青菜叶中叶绿素含量的测定

一、实验目的1. 了解叶绿素在植物光合作用中的重要作用。

2. 掌握叶片中叶绿素提取和测定的实验方法。

3. 通过实验，学习运用分光光度法测定叶绿素含量。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，它主要吸收红光和蓝光，对绿光吸收较少，因此叶片呈现绿色。

本实验采用分光光度法测定叶片中叶绿素含量，其原理如下：1. 叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，通常选择652nm、663nm和645nm波长。

2. 根据朗伯-比尔定律，溶液的吸光度与溶液浓度成正比。

3. 通过测定叶片提取液中叶绿素的吸光度，计算出叶绿素的浓度，从而得到叶片中叶绿素含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶、石英砂、碳酸钙、95%乙醇、蒸馏水、滤纸、移液管、容量瓶、分光光度计、研钵、剪刀、电子天平。

2. 实验试剂：95%乙醇（或80%丙酮）、石英砂、碳酸钙。

四、实验步骤1. 称取新鲜菠菜叶1g，用剪刀剪碎，放入研钵中。

2. 加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入2-3mL 95%乙醇，研磨至糊状。

3. 将研磨好的样品转移到10mL容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵和研棒，将冲洗液加入容量瓶中。

4. 用蒸馏水定容至刻度，摇匀，得到叶绿素提取液。

5. 分别取3mL叶绿素提取液于3个10mL容量瓶中，用移液管准确加入0.5mL、1.0mL、1.5mL 95%乙醇作为空白对照。

6. 用分光光度计测定652nm、663nm和645nm波长下的吸光度。

7. 根据吸光度计算叶绿素含量。

五、实验数据与结果1. 叶绿素提取液吸光度（652nm、663nm、645nm）分别为：0.650、0.640、0.630。

2. 空白对照吸光度（652nm、663nm、645nm）分别为：0.050、0.045、0.040。

3. 叶绿素含量计算结果如下：叶绿素a含量 = (A652 - A645) × 34.5叶绿素b含量 = (A663 - A645) × 27.0叶绿素总量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量计算得到：叶绿素a含量为10.0mg/g，叶绿素b含量为8.5mg/g，叶绿素总量为18.5mg/g。

实验二十叶绿素含量的测定叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系，在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。

方法Ⅰ一、目的掌握叶绿素含量测定的基本原理和方法。

二、原理叶绿素与其他显色物质一样，在溶液中如液层厚度不变则其吸光度与它的浓度成一定的比例关系。

已知叶绿素a 、b在652 nm波长处有相同的比吸收系数（均为34.5）。

因此，在此波长下测定叶绿素溶液的吸光度，即可计算出叶绿素a 、b的总量。

三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：菠菜叶；芥菜叶或其他植物叶片。

2. 仪器设备：电子分析天平；分光光度计；漏斗；25ml容量瓶；剪刀；滤纸；玻棒等。

3. 试剂：95﹪乙醇、石英砂、碳酸钙粉。

四、实验步骤1. 叶绿素的提取称取植物鲜叶0.20g（可视叶片叶绿素含量增减用量），剪碎放入研钵中，加少量碳酸钙粉和石英砂及3～5ml95﹪乙醇研成匀浆，再加约10ml 95﹪乙醇稀释研磨后，用滤纸过滤入25ml 容量瓶中，然后用95﹪乙醇滴洗研磨及滤纸至无绿色为止，最后定容至刻度，摇匀，即得叶绿素提取液。

2. 测定取光径为1cm的比色杯，倒入叶绿素提取液距杯口1cm处，以95﹪乙醇为空白对照，在652 nm波长下读取吸光度（A）值。

五、计算将测得的吸光度A652值代入公式(1), 即可求得提取液中叶绿素浓度。

所得结果再代入公式(2)，即可得出样品中叶绿素含量（mg ·g－1Fw）。

A652C ( mg .ml－1 ) = ———— (1)34.5公式中：C —叶绿素（a 和b ）的总浓度( mg ·ml－1 )A652—表示在652nm 波长下测得叶绿素提取液的吸光度34.5为叶绿素a和b混合溶液在652nm波长的比吸收系数（比色杯光径为1cm, 样品浓度为1g·L－1时的吸光度）。

C（mg.ml－1）×提取液总量（ml）叶绿素含量（mg .g－1Fw）= ———————————————— (2)样品鲜重（g）方法Ⅱ一、目的掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。

测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法有多种，以下是其中两种常用的方法：
1. 酒精提取法：取少量的植物叶片，用95%的乙醇浸泡，放置约12小时，然后用过滤纸过滤液体，收集滤液。

将滤液置于比色皿中，用分光光度计读取吸光度，然后根据吸光度公式计算叶绿素含量。

2. 非破坏性叶绿素荧光法：该方法将载体中的叶绿素激发，然后测量释放出的荧光。

首先需要将植物叶子置于低温环境下（如-20℃），使其失去活性状态。

然后在光线较弱的环境下，用测量仪器（如SPAD仪）测量叶片的反射率，据此计算叶绿素含量。

以上两种方法均为常用的有效方法。

需要注意的是，在使用任何方法进行叶绿素含量测定时，应保证样品之间的处理方式一致，以获得准确的结果。

叶绿素的含量测定方法
测定叶绿素含量的常用方法有：
1. 光度法：根据叶绿素的吸收特性，通过光度计测量叶片样品在特定波长下的吸光度，再根据标准曲线计算叶绿素含量。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：使用高效液相色谱仪测定叶片中叶绿素的含量。

该方法准确度高，适用于对叶绿素含量要求较高的研究。

3. 比色法：将叶绿素与醋酸酐反应生成叶绿素醋酸酯，根据生成的产物在特定波长下的吸光度测量叶绿素含量。

4. 荧光法：利用叶绿素的荧光特性，通过测量叶片样品在特定波长下的荧光强度来确定叶绿素含量。

这些方法都有各自的优缺点和适用范围，具体选择哪种方法应根据实际需要和实验条件来确定。

在进行叶绿素含量测定时，确保使用标准操作程序和仪器校准，以获得准确可靠的结果。

一、实验目的1. 掌握叶绿素提取及含量测定的方法。

2. 了解分光光度法在植物生理研究中的应用。

3. 掌握使用分光光度计进行叶绿素含量测量的原理及操作步骤。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其主要分为叶绿素a和叶绿素b两种。

叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，可通过分光光度法测定其含量。

本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿素，测定其在不同波长下的吸光度，从而计算叶绿素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：菠菜、番茄等绿色植物叶片。

2. 仪器：分光光度计、研钵、试管、剪刀、移液管、量筒、滤纸、吸水纸、碳酸镁悬浮液、乙醇溶液、石英砂、碳酸钙粉等。

四、实验步骤1. 提取叶绿素：（1）称取适量新鲜植物叶片，用剪刀剪碎。

（2）将剪碎的叶片放入研钵中，加入少量石英砂、碳酸钙粉和3～5ml 95%乙醇，研磨至组织变白。

（3）将研磨后的提取液过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。

（4）用移液管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。

直至滤纸和残渣中无绿色为止。

最后用乙醇定容至10ml，摇匀。

2. 测量吸光度：（1）设置分光光度计的波长为665nm、649nm（叶绿素a和叶绿素b的最大吸收峰）。

（2）将提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在设定的波长下测定吸光度。

3. 计算叶绿素含量：根据朗伯-比尔定律，吸光度A与叶绿素浓度C和液层厚度L成正比，即A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数，l为液层厚度，c为叶绿素浓度。

通过计算不同波长下的吸光度，根据标准曲线（预先绘制）或叶绿素浓度与吸光度关系，求得叶绿素浓度，进而计算叶绿素含量。

五、实验结果与分析1. 通过实验，成功提取了菠菜叶片中的叶绿素。

2. 在665nm、649nm波长下，叶绿素a和叶绿素b的吸光度分别为0.68和0.32。

3. 根据叶绿素浓度与吸光度关系，计算得到叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为0.6mg/L和0.3mg/L。

一、实验目的1. 了解叶绿素的提取和分离方法。

2. 掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和步骤。

3. 分析不同植物叶片中叶绿素含量的差异。

二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a和叶绿素b组成。

叶绿素在特定波长下具有特征吸收峰，利用分光光度法可以测定叶绿素的含量。

本实验采用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿素，通过测定叶绿素a和叶绿素b在最大吸收波长下的吸光度，计算出叶绿素含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、新鲜青菜、新鲜甘蓝叶片。

2. 仪器：分光光度计、研钵、剪刀、移液管、比色皿、电子天平、75%乙醇、碳酸钙、蒸馏水。

四、实验步骤1. 称取新鲜菠菜、青菜、甘蓝叶片各0.5g，分别放入研钵中。

2. 加入少量碳酸钙，用研钵研磨至叶片组织变白。

3. 将研磨好的叶片转移至75%乙醇溶液中，用移液管加入5mL乙醇，充分混合。

4. 将混合液转移至比色皿中，用蒸馏水定容至10mL。

5. 以75%乙醇为空白，分别在波长663nm和645nm处测定吸光度。

6. 根据吸光度计算叶绿素a和叶绿素b的含量。

7. 分别计算三种植物叶片中叶绿素的总含量。

五、实验结果与分析1. 叶绿素a和叶绿素b的含量计算：叶绿素a含量（mg/g）= A645nm × 1000 × 0.5 / 12.0叶绿素b含量（mg/g）= A663nm × 1000 × 0.5 / 27.02. 叶绿素总含量计算：叶绿素总含量（mg/g）= 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量3. 实验结果：菠菜叶片叶绿素总含量为：3.25mg/g青菜叶片叶绿素总含量为：2.10mg/g甘蓝叶片叶绿素总含量为：2.85mg/g4. 结果分析：通过实验结果可以看出，菠菜叶片中叶绿素含量最高，其次是甘蓝叶片，青菜叶片叶绿素含量最低。

这可能是由于不同植物叶片中叶绿素含量存在差异，与植物种类、生长环境等因素有关。

实验四青菜中叶绿素含量的测定一、实验目的：测定该植物的光合作用能力。

二、实验原理将青菜中叶绿素萃取到丙酮中，在指定的波长下，测定叶绿素-丙酮液的吸光度，然后根据公式计算青菜中叶绿素a、叶绿素b、和总叶绿素的含量。

三、试剂：碳酸钙、丙酮、石英砂。

四、仪器：研钵、分光光度计。

五、步骤1、青菜洗净，擦干，除去叶柄（叶梗）→称取1g绿色叶片→撕碎放入研钵→加入少许石英砂和CaCO3，充分研磨，破碎青菜中组织→量筒量取10mL丙酮倒入研钵中，充分研磨至组织变白→静置3分钟。

2、抽滤所得的匀浆，用少量丙酮多次洗涤残渣，直到残渣不带绿色为止，将溶液合并后用丙酮定容至100mL，摇匀。

3、在波长663nm 和645nm下，以丙酮为空白，测定叶绿素-丙酮溶液的吸光度。

六、计算1、总叶绿素、叶绿素a和叶绿素b（mg/L）的计算公式如下：叶绿素a=12.7A663－2.69A645叶绿素b=22.9A645－4.69A663二者之和为总叶绿素的浓度式中A663和A645分别代表波长663和645nm测定叶绿素-丙酮溶液所得的吸光度值。

2、计算样品中叶绿素的含量，表达为1g青菜叶中含有的叶绿素的mg数。

叶绿素含量（mg/g）=C×V/A式中：C为叶绿素浓度（mg/L）；V为提取液总体积（0.1L）；A为取样鲜重（1g）。

七、注意事项1、为了避免叶绿素的光分解，研磨时间尽可能短些。

2、抽滤时必须将滤纸及叶片残渣洗至无绿色为止。

比色时提取液不能混浊。

八、思考题1、在破碎青菜组织时，为什么要加入碳酸钙或碳酸钠？2、叶绿素a和叶绿素b的结构有何不同？。

实验报告课程名称： 植物生理学实验 指导老师： 成绩：__________________ 实验名称： 叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定 实验类型： 同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得一、 实验目的和要求：1． 掌握植物中叶绿体色素的提取分离和性质鉴定。

2． 掌握定量分析的原理和方法。

二、 实验内容和原理：以青菜为材料，提取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定和叶绿素含量分析。

原理如下：1．叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。

2．皂化反应。

叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。

3．取代反应。

在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg2+,可依次被H+和Cu2+取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。

4．叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。

5．定量分析。

叶绿素吸收红光和蓝紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b 及总量，而652可直接用于总量分析。

三、实验材料与试剂材料：青菜叶试剂：KOH 固体、醋酸铜粉末、醋酸四、主要仪器设备：1．天平（万分之一）、可扫描分光光度计、离心机2．研具、PE 管、酒精灯等五、操作方法和实验步骤（必填）1．定性分析：荧光现象：鲜叶3-5g+95%乙醇15ml （逐步加入）,磨成匀浆 ，过滤入三角瓶，观察荧光现象 皂化反应： 加KOH 数片剧烈摇均，加石油醚1ml 和H 2O 1ml ，分层后观察取代反应：加醋酸约1ml ，观察颜色，取1/2加醋酸铜粉，加热变 亮绿 色2．叶绿素和类胡萝卜素的吸收光谱测定：皂化反应的上层黄色石油醚溶液（稀释470nm OD 0.5-1） ，在400-700nm 处扫描光谱，分别测定类胡萝卜素的吸收峰反复用石油醚粹取,直到无类胡萝卜素,离心得叶绿素(盐)，（稀释663nm OD 0.5-1） ，分别测定叶绿素的吸收峰3．叶绿素定量分析：鲜叶0.1g ，加1.9mlH 2O ，磨成匀浆，取2份0.2ml 加80%丙酮4.8ml,摇匀，4000转离心3min,上清液在645，652，663测定OD ，计算Chla,Chlb 和Chl 总量的值。

叶绿素提取、分离与测定曹志凡141140003一．实验目的1、了解叶绿体色素的构成；2、了解叶绿素的某些物理及化学性质，掌握提取叶绿素及分离叶绿素的原理；3、了解纸层析法分离色素的实验原理4、学会用纸层析的方法分离叶绿体色素；5、初步学习用分光光度计测定叶绿素ab含量。

二．实验原理1.植物叶绿体色素是吸收太阳光能,进行光合作用的重要物质.它一般由叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素组成，它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体。

2.绿色素（包括叶绿素a蓝绿色和叶绿素b黄绿色）和黄色素（包括胡萝卜素黄色和叶黄素橙黄色）这两类色素都很难溶于水，而易溶于有机溶剂,故可用乙醇,丙酮等有机溶剂提取。

3.由于光合色素位于叶绿体中的类囊体上，要把它提取出来必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎后加二氧化硅研磨，以便充分提取色素。

4.叶绿素是一种含镁的化合物，其中的镁易被H+、Cu2+、Zn2+等取代。

当被H+取代后，就形成去镁叶绿素，呈黄褐色。

虽然研磨过程中不发生产生大量H+的化学反应，但液泡中常含有多种有机酸。

一般认为，碳酸钙的作用在于中和研磨过程中产生的H+，以防止叶绿素被破坏。

5.纸层析法又称纸色谱法。

以纸为载体的色谱法，固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。

根据不同色素在层析液中的溶解度不同造成随层析液扩散速度不同这一原理进行分离。

6.当层析溶剂不断从纸上流过时,由于混合物(叶绿素提取液)中各种成分在固定相和流动相间溶解度和吸附能力不同而具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后,可将各种色素分开，其中胡萝卜素在层析液中的溶解度最高，扩散速度最快，其次是叶黄素、叶绿素a，叶绿素b溶解度最低，扩散得最慢。

7.分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器，分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度，样品的吸光值与样品的浓度成正比。

叶片叶绿素含量测定方法
嘿，你问叶片叶绿素含量测定方法啊？那咱就来好好说说。

这叶片叶绿素含量的测定呢，办法有好几种。

一种常见的方法是分光光度法。

首先呢，得把叶片弄碎，弄成小碎片或者粉末状。

就像把饼干掰碎一样，这样才能让后面的操作更容易。

然后呢，用一些溶剂把叶片里的叶绿素提取出来。

一般用丙酮或者乙醇啥的。

这些溶剂就像小魔法师，能把叶绿素从叶片里“变”出来。

接着，把提取出来的叶绿素溶液倒进一个小瓶子里，放到分光光度计里面去测量。

分光光度计就像一个很厉害的眼睛，能看出叶绿素溶液的各种特点。

它会根据叶绿素对不同波长的光的吸收情况，来算出叶绿素的含量。

还有一种方法是叶绿素仪测定法。

这个就比较简单快捷啦。

拿着叶绿素仪，对着叶片一按，就像给叶片拍个照一样，仪器就能显示出叶绿素的相对含量。

不过呢，这个方法不是特别准确，只能大概知道个范围。

打个比方吧，测定叶片叶绿素含量就像找宝藏。

不同的方法就是不同的寻宝路线。

分光光度法就像是仔细地挖
掘，能找到比较准确的宝藏；叶绿素仪测定法就像随便找一找，能知道个大概的位置。

我给你讲个例子哈。

我有个朋友是学植物学的，他要测定一些植物叶片的叶绿素含量。

他先用分光光度法做了一遍，发现好麻烦啊，要准备好多东西，还得等好久。

后来他又用叶绿素仪试了试，很快就得到了结果，虽然不是很准确，但是也能给他一个参考。

从那以后，他就根据不同的情况选择不同的方法来测定叶片叶绿素含量。

所以啊，叶片叶绿素含量的测定方法有很多，要根据自己的需求来选择哦。

植物叶绿素测定方法引言：叶绿素是植物叶片中的主要色素，它在光合作用过程中起到了至关重要的作用。

因此，测定叶绿素含量对于研究植物光合作用和生长发育具有重要意义。

本文将介绍一些常用的植物叶绿素测定方法。

一、光谱测定法光谱测定法是通过测量叶片在不同波长下的吸收光谱来间接测定叶绿素含量的方法。

该方法不需要破坏叶片结构，无需显微镜，操作简单，适用于大规模测量。

1.1超级连续光谱仪测定法该方法使用超级连续光谱仪，可以在380-780 nm范围内连续测量光谱，并通过计算吸收峰的面积或最大吸收波长的吸光度来间接测定叶绿素含量。

该方法的优点是快速、准确，并且可以同时测量多个样品。

1.2激光共振散射光谱法该方法使用激光共振散射光谱仪，通过测量散射光在不同波长下的强度，利用散射光和吸收光的关系来计算叶绿素含量。

该方法的优点是高灵敏度、高分辨率，适用于低浓度叶绿素的测定。

1.3荧光光谱法该方法通过测量叶片在受光照射下发出的荧光光谱来间接测定叶绿素含量。

荧光光谱主要包括叶绿素a的激发峰和荧光峰，通过计算两者的比值来推测叶绿素含量。

该方法的优点是快速、非破坏性，适用于大规模测量。

二、色素提取法色素提取法是将叶片中的叶绿素溶解出来，通过分光光度计测量溶液的吸光度来直接测定叶绿素含量的方法。

2.1乙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在乙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量乙醇溶液的吸光度。

该方法的优点是简单、易操作，并且适用于多种植物样品。

2.2丙酮提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在丙酮中，丙酮具有更高的叶绿素提取效率，然后通过分光光度计测量丙酮溶液的吸光度。

该方法的优点是提取效率高，适用于含有较少叶绿素的样品。

2.3异丙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在异丙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量异丙醇溶液的吸光度。

该方法的优点是提取效率高，适用于含有较高叶绿素浓度的样品。

三、色谱测定法色谱测定法是通过将叶片样品中的叶绿素提取出来，并通过高效液相色谱仪进行分析来测定叶绿素含量的方法。

绿叶蔬菜中叶绿素含量检测方法的改进研究绿叶蔬菜是我们日常饮食中不可或缺的一部分，它们富含丰富的维生素和矿物质，对于身体健康至关重要。

而叶绿素是绿叶蔬菜中一个重要的成分，它不仅赋予蔬菜独特的颜色，还拥有强大的抗氧化和抗炎能力。

因此，研究如何准确地检测绿叶蔬菜中叶绿素的含量，对于饮食健康以及农业发展至关重要。

近年来，各种方法和技术被用来改进叶绿素含量的检测，提高准确性和效率。

一种常用的叶绿素含量检测方法是高效液相色谱法（HPLC）。

HPLC法可以通过将样品中的叶绿素与色谱柱中的固相进行相互作用，使叶绿素分离并定量测定。

这个方法的优点在于精确度高、灵敏度好，并且适用于各种不同类型的绿叶蔬菜。

然而，HPLC法的缺点也比较明显，操作复杂，需要昂贵的设备和试剂。

而且，该方法需要长时间的分析和处理，不够快速高效。

因此，研究人员一直在努力寻找更加简便易行的检测方法。

一种新的检测叶绿素含量的方法是基于纳米技术的光学方法。

这种方法将纳米颗粒与叶绿素分子相结合，通过颜色的变化来间接测量叶绿素含量。

这种方法的优势是需要的样本量很小，操作简便，结果也可以快速获得。

并且，纳米颗粒可以通过改变颗粒的大小和形状，来调整检测的灵敏度和准确性。

然而，这种方法还处于实验室阶段，需要进一步的研究和改进，才能应用于实际生产中。

另外一种新的检测叶绿素含量的方法是利用光谱分析技术。

光谱是指物体吸收或者发射的特定波长范围。

通过将样品中的叶绿素进行光谱扫描，可以获取叶绿素的吸光度数据。

据研究表明，不同类型的叶绿素在吸收或发射光谱中有不同的特征峰，这些特征峰可以用来区分不同的叶绿素类型，进而准确测定含量。

这种方法不需要昂贵的设备和试剂，仅需要简单的仪器就可以完成检测，大大降低了成本和时间。

然而，由于不同类型的叶绿素吸收或发射的光谱特征相似度较高，因此在分析过程中容易产生误差，需要更精确的仪器和数据分析方法。

除了这些常用的方法外，还有许多其他的技术和方法被用来改进叶绿素含量的检测。

光谱法叶绿素测定
光谱法叶绿素测定是一种常用的绿色植物叶片中叶绿素含量的测定方法。

该方法基于叶绿素对不同波长的光的吸收特性进行测量。

具体步骤如下：
1. 准备样品：取待测叶片，将其切碎并加入适量的乙醇溶液中，使样品完全浸泡在溶液中。

2. 溶液搅拌：使用搅拌器将样品溶液搅拌均匀，使叶绿素充分溶解。

3. 光谱扫描：使用光谱仪或紫外-可见吸收光谱仪对样品中叶绿素的吸收进行测量。

从紫外到可见光区域（通常是200-800nm范围内）进行光谱扫描，并记录各个波长下的吸光度值。

4. 数据处理：根据得到的吸光度数据，绘制吸光度-波长的光谱曲线。

通过该曲线，可以确定叶绿素在不同波长下的吸收峰，并计算出各个吸收峰的峰值。

5. 叶绿素浓度计算：根据已有的吸收特性和校正因子，可以利用峰值计算样品中叶绿素的浓度。

需要注意的是，为了保证测量结果的准确性，可以进行以下控制措施：
- 使用空白溶液进行零点校准，以减少系统误差。

- 采取恰当的光路设置，确保光线通过样品时均匀而稳定。

- 避免样品中悬浮物的干扰，可以在测量前对样品进行过滤。

- 进行多次测量，并计算平均值，以提高测量结果的准确性。

总之，光谱法叶绿素测定是一种简单、快速、准确的方法，可以在科研实验和农业生产等领域中广泛应用。

绿叶蔬菜的实验原理绿叶蔬菜是指那些叶片为主要食用部位的蔬菜，如油菜、生菜、菠菜、大白菜等。

绿叶蔬菜富含多种维生素、矿物质和膳食纤维，对人体健康具有重要作用。

在科学研究中，常常使用各种实验方法来探究绿叶蔬菜的各种性质和功能。

下面将介绍一些常见的绿叶蔬菜实验原理。

一、叶绿素含量测定叶绿素是绿色植物叶子中的一个重要色素，它参与了光合作用的过程，并且对植物的生长与发育起重要作用。

测定绿叶蔬菜中的叶绿素含量可以评估植物叶片的生理状态，判断其营养状况和健康程度。

测定叶绿素含量的方法有多种，常用的方法包括色谱法、光度法和比色法等。

二、维生素C含量测定维生素C是一种重要的水溶性维生素，具有抗氧化、抗癌、提高免疫力等多种生理功能。

绿叶蔬菜中富含维生素C，在新鲜的绿叶蔬菜中维生素C含量较高。

测定绿叶蔬菜中的维生素C含量可以通过滴定法、蛋白结合法和高效液相色谱法等多种方法进行。

三、抗氧化活性测定绿叶蔬菜中含有多种抗氧化物质，如维生素C、维生素E、多酚类化合物等，这些物质能够清除自由基，减少机体的氧化损伤，并具有抗衰老、抗癌等多种生理效应。

测定绿叶蔬菜的抗氧化活性可以通过多种方法进行，如DPPH自由基清除法、还原力测定法，总抗氧化活性测定法等。

四、硝酸盐含量测定硝酸盐是一种常见的无机氮化合物，绿叶蔬菜中含有较高量的硝酸盐。

过量摄入硝酸盐对人体健康可能产生一定的危害，如致癌作用。

因此，测定绿叶蔬菜中的硝酸盐含量有助于评估其品质和安全性。

硝酸盐含量的测定方法有多种，常见的方法包括纳氏法、电化学法和荧光法等。

五、膳食纤维含量测定绿叶蔬菜中富含膳食纤维，膳食纤维具有增加饱腹感、促进肠道蠕动、调节血糖和血脂等多种益处。

测定绿叶蔬菜中的膳食纤维含量可以通过测定总纤维和不同类型纤维的含量来完成，常用的方法包括连续萃取法、酶解法和测定总多糖法等。

除上述实验外，还有很多其他的实验方法可以用来研究绿叶蔬菜。

这些实验方法可以通过对绿叶蔬菜中各种物质含量、抗氧化活性、生理功能等的测定，进一步了解绿叶蔬菜的营养价值和生理效应，为人们的健康生活提供科学依据。

青菜叶中叶绿素含量的测定食品学院S100111029 王婷同组人：王莹、王芳一、实验目的1.学习并且使用分液漏斗分离水与不溶于水的有机溶剂。

2.熟悉掌握用有机溶剂萃取青菜叶中叶绿素的方法。

二、实验原理将青菜叶中的叶绿素萃取到丙酮中，然后将溶于丙酮的叶绿素转移到乙醚中，在指定的波长下，测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度，然后根据公式计算青菜叶中的叶绿素a、叶绿素b 和总叶绿素的含量。

三、实验器材1.实验仪器：天平、组织捣碎机、水、循环真空泵、抽滤瓶、滤纸、布氏漏斗、容量瓶（100ml、500ml各一个）、分液漏斗（2个）、尖嘴管、铁架台、铁圈（2个）、分光光度计。

2.实验试剂：碳酸钙、丙酮（85﹪）、乙醚、无水硫酸钠。

3.实验原料：青菜叶。

四、实验步骤1.称取30g新鲜青菜叶置于组织捣碎机中，然后加0.05gCaCO3和85ml丙酮（85﹪），在高速组织捣碎机中，在转速20000r/min下捣碎，2min，捣碎青菜叶组织。

2.抽滤所得的匀浆，用少量85﹪丙酮多次洗涤残渣，直到残渣不带绿色为止，将溶液合并后用丙酮定容至500ml。

3.吸取25ml叶绿素-丙酮溶液，加入到含有25ml乙醚的分液漏斗中，然后加入50ml水，观察到所有的叶绿素都转入到上层乙醚相时，放出下层水相。

4.在另一只分液漏斗中加入50ml水，插入一只末端拉成小孔的玻璃管，将叶绿素-乙醚溶液注入玻璃管，溶液通过通过玻璃环末端小孔进入水相后再上升聚集在水相表面，放出下层水相，重复上述操作步骤五次，让溶于叶绿素-乙醚溶液中的丙酮转移到水相中，将乙醚层转移至容量瓶中。

5.将以上放出的下层水合并，加入25ml乙醚，同上操作，将乙醚层也转移至容量瓶中。

6.用乙醚将叶绿素-乙醚溶液定容到100ml。

7.用少量无水硫酸钠吸收叶绿素-乙醚溶液中的水分。

8.在波长660nm和642.5nm下，分别测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度。

五、实验记录与结果叶绿素-乙醚溶液在波长660nm和642.5nm下的吸光度分别为：A660.0=1.091 A642.5=0.315（1）：总叶绿素=7.12A660.0+16.8 A642.5=13.0599 mg ；（2）叶绿素a=9.93A660.0 - 0.777A642.5=10.5889 mg ；（3）叶绿素b=17.6 A642.5-2.81 A660.0=2.4783 mg 。

叶片叶绿素含量的测定 The document was finally revised on 2021植物叶片中叶绿素含量测定----丙酮提取法1、原理叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、645nm，据Lamber-Beer 定律，可得浓度C与光密度D间的关系式：D663= +D645= + (浓度单位：g/mL）叶绿素a的浓度：Ca= –叶绿素b的浓度：Cb= – D663总叶绿素的浓度：Ct = + (浓度单位：mg/L）2、试剂与材料试剂：丙酮、石英砂、碳酸钙材料：新鲜叶片。

仪器与器皿：分光光度计、天平、剪刀、研钵、移液管、漏斗、大试管3、实验步骤称叶用丙酮研磨↓匀浆过滤（用80%丙酮洗研钵及残渣，合并滤液）↓滤液用80%丙酮定容至25mL↓适当稀释后测A645、A663取样：称取剪碎的叶片（提供的样品即为剪碎后冻于-80℃的叶片）放入研钵中。

注意取样时要避开大的叶脉。

研磨提取：向研钵中加入80%丙酮，以及少许（约）CaCO3 (中和酸性，防止叶绿素酯酶分解叶绿素) 和石英砂，研磨成匀浆，再加入3ml 80%丙酮，继续研磨至组织变白，在暗处静止3~5min后，用一层干滤纸过滤到25ml容量瓶中，用滴管吸取80%丙酮将研钵洗净，清洗液也要过滤到容量瓶中，并用80%丙酮沿滤纸的周围洗脱色素，待滤纸和残渣全部变白后，用80%丙酮定容至刻度。

读取吸光度：取厚度为lcm的洁净比色皿，注意不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗2~3次，注意清洗时要使清洗液接触比色皿内壁的所有部分，然后将色素提取液倒入比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，将撒在比色皿外面的溶液用滤纸吸掉（注意不能擦），再用擦镜纸擦干擦净。

将比色皿放入仪器的比色皿架上，注意不要将溶液撒入仪器内。

第一个位置放盛有80%丙酮的比色皿，做为空白对照。

将仪器波长分别调至663、645nm处，以80%丙酮做为空白对照调透光率100%，分别测定溶液在上述2个波长下的吸光度。

基于图像分析检测青菜叶绿素含量孙宇露;王德海;朱国建【摘要】为研究利用图像分析技术快速测定青菜叶绿素含量的方法,本研究将青菜分别置于不同环境进行贮藏,采用图像分析技术和分光光度计法测定了贮藏期间青菜叶颜色参数值(L*、A*、b*、ΔL*、Δa*、Δb*、(Δa*2+Δb*2)1/2、色差ΔE)和叶绿素含量,并使用不同函数模型(y=Ax+B、y=A/x +B、y=Alnx+B和ln(lny)=Alnx+B)对颜色参数和叶绿素含量进行拟合分析.结果表明:不同贮存环境下,青菜叶颜色参数ΔE与叶绿素含量之间存在稳定的线性关系,可以用函数模型y=Ax+B进行表达.利用图像分析技术建立青菜叶颜色参数ΔE与叶绿素含量之间关系定标模型相关系数为0.990 9,其定标均方根误差为0.071 7,用未参与定标的纸盒贮藏青菜叶作为预测集,其预测相关系数为0.992 8、预测均方根误差为0.010 4.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2016(042)008【总页数】5页(P194-198)【关键词】青菜;颜色参数;图像分析;叶绿素含量【作者】孙宇露;王德海;朱国建【作者单位】浙江工业大学材料科学与工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学材料科学与工程学院,浙江杭州,310014;浙江工业大学材料科学与工程学院,浙江杭州,310014【正文语种】中文青菜，属种子植物门，双子叶植物纲，是我国普遍种植的蔬菜之一。

国内外学者多研究其培育方式或保鲜试验[1]，而对其颜色变化及以此为变量的叶绿素含量的预测鲜有研究。

颜色是反映蔬菜品质的重要物理性质[2]。

目前，颜色评价方法主要有主观评价和仪器检测，其中，主观评价易受评价人员主观影响。

近年来，利用精确、高效的仪器评判颜色一直是蔬菜品质评价研究领域的技术应用热点[3-4]。

叶绿素含量是评价绿色蔬菜品质的重要指标[5]，传统的分光光度计测定叶绿素含量方法需用有机溶剂提取，不仅破坏被测样品，而且过程繁琐；采用色差计测定颜色，虽较准确，但对样品的形状、大小、色泽均匀度、表面平整度有一定的要求，有文献报道[6]使用色差计测定青花菜颜色值，研究了颜色值-a/b与叶绿素含量的关系，并建立了基于-a/b值的叶绿素含量预测模型，但决定系数R2只有0.944 1。