.07.13Cat number ：KGA357 Store at 2-8℃ for 6 monthsFor Research Use Only （科研专用）一、试剂盒说明本试剂盒可用于免疫组织化学方法以显示人、大、小鼠来源的组织样本Collagen II 抗原分布。
本试剂盒适用于常规福尔马林固定石蜡包埋切片、冰冻切片、培养固定的细胞涂片等。
凯基即用型一步法免疫组化检测试剂盒与常规免疫组化染色试剂盒相比，具有高灵敏性、高特异性及操作简便的优点。
多个HRP 聚合物直接与二抗相连，大大放大了抗原抗体结合的信号，减少了孵育步骤，孵育时间缩短为10分钟。
试剂盒不含有生物素，完全避免了内源性生物素造成的背景影响。
试剂盒提供的DAB 显色试剂为增强型显色试剂，且自带稀释液，避免了由于水质的不同对DAB 显色造成的影响；与一般DAB 试剂相比，增强型的稳定性显著提高，显色更醒目，敏感性更高。
二、试剂盒组份组份Cat ：KGA357 50 tests 备注 Collagen II 兔多抗 50 µl 2-8℃/-20℃ 增强剂3 ml HRP 聚合物 (即用型)3 ml 2-8℃试剂A ：20×DAB 底物缓冲液A 160 µl 试剂B ：20×DAB 底物缓冲液B 160 µl 试剂C ：20×DAB 底物缓冲液C160 µl2-8℃，避光备注备注：：抗体在2-8℃可以保存6个月个月，，长期保存可以分装保存于-20℃。
三、试剂盒以外自备试剂和仪器二甲苯、乙醇、蒸馏水或去离子水、3%H 2O 2-甲醇、10%山羊血清封闭液、10 mM PBS （pH 7.4）、免疫组化笔、苏木素染液、封片胶、显微镜四、使用注意事项1. 检测标本时需同时做阴性对照和阳性对照。
免疫组化实验试剂耗材大全华越洋---------------------------- 0.1%胰蛋白酶消化液waryong 10ml 110多聚甲醛merk 25g 504%多聚甲醛waryong 500ml 22010X多聚赖氨酸waryong 10ml 260抗荧光衰减封片剂waryong 25ml 230防脱载玻片waryong 50片310mayer'苏木素染液（免疫组化）waryong 100ml 410封闭用正常绵羊/山羊/兔/人血清waryong 10ml 75弗氏不完全佐剂sigma 10ml 180弗氏完全佐剂sigma 10ml 200柠檬酸钠缓冲液0.01mol/L PH6.0 waryong 1L 10DAB amresco 1g 13520XDAB显色液 A，B液各1.5ml waryong 3ml 95NBT amresco 100mg 95BCIP amresco 100mg 310BCIP/NBT底物显色试剂盒waryong 25ml 210PBST(PH7.4)抗体稀释液waryong 1ml 25一抗稀释液waryong 100ml 390HRP标记抗体稀释液waryong 100ml 390AP标记抗体稀释液waryong 100ml 390荧光抗体稀释液waryong 50ml 110免疫组化名称规格价格Super Polymer-二步法IHC试剂盒3ml35818ml1598兔Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998鼠Streptavidin-HRP试剂盒3ml19818ml998兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒3ml25818ml1198山羊抗兔IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml6818ml298山羊抗兔∕鼠IgG,Biotin(IHC工作液)3ml9818ml498 Streptavidin-HRP(IHC工作液)3ml9818ml49860ml258 AEC底物显色试剂盒20ml98 BCIP∕NBT碱性磷酸酶显色试剂盒(40x)40ml198 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂40ml229改良型苏木素(IHC常用复染试剂)10ml68柠檬酸缓冲液(IHC抗原修复液,100x)100ml68EDTA缓冲液(IHC抗原修复液，50x)100ml68封闭用正常山羊血清工作液(免疫组化封闭液)10ml68内源性过氧化物酶封闭液10ml68内源性碱性磷酸酶封闭液10ml68Biotin标记抗体稀释液20ml中性树胶100g98水性封片剂10ml98 Super Polymer-二步法IHC试剂盒（带DAB显色液）3ml39818ml1698兔Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098鼠Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml25818ml1098兔∕鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒（带DAB显色液）3ml29818ml1298。
常用免疫组化试剂介绍完整版免疫组化试剂是一类用于检测细胞和组织中特定分子的试剂。
它们能够与目标分子发生特异性的结合反应，通过显色、荧光等方式实现目标分子的定位和检测。
常用的免疫组化试剂有抗体、底物、荧光染料等。
下面将详细介绍常用的免疫组化试剂。
一、抗体单克隆抗体：单克隆抗体是由单个克隆的B细胞分泌的抗体组成。
它们具有更高的特异性和一致性，适用于特定的免疫组化实验。
单克隆抗体一般通过酶联免疫吸附试验或杂交瘤技术获得。
二、底物底物是一种被特定酶催化后能够产生染色或荧光信号的化学物质。
在免疫组化实验中，常用的底物有DAB、VIP、AP、HRP等。
DAB：DAB（3,3'-二氨基联吡啶）是一种常用的免疫组化染色底物。
当DAB与过氧化物酶结合后，在特定条件下会产生棕色沉淀物，用于检测目标分子的位置。
VIP：VIP（维珍纳胶体阳离子）是一种特殊的底物，其在经过过氧化物酶催化后，形成带有阳离子电荷的胶体颗粒。
VIP用于染色后，可以形成黑色沉淀物。
AP：AP（碱性磷酸酶）是一种常用的底物，可以和特定基质反应生成可见或荧光信号。
AP基质有两种常用的类型，一种是快速红色溶液（Fast Red），另一种是紫色溶液。
HRP：HRP（过氧化物酶）是一种广泛使用的底物，在过氧化物酶的作用下可以产生明亮的荧光或染色信号。
HRP染色通常呈现为褐色或黑色。
三、荧光染料荧光染料是一种通过吸收特定波长的光线并在另一个波长下发射荧光的化合物。
免疫组化实验中常用的荧光染料有FITC、TRITC、Cy3、Cy5等。
FITC：FITC（荧光异硫氰酸酯或荧光同硫氰酸酯）是一种常用的绿色荧光染料，其在激发波长为488nm的波长下产生绿色荧光。
TRITC：TRITC（荧光异硫氰酸酯）是一种常用的红色荧光染料，其在激发波长为568nm的波长下产生红色荧光。
Cy3：Cy3是一种荧光发色团，其在激发波长为550nm的波长下产生黄绿色荧光。
Cy5：Cy5是一种荧光发色团，其在激发波长为650nm的波长下产生红色荧光。
1、一抗选择要点(1)选择单克隆还是多克隆抗体。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色(可以通过封闭等有所避免)。
(2)种属来源。
一般家兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，但也有另外。
这条主要要与后面的二抗来源相匹配。
(3)实验目的是检测什么种属的抗原，即speciesreactivity。
这一点很重要，一般说明书上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。
(4)能否做免疫组化。
一般一抗说明书都会注明做WB、IHC、ICC、IF等，建议最好选择注明的抗体，因为一般都是经过文章证明。
(5)检测标本类型。
用于检测石蜡切片还是冰冻切片，一般能做石蜡切片的抗体，可能都可以用来检测冰冻切片，但能做冰冻切片的抗体，不一定能检测石蜡切片中的抗原。
(6)生产厂家。
国外著名抗体生产商原装抗体质量一般没问题，尤其是美国Lifespan公司生产的IHCPlusAntibodies系列抗体，全部经过病理组织切片检测验证，100%质量保证，国内北京西美杰科技有限公司有售，就是价格有点贵；而国内分装厂家用的一抗工作液，价格便宜，但有时结果的稳定性和重复性稍差，不同批次重复性较差。
(7)价格与质量的矛盾。
我个人认为一抗原装质量可能会好点，因为许多一抗避免反复冻融，且在稀释液中稳定性较差(若时间长)，但价格较贵。
2、二抗选择要点(1)种属来源。
主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。
有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
