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核酸检测考核试题和答案大全1.临床实验室对检测系统进行性能核实时，需要进行精密度和准确性实验。
2.基因芯片技术的本质是核酸分子杂交技术。
3.当肺炎患者行有创机械通气时，正确的方法是使用小潮气量和低吸气压力。
4.合成RNA的原料是NTP。
5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等危险因素伤害的器材和用品。
6.参与杂交反应的已知核酸序列标记为探针。
7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接使用套管或伞型罩连接。
8.第三代测序技术的特征是单分子测序。
9.在新冠病毒核酸检测实验室中，净化实验室专用门不具备特定的特点。
10.正确的对应关系是敏感性=真阳性/真阳性+假阴性*100%。
11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约为1000bp。
12.分子信标技术的设计并不简单。
13.国内的生物安全实验室必须按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》进行管理。
14.从鼻咽拭子中提取的剩余核酸提取物不能用于丙型肝炎病毒的诊断。
15.退火温度是PCR反应特异性的关键因素，通常退火温度为Tm减5℃。
16.实验室人员培训的主要内容包括以上所有内容。
17.Taq DNA聚合酶在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸，形成3',5磷酸二酯键。
18.孔位不足时，不能将0.5mEP管放入1.5m加热孔中进行热裂解，加热时间不变。
19.脱卸三级防护装备的顺序是鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩。
20.进行核酸提取的有效性评价是临床分子生物学检验分析前的质量控制内容之一。
21.在核酸检测体系中加入内部质控的作用不仅是监测单项，还包括监测样本吸取错误所致的假阴性结果。
22.生物危害是指各种生物因子对人类健康、环境和社会造成的危害。
31.性能验证计划应包括验证项目内容、待验证性能指标、验证实施方案和结果判断标准。
32.感染病例出院的标准包括体温恢复正常3天以上、呼吸道症状明显好转以及连续2次呼吸道标本病原核酸检测阴性（采样时间间隔至少24小时）。
《分子诊断学》习题一、名词解释1、基因:是有功能的DNA，合成含有功能的蛋白质多肽链或RNA所必需的全部核苷酸序列是遗传的结构和功能单位。
2、假基因:或称伪基因，是基因家族在进化过程中形成的无功能残留物，在真核生物多基因家族中存在因突变而失活，不能表达出有活性的产物。
3、结构基因:指能编码蛋白质或RNA的基因。
4、基因家族:真核细胞中许多相关的基因常按功能成套组合被称为基因家族。
5、管家基因:是指所有细胞中均要稳定表达的一类基因，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的。
6、重叠基因:指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列或者一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。
7、基因组:细胞中一套完整单体的遗传物质的总和，指生物体全套遗传信息，包括所有的基因和基因间区域。
8、人类基因组计划:主要任务是人类的DNA测序，绘制人类基因组图谱。
9、内含子:是指真核生物基因转录区位于相邻外显子之间的序列及初级转录后加工之后保留于成熟DNA中的序列和转录区内的对应序列，属于非编码序列。
不能参与基因表达调控序列。
10、外显子:是基因(真核生物)转录区的初级转录产物，经过转录后加工之后，保留于成熟DNA中的序列和转录区内的对应序列，属于编码序列。
11、基因表达:只将来自基因的遗传信息合成功能性基因产物的过程。
12、核酸分子杂交:互补的核苷酸序列通过碱基互补配对形成稳定的杂合双链DNA或RNA分子的过程。
13、核酸探针:能识别特异碱基序列的带有标记的一段DNA或RNA分子。
14、聚合酶链反应：是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性，低温退火，及适温延伸等几步反应组成一个个周期循环进行，使得DNA得以迅速扩增，具有特异性强，灵敏度高，操作简便省时等特点。
15、巢式PCR：使用两队对引物，一对引物序列在模板的外侧，用于扩增含目的基因的大片段，另一对引物序列在模板内侧，用于扩增目的基因。
第一对引物做PCR的扩增产物，作为第二对引物退火的模板，再进行第二轮PCR，这样经过两次PCR放大，灵敏度得以提高。
![[说明]核酸分子杂交及PCR技术](https://img.taocdn.com/s1/m/cd08778f50e79b89680203d8ce2f0066f53364c4.png)
核酸的分子杂交技术一、核酸分子杂交用标记的已知DNA或RNA片段（探针）来检测样品中未知核酸序列，通过核苷酸间碱基互补的原则发生异源性结合，再经显影或显色的方法，将结合核酸序列的位置或大小显示出来。
待测的核酸序列，可以是克隆的基因片段，也可以是未克隆化的基因组DNA和组织细胞的RNA。
二、核酸分子杂交的分类液相杂交核算分子杂交印记杂交固相杂交原位杂交1.固相杂交：将需要杂交的一条核酸链先固定在固体支持物上，另一条核酸链游离在液体中。
2.液相杂交：参与反应的两条核酸链都游离在液体中。
常用固相杂交类型：Southern印迹杂交、Northern印迹杂、菌落原位杂交、斑点杂交、狭缝杂交、组织原位杂交、夹心杂交等。
三、核酸分子杂交的基本原理1、变性：在某些理化因素的作用下，核酸双链分子碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，双链螺旋或发夹结构被拆开，有规则的空间结构被破坏，形成单链分子，称为核酸的变性。
﹡引起核酸变性的因素：热、酸、碱、化学试剂（如：尿素、甲酰胺、甲醛等）。
﹡加热变性是最常用的方法，一般加热80-100℃数分钟即可使核酸分子氢键断裂，双链分开。
﹡变性的核酸分子失去了生物活性，同时理化性质也随之改变，其紫外吸收值（A260）也随之升高。
可用紫外吸收的变化来跟踪DNA的变性过程。
以A260吸收值对应温度作图，得到DNA的变性曲线或熔解曲线。
增色效应：DNA变性后对260nm紫外光收增加的现象。
DNA热变性现象双螺旋结构即发生解体，两条链分开形成无规则线团。
同时，一系列物化性质发生改变：260nm处紫外吸收值升高，粘度降低，浮力密度升高。
由于二级结构的丧失，也失去了部分或全部生物活性。
增色效应和减色效应当DNA分子加热变性后，其260nm的紫外吸收会急剧增加的现象称为增色效应。
变性DNA复性后，在260nm处的吸收值减少的现象称为减色效应。
A260值达到最大值1/2时的温度称为解链温度或熔解温度（melting temperature,Tm)，此时50%的DNA分子发生了变性。
核酸分子杂交技术定义核酸分子杂交技术是一种广泛应用于生物学和医学领域的技术手段。
它利用互补配对的原理，将两个核酸链在一定条件下结合成一个双链分子。
该技术可用于分析、检测、鉴定、筛选和修饰核酸分子等方面，具有重要的实验和临床应用价值。
一、技术原理核酸分子杂交技术的原理是基于核酸互补配对的规律。
核酸是由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳞状细胞素）组成的双链分子，两条链通过氢键相互配对形成双螺旋结构。
在核酸分子杂交技术中，将两个互补的核酸链置于一定条件下（如适当的温度、pH值和离子浓度等），使它们形成双链分子。
这个过程中，两个链之间的氢键会断裂，然后重新组合成新的氢键，形成一个更稳定的双链分子。
这个过程被称为“杂交”。
二、应用领域1. 分析基因序列核酸分子杂交技术可用于分析基因序列。
通过与已知序列相比较，可确定未知序列的位置和组成。
这种技术被广泛应用于基因组学和生物技术领域，包括基因定位、基因诊断、基因克隆和基因表达研究等方面。
2. 检测病原体核酸分子杂交技术可用于检测病原体。
该技术可以检测细菌、病毒、真菌和寄生虫等微生物的存在和数量。
与传统的细菌培养方法相比，核酸分子杂交技术具有更高的灵敏度和特异性，可以更快速和准确地诊断疾病。
3. 鉴定基因型核酸分子杂交技术可用于鉴定基因型。
通过检测DNA序列的变异，可以确定不同基因型之间的差异。
这种技术被广泛应用于疾病的遗传咨询、人类学研究和法医学等领域。
4. 筛选基因库核酸分子杂交技术可用于筛选基因库。
该技术可以通过与探针的杂交来筛选目标基因，从而快速地鉴定和克隆感兴趣的基因。
这种技术被广泛应用于基因工程、药物研发和生物产业等领域。
5. 修饰核酸分子核酸分子杂交技术可用于修饰核酸分子。
通过与修饰剂的杂交，可以将不同的化合物引入到核酸分子中，从而实现对分子结构和性质的调控。
这种技术被广泛应用于药物研发、生物材料和生物传感器等领域。
三、实验步骤核酸分子杂交技术的实验步骤包括样品处理、杂交反应、检测和数据分析等环节。
核酸分子杂交试题一 . 名词解释 :1. 核酸分子杂交2. DNA 复性3. Southern 杂交4. Northern 杂交5. 斑点印迹6. 原位杂交二 . 单项选择题 :1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条 的称为（ ）。
A. DNA 变性B. DNA 复性C. DNA 重组2. DNA 变性的本质是（ ）的断裂。
A. 盐键B. 氢键C. 离子键3. 一般影响核酸变性的温度可选在（ ）。
A. 60 — 70 CB. 70 — 80 CC. 80 — 90 CA. 0.1 3 gB.0.1 — 0.5 3 gC.0.5-- 1 3 gD.1.0 —1.5 3g6. 杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在 （ ）。
A. 50 —300bpB. 20 —200bpC.300 —400bpD.200 —500 A. A260 吸收值 B. A280 吸收值C .A320 吸收值 D. A360 吸收值 4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。
DNA 链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响 D. DNA 杂交 D. 共价键 D. 90 —100C DNA 复性曲线所用的紫外吸收值是（ ）。
7. 进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm 值低（）。
A.10 CB.15 CC.20 CD.25 C8. 寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm 值（）下进行。
A.5CB.10CC.15CD. 25C9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm 值（B ）。
A.尿素B.甲酰胺C.甲醛D.乙醇10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA 片段在合理的时间内从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA 片段控制在大约（）。
A. 1KbB. 2 KbC. 3 KbD. 4 Kb11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。
第十八章基因诊断与基因治疗一、填空题1. 基因突变可导致____的改变，从而引起____。
2. 基因变异包括____和____。
3. 内源性基因变异包括____、____、____和____等。
4. 外源性基因变异是指____疾病。
5. 基因诊断常用技术方法有____、____、____和____。
6. 核酸分子杂交技术是依据____、____和____原理设计的技术方法。
7. 常用固相核酸杂交方法有____、____、____、____、____和____等。
8. PCR是____的缩写，译为____。
9. PCR过程由____、____和____步骤组成。
10. 生物芯片技术包括____、____、____、____、____和____。
11. 基因测序是将有关基因进行____，测出____，从中找出____所在。
12. 基因治疗在概念上分为____和____。
目前普遍接受的是____。
13. 基因治疗的总体策略主要有____、____、____、____、____、____和____等。
14. 基因治疗的基本程序包括____、____、____、和____。
15. 获得治疗性基因的方法包括____、____、____、和____。
16. 常被用于基因治疗的基因转移载体有____、____和____。
17. 基因治疗中的靶细胞也称为____细胞，靶细胞有____和____两大类。
18. 基因转移方法概括地讲有____、____和____等。
二、名词解释19. 基因诊断20. 基因治疗21. 核酸分子杂交22. Southern blotting23. 生物芯片24. 免疫基因治疗25. 基因矫正26. 基因置换27. 基因增补28. 基因失活29. 自杀基因30. 夹心杂交31. 引物32. Northern blotting33. PCR三、问答题34. 简述基因诊断的特点。
35. 简述分子杂交程序。
第十一章分子生物学常用技术及其应用一、名词解释1．DNA重组 2．基因工程3．限制性核酸内切酶 4．基因组DNA文库5．cDNA文库 6．聚合酶链反应（PCR）7．载体 8．转化9．感染 10．核酸分子杂交11．Southern印迹杂交 12．Northern印迹杂交13．斑点印迹 14．原位杂交15．DNA芯片 16．基因诊断17．基因治疗二、选择题A型题：1.限制性核酸内切酶作用特点不包括：A．在对称序列处切开DNA B．DNA两链的切点常不在同一位点C．酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端 D．DNA两链的切点常在同一位点E．酶辨认的碱基一般为4～6个2．限制性核酸内切酶：A．可将单链DNA任意切断 B．可将双链DNA序列特异切开C．可将两个DNA分子连接起来 D．不受DNA甲基化影响E．由噬菌体提取而得3．cDNA文库包括该种生物的：A．某些蛋白质的结构基因 B．所有基因组C．结构基因与不表达的调控区 D．内含子和调节区E．内含子和外显子4．下列关于建立cDNA文库的叙述哪项是错误的：A．从特定组织或细胞中提取mRNAB．将特定细胞的DNA用限制性核酸内切酶切割后，克隆到噬菌体或质粒中C．用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNAD．用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNAE．加S-腺苷甲硫氨酸（SAM），以使新生的DNA双链甲基化5．限制性核酸内切酶的通常识别序列是：A．粘性末端 B．RNA聚合酶附着点C．回文对称序列 D．聚腺苷酸E．甲基化“帽”结构6．pUC系列是指：A．经人工改造的大肠杆菌质粒 B．天然的大肠杆菌质粒C．天然的酵母质粒 D．经人工改造的大肠杆菌噬菌体E．经人工改造的酵母质粒7．用于转染哺乳类细胞的常用载体是：A．质粒 B．噬菌体C．逆转录病毒RNA D．结构基因E．乳糖操纵子8．转化常指：A．噬菌体感染 B．基因的转位C．摄取外来DNA，引起细胞生物学类型的改变 D．产生点突变E．产生移码突变9．基因工程的操作程序可简单地概括为：A．载体和目的基因的分离、提纯与鉴定 B．分、切、接、转、筛C．将重组体导入宿主细胞，筛选出含目的基因的菌株 D．将载体和目的基因接合成重组体E．限制性核酸内切酶的应用10．用于基因治疗较为理想的载体是：A．质粒 B．噬菌体C．经改造的逆转录病毒 D．人类DNAE．酵母质粒11．常用质粒有以下特性：A．是线形双链DNA B．插入片段的容量比λ噬菌体DNA大C．含有抗生素抗性基因 D．含有同一限制性核酸内切酶的多个切口E．不随细菌繁殖而进行自我复制12．在重组体中切出插入片段最常用的方法是：A．以重组时所用限制性核酸内切酶将其切出 B．用其它限制性酶将其切出C．用S1核酸酶将其切出 D．用DNA酶将切出E．用多种限制性内切酶将其切出13．利用PCR扩增特异DNA序列主要原理之一是：A．反应体系内存在特异DNA片段 B．反应体系内存在特异RNA片段C．反应体系内存在特异DNA引物 D．反应体系内存在特异RNA引物E．反应体系内存在的TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列的作用14．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A．大肠杆菌表达体系 B．原核表达体系C．酵母表达体系 D．昆虫表达体系E．哺乳类细胞表达体系15．限制性核酸内切酶切割DNA后产生：A．3′-磷酸基末端和5′-羟基末端 B．5′-磷酸基末端和3′-羟基末端C．3′-磷酸基末端和5′-磷酸基末端 D．5′-羟基末端和3′-羟基末端E．3′-羟基末端和5′-羟基末端及磷酸16．下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：A．小型环状双链DNA分子 B．携带有某些抗生素抗性基因C．在细胞分裂时恒定地传给子代细胞 D．具有自我复制功能E．获得目的基因17．在分子生物学领域分子克隆主要是指：A．DNA的大量复制 B．DNA的大量转录C．DNA的大量剪切 D．RNA的大量剪切E．RNA的大量反转录18．在分子生物学领域重组DNA技术又称：A．酶工程 B．蛋白质工程C．细胞工程 D．发酵工程E．分子克隆技术19．在重组DNA技术中不涉及的酶是：A．限制性核酸内切酶 B．DNA聚合酶C．DNA连接酶 D．反转录酶E．DNA解链酶20．多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为：A．平端末端 B．3′突出末端C．5′突出末端 D．粘性末端E．缺口末端21．可识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶为：A．限制性核酸外切酶 B．限制性核酸内切酶C．非限制性核酸外切酶 D．非限制性核酸内切酶E．DNA内切酶22．cDNA是指：A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNA B．在体外经反转录合成的与DNA 互补的DNAC．在体外经转录合成的与DNA互补的RNA D．在体外经反转录合成的与RNA 互补的RNAE．在体外经反转录合成的与DNA互补的RNA23．基因组代表一个细胞或生物体的：A．部分遗传信息 B．整套遗传信息C．可转录基因 D．非转录基因E．可表达基因24．在基因工程中通常所用的质粒存在于：A．细菌染色体 B．酵母染色体C．细菌染色体外 D．酵母染色体外E．病毒DNA外25．就分子结构而论质粒是：A．环状双链DNA分子 B．环状单链DNA分子C．环状双链RNA分子 D．线状双链DNA分子E．线状单链DNA分子26．聚合酶链式反应可表示为：A．PEC B．PERC．PDR D．BCRE．PCR27．在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是：A．化学合成法 B．基因组文库法C．cDNA文库法 D．PCRE．差异显示法28．重组DNA的基本构建过程是将：A．任意两段DNA接在一起 B．外源DNA接入人体DNA C．外源基因插入宿主基因 D．目的基因接入适当载体E．目的基因接入哺乳类DNA29．EcoRⅠ切割DNA双链产生：A．平端 B．5′突出粘端C．3′突出粘端 D．钝性末端E．配伍末端30．催化PCR的酶是：A．DNA连接酶 B．反转录酶C．末端转移酶 D．碱性磷酸酶E．TaqDNA聚合酶31．将PstⅠ内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属：A．同聚物加尾连接 B．人工接头连接C．平端连接 D．粘性末端连接E．非粘性末端连接32．重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是：A．DNA聚合酶 B．RNA聚合酶C．DNA连接酶 D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶33．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称：A．转化 B．转染C．感染 D．转导E．转位34．最常用的筛选转化细菌是否含重组质粒的方法是：A．营养互补筛选 B．抗药性筛选C．免疫化学筛选 D．PCR筛选E．分子杂交筛选35．α互补筛选法属于：A．抗药性标志筛选 B．酶联免疫筛选C．标志补救筛选 D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选36．下列常用于原核表达体系的是：A．酵母细胞 B．昆虫细胞C．哺乳类细胞 D．真菌E．大肠杆菌37．在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时，需采用：A．反转录酶 B．多聚核苷酸激酶C．引物酶 D．RNA聚合酶E．末端转移酶38．在分子生物学领域分子克隆专指：A．细胞克隆 B．RNA克隆C．DNA克隆 D．抗体克隆E．mRNA克隆39．用于重组DNA 的限制性核酸内切酶，识别核苷酸序列的：A．正超螺旋结构 B．负超螺旋结构C．α螺旋结构 D．回文结构E．锌指结构40．在基因工程中通常所用的质粒是：A．细菌染色体DNA B．细菌染色体以外的DNA C．病毒染色体DNA D．病毒染色体以外DNAE．噬菌体DNA41．构建基因组DNA文库时，首先需要分离细胞的：A．染色体DNA B．线粒体DNAC．总mRNA D．tRNAE．rRNA42．DNA连接酶是从T4 噬菌体感染大肠杆菌中分离的，这种连接酶：A．只能催化平末端连接，而不能催化粘性末端连接B．即能催化单链DNA连接又能催化粘性末端双链DNA连接C．双链DNA中不需一条完整的单链D．单链中的切口位点可缺少几个核苷酸E．切口存在相邻的5′-磷酸和3′-羟基末端，使其以磷酸二酯键连接43．末端转移酶是合成酶类：A．作用时不需模板 B．是从小牛胸腺中分离C．能催化单链核苷酸转移到5′-磷酸上 D．需要带有5′-端磷酸的末端的ssDNA E．需要有延伸5′-端磷酸的末端dsDNA44．在基因工程中可用碱性磷酸酶：A．防止DNA的自身环化 B．同多核苷酸激酶一起进行DNA3′-羟基末端标记C．制备突出的3′-末端 D．特异切除DNA或RNA的3′-末端羟基E．水解特异的核苷酸片段45．以下哪种酶作用时需要引物：A．限制性核酸内切酶 B．末端转移酶C．反转录酶 D．DNA连接酶E．碱性磷酸酶46．S1核酸酶的功能是：A．切割双链的DNA B．切割单链的RNA C．切割发夹环 D．切割单链DNA E．以上有两项是正确的47．在cDNA技术中所形成的发夹环可用：A．限制性核酸内切酶切除 B．用3′外切酶切除C．用S1核酸酶切除 D．用5′外切酶切除E．碱性磷酸酶切除48．下面有关限制性内切酶的叙述正确的是：A．限制酶是外切酶而不是内切酶B．限制酶在特异序列（识别位点）对DNA进行切割C．同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的D．一些限制酶在识别位点稍有不同的点切割双链DNA，产生粘性末端E．一些限制酶在识别位点相同的位置切割双链DNA，产生平末端49．限制性核酸内切酶可以特异识别：A．双链DNA的特定碱基对 B．双链DNA的特定碱基序列C．特定的三联码 D．双链RNA的特定碱基序列E．双链RNA的特定碱基对50．DNA聚合酶的主要用途：A．利用它的3′→5′聚合活性，合成ds-DNA第二条链B．对DNA的5′-端进行填补或末端标记C．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ用于缺口平移，制作DNA标志探针D．DNA聚合酶Ⅱ可用于DNA测序E．TaqDNA聚合酶用于PCR51．反转录酶：A．是依赖于DNA的RNA聚合酶 B．用于真核DNA反转录生成mRNA C．用于RNA探针的制备 D．用于RNA序列测定E．是依赖于RNA的DNA聚合酶52．基因工程中作为载体应具备以下特点：A．能在宿主细胞中复制繁殖 B．容易进入宿主细胞C．具有多克隆位点 D．容易从宿主细胞中分离出来E．以上均是53．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大：A．质粒 B．粘粒C．酵母人工染色体 D．λ噬菌体E．cDNA表达载体54．pUC是一种改造型质粒，含有：A．乳糖操纵子调节基因、启动子 B．多克隆位点C．lacZ′基因 D．氨苄青霉素抗性基因E．以上均有55．质粒具有以下特点：A．是位于细菌染色体外的RNA B．不能自主复制C．为单链环形DNA D．大小在2～300kb之间E．以上都不对56．粘粒是一种人工建造的载体不具有以下特点：A．可借cos位点将多个粘粒串联成大环 B．本身约4～6kb之间C．进入受体细胞后可进行复制 D．可克隆DNA大片段E．以上都不是57．下面关于多克隆位点的描述不正确的是：A．仅位于质粒载体中 B．具有多种限制性内切酶识别的位点C．不同酶的识别序列可以重叠 D．一般是人工合成后添加到载体中E．可位于不同载体中58．下列筛选重组体的方法中不属于遗传学方法的是：A．限制性内切酶图谱法 B．PCRC．Northern印迹法 D．Southern印迹法E．抗药性标记基因59．利用基因工程可以进行：A．建立染色体基因文库 B．分析基因的结构与功能C．疾病的发生、发展及治疗的分子机制 D．疾病的诊断和基因治疗E．以上均可以60．Southern印迹的DNA探针杂交：A．只与序列完全相同的RNA片段 B．可与任何含有相同序列的DNA片段C．可与任何含有互补序列的DNA片段 D．可与用某些限制性核酸内切酶切成的DNA片段E．只与含有互补序列的RNA片段61．下列哪个不是Southern印迹法的步骤：A．用限制性核酸内切酶消化DNA B．DNA与载体连接C．用凝胶电泳分离DNA片段 D．DNA片段转移至硝酸纤维素膜上E．用一个标记的探针与膜杂交62．下列哪个不是Northern印迹法的步骤：A．从细胞和组织中提取RNA B．用凝胶电泳分离RNAC．将RNA转移到支持物上 D．与核酸探针进行杂交E．将RNA反转录合成DNA63．原位杂交具有以下特点：A．不需从组织或细胞中提取核酸 B．对靶序列有很高的灵敏度C．可完整保护组织与细胞的形态 D．准确反映出组织细胞的相互关系及功能状态E．以上均是64．下列哪项不是探针的特点：A．要加以标记 B．应是双链DNAC．只与靶核酸序列杂交 D．探针长度可以是十几个碱基到几千个碱基不等E．高灵敏度65．探针的种类包括：A．基因组DNA探针 B．cDNA探针C．寡核苷酸探针 D．RNA探针E．以上均是66．下面哪一步不是获得基因组DNA探针的步骤：A．从基因组文库筛选得到特定基因 B．克隆、扩增C．纯化 D．连入表达载体E．切取插入片段67．RNA探针具有以下特点，但除外：A.采用反转录方法可以得到 B．单链、杂交效率高C．杂交体系稳定 D．不存在高度重复序列E．特异性高68．下面哪一步不是cDNA探针的步骤：A．从相应组织细胞直接中分离特异的cDNA B．从相应组织细胞中分离特异的mRNA C．反转录合成cDNA D．与载体连接E．切割cDNA，分离纯化69．常用的标记物有，但除外：A．放射性核素 B．生物素C．荧光素 D．地高辛E．NTP70．用于标记核酸探针的放射性核素主要有，但除外：A．32P B．35SC．3H D．125IE．14C71．放射性核素标记物具有，但除外：A．检测时间短 B．灵敏度和特异性高C．可检出样品少于1000个分子的核酸量 D．半衰期短，稳定性差E．污染环境72．非放射性核素标记物包括，但除外：A．生物素 B．地高辛C．荧光素 D．酶E．核酸73．非放射性核素标记物具有，但除外：A．灵敏度高于放射性核素 B．稳定C．经济 D．实验周期短E．安全、无污染74．PCR反应体系包括，但除外：A．基因组DNA（模板） B．引物C．dNTP D．TaqDNA聚合酶E．T4DNA连接酶75．PCR技术主要应用于：A．目的基因的克隆 B．基因表达与调控C．DNA微量分析 D．遗传病与传染性疾病的诊断E．以上均可以76．以DNA为模板的PCR反应，具备以下条件：A．反应体系一般选用50-100μl B．引物、TaqDNA聚合酶C．4种dNTP、模板DNA D．缓冲液E．以上均是77．以mRNA为模板的PCR反应，具备以下条件：A．需将mRNA反转录生成cDNA B．反应体系一般选用20μl体积、4种dNTP、引物C．需要RNA酶抑制剂、反转录酶 D．TaqDNA聚合酶E．以上均是78．关于PCR停滞的原因，取决于很多因素，但除外：A．样品模板的拷贝数 B．PCR扩增效率C．DNA酶种类及活性 D．dNTP的大量消耗E．非特异性的竞争因素79．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性核素标记的：A．核糖体 B．RNAC．抗体 D．抗原E．以上都不是80．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是：A．用RNA探针检测DNA片段 B．用RNA探针检测RNA片段C．用DNA探针检测RNA片段 D．用RNA探针检测蛋白片段E．用DNA探针检测蛋白片段81．用免疫化学筛选重组体的原理是：A．根据外源基因的表达 B．根据载体基因的表达C．根据mRNA与DNA的杂交 D．根据DNA与DNA的杂交E．根据RNA与RNA的杂交82．原位杂交包括：A．转膜杂交 B．斑点杂交C．菌落杂交或噬菌斑杂交 D．直接对染色体或组织的杂交E．以上均有83．外源性DNA进入菌体的方式是：A．转化 B．转录C．翻译 D．半保留复制E．以上都不是84．要将无粘性末端的两种平端DNA片段结合在一起，可在：A．两种片段上都接上聚（dT）尾部 B．一种片段接聚（dT）尾部，另一种接聚（dA）尾部C．两种片段都接上聚（dA）尾部 D．反应液中加以T4DNA连接酶E．有两项是对的85．用原核生物表达真核生物的基因存在的问题是：A．大肠细菌只能表达克隆的cDNA B．细菌不能切除原始转录物中相当于内含子的核苷酸序列C．缺乏翻译后加工机制 D．表达的蛋白质常形成不溶性包涵体E．以上都正确86．常用载体有：A．质粒 B．噬菌体C．病毒DNA D．大肠杆菌基因组DNAE．有3项是正确的87．构建cDNA文库时，首先需分离细胞的：A．染色体DNA B．线粒体DNAC．总mRNA D．tRNAE．rRNA88．构建DNA文库时，首先需分离细胞的：A．染色体DNA B．线粒体DNAC．总mRNA D．tRNAE．rRNA89．设计PCR的引物时，应考虑引物与模板的：A．5ˊ端特定序列互补 B．5ˊ端任意序列互补C．3ˊ端特定序列互补 D．3ˊ端任意序列互补E．中间序列互补90．用于鉴定转化子细胞是否含重组DNA的最常用方法是：A．抗药性选择 B．分子杂交选择C．RNA反转录 D．免疫学方法E．体外翻译91．下列哪一步是DNA芯片技术的最关键的环节：A．样品的准备与标记 B．芯片的制备C．信号的检测 D．数据分析处理E．杂交92．基因诊断常用的技术方法有：A．核酸分子杂交 B．单链构象多态性分析C．DNA序列测定 D．DNA芯片技术E．以上均是B型题：A．基因从原来位置转到基因组的另一位置 B．噬菌体或病毒DNA进入细胞中繁殖C．外来DNA引起细胞生物学特性的改变 D．移码突变 E．非移码突变1．感染是指：2．转化是指：3．转位是指：4．结构基因中3个核苷酸的插入或丢失是指：5．结构基因中1个核苷酸的插入或丢失是指：A．抗药性选择 B．分子杂交选择 C．RNA转录 D．免疫学方法 E．体外翻译6．用于鉴定是否有质粒转入受体菌的一般方法是：7．用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法：8．利用目的基因表达产物的特异抗体来筛选含目的基因的转化子细胞的方法是：A．限制性核酸内切酶 B．DNA连接酶 C．反转录酶 D．TaqDNA聚合酶 E．碱性磷酸酶9．识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：10．用于聚合酶链式反应的是：11．将目的基因与载体DNA进行连接的酶是：12．特异切除DNA或RNA5ˊ端磷酸的酶是：13．mRNA转录合成cDNA的酶是：A．支原体 B．衣原体 C．噬菌体 D．细菌 E．酵母14．常用作原核表达体系的是：15．常用作真核表达体系的是：A．基因组文库 B．cDNA文库 C．mRNA文库 D．tRNA文库 E．rRNA 文库16．分离细胞染色体可制备：17．分离细胞总mRNA可制备：A．抗药性选择 B．RNA反转录 C．免疫化学方法 D．体外翻译E．PCR18．对重组体内基因进行直接选择的方法是：19．通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是：A．RNA聚合酶 B．末端转移酶 C．碱性磷酸酶 D．反转录酶 E．核苷酸酶20．切除DNA末端磷酸基需要用：21．在DNA3′羟基末端进行同聚物加尾需要用：22．合成cDNA需要用：A．同聚物加尾连接 B．人工接头 C．粘性末端连接 D．缺口末端连接 E．平端连接23．外源基因和载体DNA经限制性酶切后的连接属于：24．在外源基因和载体DNA末端添加同聚物序列后再进行连接属于：25．在外源基因和载体DNA末端添加短核苷酸序列，人为制造粘性末端再进行连接属于：26．需用适当的酶将DNA突出末端削平或补齐的连接属于：A．将单链DNA任意切断 B．将双链DNA序列特异切开 C．将两个DNA分子连接起来D．将缺口末端连接 E．切除DNA末端磷酸基团27．限制性内切酶的作用是：28．DNA连接酶作用是：29．碱性磷酸酶作用是：A．某些蛋白质的结构基因 B．所有基因结构 C．不表达的调控区D．内含子和调节区 E．外显子和调节区30．cDNA文库包括：31．DNA文库包括：32．真核mRNA包括：A．DNA聚合酶 B．RNA聚合酶 C．DNA连接酶D．RNA连接酶 E．限制性核酸内切酶33．切除特异DNA片段：34．连接两个DNA片段：35．大量扩增DNA片段：A．反转录酶 B．多聚核苷酸激酶 C．引物酶 D．RNA聚合酶 E．末端转移酶36．催化ATP的磷酸转移到DNA或RNA的5ˊ端羟基上：37．催化单核苷酸转移到DNA的3ˊ端羟基上：38．合成cDNA：C型题：A．将含有目的基因的噬菌体感染细菌 B．将含有目的基因的质粒导入细菌进行表达C．两者都是 D．两者都不是1．转化：2．感染：A．cDNA文库 B．基因组文库 C．两者都是 D．两者都不是3．含内含子：4．含结构基因：A．将含有目的基因的噬菌体感染细菌 B．将含有目的基因的质粒导入细菌进行表达C．两者都是 D．两者都不是5．转化：6．转位：A．cDNA文库 B．基因组文库 C．两者都是 D．两者都不是7．含转录调控区：8．较易表达：A．cDNA文库 B．基因组文库 C．两者都是 D．两者都不是9．制备目的基因可在真核生物体系中表达：10．几乎含有人的全部基因：A．cDNA文库 B．基因组文库 C．两者都是 D．两者都不是11．具有组织特异性：12．可在原核生物体系中表达：A．光介导原位合成 B．压电打印合成 C．两者都是 D．两者都不是13．原位合成芯片：14．DNA微集阵列：A．喷墨打印 B．针式打印 C．两者都是 D．两者都不是15．原位合成芯片：16．DNA微集阵列：A．光介导原位合成 B．喷墨打印 C．两者都是 D．两者都不是17．原位合成芯片：18．DNA微集阵列：A．压电打印合成 B．针式打印 C．两者都是 D．两者都不是19．原位合成芯片：20．DNA微集阵列：A．DNA序列测定 B．突变分析 C．两者都是 D．两者都不是21．DNA芯片技术可用于：22．PCR技术可用于：A．基因表达 B．DNA的微量分析 C．两者都是 D．两者都不是23．DNA芯片技术可用于：24．PCR技术可用于：A．药物研究 B．基因诊断 C．两者都是 D．两者都不是25．PCR技术可用于：26．核酸分子杂交：A．目的基因克隆 B．基因结构研究 C．两者都是 D．两者都不是27．DNA芯片技术可用于：28．PCR技术可用于：A．DNA与DNA的杂交 B．DNA与RNA杂交 C．两者都是 D．两者都不是29．Southern印迹杂交：30．斑点杂交：A．DNA与RNA杂交 B．DNA与DNA的杂交 C．两者都是 D．两者都不是31．原位杂交：32．Northern杂交：A．遗传性疾病的诊断 B．感染性疾病的诊断 C．两者都是 D．两者都不是33．分子杂交技术可用于：34．PCR技术可用于：A．肿瘤 B．个体鉴别 C．两者都是 D．两者都不是35．PCR技术可用于：36．DNA芯片技术可用于：三、问答题1．简述基因工程的主要过程。
第二章核酸杂交技术（一）名词解释1．原位杂交2．核酸分子杂交技术3．探针4．反向点杂交5．缺口平移标记法6．随机引物标记法7．末端标记法8．Southern blot杂交9．荧光原位杂交10．菌落杂交（二）选择题【A型题】1．DNA链的Tm值主要取决于核酸分子的（）A G－C含量B A－T含量C A－G含量D A－C含量E T－G含量2．液相杂交是下列哪一种（）A Southem印迹杂交B Northem印迹杂交C Dot印迹杂交D Slot印迹杂交E RPA实验3．研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A 菌落杂交B Southern杂交C Northern杂交D 液相杂交E 原位杂交4．Southern杂交通常是指（）A DNA和RNA杂交B DNA和DNA杂交C RNA和RNA杂交D 蛋白质和蛋白质杂交E DNA和蛋白质杂交5．最容易降解的核酸探针是( )A cDNA探针B dsDNA探针C ssDNA探针D gDNA探针E: RNA6．探针基因芯片技术的本质就是（）A 核酸分子杂交技术B 蛋白质分子杂交技术C 聚合酶链反应技术D 基因重组技术E 酶切技术7．DNA探针的长度通常为( )A 1000 ～ 2000个碱基B 500 ～ 1000个碱基C 400 ～ 500个碱基D 100 ～ 400个碱基E. <100个碱基8．寡核苷酸探针的最大的优势是（）A 杂化分子稳定B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列C 易标记D 易合成E 易分解9．在Southern印迹中常用的核酸变性剂是( ) A 甲醛B 乙醛C 氢氧化钠D 碳酸钠E 盐酸10．盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A 脆性大B 本底低C 共价键结合D 非共价键结合E 高结合力11．最常用的DNA探针标记方法是( )A 随机引物B 切口平移C 3′ -末端标记D 5′ -末端标记E PCR法12．为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干燥过B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过13．5′一末端的DNA探针标记主要依靠的酶是( )A T4多聚核苷酸激酶B 末端转移酶C AKPD DNA polⅡE DNA pol14．血友病是一种（）A 染色体病B X连锁遗传病C 先天性代谢缺陷病D 先天畸形E 常染色体隠性遗传病15．预杂交中最常用的封闭剂是( )A Denhavdt's溶液B 5×TBEC 1×TBED 1×TAEE 1×TPE16．检测目标是RNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤17．检测靶序列是DNA的技术是（）A Southern杂交B Western杂交C Northern杂交D Eastern杂交E 杂交淋巴瘤18．DNA双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA 分子成为单链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针19．具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针20．一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称（）A 变性B 复性C 复杂性D 杂交E 探针21．点/狭缝杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测22．放射自显影时反射光产生的潜影在低温下较稳定，最适温度是( )A -70℃B -30℃C -20℃D -10℃E 4℃23．Southern印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测24．寡核苷酸探针的Tm简单计算公式为( )A Tm=4(G+C)+2(A+T)B Tm=2(G+C)+4(A+T)C Tm=6(G+C)+4(A+T)D Tm=2(G+C)+6(A+T)E Tm=6(G+C)+2(A+T)25．Northern印迹杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息C 检测的目标是RNAD 用于基因定位分析E 阳性菌落的筛选2626．荧光原位杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因B 检测的目标是RNAC 用于基因定位分析D 阳性菌落的筛选E 蛋白水平的检测27．以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）A 正常人B 杂合体患者C 纯合体患者D 携带者E 不能确定28．在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显( )A pH为3～5B pH为4～5C pH为5～6D pH为5～9E pH为8～1129．一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）A 2-10bpB 17-50bpC 60-100bpD 100-200bpE 200-300bp30．变性剂可使核酸的Tm值降低，常用的变性剂是( )A 甲酰胺B 氢氧化钠C 浓盐酸D 稀盐酸E 甲醇31．下列有关cDNA探针的描述不正确的为（）A 利用mRNA通过RT-PCR在体外反转录可制备大量的cDNA探针B cDNA探针不包含内含子C cDNA探针不包含大量的高度重复序列D 由于cDNA探针自身所携带的poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题E cDNA探针合成方便，成为探针的重要来源32．一般来说核酸杂交的温度低于其Tm值的多少度进行( )A 15～25℃B 10～15℃C 5～10℃D 30～40℃E 40～50℃33．对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其Tm 值( )A 30～40℃B 20～30℃C 15～30℃D 10～15℃E 5℃34．一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少℃下进行( )A 90B 80C 75D 68E 5835．在含50%甲酰胺时，杂交反应在多少℃进行( )A 70B 65C 55D 42E 3536．杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加1%，则Tm值下降( )A 0.5℃B 1～1.5℃C 2～2.5℃D 3～3. S℃E 4～4.5℃37．RNA/RNA的杂交体的Tm值一般应增加( )A 1～5℃B 5～10℃C 10～15℃D 15～20℃E 20～25℃38．杂交的时间一般为Cot1/2的( )A l倍B 1～3倍C 3 ～5倍D 5～8倍E 10倍以上39．为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入( )A ssDNAB 1×SSCC 10×SSCD 5×TBECE 50×TAE40．随机引物法标记探针常用的A、G、C、T聚合体的数目是( )A 4个B 6个C 8个D 10个E 12个【X型题】41．下列哪些是影响DNA复性的因素( )A DNA浓度B DNA的分子量C 温度D 碱基组成E DNA的来源42．DNA探针的优点有（）A 制备方法简单B DNA探针易降解C DNA探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽E 单链，不存在竞争性的自身复性43．以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）A DNA加尾法B DNA切口平移标记法C 随机引物标记法D 末端标记E 尾端标记44．关于DNA变性的描述正确的是( )A 二级结构破B 一级结构破坏C 黏度降低D 生物活性丧失E 浮力密度增加45．以下哪些因素可以使DNA变性（）A 增加溶液的浓度B 加热C 改变溶液的pH值D 有机溶剂E 冷藏46．预杂交中，下列能起封闭作用的是( )A ssDNAB BSAC 小牛胸腺DNAD 脱脂奶粉E DTT47．变性的DNA会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降B 沉降速度增加C 浮力下降D 紫外光吸收增加E 紫外光吸收减少48.下列物质适于非放射性探针标记的是( )A AKPB ACPC 生物素D 地高辛E 荧光素49．关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是( )A 特异性高B 可依赖氨基酸序列推测其序列C 分子量小D 可用于相似基因顺序差异性分析E 可用末端转移酶进行5′端标记50．通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）A 采用大片段探针B 少量的反应体积C 高反应温度D 不断的振摇E 大量的反应体积51．关于切口平移法下述正确的是( )A 可标记线性DNAB 可标记松散螺旋DNAC 可标记超螺旋DNAD 可标记存在缺口的双链DNAE 可标记随机引物52．以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）A 毛细转移B 真空转移C 负压转移D 电泳转移E 冷冻转移53．关于随机引物法标记探针下述正确的是( )A 可标记单链DNAB 可标记双链RNAC 可标记单链RNAD 比活性高达108cpm／µg DNA以上E 常经过SephadexG-50纯化才可使用54．可以采用哪些方法来标记探针（）A 杂交标记法B 切口平移标记法C 5’-末端的标记D 3’-末端的标记E 化学法延长标记55．整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）A 预杂交B 杂交C 洗脱D 固定E 转移56．放射自显影可以被分为（）A 直接放射自显影B 氧化显影C 封闭显影D 间接放射自显影E 固定显影57．关于电转移下列描述正确的是( )A 快速、高效B 需要特殊设备C 缓冲液用TAE或TBED 可产生高温E 常用NC膜作为支持介质58．预杂交的主要目的是（）A 平衡滤膜B 封闭非特异性杂交的位置C 提高杂交信号的检测效率D 便于从滤膜上除去探针E 清除用于杂交反应检测的显色物质59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是( )A 对人体危害小B 需要特殊设备C 可长时间使用D 灵敏度不如放射性探针E 重新杂交新探比较容易60．对于改变DNA片段长度的突变，可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限制性片段长度改变。
可以通过哪些方法检测（）A PCR扩增B RAPDC Southerm印迹杂交D Northern印迹杂交E 以上都不是61．重组DNA的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测DNA的杂交方法有哪些（）A 菌落印迹杂交B Northern印迹杂交C Western印迹杂交D 原位杂交E 斑点杂交62．关于RNA探针的描述下列正确的是( )A 可用于随机引物标记B 特异性高C 灵敏度高D 可用非同位素标记法标记E 不易降解63．下列哪些可以作为核酸探针使用（）A microRNAB 单链DNAC 寡核苷酸D mRNAE 双链RNA64．关于核酸探针的描述下列正确的是( )A 可以是DNAB 可以是RNAC 可用放射性标记D 可用非放射性标记E 必须是单链核酸（三）问答题1．根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类？2．简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围3．试述Northern blot杂交的操作步骤？4．什么是肽核酸？并简述其应用？5．请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。
