HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent

HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）说明书【产品名称】通用名称：HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）英文名称：Zyto Light SPEC HER2/CEN17 Dual Color Probe Kit【包装规格】货号Z-2020-5：5测试/盒货号Z-2020-20：20测试/盒【预期用途】本试剂盒用于检测经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋的乳腺癌组织切片中HER2基因的扩增状态。

本试剂盒尤其适用于免疫组织化学HER2（ERBB2）蛋白检测结果为不确定的标本的检测。

HER2基因扩增是确定靶向治疗适应症的重要指标，基于本试剂盒未与具体药物联合进行临床评价，临床医生应在本检测结果基础上结合患者病情、药物适应症、治疗反应及其他检测结果对患者的个体化治疗进行综合判断。

【检验原理】荧光原位杂交技术（Fluorescent In Situ Hybridization, FISH）是一种以荧光标记的核酸探针与组织中的特异核酸分子进行杂交的技术，其基本原理是利用荧光标记的核酸探针在变性后根据碱基互补配对原则准确识别待检样本中的靶核酸序列，经退火复性后形成靶DNA与核酸探针杂交体，通过荧光检测系统（荧光显微镜）直接观察和分析染色体或基因的数量或结构的状态。

本试剂盒内HER2/CEN17双色探针液（以下简称为探针）设计序列来源图见图1和图2。

将样本经福尔马林固定、石蜡包埋后制成4±1μm厚度的切片，固定于粘性玻片上。

切片经预处理后，将HER2/CEN 17双色探针液与待测样本DNA变性、杂交。

杂交完成后，通过一系列洗涤缓冲液洗去未结合探针，并用DAPI（4，6-二咪基-2-联苯基吲哚）对样本中的细胞核复染成蓝色。

DAPI是一种蓝色荧光素，为DNA特异性染色剂。

探针杂交信号可通过配置相应滤光片的荧光显微镜进行观察。

在显微镜下观察细胞核内的荧光信号，对HER2基因（绿色荧光染料ZyGreen：激发波503nm，发射波528nm，同FITC）和CEN17着丝粒（橙红色荧光染料ZyOrange：激发波546nm，发射波572nm，同罗丹明）信号进行计数，计算比值（HER2/CEN17），从而判断HER2基因状态。

her-2 免疫组化评分标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：HER-2是一种重要的癌症标志物，广泛应用于乳腺癌和胃癌的免疫组化检测中。

HER-2（人类表皮生长因子受体-2）是一种膜上受体酪氨酸激酶，可以促进细胞生长和分化，参与细胞增殖和生存信号传导途径，其异常表达或过度表达与癌症的发生和发展密切相关。

在临床治疗中，HER-2免疫组化评分标准是一个重要的判断指标，通过对HER-2表达水平的评估，可以指导临床治疗方案的选择和预后的判断。

HER-2的免疫组化评分标准主要根据HER-2的膜表达强度和细胞膜的阳性率来进行分类评分。

主要有四个等级：0级、1级、2级和3级，具体标准如下：0级：不存在HER-2的膜表达，细胞膜完全阴性；1级：细胞膜显示很弱或微弱的不定性阳性；2级：细胞膜显示强阳性，疑似HER-2过表达；3级：细胞膜显示强烈阳性，明显HER-2过表达。

根据不同的评分结果，可以确定HER-2在肿瘤组织中的表达水平，从而为临床治疗方案的选择提供重要依据。

通常情况下，0级和1级的患者被认为是HER-2阴性，对HER-2靶向治疗药物无效；而2级和3级的患者则判定为HER-2阳性，可以考虑使用HER-2靶向药物进行治疗。

准确评估HER-2的表达水平对于个体化治疗方案的制定是至关重要的。

在进行HER-2免疫组化评分时，需要注意一些技术操作规范，以确保结果的准确性和可靠性。

必须选择合适的切片，并严格按照试剂盒说明书中的操作步骤进行染色和显微观察。

需要有经验的专业技术人员进行操作，确保染色结果清晰可靠。

在观察和评分过程中，要注意细胞膜的染色强度和阳性率，并结合组织学形态学特征进行分析和判断，避免评分的主观性和片子之间的差异性。

除了HER-2免疫组化评分标准外，还有其他方法可以用来检测HER-2的表达水平，例如原位杂交法、蛋白质芯片技术等。

这些方法都可以对HER-2的表达进行定量或定性分析，为临床治疗提供更多的参考依据。

ICS11.100CCS44CASME中国中小商业企业协会团体标准T/CASME XXXX—2023人类HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）Human detection kit for analysis of HER2gene abnormalities（fluorescent in situhybridization）（征求意见稿）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施目次前言 (II)1范围 (1)2规范性引用文件 (1)3术语和定义 (1)4要求 (1)5试验方法 (2)6标识、标签、使用说明书 (3)7包装、运输和贮存 (4)前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，本文件 3.2的相关内容涉及到(CN103409504B)《一种用于检测Her2基因不含重复序列的FISH探针、试剂盒及其检测方法》发明专利的使用。

本文件的发布机构作为此项专利的持有人愿意同任何申请人在合理且非歧视的条款和条件下，就专利授权许可进行谈判。

该专利持有人的相关信息可以通过以下联系方式获得：专利申请人或受让人：武汉康录生物技术股份有限公司。

联系地址：武汉东湖新技术开发区高科园三路9号武汉光谷精准医疗产业基地一期(全部自用)8号厂房1-4层（1)厂房号。

联系人：联系电话或邮箱：请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。

本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由武汉康录生物技术股份有限公司提出。

本文件由中国中小商业企业协会归口。

本文件起草单位：武汉康录生物技术股份有限公司、宝日医生物技术（北京）有限公司、赛默飞世尔（苏州）仪器有限公司、宝生物工程（大连）有限公司。

本文件主要起草人：孙华、付杰、陈刚、于福功。

人类HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）1范围本文件规定了人类HER2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）的术语和定义、要求、检验方法、使用说明、标志、标签以及包装、运输、贮存。

HER-2基因扩增检测试剂盒（荧光原位杂交法）标准化操作流程1、预期用途用于检测乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况°1.1临床适用人群：临床上确诊为乳腺癌的患者。

1.2不适用的情况：未患有乳腺癌的患者。

1.3临床应用定位：用于检测患者乳腺癌组织细胞中的HER-2基因扩增情况，为乳腺癌的临床治疗和预后评估提供参考2、仪器配置要求荧光显微镜的配置包括：10x目镜，10x. 40x物镜和100x油镜。

建议顾客使用探针前向滤片组供应商了解所使用的滤片组的详细情况，以便选择与标记荧光染料相适应的滤片组。

绿色荧光：激发波长为490nm,发散波长为516nm,与FITC类似橘红色荧光：激发波长为551nm,发散波长为572nm,与rhodamine类似。

移液器，振荡器，微型离心机，分析天平，高压灭菌锅，3、耗材要求玻片，染缸，保子，无菌带滤芯吸头、离心管，无粉一次性乳胶手套。

4、责任人基因扩增实验室室长负责技术指导和质量监督。

5、执行人操作人员应经过专业培训，具有合格的操作技能的检验专业技术人员6、检测原理乳腺癌组织样本，经处理后可用于荧光原位杂交分析。

杂交操作流程包括：细胞核中核酸DNA与探针位点特异性荧光原位杂交探针在高温下变性成单链脱氧核糖核酸，在37C环境中，这些己变性成单链的样本及探针核酸根据碱基互补的原则进行特异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸，洗涤非特异性杂交后，探针上标记的荧光信号既可在荧光显微镜下被检测。

本试剂盒包含一组探针：HER2（绿色）位点和CEN17 （红色）位点及FTSH操作配套试剂。

正常细胞信号方式：每个细胞显示两个绿色信号及两个红色信号。

异常细胞信号方式：细胞中若出现三个及以上绿色信号且红色信号不小于两个，则提示HER2基因扩增。

7、试剂来源北京鑫诺美迪基因检测技术有限公司8、样本要求福尔马林固定、石蜡包理的乳腺癌组织和细胞。

9、标准操作程序9.1乙醇溶液（70%乙醇、90%乙醇）将700ml、900ml无水乙醇用去离子水分别稀释至1L,使用期间2-8°C储存。

大鼠表皮生长因子受体2(Her2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书产品编号：E1867r2. 微量加液器及吸头，EP管3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。

实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。

空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。

每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

E-mail:Website: 2-step plus Poly-HRP Anti Rabbit/Mouse IgG Detection SystemCat. No: E-IR-R211Size: 3 mL/ 6 mL/ 18 mL产品编号产品名称 3 mL 6 mL 18 mL Storage E-IR-R211A 3% H2O2 3 mL 6 mL 18 mL 2~8°CE-IR-R211B Polymer Helper (Ready-to-Use) 3 mL 6 mL 18 mL 2~8°CE-IR-R211C Polyperoxidase-anti-Mouse/Rabbit IgG (Ready-to-Use) 3 mL 6 mL 18 mL 2~8°C说明书一份产品简介Elabscience 公司最新推出的二步法免疫组化试剂盒，将二抗的单价Fab 片段和过氧化物酶HRP 聚合在一起，替代传统方法中的二抗和三抗，直接放大抗原抗体结合的信号，既保留了抗体特异性结合抗原的能力，又可有效地避免聚合分子过大而造成的空间位阻。

与传统的SP三步法相比，此试剂盒具有简单、快速、敏感等特点，试剂盒不再使用生物素，避免了由于内源性生物素所造成的背景染色。

本产品可用于检测一抗是Rabbit和Mouse来源的单克隆抗体或多克隆抗体，本品独特的聚合物辅助剂有利于大分子的检测系统更好地结合所检测的一抗分子。

此检测系统是目前已知的灵敏度最高的免疫组化检测系统。

使用说明1.脱蜡、水化组织切片。

2.根据所应用的抗原抗体要求，对组织切片进行抗原修复。

3.加E-IR-R211A 3% H2O2，孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。

4.PBS或TBS 冲洗，3分钟×3次。

5.滴加适当稀释的一抗，室温或37°C孵育1~2小时或4°C过夜（后37°C复温30 min），PBS 或TBS冲洗，3分钟×3次。

雌二醇化学发光免疫检测试剂盒使用说明书( 美国DRG 编号: CLA-4664 规格：96T)企业名称：德国DRG诊断设备有限公司地址：德国玛堡市斐恩贝塔思路18号1简介1.1预期用途此DRG 化学发光免疫检测试剂盒可用于血清和血浆中雌二醇的体外定量检测.1.2前言（略）2实验原理此CLIA检测试剂盒采用化学发光免疫检测法,基于竞争法原理.微孔内预先包被有兔抗雌二醇分子特性性结合位点的多克隆抗体.患者样本中内源性雌二醇与辣根过氧化物酶(HRP)标记的雌二醇（酶联物）竞相与预包被的抗体结合。

孵育后，洗板洗去未结合的酶联物.结合的过氧化酶复合物（酶联物）与患者样本中雌二醇的量成反比.加入底物液后,发射光的强度与样本中雌二醇的浓度成反比3注意事项1.试剂盒仅供体外诊断用2.试剂盒相关有害物质的信息请参阅物料安全数据单（MSMD）3.试剂盒中的所有试剂包括人血清/血浆对HIV/II，HbsAg和HCV已检测为阴性，但所有的试剂在使用和处理的过程中都应当作潜在生物有害物质进行处理4.勿用嘴移液,同时避免样品和试剂接触皮肤和试剂.5.实验区内禁止饮食,化妆6.处理试剂和样品时应戴一次性手套。

微生物污染可能会导致结果失败7.按照相应的国家生物安全管理条理进行操作8.不要使用过期的试剂,有效期见试剂标签9.所有试剂的量都应按说明来，使用校正的移液器和发光仪可得到最佳的结果10.发光底物液（试剂A和试剂B）对光感染,应避光瓶装保存.11.不要混合使用不同批次的试剂、板条，即使是同一批次不同板条的也不建议。

试剂盒的运输和贮存环境不同可能会导致结果有轻微的变化12.化学物质、即用试剂或稀释试剂，需根据相关国家生物危害安全条例或规范，视为潜在有害物质处理。

13.产品的物料安全数据单（MSMD）可直接向DRG索取。

物料安全数据单（MSMD）符合EU-Guideline 91/155 EC4试剂盒组成4.1提供的试剂1.微孔板，12x8(可拆),96孔包被有抗雌二醇抗体（兔多抗）2.标准品，（标准品0-5）,6瓶，1ml，即用浓度为：0 – 25 – 100 – 250 – 500 - 1000 pg/mL单位换算: 1 pg/mL = 3.67 pmol/L含0.3% Proclin、0.005%硫酸庆大小诺霉素作防腐剂3.酶联物,1瓶, 12 mL,即用辣根过氧化物酶(HRP)标记雌二醇含0.3% Proclin、0.015% BND、0.010% MIT作为防腐剂4.化学发光底物液试剂A，1瓶，2ml，注意：光敏感试剂B，1瓶，2ml，注意：光敏感试剂C，1瓶，3ml见“试剂准备”5.洗涤液，1瓶，30ml，(40倍浓缩)见“试剂准备提示：额外的样品稀释液向DRG公司另购4.1.1实验所需器材(但本试剂盒没有提供)1.化学发光仪2.各种规格的标准精密移液管3.吸水纸4.蒸馏水或去离子水4.2存储条件及稳定性未开封的试剂在2-8℃下可保存至有效期，不要使用过期的试剂打开的试剂必须保存在2-8℃，微孔板也必须保存于2-8℃，一旦打开了微孔板的袋子，需小心地将其重新密封开封的试剂盒如按以上描述的贮存条件可保存2个月4.3试剂准备使用前，将所有试剂和所需微孔板平衡至室温洗涤液加30 mL浓缩洗涤液至1170 mL 去离子水中,制成总体积为1200 mL的稀释洗涤液。

乳腺癌HER2 FISH检测-检测意义、建议及标本准备HER2与乳腺癌乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%～4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。

临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。

HER2基因(又名HER2/neu，c-erbB-2)位于17q12，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。

HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。

HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。

HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。

《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》均强调：FISH是检测HER2基因状态的金标准。

一．检测意义1. 判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。

2. 指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。

HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。

二．检测建议IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC 2+样本必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做FISH验证。

IHCFISH 阳性率（%）阴性阳性0 1+ 2+ 3+89251432774562114156605.929.155.989.9表1：(2004) HER2 Amplification Ratios by Fluorescence In Situ Hybridization and Correlation with Immunohistochemistry in a Cohort of 6556 Breast Cancer Tissues. Clinical Breast Cancer 表2：2007年卫生部科教司牵头组织全国73家三级以上医院历时2年完成“荧光原位杂交技术（FISH）用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题，检测标本达3368例因此，《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南（2014版）》均建议先进行HER2蛋白的IHC检测，IHC 2+样本进行ISH（FISH、DISH或CISH）检测。

乳腺癌HER2基因扩增检测SOP1.目的：保证乳腺HER2判读的准确。

2.责任人：负责HER2基因扩增检测的责任医生及技术员。

3.探针特性（Probe Character）：LSI HER2/CEP17探针包含2种DNA探针，在中期染色体与间期核上均能杂交产生明亮的信号。

HER2探针杂交到人类17号染色体长臂17q11.2-q12区，荧光信号为橘红色；对照探针为CEP17，探针杂交信号位于人类17号染色体17p11.1-q11.1区，覆盖整个着丝粒区域，荧光信号为绿色。

4.安全（Safety）：4.1橡皮胶，大量接触会引致眼痛发炎，恶心，头痛或神志不稳。

4.2DAPI复染剂，能快速进入活细胞中与DNA结合，被视为一种毒性物质与致癌物，操作时应戴上手套。

5.标本（Specimen）：经病理学检查确诊为浸润性乳腺癌患者的石蜡包埋组织切片。

在石蜡切片的制作中，新鲜组织取下后应在1个小时内放入10%中性福尔马林溶液中固定，用量应为组织块的4-20倍，固定时间应在6-48hr之间，制作的石蜡切片一般应在6周内进行FISH试验，切片厚度为4μm。

6.仪器（Equipment）：7.1荧光原位杂交成像系统，包括荧光显微镜及相应的滤光片组7.242℃恒温孵箱或杂交仪，立式染缸（考普林瓶），计时器，水银温度计7.3恒温水浴箱，迷你离心机，移液器7.4PH计，载玻片，盖玻片，0.5ml离心管7.试剂（Reagent）：7.1二甲苯，胃酶，NP-40，20×SSC，70%乙醇，85%乙醇，100%乙醇，去离子水7.2HER2基因扩增试剂盒，预处理试剂盒8.质量控制（Quality Control）：每次实验均应设有阳性对照和阴性对照。

9.步骤（Procedure）：9.1经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋的乳腺癌组织切片4μm，置于处理干净后的涂胶玻片上（一般每例需备至少两张后备片）。

9.2将组织切片置于56℃下过夜烘烤，老化玻片。