HPLC常见问题和解决方法总汇

高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法诊状(一)保留时间变化可能的原因: 解决方法1.柱温变化:柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液4.柱污染:每天冲洗柱5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相6.柱快达到寿命:采用保护柱(二)保留时间缩短可能的原因: 解决方法1.流速增加:检查泵,重新设定流速2.样品超载:降低样品量3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加:柱恒温(三)保留时间延长可能的原因: 解决方法1.流速下降:管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱3.键合相流失:同前(二)34.流动相组成变化:同前(二)45.温度降低:同前(二)5(四)出现肩峰或分叉可能的原因: 解决方法1.样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强:采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品5.进样器损坏:更换进样器转子(五)鬼峰可能的原因: 解决方法1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2.样品中未知物:处理样品3.柱未平衡:重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱) : 每天新配,用抗氧化剂5.水污染(反相) : 通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水(六)基线噪声可能的原因: 解决方法1.气泡(尖锐峰) : 流动相脱气,加柱后背压2.污染(随机噪声) : 清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声:更换氘灯4.电干扰(偶然噪声) : 采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡:流动相脱气,加柱后背压(七)峰拖尾可能的原因: 解决方法1.柱超载:降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干扰:清洁样品,调整流动相3.硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,钝化样品4.同前(四)4 : 同前(四)45.同前(四)3 5. : 同前(四)36.死体积或柱外体积过大:连接点降至最低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降:用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱(八)峰展宽可能的原因: 解决方法1.进样体积过大:同(四)12.在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点4.检测器时间常数过大:设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相6.检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载:进小浓度小体积样品液相色谱柱使用及保养液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成，其中液相色谱柱的正确安装和使用，是液相色谱工作的关键；也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。

高效液相色谱仪常见故障及解决方法一、泵故障1. 故障现象：泵无法正常启动或启动后无法正常停止。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧。

2. 故障现象：泵的流量不稳定或无法调节。

解决方法：检查泵头是否有污物堵塞，清除污物；检查泵头与控制器之间的连接线是否接触良好，如有松动，重新插紧；检查泵头与柱塞之间的密封圈是否损坏，如损坏，更换密封圈。

二、流动相跑空1. 故障现象：流动相液位下降至最低液位以下，导致无法正常进样。

解决方法：检查流动相的储液瓶是否已空，如已空，重新更换储液瓶；检查流动相的流速设置是否正确，如不正确，重新设置流速；检查管路是否有泄漏点，如存在泄漏点，修复泄漏点。

2. 故障现象：流动相液位迅速下降，导致无法正常进样。

解决方法：检查废液瓶是否已满，如已满，倾倒废液；检查管路是否有堵塞或弯折，如有，更换管路或调整管路布局。

三、峰面积重复性差1. 故障现象：同一色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查进样针的清洗是否彻底，如不彻底，加强清洗；检查样品前处理的稳定性是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：不同色谱条件下，每次运行同一色谱图时，峰面积重复性差。

解决方法：检查流动相的组成是否恒定，如不恒定，重新配制流动相；检查色谱柱的稳定性是否可靠，如不可靠，更换色谱柱；检查检测器的波长是否准确，如不准确，重新调整波长。

四、峰丢失1. 故障现象：在色谱图中看不到预期的峰。

解决方法：检查进样针是否堵塞或断裂，如堵塞或断裂，更换进样针；检查进样阀的切换次数是否过多，如过多，减少切换次数；检查样品前处理是否可靠，如不可靠，重新进行样品前处理。

2. 故障现象：在流动相中添加了某种物质后，出现了预期之外的峰。

解决方法：检查流动相中添加的物质是否稳定，如不稳定，重新配制流动相；检查检测器的灵敏度是否足够高，如不够高，调整灵敏度；检查色谱柱的类型是否正确，如不正确，更换色谱柱。

高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。

解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。

-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。

解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。

2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。

解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。

3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。

-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。

解决方案包括更换流动相或清洗柱。

4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。

解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。

-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。

解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。

5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。

解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。

6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。

解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。

7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。

解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。

8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。

解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。

这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。

在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。

液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。

调整衰减即可。

5、检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

7、检测池中有气泡。

解决办法为排气。

8、流动相流量不合适。

调整流速即可。

为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查（在安装了保护预柱的情况下）；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，若压力仍高则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

若柱压还高，请与厂商联系。

液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合HPLC 仪器问题1、我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。

HPLC异常问题原因及解决办法办法（一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。

从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。

A、没有压力显示，没有流动相流动B、流动相流动正常，但没有压力显示C、压力持续偏高D、压力持续偏低E、压力不断上升F、压力降为零G、压力不断下降，但不回零H、压力波动HPLC日常维护办法之二：漏液漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。

如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。

A、接头处漏液B、泵漏液C、进样阀漏液D、色谱柱漏液筛板选择指导E、检测器漏液HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。

对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。

A、峰拖尾B、峰前延C、峰分叉D、峰变形E、早出的峰变形F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰G、K’增加时，脱尾更严重H、酸性或碱性化合物的峰拖尾I、额外的峰J、保留时间波动K、保留时间不断变化L、基线漂移M、基线噪音（规则的）N、基线噪音（不规则的）O、宽峰P、分离度降低Q、所有的峰面积都太小R、所有的峰面积都太大HPLC日常维护办法之四：你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。

你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。

例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。

大部分的问题是可以通过眼睛看到。

A、溶剂的气味B、热气味C、读数不正常D、灯警告E、警告音F、刺耳的短音或长音。

HPLC色谱常见问题1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？7.色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗？9.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现鬼峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发生重排？22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些？23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖”峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发生及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管子切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“无限直径效应”？34.如何评价一台检测器？35.如何简单判断比例阀是否内漏？1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

HPLC的故障诊断及其维修在实验室中，高效液相色谱(HPLC)是一种常用的分析方法，但是使用过程中可能会出现一些故障。

下面将对HPLC的常见故障进行诊断和维修。

1. 压力问题如果HPLC系统的压力异常升高或降低，可能是由于柱堵塞、封口件失效或泵的问题引起的。

此时需要检查柱是否需要更换，清洗封口件或者校准泵的工作方式。

2. 色谱峰形问题如果HPLC的色谱峰出现拖尾、畸变或分离不良的情况，可能是由于进样器、柱或检测器的问题。

此时需要检查进样器的清洁程度、柱的使用寿命以及检测器的工作状态。

3. 泄漏问题HPLC系统的泄漏可能会导致试剂的浪费并且对操作人员造成危险。

在发现泄漏时，需要立即停止使用HPLC系统，并检查管路和连接件是否紧固，替换损坏的零件。

4. 溶剂问题HPLC的溶剂可能会受到污染或者流速不稳定，导致分析结果不准确。

此时需要更换新的溶剂瓶、清洗管路和泵，并重新校准流速。

以上是HPLC常见的故障诊断和维修方法，为了保证分析结果的准确性和仪器的稳定性，实验室操作人员需要定期对HPLC进行检查和维护。

高效液相色谱（HPLC）作为一种准确、灵敏和可靠的分析技术，在化学、生物和制药领域中得到了广泛的应用。

然而，HPLC分析过程中常会遇到一些故障，这些故障可能会影响分析结果的准确性和可靠性。

因此，了解常见的HPLC故障并掌握相应的维修方法对于保障实验室分析工作的顺利进行至关重要。

5. 柱温度问题HPLC柱温度的稳定对于分离和检测分析结果非常重要。

如果发现柱温度不稳定或者超出设定范围，一般可以通过检查柱箱温度控制器、换热器或者冷却器来确定问题所在，并及时调整或更换相关部件。

6. 泵的稳压性能问题HPLC泵的稳压性能直接影响流速和流量的准确性。

如果发现流速或者流量不稳定，需要检查压力传感器、活塞密封件等部件是否出现损坏或者磨损，及时更换损坏部件进行维修。

7. 检测器故障检测器在HPLC分析中起着至关重要的作用，如果出现检测信号异常、漂移或者峰形畸变，需要检查检测器灯泡是否老化，光路是否受到污染或者调整参数设置是否准确，进行相应的维修和调整。

高效液相色谱仪故障排除指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，可以广泛应用于药物分析、环境检测、食品科学等领域。

然而，在使用过程中，不可避免地会出现一些故障情况。

本文将介绍一些常见的HPLC故障，并提供相应的排除方法。

一、进样器故障1. 进样器漏液若观察到进样口出现漏液现象，首先可以检查密封件是否完好，如若密封件损坏应及时更换。

若密封件完好，还可以检查进样器盖上是否存在污垢，若有，则可清洗并重新安装。

2. 进样器堵塞如果在进样过程中发现进样器堵塞，可以先使用无机溶液进行冲洗，以清除可能存在的样品残留物。

如果仍然无法解决堵塞问题，可以采取拆卸进样器进行彻底清洗的方法。

二、柱温箱故障1. 温度控制不稳定若柱温箱的温度控制不稳定，可能会导致分离信号的漂移，影响分析结果的准确性。

这时，可以首先检查温度控制仪是否设置正确，如有必要，可以重新设置。

另外，也可以检查柱温箱是否存在漏气现象，若存在，应及时修复。

2. 柱温箱泄漏柱温箱泄漏可能会导致温度失控，因而影响分析结果。

检测到泄漏时，应首先检查柱温箱的密封性能，如有必要，可以更换密封圈，确保密封良好。

三、流动相泵故障1. 流量不稳定如果在使用流动相泵时，发现流量不稳定，可能是由于空气进入了系统，导致气泡形成。

这时，可以检查胶管连接是否松动，以及胶管中是否有积气现象。

如果检查后仍然无法解决问题，可以考虑更换胶管或检修流动相泵。

2. 压力异常如果HPLC系统在运行过程中压力异常，可能是由于流动相泵的压力传感器出现问题。

此时，应检查压力传感器是否损坏，如有必要，可以进行维修或更换。

四、检测器故障1. 检测器信号异常如果在分析过程中，检测器的信号异常，可能是由于光源出现故障导致。

这时，可以检查光源是否正常工作，如有必要，可以更换光源。

另外，也可以尝试调整检测器的增益或灵敏度，以改善信号异常问题。

HPLC常见问题及解决办法1.保留时间的变化（对于反相液相色谱，正相相反）1.1怎么样缩短保留时间（1）加大流速（2）加大有机相（A相）比例，极性缩小，其基本原理可以用相似相容原理解释，以此也可以用来解释薄层色谱中极性过大，点会出现在溶剂前沿。

（3）梯度洗脱，N分钟后（前面峰出来之后），加大A相比例。

与（2）相比更适用，如果直接加大有机相比例，可能导致前面的峰分不开。

（4）改变有机相，换成洗脱能力更强的，如甲醇换成乙腈。

（5）适当调高柱温。

（6）柱子缩短，减小柱子的内径，1.2 如何延长保留时间（1）换新柱子，新柱子一般较旧柱子保留时间长，当然指的是同等规格的柱子。

(2)色谱柱填料粒径减小，延长保留时间，分离效果和柱效变高。

但是粒径和孔径的变小，会使柱压升高，，因而会用比较小的流速，从而造成分离时间的延长和一定程度的峰展宽。

（3）其他的方法与缩短保留时间的方法相反。

2.怎么样提高分离度（1）一般提高液相的分离，主要就是从增加色谱柱的理论塔板数，从而提高柱效，使分离效果更好。

减小色谱柱填料的粒径。

使用粗长的色谱柱。

（2）提高柱温可缩短分析时间；降低柱温可使色谱柱选择性增大，有利于组分的分离和色谱柱稳定性提高。

（3）延长保留时间。

3.谱峰拖尾影响因素（1）在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留值重现性差和峰拖尾。

增加缓冲浓度(与样品大小相匹配)能大大改善此情况。

（2）干扰峰的影响，通过使用更长的色谱柱或改变流动相的比例，可以减小干扰峰的影响。

（3）筛板阻塞，解决方法有a反冲色谱柱b更换进口筛板、c更换色谱柱（4）色谱柱塌陷，可以通过填充色谱柱来解决。

（5）流动相PH选择错误，调整PH，对于碱性化合物，低PH更易于得到对称峰。

高效液相色谱HPLC常见问题分析1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？① 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

② 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③ 可能柱超载，减少进样量。

3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法① 样品量不足，解决办法为增加样品量② 样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③ 样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器④ 检测器衰减太多。

调整衰减即可。

⑤ 检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数⑥ 检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

⑦ 检测池中有气泡。

解决办法为排气。

⑧ 记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

⑨ 流动相流量不合适。

调整流速即可。

⑩ 检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？① 泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；② 比例阀失效，更换比例阀即可；③ 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；④ 溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；⑤ 系统检漏，找出漏点，密封即可；⑥ 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。