胃癌第10组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系和其临床意义
- 格式:pdf
- 大小:2.68 MB
- 文档页数:32
胃癌患者临床病理参数与NO.14v组淋巴结转移的关系徐荣【摘要】目的:分析胃癌患者临床病理参数与NO.14v淋巴结转移的关系.方法:行全胃切除和远端胃切除治疗的84例胃癌患者的手术资料,所有患者均摘取No.14v 组淋巴结送病理检查,根据检查结果分为NO.14v淋巴结转移转移组与非转移组,分析胃癌患者的性别、年龄、肿瘤浸润深度、临床分期、肿瘤细胞分化程度等临床病理参数与NO.14v组淋巴结转移的关系.结果:84例患者检出NO.14v淋巴结转移25例、转移率为29.76%,共检出阳性淋巴结43枚、每例患者1~3枚、平均(1.7±0.3)枚;肿瘤直径>4 cm、肿瘤根除程度为R1或R2、肿瘤T分期为T3~T4期、肿瘤N分期为N3期、M分期为M1分期的患者,发生NO.14v淋巴结转移的比例明显高于未转移患者,差异有统计学意义(P<0.05);多因素分析显示,T分期、N 分期、M分期均为导致胃癌患者NO.14v淋巴结转移的独立危险因素(P<0.05).结论:胃癌患者TNM分期与NO.14v淋巴结转移存在相关性,病理分期越晚的胃癌患者NO.14v淋巴结转移风险较高.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2018(043)001【总页数】5页(P70-74)【关键词】胃肿瘤;淋巴转移;根治术;病理学【作者】徐荣【作者单位】广安市中医医院,四川广安638000【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是临床常见的恶性肿瘤类型,全球每年新发胃癌病例数逾百万,死亡病例达80余万,我国癌症死因中胃癌死亡病例占35%[1]。
手术仍为目前治疗胃癌的主要手段,常用术式包括全胃切除和胃次全切除,配合规范化淋巴结清扫,但目前对淋巴结清扫范围尚存在一定的争议,早期认为D2淋巴结清扫较常规D1清扫可明显改善患者预后[2]。
但也有研究者指出,盲目扩大手术范围并不能提高患者远期生存率[3]。
NO.14v淋巴结是指分布于肠系膜上静脉根部的淋巴结类型,属区域性胃淋巴结,新版日本胃癌治疗指南未将NO14v淋巴结作为D2根治术清扫范围,但其与第6组淋巴结相邻,仍纳入区域性淋巴结范畴。
胃癌微转移检测及临床应用的研究进展【摘要】胃癌是常见的恶性肿瘤,由于缺乏特异性症状,早期不易发现;而进展期胃癌易在微转移基础上发生转移。
近年来,随着分子生物学的发展,胃癌的微转移已成为研究热点。
胃癌微转移的检测方法包括常规HE染色法、免疫组织化学法、RT-PCR等,也可通过对腹腔冲洗液进行检测获得胃癌转移的相关证据。
CEA、细胞角蛋白(cytokeratin, CK)、糖类抗原(carbohydrate antigens,CA)等是检测胃癌微转移的常用肿瘤标记物。
胃癌微转移的检测对胃癌患者选择术式、确定淋巴结清除范围、术后确立分期、建立个体化的化疗方案及判断预后均有帮助。
【关键词】胃肿瘤・微转移・肿瘤标记物胃癌是常见的恶性肿瘤。
我国胃癌患者的年死亡率为25.53人/10万人,在各种恶性肿瘤中居首位[1]。
许多患者即使给予了标准R2根治,仍死于远处复发,可能是由于肿瘤发生了微转移[2-4]。
微转移(micrometastases)是指在机体组织、体液及细胞移植物中检测到的镜下及亚显微水平的肿瘤残留,是常规临床病理学方法不能检出的、隐匿在原发灶以外组织的转移[5-6]。
目前认为,临床转移一般都是由微转移发展而来的[6]。
明确肿瘤有无发生微转移,能够更好地对患者进行临床分期并指导治疗。
近年来,组织化学和分子生物学技术的迅速发展使得微转移研究领域也有了较快的发展;随着免疫组织化学和RT-PCR的发展和应用,胃癌微转移的检出成为可能。
1 胃癌微转移的检测方法1.1 常规连续切片HE染色法连续切片法一般用于淋巴结的微转移检测,其检出率与切片间距有很大关系。
仅切取1~2个切面的常规病理切片检查对淋巴结微转移灶的检出率很低,连续切片可以提高淋巴结微转移的检出率。
据报道,对连续切片进行细致分析,能从常规病理组织学检查阴性的淋巴结中检出l0%的微转移[7]。
但是连续切片法需要一个标本切几十乃至几百张切片,工作量大,且敏感度低,对未形成转移灶的少量癌细胞难以检出,故近年来已很少使用。
胃癌的淋巴结转移与临床病理特征的关系叶进军;阎玉矿;李德宁【摘要】目的探讨胃癌淋巴结转移与患者临床病理特征的相关性,为临床诊断和制订治疗方案提供依据.方法对120例患者病例资料进行收集和整理,记录患者性别、年龄、查体情况、病灶部位、肿瘤类型、肿瘤大小、溃疡发生情况、浸润程度、神经侵犯等,并对比其与淋巴结转移的发生情况.结果早期胃癌患者淋巴结转移的病理特征中,以肿瘤直径、组织学分化、大体分型、浸润深度、淋巴管癌浸润的各分型差异有统计学意义(P<0.05);早期胃癌淋巴转移与患者年龄、性别、病灶数量、肿瘤部位、病理类型、手术方式无相关性(P>0.05).结论肿瘤直径、组织学分化、大体分型、浸润深度、淋巴管癌浸润不仅是胃癌淋巴结转移的危险因素,且具有独立性,临床应重视该类特征,为诊断和治疗提供方法,达到治疗目的,提高预后.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2013(035)002【总页数】3页(P222-224)【关键词】胃肿瘤;淋巴结转移;病理特征;相关性研究【作者】叶进军;阎玉矿;李德宁【作者单位】518116,广东省深圳市龙岗中心医院普外科;518116,广东省深圳市龙岗中心医院普外科;518116,广东省深圳市龙岗中心医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R735.2胃癌是主要发病于胃部各个部位的癌症类型,临床以胃窦幽门区发病最多,其次是胃底贲门区,还有胃体部也有少量的病例[1,2]。
胃癌严重影响患者的生命健康,随着病变的加深加重,甚至可能出现转移而进一部损伤患者的组织细胞,从而致死。
近些年来,越来越多的医学研究深入探讨早期病变的特征,以此来对胃癌的发病早发现早施治,从而阻碍病变的深入和加重,为挽救患者的生命和疾病提供更长效的临床支持。
日本内镜学会最早提出了“早期胃癌”(Early Gastric Cancer,EGC)这一概念,主要指胃部癌细胞仅限于胃壁黏膜层或稍侵入黏膜下层,不包含有无淋巴结转移[3]。
淋巴结标记及微转移检测对胃癌病理分期的影响王红岩;刘峥嵘;徐惠绵【期刊名称】《中国肿瘤临床》【年(卷),期】2009(036)016【摘要】目的:本研究采用改良淋巴结显示液(MLNRS)与免疫组织化学染色(IHC)联合法对胃癌术后标本进行区域淋巴结检查,分析其对病理分期(pTNM)的影响.方法:以46例胃癌术后标本为研究对象.先行传统法检出淋巴结,再经MLNRS染色进一步检出淋巴结,所有淋巴结经HE染色诊断是否有转移,无转移者再经IHC法检测微转移.结果:传统法检出淋巴结共1 456枚,HE染色130枚有转移,无转移者再经IHC法检测出63枚存在微转移.标本再经MLNRS染色后又检出1 377枚淋巴结,其中HE染色106枚有转移,无转移者再经IHC法102枚存在微转移.联合检查法淋巴结平均检出数及淋巴结转移检出率均较传统检查法明显增加,差异有统计学意义.不同检查方法分组比较,pN分期以及pTNM分期结果差异明显,具有统计学意义.结论:MLNRS能够提高胃癌区域淋巴结平均检出数,IHC法有助于检测淋巴结微转移,两者联合应用能够提高胃癌区域淋巴结转移检出率,使术后病理分期更为准确.【总页数】4页(P909-912)【作者】王红岩;刘峥嵘;徐惠绵【作者单位】辽宁省人民医院普外科,沈阳市,110016;辽宁省人民医院普外科,沈阳市,110016;中国医科大学附属第一医院肿瘤外科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.淋巴结微转移检测对大肠癌病理分期的影响 [J], 于游;张才全2.淋巴结微转移检测对结直肠癌病理分期的影响 [J], 于游;王灿;彭力;吴强;韩继明;李雅嘉3.前哨淋巴结病理超分期检测肿瘤微转移在子宫颈癌中的应用 [J], 刘瀚元;朱晨辰;申震;吴大保;朱靖;翁海燕;周颖4.胃癌患者血清CA724,NSE和PGR水平联合检测对肿瘤临床病理分期及淋巴结转移的诊断价值 [J], 徐翠香;王建华;武敏;刘宵;张丽洁;黄晓燕5.RT-PCR法检测常规病理检查淋巴结阴性胃癌的淋巴结微转移 [J], 肖卫东;彭承宏;王梦龙;邹叶青;程华;朱培谦因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
胃癌前哨淋巴结研究的临床意义胃癌是全球范围内常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率一直居高不下。
对于胃癌的治疗,早期诊断和精准的手术治疗是提高患者生存率和生活质量的关键。
在胃癌的外科治疗中,前哨淋巴结(Sentinel Lymph Node,SLN)的研究具有重要的临床意义。
首先,我们来了解一下什么是前哨淋巴结。
前哨淋巴结是肿瘤细胞在淋巴系统转移过程中最先到达的一组淋巴结。
对于胃癌来说,前哨淋巴结的定位和检测可以帮助外科医生更准确地判断肿瘤的淋巴转移情况,从而制定更个体化的手术方案。
传统的胃癌手术中,为了防止肿瘤细胞通过淋巴系统扩散,往往会进行大范围的淋巴结清扫。
然而,这种广泛的清扫不仅增加了手术的创伤和并发症的风险,还可能对患者的免疫功能和生活质量造成不利影响。
而通过前哨淋巴结研究,如果能够准确地识别出没有转移的前哨淋巴结,就有可能避免不必要的大范围淋巴结清扫,减少手术创伤和并发症。
在临床实践中,前哨淋巴结的检测方法主要包括染料法、核素法以及联合法等。
染料法通常使用的是亚甲蓝等染料,在肿瘤周围注射后,通过肉眼观察最先染色的淋巴结即为前哨淋巴结。
核素法则是通过注射放射性标记的物质,然后使用γ探测器来定位前哨淋巴结。
联合法结合了染料法和核素法的优点,能够提高前哨淋巴结的检出率和准确性。
胃癌前哨淋巴结研究的临床意义主要体现在以下几个方面:第一,有助于更准确的肿瘤分期。
准确的肿瘤分期对于制定治疗方案和评估预后至关重要。
通过对前哨淋巴结的病理检查,可以更精确地判断肿瘤是否已经发生淋巴转移,以及转移的范围和程度。
如果前哨淋巴结没有转移,那么其他远处淋巴结转移的可能性相对较小,患者的肿瘤分期可能较低,治疗方案也可以相应调整。
第二,指导手术范围的确定。
如前所述,如果前哨淋巴结没有转移,外科医生可以考虑缩小淋巴结清扫的范围,避免过度清扫带来的并发症。
相反,如果前哨淋巴结有转移,就需要进行更广泛的淋巴结清扫,以提高肿瘤的根治效果。
pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的临床意义的开题报告一、选题背景与意义胃癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一。
尽管在治疗方面已取得了一定的进展,但由于淋巴结转移是胃癌病变的重要指标之一,因此对该指标的检查仍然是临床诊断和治疗成功的重要手段。
在胃癌淋巴结微转移检测方面,近年来的进展使得医生们更加精准地检测了患者的转移情况。
二、研究目的本研究旨在探讨pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的临床意义,为患者的治疗提供更准确和有效的指导。
三、研究内容本研究将以文献综述和资料收集为主要研究内容,具体内容包括以下几个方面:1.分析pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的意义。
2.探讨pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测对患者治疗的指导意义。
3.研究pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的技术方法和应用实例。
4.分析pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的不足和研究方向。
四、研究方法1.文献综述法:通过检索相关文献资料,对pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的意义及其研究进展进行详细的梳理和分析,得出结论。
2.实证研究法:通过现场观察和实验分析等方法,对pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的应用实例和技术方法进行研究,得出初步结论。
五、预期结果本研究旨在探讨pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的临床意义,除了能够深入了解其功能和特点,也可为患者的治疗提供更准确和有效的指导。
预期结果为:1.掌握pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的意义及其研究进展。
2.研究pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的应用实例和技术方法。
3.分析pT1-4aN0M0胃癌淋巴结微转移检测的不足和研究方向。
4.为pT1-4aN0M0胃癌患者治疗提供更准确和有效的指导。
胃癌淋巴结微转移的研究进展胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,淋巴结转移是胃癌复发和转移的主要途径,传统HE染色确定肿瘤的转移和分期存在一定的弊端。
随着组织化学和分子生物学方法的进步,使淋巴结微转移的检测成为可能,其在临床中的指导意义也日益受到重视。
本文就国内外淋巴结微转移在胃癌的的研究进展做一综述,以期为临床工作者为胃癌制定个体化的诊疗方案提供一定参考。
标签:胃癌;淋巴结微转移;检测方法;临床意义手术治疗是胃癌的首选治疗方法,而许多患者即使进行了标准D2根治术,最终仍死于远处复发。
淋巴结转移是胃癌复发和转移的主要途径,它是恶性肿瘤转移的一个早期事件和独立预后因素,有淋巴结转移者5年生存率大大降低。
常规组织学检测淋巴结微小转移常有遗漏,直接影响着临床分期的准确性、预后评估以及辅助治疗的选择。
本文将从胃癌淋巴结微转移的检测方法,淋巴微转移与临床转移和临床病理特征的关系,淋巴微转移的临床意义这几个方面综述其研究进展。
1 淋巴结微转移相关概念淋巴结微转移属于微转移的一类,它指常规组织病理学检查淋巴结阴性,而免疫组织化学染色显示单个或成簇恶性肿瘤细胞。
根据其癌灶大小和组织学变化,可分为三类:①肿瘤细胞微累及:是指单个或成簇(瘤细胞聚集3cm时,淋巴结转移率为19.2%。
研究发现浸润性生长胃癌(Borrmann分型Ⅲ、Ⅳ型)较呈膨胀性生长者(Borrmann分型Ⅰ、Ⅱ型)更易发生微转移。
这可能是因为肿瘤直径越大、侵袭性越强,肿瘤细胞侵入淋巴管的机会就随之增多,从而更易发生淋巴结转移。
5 淋巴结微转移检测的临床意义5.1确定分期UICC在新的TNM分期中更加注重淋巴结转移的情况,如将淋巴结微转移也纳入胃癌的TNM分期,那么患者的临床病理分期将会上升。
Yun 等[7]对355例胃癌患者淋巴结微转移进行检测,结果共有8.5%的患者分期得到提高,其中在T1期提高的比例是6.7%,T2是14.8%,T3是2.4%,T4是0%。
中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。
论文作者签名:重丝壅日期:7≯卫口。
S、§中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。
本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。
学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。
学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外),以采用影印、缩印或其他手段保存论文。
论文作者签名:指导教师签名:委妇靖胃癌第10组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系及其临床意义目的探讨59例胃癌第10组淋巴结微转移状态与胃癌生物学行为的关系及其与其他组别淋巴结转移的关系,探讨胃中上部癌联合脾切除清扫第10组淋巴结的必要性。
方法选取中国医科大学第一附属医院肿瘤科1998年9月至2004年6月间行根治性全胃切除或近端胃大部切除联合脾切除的59例胃癌患者的第10组淋巴结标本,共112个。
标本均经福尔马林固定,石蜡包埋处置。
所有病例术前均未行放化疗治疗。
现每例重新行间断连续切取10张厚度为4um切片(共680张),选取第一张用于常规HE染色,其余用于CK20免疫组织化学染色(S—P法),检测第10组淋巴结微转移,并进行统计学处理。
结果1、胃癌细胞CK20染色时,胞浆呈较强着色,以周边部最显著。
59例胃癌患者根治术后常规病理染色无转移的第10组淋巴结共112个,其中14例15个淋巴结CK20染色微转移阳性。
14倒微转移病例中1例所累及的淋巴结为2个,其余均为1例1个。
微转移表现为单个或2—3个细胞聚集,位置以边缘窦为主。
同期病例常规病理染色第10组淋巴结转移率为17.9%,微转移的检出(23.7%),提高了第10组淋巴结转移的检出率。
2、第10组淋巴结微转移的发生与肿瘤大小及大体类型无关,而与肿瘤的分化程度、生长方式、侵袭深度及肿瘤的部位有关。
3、第10组淋巴结微转移的发生与大弯侧淋巴结(No.4)转移有关。
・】・结论1、低分化、弥漫性生长、浸透浆膜的上部胃癌,第10组淋巴结易发生微转移。
2、大弯侧淋巴结(No.4’转移阳性者,第lO组淋巴结微转移发生率高。
3、第10组淋巴结微转移检测对胃癌重薪TNM分期及指导外科治疗有一定的临床价值。
第10组淋巴结微转移的存在,提示胃上、中部癌行全胃或近端切除D:根治术时,应联合预防性脾切除,以彻底清除第lo组淋巴结,保证根治性。
关键词淋巴结微转移,细胞角蛋白20,胃癌,第10组淋巴结・2・(‘1甄甄r)ThestudyofrelationshipbetweenthemicrometastasisofNo.10lymphnodes(LN)andthebiologicalbehaviorofgastriccanceranditsclinicalsignificance.AbstractObjectiveToevaluatetherelationshipbetweenthemicrometastasisofNo.10lymphnodesandthebiologicalbehaviorof59gastriccanceranditsclinicalsignifi-evaluatethenecessaryofdissectionofNo.10lymphnodes.cance;toThemicmmetastasisofNo.10lymphnodeswasdetectedbytheintermission—continuousset,onandCK20immunohistochemistrytechnique.ResultsMicmmetastasisofNo.10lymphnodeswereobservedin15lymphnodesof14patients.ThereisnorelationshipbetweenthemierometastasesofNo.10lymphnodesandgrosstypeandmaximaldiameterofthetumor,andthereistherelationshipswiththedifferentiation,diffusetype,invasiondepthandpositionoftheprimarytumor,thepositifivemetastasisinNo.4lymphnodeswerepredictivefactorsformicrometastasistoNo.10lymphnodes.Themethodofconjointingtheintermissioncontinuous—sectionandCK20・3・immunhistochemistrytechniquemaybevaluabletore—estimatethelymphnodesmestastasisstatusandstageofgastriccancer,thetotalandproximalgas—trectomyshouldbecombinedwithspleneetomytodissecttheNo.10lymphnodes.nodeKeywordslymphnodesmicrometastasis,cytokeration20,gastriccancer。
No.10lymph・4・,………一+一、;、英文缩略语,I・5・胃癌第lo组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系及其临床意义制置转移是恶性肿瘤的重要特征,也是导致癌症患者死亡的主要原因。
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,目前对其局部原发肿瘤采取以手术为主的综合治疗措施,但根治术后仍有部分患者(20%)死于复发和转移。
淋巴结转移是胃癌转移和复发的主要途径之一,是影响胃癌患者预后的最重要因素。
清扫转移淋巴结是胃癌无肿瘤残余术的合理要求,第10组淋巴结属于第二站或第三站淋巴结,有一定的转移率。
通过对常规病理检查没有发现转移的第10组淋巴结进行微转移的检测,将对临床准确分期及术式选择有重要意义。
淋巴结微转移一般是指恶性肿瘤在发展过程中,播散并存在于淋巴结中的肿瘤细胞尚未形成结节,无临床表现,常规病理检查难以发现的微小转移。
目前应用于淋巴结微转移的检测方法有多种。
连续病理切片法是最早应用于检测淋巴结微转移的一种方法,对常规检测阴性的淋巴结进行连续常规病理切片检查,可提高淋巴结转移的检出率。
但此方法与切片间隔有很大相关性,且费时费力,难以广泛应用于临床。
免疫组织化学方法采用不同的标记抗体,方法实用有效,应用较广。
各种研究区别在于选择不同的抗体。
免疫组织化学方法简便,直观,还可用于鉴别肿瘤病理来源。
缺点是易遗漏,需连续切片,单抗的质量,交叉反应等因素影响检测的敏感性和特异性。
RT—PCR是通过对肿瘤标志物mRNA表达水平的检测来诊断微转移。
PCR被认为是目前检测微转移最敏感的方法,但技术要求高,检测价格昂贵,临床应用受到限制。
本研究采用间断连续切片法结合CK20免疫组织化学方法检测胃癌第10组淋巴结微转移情况,旨在探讨第lO组淋巴结微转移与胃癌生物学行为的关系,对病期重新评估,探讨其临床意义,指导术式的选择。
.6・~一[一一一一F~一一~一实验材料与方法~、实验材料1.研究对象选取中国医科大学第一附属医院肿瘤科1998年9月至2004年6月间行根治性全胃切除或近端胃大部切除联合脾切除的59例胃癌患者的第10组淋巴结标本,共112个.标本均经福尔马林固定,石蜡包埋处置。
所有病例术前均未行放化疗治疗。
其中男性43例,女性16例,年龄34—74岁,平均6l岁。
所有患者临床病理分期按日本胃癌研究会规约和1997年UICC胃癌TNN分期标准。
临床病理因素分为:肿瘤部位(上部,中部);肿瘤大小(。
<5cm,>5cm);大体类型(Borr.1+2,Borr.3+4);组织学类型(分化,未分化);生长方式(团块状+巢状,弥漫状);浸润深度(粘膜层+肌层,浆膜层+浆膜外)。
2.主要仪器设备切片机(Finesse一325.u.k),4℃冰箱(新飞BED一190D),光学显微镜(Olympus—BH一2),电热培养箱(双猫牌HH.B11.500.70c),医用烤箱(沈阳瑞龙牌烤片机)3.主要试剂(1)人单克隆细胞角蛋白CK20(即用型);(2)兔抗鼠s—P超敏试剂盒(链霉素抗生素蛋白一过氧化酶免疫组织化学染色超敏试剂盒);(3)0.05%DAB显色剂;(4)胃蛋白酶。
以上试剂均购自福建迈新公司。
二、实验方法1.实验取材:全部59例胃癌患者术中所取第lO组淋巴结共112个(68个蜡块),标本均经福尔马林固定,石蜡包埋,现每例重新行间断连续切取10张厚度为4um切片(共680张),选取第一张用于常规HE染色,其余用于EK20免疫组织化学染色。
2.常规组织病理染色:-1・切片经常规垮片20分钟(7懒,二甲苯l脱蜡10分钟‘二甲苯Il脱蜡10分钟I无水酒精I脱水10分钟0无永酒精II脱水10分钟‘9矾酒精脱水5分钟‘自来水冲洗l苏木蠢浸染2分钟0自来水冲洗‘‘自来水冲洗l9骗酒精I脱水5分钟l9鞴滔精ll脱水5分钟I无水酒精I脱水10分钟0无水酒精II脱水10分钟0二甲苯I、透明5分钟0二甲苯lI透明5分钟‘3.免疫组织化学染色:免疫组织化学染色采用S—P免疫组织化学染色方法。
使用一抗为鼠抗人单克隆细胞角蛋白20抗体。
抗原修复采用胃蛋白酶37℃温箱孵育20分钟。
二抗为兔抗鼠抗体含于S—P超敏试剂盒中。
染色过程按照兔抗鼠s—P超敏试剂盒说明书上步骤实施,具体步骤如下:・8・免疫组织化学染色1.脱靖&水化二甲苯I15分钟l二甲苯1115分钟{糕55镛上85%酒精5分钟75%酒精3分钟2.PBS缓冲液PH7.4洗净3x5分钟Il3.抗原修复胃蛋白酶37℃温蓓孵育20分钟l4.PEgS缓冲液PH7.4,冲洗3x5分钟l5.每张切片加入一滴试jI蛩^I阻斯内源性过氧化匏酶活性。
室沮孵育lO分钟l6.PBS缓冲液Ptl7A,冲洗3x5分锋7.每张切片加l滴或50d动物非免疫血清(试剂B),室温下孵育20分钟.18.移去试剂BI每张切片加一滴一抗CK20掘入漫▲.4℃冰糖过夜。