过表达转OsILP基因水稻株系的构建

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2008,16(3):530~536*基金项目： 国家重点基础研究发展规划(973)(No.2006CB100203)、 国家自然科学基金(No.30671357)、 教育部博士点基金(No.20040389002)和福建省自然科学基金(No.C0310010)资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.谢联辉， 教授， 主要从事植物病毒学研究。

E­mail:<fjxlh@>；吴祖建， 副研究员， 主要从事植物病毒学研究。

E­mail:<wuzujian@>. 收稿日期：2007­09­20 接受日期： 2007­11­09 ·研究论文· 水稻条纹病毒 与叶绿体 Rubisco 引导肽融合基因的构建及其原核表达 *鹿连明， 林丽明， 谢荔岩， 林奇英， 吴祖建 **， 谢联辉 **(福建农林大学植物病毒研究所，福建省植物病毒学重点实验室， 福州 350002) 摘要：PCR 扩增获得水稻( L.ssp.)叶绿体 Rubisco引导肽基因和水稻条纹病毒(,RSV)外壳蛋白(coat protein,)基因。

分别借助于 pGEX­4T­1和pET­29a 表达载体，通过两种方法构建了融合基因 ­和 。

测序表明,其读码框完整， 连接部位正确。

将重组子 pGEX­ 和 pET­ 转化大肠杆菌()BL21(DE3)并诱导表达。

SDS­PAGE 电泳检测其表达产物分子量分别为64和40kD ， 与预期结果大小一致。

Western blot 鉴定发 现，两种融合基因的表达产物均能与RSV CP 抗体特异结合，说明融合蛋白中 RSV CP 蛋白保持了自身的抗原活性，叶绿体 Rubisco SSU 引导肽并未影响其正确表达。

水稻microRNA416过表达载体的构建及遗传转化生命科学学院生物科学（师范）专业2016级王程程指导教师秦小健摘要：水稻是我国人民日常生活中最主要的粮食农作物之一，在保证民生经济和粮食安全方面具有重要作用，因此提升水稻产量和品质成为了水稻研究工作的重要内容之一。

microRNA（miRNA）作为一类新发现的基因表达调节因子，在研究生物体生命代谢活动方面具有极高的研究价值。

本实验主要是构建microRNA416过表达载体，并通过遗传转化的方法为后续研究microRNA416的功能和分子作用机制提供基础和材料。

关键词：水稻；载体构建；microRNA；遗传转化Abstract：Rice is one of the most important crops in the daily life of our people, and it plays an important role in ensuring people's livelihood economy and food security. Therefore, improving rice yield and quality has become one of the important contents of rice research. As a newly discovered gene expression regulator, microRNA (miRNA) has extremely high research value in the life metabolic activities of graduate students. This experiment mainly provides the basis and materials for the subsequent study of the function and molecular mechanism of microRNA416 by constructing the microRNA416 overexpression vector.Key words：Oryza sativa；carrier construction；microRNA；genetic transformation 1 引言1.1水稻水稻（Oryza sativa）叶脉平行，胡须状根，是稻属谷类作物中的一种。

摘要富含甘氨酸和脯氨酸的蛋白（glycine and proline-rich protein，GPRP）基因广泛分布于植物界中，且已被证实在植物的生长发育和逆境适应过程中扮演着非常重要的角色。

然而，目前仅在少数几种植物中对其基因结构特征、表达特性和功能预测等进行了初步报道，水稻中有关这类家族基因的研究鲜有报道。

本研究克隆了3个候选的水稻OsGPRP基因，结合生物信息学分析手段，对这3个OsGPRP基因的结构特征进行了分析；基于荧光定量PCR等方法对正常和逆境下OsGPRP家族基因在水稻不同组织部位的表达模式进行了分析；利用烟草叶片瞬时表达法对预测的OsGPRP蛋白进行了初步的亚细胞定位分析。

此外，还对OsGPRP1和OsGPRP3蛋白进行了原核表达分析；利用pCXUN质粒构建了OsGPRP1和OsGPRP2基因的过量表达载体，以农杆菌介导法转化水稻，获得了转基因T2代植株。

为进一步研究水稻OsGPRP家族基因的生物学功能奠定了基础。

主要研究结果如下：1. 水稻OsGPRP家族基因结构特征分析借助生物信息学分析手段，成功筛选并克隆了3个水稻OsGPRP家族基因；3个水稻OsGPRP基因含有2-3个外显子和1-2个内含子，编码170-197个氨基酸，蛋白大小为16.8-19.7kDa，等电点为7.53-9.82；启动子中含有多种逆境响应元件；蛋白序列结构特征分析表明，3个OsGPRP含有典型的植物GPRP蛋白保守结构域（N端XYPP重复序列、中部富含A的疏水区和C端HGK重复区），符合植物GPRP蛋白家族的结构特征。

系统进化树分析结果显示，OsGPRP1和OsGPRP3属于同一分枝，OsGPRP2属于另一分枝。

2. 正常和逆境下OsGPRP基因在水稻不同组织部位中的表达模式荧光定量PCR结果显示，正常情况下3个OsGPRP基因在水稻幼苗的根、茎、叶和抽穗期的幼穗中存在差异表达，均在叶中表达量最高；在低温、干旱和高盐逆境下，3个OsGPRP基因在水稻不同组织部位中的表达模式存在明显差异，OsGPRP2和OsGPRP3在根和茎中均显著上调表达，OsGPRP1和OsGPRP2在叶中下调表达；在干旱胁迫下，OsGPRP1基因在水稻根中显著上调表达；在盐胁迫下，OsGPRP3在叶中显著上调表达。

《水稻OsIAA20基因功能研究》篇一一、引言水稻是全球最重要的粮食作物之一，对于人类的食物安全和农业生产具有极其重要的意义。

随着分子生物学技术的快速发展，基因功能研究成为了作物遗传育种的重要手段。

OsIAA20基因作为水稻中的一种关键基因，其在植物生长发育及逆境响应中的功能逐渐被揭示。

本文将围绕水稻OsIAA20基因的功能研究进行详细的介绍和分析。

二、OsIAA20基因的基本特征OsIAA20基因是水稻基因组中的一个重要成员，属于生长素响应因子家族。

该基因编码的蛋白质具有生长素受体活性，参与生长素的信号转导过程。

通过对OsIAA20基因的序列分析，发现其具有典型的IAA（生长素不敏感）结构域，这表明该基因在生长素信号通路中发挥着重要作用。

三、OsIAA20基因的功能研究1. 生长素信号转导OsIAA20基因参与生长素的信号转导过程，通过与生长素受体蛋白互作，调节生长素的响应和传递。

研究表明，OsIAA20基因的表达受到生长素浓度的调控，当生长素浓度升高时，该基因的表达也会相应增加，从而增强生长素信号的强度。

2. 植物生长发育OsIAA20基因对植物的生长发育具有重要影响。

研究表明，该基因的过表达会导致植物叶片数目增多，株高增加，同时还会影响花的发育和结实率。

此外，OsIAA20基因还参与了植物根系的发育和分生组织的形成。

3. 逆境响应OsIAA20基因还参与了植物的逆境响应过程。

研究表明，该基因能够提高植物对干旱、盐碱等逆境的耐受能力。

当植物受到逆境胁迫时，OsIAA20基因的表达会上调，从而激活一系列的逆境响应机制，保护植物免受逆境的伤害。

四、研究方法与技术对于OsIAA20基因的功能研究，主要采用的方法包括基因克隆、转基因技术、荧光定量PCR、酵母双杂交等。

通过这些技术手段，可以深入研究OsIAA20基因的表达模式、互作蛋白、功能机制等。

此外，还利用生物信息学的方法对OsIAA20基因进行全面的分析，包括序列分析、结构预测、表达谱分析等。

水稻单片段代换系群体的构建郭晓琴1，2，王岚1，张桂权2*(1.中州大学，河南郑州450044；2.华南农业大学植物分子育种广东省重点实验室,广东广州510642 )摘要：为研究水稻QTL的遗传机制，同时对优良水稻品种华粳籼74进行进一步遗传改良，以华粳籼74为受体, 以来源广泛的11个水稻品种为供体, 通过高代回交和微卫星标记辅助选择相结合的方法, 构建了水稻的一个单片段代换系群体。

该群体由59个单片段代换系组成，每个单片段代换系只含有来自一个供体的一个染色体代换片段, 而遗传背景与华粳籼74相同。

这些单片段代换系的代换片段分布在除12号染色体之外的其他11条染色体上, 59个代换片段的长度在0.2～58.5cM，大多数代换片段的长度为0～30cM。

代换片段长度较小的单片段代换系是用于QTL精细定位的优良材料。

关键词：水稻；单片段代换系；微卫星标记；分子标记辅助选择Development of Single Segment Substitution Lines ( SSSLs ) in Rice (Oryza sativa L. )GUO Xiao-qin1,2，W ANG Lan1，ZHANG Gui-quan2*（1.Zhongzhou University，Zhengzhou 450044，China；2.Guangdong Key Laboratory of Plant Molecular Breeding South China Agricultural University，Guangzhou，510642，China)Abstract: In order to study the genetic mechanisms of rice QTL and improve genetic traits of Huajingxian 74，a novel population consisted o f 59 sin gle segment substitution lines ( SSSLs ) was developed with Huajingxian 74 as a recipient and eleven varieties as donors through backcrossing and SSR marker-assisted selection ( MAS ). The substituted segments in the SSSLs distributed on eleven rice chromosomes except Chr.12. The estimated length of the substituted segments in SSSLs ranged from 0.2 cM to 58.5 cM, and most of the length of the substituted segments concentrate between 0cM and 30cM.Key words:rice, single segment substitution line, microsatellite marker; molecular marker-assisted selection水稻重要的农艺性状大多数是数量性状，分析数量性状的遗传机制对于水稻品种的定向改良具有重要意义。

水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化引言：水稻作为世界上最重要的粮食作物之一，已经成为了人类生活不可或缺的一部分。

然而，由于自然环境的限制以及病虫害的侵袭，水稻的产量仍然面临较大的挑战。

因此，通过遗传工程的手段，改良水稻的抗病虫害能力以及提高产量已成为当前研究的热点领域。

本文主要介绍了水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化的方法与意义。

一、水稻OsCOI基因表达载体的构建1. 基因序列获取：首先，我们需要获取水稻OsCOI基因的完整序列。

通过生物信息学的分析，我们可以在公共数据库中查询到该基因的序列信息。

2. PCR扩增：利用聚合酶链反应（PCR）技术，我们可以选择适当的引物并将水稻OsCOI基因扩增出来。

在PCR反应体系中，我们还需要加入适当浓度的dNTPs、Taq聚合酶以及缓冲液等试剂。

3. 酶切与连接：将扩增出来的水稻OsCOI基因与表达载体进行酶切，使两者能够具有互补的黏性末端。

然后，我们可以利用DNA连接酶将水稻OsCOI基因与表达载体连接起来。

4. 转化大肠杆菌：将连接好的表达载体转化到大肠杆菌中，通过筛选和培养，可以得到带有水稻OsCOI基因的大肠杆菌。

5. 提取载体：从大肠杆菌中提取出带有水稻OsCOI基因的载体。

可以使用溶解裂解法、玻璃珠破碎法等不同的方法进行载体提取。

二、水稻OsCOI基因的遗传转化1. 感受器准备：在水稻培养基中加入适当浓度的激素，促使水稻愈伤组织的形成。

然后，将愈伤组织与表达载体进行共培养。

2. 培养基筛选：根据表达载体中的抗性标记基因，在培养基中添加相应的抗生素。

只有带有水稻OsCOI基因的愈伤组织可以存活下来。

3. 愈伤组织再生：将带有水稻OsCOI基因的愈伤组织进行再生培养，促使其形成幼苗。

4. 控制培养：在培养条件的控制下，使幼苗正常生长。

5. 地上部移栽：将生长良好的幼苗移栽到含有适宜养分的培养基中。

水稻单片段代换系群体的构建郭晓琴1，2，王岚1，张桂权2*(1.中州大学，河南郑州450044；2.华南农业大学植物分子育种广东省重点实验室,广东广州510642 )摘要：为研究水稻QTL的遗传机制，同时对优良水稻品种华粳籼74进行进一步遗传改良，以华粳籼74为受体, 以来源广泛的11个水稻品种为供体, 通过高代回交和微卫星标记辅助选择相结合的方法, 构建了水稻的一个单片段代换系群体。

该群体由59个单片段代换系组成，每个单片段代换系只含有来自一个供体的一个染色体代换片段, 而遗传背景与华粳籼74相同。

这些单片段代换系的代换片段分布在除12号染色体之外的其他11条染色体上, 59个代换片段的长度在0.2～58.5cM，大多数代换片段的长度为0～30cM。

代换片段长度较小的单片段代换系是用于QTL精细定位的优良材料。

关键词：水稻；单片段代换系；微卫星标记；分子标记辅助选择Development of Single Segment Substitution Lines ( SSSLs ) in Rice (Oryza sativa L. )GUO Xiao-qin1,2，W ANG Lan1，ZHANG Gui-quan2*（1.Zhongzhou University，Zhengzhou 450044，China；2.Guangdong Key Laboratory of Plant Molecular Breeding South China Agricultural University，Guangzhou，510642，China)Abstract: In order to study the genetic mechanisms of rice QTL and improve genetic traits of Huajingxian 74，a novel population consisted o f 59 sin gle segment substitution lines ( SSSLs ) was developed with Huajingxian 74 as a recipient and eleven varieties as donors through backcrossing and SSR marker-assisted selection ( MAS ). The substituted segments in the SSSLs distributed on eleven rice chromosomes except Chr.12. The estimated length of the substituted segments in SSSLs ranged from 0.2 cM to 58.5 cM, and most of the length of the substituted segments concentrate between 0cM and 30cM.Key words:rice, single segment substitution line, microsatellite marker; molecular marker-assisted selection水稻重要的农艺性状大多数是数量性状，分析数量性状的遗传机制对于水稻品种的定向改良具有重要意义。

转PcLIPH8基因水稻的构建及其相关表型分析李珅;王珂;林法明;李光豪;高俊峰;杜长青【摘要】利用黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(PcLIPH8),构建植物双元表达载体35S∷PcLIPH8,并遗传转化水稻野生型品种Kitaake,对转基因水稻进行分子鉴定、酶活及木质素含量测定、表型观察等分析.结果表明:(1)成功构建了植物双元表达载体35S∷PcLIPH8,获得3个独立的转PcLIPH8水稻株系,但在苗期转基因水稻与野生型对照无明显表型差异.(2)酶活及木质素含量测定结果表明,转基因水稻的木质素过氧化物酶活性增加3.06％～5.07％,而木质素含量显著低于野生型对照,苗期降低11.44％～14.97％,成熟期降低13.83％～20.05％.(3)成熟期表型分析表明,转基因水稻较野生型对照的株高增加了28.37％～39.78％,穗谷粒数增多110％～120％,生物量增大18.61％～22.97％,而千粒重减小12.86％～13.34％,谷粒长度变短6.67％～7.15％.该研究结果为利用PcLIPH8基因降低木质素含量,提高生物产量,从而改善植物品质奠定了前期基础.【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2018(038)011【总页数】7页(P1968-1974)【关键词】黄孢原毛平革菌;PcLIPH8基因;异源表达;水稻【作者】李珅;王珂;林法明;李光豪;高俊峰;杜长青【作者单位】河南农业大学农学院,郑州450046;河南农业大学农学院,郑州450046;河南农业大学农学院,郑州450046;河南农业大学农学院,郑州450046;河南农业大学农学院,郑州450046;河南农业大学农学院,郑州450046【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q786;Q789木质素是重要的植物次生代谢产物之一。

在高等植物体内，木质素是仅次于纤维素的第二位最丰富的大分子有机物[1-2]。

木质素沉积在木质部导管及韧皮部纤维等组织中，参与调控植物生长发育、病虫害防御及环境适应性等过程[3-7]。

《水稻OsIAA20基因功能研究》篇一一、引言随着现代农业的不断发展，基因工程在作物育种中发挥着越来越重要的作用。

水稻作为全球最重要的粮食作物之一，其基因功能研究对于提高产量、抗病性以及适应性等方面具有重要意义。

OsIAA20基因是水稻中的一个重要基因，它在植物生长发育及响应环境压力中起着关键作用。

本文旨在深入研究OsIAA20基因的功能，为水稻育种提供理论依据。

二、OsIAA20基因概述OsIAA20基因属于生长素响应因子家族，参与植物激素生长素的信号传导。

它在水稻中的表达受到多种环境因素和生理条件的调控，对水稻的生长和发育具有重要影响。

然而，OsIAA20基因的具体功能尚不清楚，需要进一步研究。

三、OsIAA20基因功能研究方法1. 基因克隆与序列分析：通过PCR扩增、测序等方法，获取OsIAA20基因的完整序列，并进行序列分析，了解其结构特征。

2. 转基因技术：构建OsIAA20基因的过表达和敲除载体，通过转基因技术将载体导入水稻中，获得转基因水稻株系。

3. 生理生化分析：通过测定转基因水稻株系的生长状况、生物量、激素含量等指标，分析OsIAA20基因对水稻生长发育的影响。

4. 分子生物学技术：运用实时荧光定量PCR、Western blot等技术，检测OsIAA20基因在不同组织、不同发育阶段的表达情况，探究其调控机制。

5. 环境适应性研究：在多种环境条件下（如干旱、淹水、盐碱等），观察转基因水稻的生长状况及生理变化，分析OsIAA20基因对水稻环境适应性的影响。

四、OsIAA20基因功能研究结果1. 序列分析结果表明，OsIAA20基因具有典型的生长素响应因子家族特征，可能在水稻生长发育中发挥重要作用。

2. 转基因技术成功获得了OsIAA20基因的过表达和敲除转基因水稻株系。

3. 生理生化分析表明，过表达OsIAA20基因的水稻株系具有更好的生长状况和生物量，而敲除OsIAA20基因的水稻株系则表现出生长受抑的现象。

《水稻OsIAA20基因功能研究》篇一一、引言随着农业生物科技的进步，对于植物基因的功能性研究显得越来越重要。

在水稻这种主要粮食作物中，对于基因的研究可以帮助我们了解其生长发育的机制，提高产量和抗逆性。

其中，OsIAA20基因作为一种在植物生长调控中具有重要功能的基因，对其功能的深入研究，有助于进一步优化水稻种植和提高其生产效益。

二、OsIAA20基因的背景OsIAA20基因是植物生长素响应因子家族的一员，它在植物的生长和发育过程中扮演着重要的角色。

在早期的研究中，我们发现OsIAA20基因在水稻中的表达水平会受到不同环境条件的影响，例如光、温度、营养状况等。

然而，关于OsIAA20基因的具体功能，我们仍知之甚少。

三、研究方法为了深入研究OsIAA20基因的功能，我们采用了多种研究方法。

首先，我们利用生物信息学手段分析了OsIAA20基因的序列特性及其与其他生长素响应因子的关系。

然后，我们通过基因编辑技术，创建了OsIAA20基因的过表达和敲除突变体，以观察其在水稻生长过程中的作用。

此外，我们还利用了分子生物学和遗传学手段，对OsIAA20基因的表达模式和调控机制进行了深入研究。

四、OsIAA20基因的功能研究1. 表达模式研究我们发现OsIAA20基因在水稻的各个组织中都有表达，尤其是在根和叶中表达量较高。

在不同的生长阶段和环境条件下，OsIAA20基因的表达水平也会发生变化。

这表明OsIAA20基因可能参与了水稻的多种生物学过程。

2. 对生长发育的影响通过对过表达和敲除突变体的研究，我们发现OsIAA20基因对水稻的生长发育有显著影响。

过表达OsIAA20基因的水稻植株表现出更强的生长势和更高的生物量。

相反，敲除OsIAA20基因的水稻植株则表现出生长受阻的现象。

这表明OsIAA20基因在促进水稻生长方面具有重要作用。

3. 对抗逆性的影响我们还发现OsIAA20基因对水稻的抗逆性有影响。

过表达OsIAA20基因的水稻植株在遭受环境压力（如干旱、盐碱等）时，能够更好地抵抗这些压力，维持正常的生长状态。

《水稻OsIAA20基因功能研究》篇一一、引言水稻作为全球最重要的粮食作物之一，其遗传学和分子生物学研究对于提高作物产量和抗逆性具有重要意义。

近年来，随着基因组学和生物信息学的发展，越来越多的基因被鉴定和功能研究。

其中，OsIAA20基因作为水稻中的一个重要基因，其功能研究备受关注。

本文旨在综述关于水稻OsIAA20基因功能的研究进展，为进一步了解其生物学功能和潜在应用提供参考。

二、OsIAA20基因的背景与发现OsIAA20基因是水稻基因组中的一个重要成员，属于IAA （Indole Acetamide）家族。

该家族基因在植物生长和发育过程中发挥重要作用，特别是在激素信号传导途径中。

通过生物信息学分析和基因组测序技术，OsIAA20基因被成功鉴定并得到了广泛关注。

三、OsIAA20基因的表达与调控OsIAA20基因在水稻生长发育过程中表达量有所差异，其在不同组织器官中的表达模式及其调控机制尚未完全明确。

研究表明，该基因的表达受到多种生物和非生物因素的影响，如激素、光照、温度等。

通过对OsIAA20基因的启动子进行转录因子结合位点的分析，发现该基因可能受到多种转录因子的调控。

此外，通过RNAi和过表达等技术手段，可以进一步研究OsIAA20基因在植物生长发育中的具体作用。

四、OsIAA20基因的功能研究1. 参与激素信号传导：OsIAA20基因参与植物激素信号传导途径，如赤霉素、生长素等。

研究表明，该基因能够与激素受体互作，进而影响激素信号的传导和响应。

通过操纵该基因的表达，可以影响植物的生长和发育。

2. 抗逆性：OsIAA20基因在水稻抗逆性方面具有重要作用。

研究发现在不同逆境条件下，如干旱、盐碱等，该基因的表达水平发生变化，从而影响植物的抗逆能力。

通过对该基因的过表达或敲除，可以进一步验证其在抗逆性方面的作用。

3. 参与植物免疫反应：近年来研究发现，OsIAA20基因还参与植物免疫反应。

该基因可能通过调控相关免疫相关基因的表达，进而影响植物对病原菌的抗性。

水稻OsPIN1b基因GFP融合表达载体构建及转化水稻的研究胥华伟;王海;莫亿伟【摘要】水稻生长素输出载体OsPIN1a可能参与调控水稻根负向光性反应.为了进一步研究其他OsPIN基因与水稻根负向光性的关系,以GenBank数据库报道的OsPIN1b核苷酸序列为基础,设计特异引物以RT-PCR从水稻cDNA中扩增得到OsPIN1b基因.测序结果表明获得完整的OsPIN1b基因ORF序列;生物信息学分析表明,OsPIN1b基因序列全长1 665 bp,与已报道的序列相吻合,其GC含量为64.08％,编码554个氨基酸.进一步构建了该基因的GFP融合表达载体pCAMBIA-1301-OsPIN1b∷GFP并转化水稻中花11,分子检测和GUS染色表明外源片段已经成功整合到水稻基因组,为研究OsPIN1b在水稻根负向光性中的作用奠定基础.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2015(042)024【总页数】5页(P146-150)【关键词】水稻;OsPIN1b;负向光性【作者】胥华伟;王海;莫亿伟【作者单位】河南科技大学农学院,河南洛阳471003;绍兴文理学院生命科学学院,浙江绍兴312000;绍兴文理学院生命科学学院,浙江绍兴312000【正文语种】中文【中图分类】Q945.7光作为一种重要的环境信号，对植物的生长发育及生理代谢等各方面都发挥着重要作用，如形态形成、花芽分化和向性运动等［1］。

其中光对植物最重要的调控是向光性，植物通过向光性可以最大限度地吸收阳光以进行光合作用促进生长［2-4］。

虽然地上部分的向光性已有深入的研究［5］，但地下部分对光的反应即根的负向光性的研究还较少［6］。

实际上，根的负向光性使根向土壤方向生长，避免强光及各种逆境因素的伤害，从而利于根进入土壤吸收更多的水分和养分［7-8］。

近年来，前人对水稻（Oryza sativa L.）根负向光性发生的部位、光受体和信号转导、根负向光性产生的可能机制、IAA等激素对水稻根负向光性的影响等已进行不少研究［9-10］。

OsBTF3过表达转基因水稻株系的创制及其分子鉴定李广旭;陈华民;吴静;吴茂森;何晨阳【摘要】本研究旨在创制OsBTF3过表达转基因水稻株系,为验证OsBTF3基因在水稻抗性和生长发育中的功能、评价其在水稻农艺性状遗传改良中的应用价值提供试验材料.通过基因过表达载体构建、水稻愈伤组织诱导、农杆菌介导愈伤组织转化、植株再生、潮霉素抗性( HygR)筛选及PCR验证、基因过表达RT-Q-PCR检测等方法,成功地获得了97个To代和20个T1代过表达转基因株系,并分别得到分子验证.与野生型对照株相比,5个T1代过表达株系中的OsBTF3基因表达水平显著提高,平均高达3.58倍.因此,由组成型表达的35S启动子驱动的OsBTF3基因在转基因水稻株系中成功地得到了增量表达,并对水稻生长发育、抗病性和抗逆性具有调控作用.【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2012(002)001【总页数】6页(P39-43,封3)【关键词】OsBTF3;过表达;分子鉴定,生物学功能【作者】李广旭;陈华民;吴静;吴茂森;何晨阳【作者单位】中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;辽宁省农业科学院果树研究所,辽宁熊岳115009;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193【正文语种】中文BTF3(basic transcription factor 3)最初是作为RNA聚合酶Ⅱ转录起始所必需的因子而被发现的,其可与RNA聚合酶Ⅱ形成稳定的复合体[1]。

随后研究发现,BTF3可作为新生多肽关联复合体(NAC)的β亚基(β-NAC)与α-NAC组成完整的NAC[2],NAC可以与信号识别颗粒(SRP)协同作用、保证蛋白质正确地向内质网转运[3,4]。

水稻OsTZF3基因敲除和过量表达载体的构建与遗传转化引言水稻（Oryza sativa L.）是世界上最重要的粮食作物之一，也是许多国家的主要粮食来源。

在水稻的生长发育过程中，许多基因起着重要的调控作用。

OsTZF3（Oryza sativa Trihelix Transcription Factor 3）是水稻中的一种三螺旋蛋白转录因子，其编码的蛋白在水稻的生长发育过程中发挥着重要作用。

研究表明，OsTZF3基因的敲除和过量表达对水稻的生长发育和抗逆能力有着显著影响。

对OsTZF3基因的研究不仅可以增进对水稻生长发育的理解，还可以为水稻品种改良和抗逆育种提供理论基础。

一、OsTZF3基因敲除载体的构建1.1 OsTZF3基因敲除载体的设计OsTZF3基因敲除载体的构建是通过CRISPR/Cas9技术实现的。

首先需要对OsTZF3基因进行序列分析，确定其靶位点。

通过在线工具或专业软件进行靶位点的设计和验证，选择合适的CRISPR引物，确保后续的敲除效率和准确性。

还需要设计引物连接至载体的适配子，以便将其整合到CRISPR/Cas9系统中进行植物转化。

1.2 OsTZF3基因敲除载体的构建利用PCR技术从水稻基因组DNA中扩增出OsTZF3基因的部分序列及其上下游的序列。

然后，将其克隆至适配子载体中，构建成相应的敲除载体。

接下来，将CRISPR引物连接至载体的相应位点，构建成完整的OsTZF3基因敲除载体。

需要对所构建的载体进行测序验证，确保其正确性和完整性。

1.3 OsTZF3基因敲除载体的验证构建好OsTZF3基因敲除载体后，需要进行相应的验证实验。

可以通过in vitro系统验证敲除载体的特异性和效率。

利用体细胞或细菌系统进行转化，验证CRISPR/Cas9系统对OsTZF3基因的切割效果和敲除率。

可以利用植物体系进行敲除载体的验证，通过适当的水稻转化技术将敲除载体导入水稻，检测敲除效果和表型改变。

过表达OsPSK3基因增加水稻叶片叶绿素含量黄霁月;王玉锋;杨金水【期刊名称】《遗传》【年(卷),期】2010(32)12【摘要】植物磺肽激素(Phytosulfokine, PSK)是新发现的一种能促进细胞分裂和分化的植物激素.水稻中该基因家族共有7个成员, 迄今为止PSK基因在水稻体内的功能和调控机制仍不清楚.文章首先利用生物信息学手段对OsPSK家族基因进行了结构比较和进化分析, 依据对水稻和拟南芥中PSK基因家族成员的分析认为: PSK祖先基因形成两个PSK基因的发生要早于单、双子叶植物的分化; 其中OsPSK1与其余的OsPSK2-OsPSK7进化自不同的祖先基因.对PSK家族成员在不同组织的表达分析发现不同基因具有不同的表达模式.文章通过基因枪转化的方法获得了水稻OsPSK3转基因系.文章着重研究了OsPSK3过量表达对水稻植株生长的影响.结果表明: 在转基因阳性株系中OsPSK3的表达量提高了约40%; 且OsPSK3ox-1有明显优于对照的营养性状, 表现在幼苗期产生更多的须根和根毛; 在各生长阶段直至结穗期与对照相比表现出更高的株高; 尤其在叶片叶绿素含量上, 转基因系较对照提高了2.3倍.【总页数】9页(P1281-1289)【作者】黄霁月;王玉锋;杨金水【作者单位】复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室,上海,200433;中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海,200032;复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室,上海,200433【正文语种】中文【相关文献】1.控制水稻叶片叶绿素含量及其离体叶片叶绿素降解速度相关的QTL定位(简报) [J], 左海龙;肖珂;张永娟;张俊芝;巩迎军;董彦君2.过表达水稻OsSAPP2基因促进转基因拟南芥叶片衰老 [J], 张艺函;徐凡;蒋太英;崔胜男;马殿荣3.高光谱数据探讨水稻叶片叶绿素含量对叶片及冠层光谱反射特性的影响 [J], 李云梅;倪绍祥;黄敬峰4.哺乳动物Jun和Fos基因增加水稻prolamin 4a基因启动子的表达 [J], 华学军;范云六5.干旱胁迫下水稻叶片光合速率与叶绿素含量的相关性及其基因定位 [J], 胡颂平;王正功;张琳;刘国兰;罗利军;廖慧敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。