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细胞制备常用耗材材料
细胞制备过程中需要使用多种耗材材料，这些材料对于细胞制备
的成功至关重要。
下面就为大家介绍常用的耗材材料及其作用。
1、细胞培养基
细胞培养基是细胞生长、分化、增殖所必须的基础。
不同类型的
细胞需要使用不同种类的培养基，例如EMEM培养基可用于培养小鼠成纤维细胞，DMEM培养基可用于培养人类细胞等。
在使用培养基时需要注意培养基的配制和储存条件，以保证细胞的健康生长。
2、细胞冻存液
细胞冻存液是将细胞保存在低温条件下的重要介质，可以延长细
胞的寿命。
细胞冻存液的配制要与细胞类型相匹配，含量的浓度、PH
值和添加物的选择具有很大关联。
一般情况下，细胞冻存液中含有10% DMSO和20%人血清可以有效保护细胞。
3、消毒液
消毒液主要用于对培养室、培养箱、培养器、试管等实验室设备
进行消毒。
为防止不同菌株的污染对细胞的影响，消毒液的选择应根
据不同细胞类型和实验要求来决定。
一般工作台、镊子、移液管、培
养板应每天进行消毒。
4、细胞培养器皿
细胞培养器皿一般包括培养瓶、培养箱、平板、离心管等。
正确
选用容器可以确保细胞生长环境卫生、稳定。
注意过期日期，选择质
量可靠的细胞培养器皿，以免对细胞生长带来影响。
细胞制备耗材材料是细胞培养的基础，要保证细胞培养以顺利的
进行，科学的选择和使用这些耗材材料具有重要意义。
选择定期更新，正确使用和保养这些耗材材料，可以更好的保证细胞培养的成功。
细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂[细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100μL（约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁；10）向培养板中加入10μL不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
细胞增殖与毒性检测实验方法及经验总结实验原理：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
一、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。
二、优点：1.使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；K-8法能快速检测；K-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；K-8法的重复性优于MTT 法，MTT 实验生成的formazan 不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解；5.而本方法产生的formazan 是水溶性的，不仅省去了溶解步骤，更因此而减少了该操作步骤带来的误差；K-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高；K-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
三、所需设备及仪器：1. 10ul，100-200ul及多通道移液器2. 酶标仪（带有450nm滤光片）3. 96孔培养板4. 二氧化碳培养箱四、方法及步骤：实验一：细胞增殖分析1、制备细胞悬液：细胞计数。
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数（约1-2×104），每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做4-6个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul CCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议将枪头浸入培养液中加入且在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
如有侵权请联系网站删除细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂［细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS、胰酶（0.25% Trypsin-EDT）胎牛血清（FBS、双抗］，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1、倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2〜10min （具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS勺培养液1〜1.5ml［培养液：胰酶=（2〜3）:1］中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10〜15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS ffl胞培养液1〜2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100卩L （约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72 小时（37 C，5%CO2,使细胞贴壁；10）向培养板中加入10卩L不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
第一，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT 、MTS 产生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
第二，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。
第四，WST-8 和 MTT 、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性。
加入 CCK-8 溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定最佳测定时间。
产品编号HY-K0301-100T HY-K0301-500T HY-K0301-3000T HY-K0301-12000T包装1 mL 5 mL 5 mL × 6(5 mL × 6) × 4产品名称Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-8Cell Counting Kit-81包装清单产品概述Cell Counting Kit-8，简称 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分。
WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1) 。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系 (图2) 。
关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择
C0009 C0036 C0038
产品名称MTT细胞增殖及细胞毒性
检测试剂盒
WST-1细胞增殖及细胞毒性
检测试剂盒
Cell Counting Kit-8
检测样品数500 500 500 价格246.00元496.00元612.00元
主要用途细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒
性检测
形成的formazan的水溶性差好好检测灵敏度高很高最高
检测时间较长较短较短
检测波长560-600nm 420-480nm 420-480nm
细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较好很好大批量样品检测可以非常适合非常适合便捷程度一般比较便捷非常便捷
如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高，从经济角度可以选择C0009，即MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。
C0009可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的formazan水溶性很差，需要额外的步骤溶解formazan。
如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，建议选择使用C0038，即Cell Counting Kit-8。
如果既希望检测灵敏度很高并且检测比较便捷，但又希望价格不是太贵，可以选择C0036，即WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。
竹密岂妨流水过蛮鬼2018.3山高哪碍野云飞MTS 或CCK8细胞增殖及毒性试验一、所需试剂1、CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay试剂盒（-20℃避光保存，4℃保存6周，黄色）（1）MTS：新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还原成有色的甲瓒产物，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数在一定范围内呈高度相关。
（2）PES：吩嗪硫酸乙酯，一种电子偶联剂，具有增强的化学稳定性，这使它可与MTS混合形成稳定的溶液2、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）（保存条件同上，紫色）（1）WST-8：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐（2）1-Methoxy PMS：1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯3、药物或毒素（药物IC50等用到）4、96孔板二、实验步骤每种处理设置3个副孔（空白组可1个），加入100μl培养基：（1）细胞增殖实验：设置NC组，处理组，空白组，6天时间，平均每孔1000-2000个细胞（2）毒性或药物或放疗IC50：设置梯度给药组（包括不给药组），空白组，平均每孔5000-8000个细胞2、在37°C，5% CO2的环境下培养（1）增殖：8h或24h（细胞贴壁时间）,也可种板后直接测第一次，作为基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS 每孔加20μl，CCK8加10μl）（2）毒性和药物：培养24h后加入药物培养48小时及以上3、增殖实验每天测量一次，以100全培养基：20MTS比例配制总管（CCK8以100:10）4、吸掉96孔板内待测孔内培养基，每孔加入120μl稀释后的MTS试剂（CCK8加入110μl）4、在37°C，5% CO2的环境下孵育1-4个小时（一般选2h）5、选取波长，MTS选492nm，CCK8选450nm，读取吸光度值，记录结果，以时间为横坐标，每日吸光值/基准值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
Meilun Cell Counting Kit-8细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8),增强型产品编号：MA0218规格：100T/ 500T/ 10000T/ 1000T/ 5000T产品内容产品简介Cell Counting Kit-8（简称CCK-8），是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT 的化合物，它在电子耦合试剂1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS ）存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan （参考图1），生成的Formazan 数量与活细胞的数量成正比。
因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
图1. CCK-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent ，即电子耦合试剂)CCK-8与以往的增殖/毒性测定试剂相比，具有明显优点（参考表1）。
美仑CCK-8试剂盒具有灵敏度高、反应时间短、线性范围宽、数据可靠、重现性好等特点，可以广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。
CCK-8增强型溶液 1 ml 5 ml 10 ml×10 10 ml×1 5 ml ×10说明书1 份1 份1 份1 份1 份表1. 增殖/毒性测定试剂的比较MTT法XTT法WST-1法CCK-8法甲瓒产物的水溶性差（需加有机溶剂溶解）好好好检测灵敏度高很高很高最高检测时间较长较短较短最短检测波长560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较差一般很好批量样品检测可以非常适合非常适合非常适合便捷程度一般便捷便捷非常便捷操作步骤制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1. 制备细胞悬液：细胞计数。
MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒产品编号 产品名称包装 C0009S MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500次 C0009MMTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒2500次产品简介：MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常经典的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。
MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan (图1A)。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解(图1B)。
然后通过酶标仪可以测定570nm 波长附近的吸光度(图2)。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
图1. MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒实测效果图。
A. HeLa 细胞加入使用本试剂盒配制的MTT 溶液，在细胞培养箱内孵育4小时，显微镜下可见大量结晶状的深紫色产物formazan 生成。
B. 不同数量HeLa 细胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小时的效果图(上图)及深紫色产物formazan 生成后加入Formazan 溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果图(下图)。
图2. 本试剂盒检测不同数量HeLa 细胞的效果图。
不同的检测条件下，实际读数会因标准品的配制、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒采用了独特的Formazan 溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan 溶解液溶解formazan 。
从而避免了由于去除培养液时formazan 被部分去除而引起的误差。
本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。
碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考/support/cell-proliferation.htm 。
本试剂盒C0009S 包装可以测定500个样品，C0009M 包装可以测定2500个样品。
图2. WST-1、XTT 和MTT 的检测效果比较 注：450nm 为测定波长，690nm 为参考波长WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 产品编号 产品名称 包装C0035 WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 100次产品简介：WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-1是一种类似于MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。
细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
图1. WST-1检测原理图 (EC=electron coupling reagent ，即电子耦合试剂) WST-1是MTT 的一种升级替代产品，和MTT 或其它MTT 类似产品如XTT 、MTS 等相比有明显的优点。
首先，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT 、MTS 产生的formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。
其次，WST-1产生的formazan 比XTT 和MTS 产生的formazan 更易溶解。
再次，WST-1比XTT 和MTS 更加稳定，使实验结果更加稳定。
另外，WST-1和MTT 、XTT 等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考图2)。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。
本试剂盒检测非常便捷。
无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。
不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan 。
可以用于大批量样品的检测。
酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
Hotline ：400-6111-883 E -上HB210525本产品仅作科研用途！MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒Cat NO.40206产品说明书网址： 第1页，共2页MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒产品信息MTT Cell Proliferation Assay Kit MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒40206ES76 500 T 40206ES80 1000 T 40206ES905000 T产品描述噻唑兰（Methylthiazolyldiphenyl -tetrazolium bromide , MTT ），也称作溴化噻唑蓝四氮唑，是一种黄色染料，已经普遍替代传统的台盼蓝染色法或者放射性同位素插入法，用来检测细胞的活力，细胞增殖以及细胞毒性分析。
检测原理在于：MTT 是一种可接受氢离子的化合物染料，带正电荷，具有细胞膜渗透性。
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将外源进入的MTT 还原成为水不溶性的深蓝色MTT -甲臜结晶，而死细胞不具有此功能。
甲臜结晶是不能穿透细胞膜，因此沉积在处于增殖且未受损伤的细胞内。
甲臜结晶可用DMSO 或者酸化的异丙醇溶解出来，酶标仪下测定570 nm 的吸光度反映甲臜的生成量。
而甲臜的生成量与活细胞数目成正比，用以评估细胞存活状况。
本试剂盒以MTT （高纯度）作为指示剂，在经典操作步骤的基础上，采用独特的甲臜溶解液配方，可以直接溶解甲臜沉淀，无需去除原有的培养液。
从而避免因去除培养液时甲臜被部分去除而引起的操作误差。
具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简单等特点。
另外，本试剂盒还提供配套的一次性针头过滤器和注射器，为实验带来更多的便利。
产品组分编号 组分 产品编号/规格40206ES76（500T ） 40206ES80（1000T ） 40206ES90（5000T ） 40206-A MTT 粉末 25 mg 50 mg 250 mg 40206-B MTT 溶剂 5 mL 10 mL 50 mL 40206-C 甲臜溶解液 50 mL 100 mL 100 mL×5 40206-D除菌套装1包1包1包运输和保存方法冰袋运输。
实验三、细胞毒性的检测一、实验材料及设备培养箱、雷杜RT-6100酶标仪、移液器（THERMO）、枪头、吸管、96孔板、盐水、PBS、1640培养液、离心管、血球计数板、CCK-8（日本同仁）二、实验步骤1、在96孔板中配置100微升的细胞悬液。
将培养板在培养箱中预培养24小时（37℃,5% CO2）（注：贴壁细胞最小的接种量为10000个/孔，细胞数目由血球计数板中计算得来，若计数时浓度太大，可以先稀释一定倍数取融合度为90%左右的细胞，吹打均匀，取样计数一般细胞接种后贴壁大约需要2~4小时，但是不同类型的细胞所需要的时间有差异，根据实验情况而定细胞悬液一定要混匀，培养基周围容易挥发，为减少误差，建议培养板的四周只加培养基，而不作为检测孔）。
2、向培养板加入10微升不同浓度的待测物质。
在培养箱中孵化一段时间。
（6、12、24、48，时间根据OD值来选择，OD值在1.0~2.0都可以，最好在1.0附近比较好，时间根据细胞周期来定，起码要一代以上的时间）3、向每孔加入10微升CCK-8溶液，加完后轻轻敲击培养板以帮助混匀。
【注：每孔培养基体积的10%加入CCK-8，注意不要在孔中形成气泡，他们会影响OD值得读数。
如果待测物质有氧化或者还原性的话，或者细胞培养时间较长使得培养基颜色或者pH发生变化的话，可以在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞俩次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
斜贴壁加CCK-8,不要插到培养基下，容易产生气泡，干扰读数，而且速度要快，减少试剂在移液器上的残留，加后要轻轻地振荡培养板使试剂和培养基充分混合，可以将CCK-8用培养基稀释一倍，混匀后每孔加20uL使用】4、将培养板在培养箱内孵育1~4小时。
（细胞不同形成的甲臜的量也不同，如果显色不够的话，可以继续培养，以确定最佳条件建议BEL-7402 2h，）。
5、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
南京恩晶生物MTT细胞增殖及细胞毒性检测方法一、产品简介EnoGene™MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)用于细胞增殖和细胞毒性的检测。
MTT是噻唑蓝（3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide），可以被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物甲臜（formazan）。
formazan可以被DMSO完全溶解，然后通过酶标仪测定490nm波长附近的吸光度。
细胞增殖速度越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则细胞增殖减慢从而导致吸光度降低。
二、操作步骤1.细胞消化、计数、制成浓度为2～10×104个/ml的细胞悬液,96孔板中每孔加入100ul细胞悬液（每孔0.2～1X104个细胞）；2.96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养24小时；3.用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100μL相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组，每组五个复孔；4.96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养72小时；5.将96孔板进行MTT染色，λ=490nm，测定OD值。
1)每孔加入20μL MTT，在培养箱继续培养4小时；2)弃去培养基(贴壁细胞可直接弃培养基，悬浮细胞需1000R，离心10min再弃培养基)，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀；3)λ=490nm，酶标仪读出每孔的OD值，计算抑制率，及IC50值。
三、注意事项1.悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。
2. Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。
3. MTT溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。
当颜色变为灰绿色时，请勿使用。
细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂[细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25% Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。
显微镜下看细胞生长状态，有无污染。
1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS 2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml 2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm 3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在96孔板中，给每孔加100μL（约7000个）的细胞悬液，将培养板放在培养箱预培养24-72小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁；10）向培养板中加入10μL不同浓度（5、10、20、40、80、160ug/ml）的待测药物；11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、24或48小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
MTS 或者CCK8细胞删殖及毒性考查之阳早格格创做一、所需试剂1、CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay 试剂盒（-20℃躲光保存，4℃保存6周，黄色）（1）MTS：新一代四氮唑蓝盐化合物，即被活细胞线粒体中的多种脱氢酶还本成有色的甲瓒产品，其颜色深浅与某些敏感细胞株的活细胞数正在一定范畴内呈下度相闭.（2）PES：吩嗪硫酸乙酯，一种电子奇联剂，具备巩固的化教宁静性，那使它可与MTS混同产死宁静的溶液2、Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）（保存条件共上，紫色）（1）WST-8：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-两磺酸苯)-2H-四唑单钠盐（2）1-Methoxy PMS：1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸两甲酯3、药物或者毒素（药物IC50等用到）4、96孔板两、真验步调1、种板（96孔板）（个/孔），先配总管再加样（多算5孔的量去配总管，免得没有敷用）每种处理树立3个副孔（空黑组可1个），加进100μl培植基：（1）细胞删殖真验：树立NC组，处理组，空黑组，6天时间，仄衡每孔1000-2000个细胞（2）毒性或者药物或者搁疗IC50：树立梯度给药组（包罗没有给药组），空黑组，仄衡每孔5000-8000个细胞2、正在37°C，5% CO2的环境下培植（1）删殖：8h或者24h（细胞揭壁时间）,也可种板后直交测第一次，动做基准线，之后每隔24小时检测下一天的细胞量（MTS 每孔加20μl，CCK8加10μl）（2）毒性战药物：培植24h后加进药物培植48小时及以上3、删殖真验每天丈量一次，以100齐培植基：20MTS比率配造总管（CCK8以100:10）4、吸掉96孔板内待测孔内培植基，每孔加进120μl密释后的MTS试剂（CCK8加进110μl）4、正在37°C，5% CO2的环境下孵育1-4个小时（普遍选2h）5、采用波少，MTS选492nm，CCK8选450nm，读与吸光度值，记录截行，以时间为横坐标，每日吸光值/基准值为纵坐标画造细胞死少直线.三、注意事项1、CCK8本理WST-8正在电子载体1-Methoxy PMS的效率下被细胞中的脱氢酶还本为具备下度火溶性的黄色甲瓒产品（Formazan dye）.死成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比2、所有历程没有成爆收气泡，免得对于测光爆收效率3、如果需要以去检测每孔加进25ul 10% SDS末行反应，躲光保存于室温的干盒中最多可保存18小时4、可正在待测孔四面加进PBS预防中围的待测孔液体挥收效率截行.（革新于2018.11）。
