华东理工大学2004–2005学年第二学期基因工程期末考试

基因工程试卷B名词解释（每个2分，共20分）1、转化：2、质粒转移性：3、DNA文库：4、RACE:5、选择标记基因:6、降落PCR7、载体：8、感受态细胞：9CaMV35s:10、ORF:二、选择题（每题1分，共15分）2(）限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是A修复自身的遗传缺陷C强化自身的核酸代谢）生物工程的下游技术是基因工程及分离工程促进自身的基因重组提局自身的防御能力蛋白质工程及发酵工程D分离工程及蛋白质工程1(3）基因工程操作常用的酶是:（1内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶A.I + IIB. I + III + IVC. II + III + IVD. I +11 + IV + III4 ()限制性内切核酸酶的星活性是指：A在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。

B活性大大提高C切割速度大大加快D识别序列与原来的完全不同5()下列五个DNA片段中含有回文结构的是A.GAAACTGCTTTGACB. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAGD. GAAACTGCAGTTTC6 ()关于cDNA的不正确的提法是：A同mRNA互补的单链RNAB同mRNA互补的含有内含子的DNAC以mRNA为模板合成的双链RNAD以上都不正确7()下列有关连接反应的叙述，错误的是A,连接反应的最佳温度为37 °CB,连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C,连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于ImMD,连接酶通常应过量2-5倍8( )T4 -DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是A. 2' -OH 和5' —PB. 2' -OH 和3'-PC. 3'-OH 和5' —PD. 5'-OH 和3' -P9()载体的功能是A.外源基因进入受体的搭载工具B.不能为外源基因提供整合能力C.不能提供复制能力D.不能为外源基因提供表达能力10()黏性末端连接法，不仅操作方便，而且A产生新切点B易于回收外源片段C载体不易环化D影响外源基因的表达11()下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)D X噬菌体12()考斯质粒(cosmid)是一种A.容量最大一种载体B,由X-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体C.是一种单链DNA环状载体D,不能在受体细胞内复制，但可以表达13()某一重组DNA 的载体部分有两个BamHI酶切位点。

《基因工程原理与应用》期末考试试卷附答案一、名词解释(共5小题，每小题4分，共20分)1、基因工程：2、星活性：3、插入型载体：4、反转录PCR：5、感受态：二、填空题(共10空，每空2分，共20分)1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是。

2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为和。

3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入Lytic growth 也可以进入Lysogenic state 。

如果其基因组DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入。

；它也可以选择进入，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。

4、ddNTP 与普通的dNTP 的不同之处在于ddNTP ，它们可以在DNA 聚合酶的作用下，通过其掺入到正在增长的DNA 链中，导致链延伸反应终止。

5、Klenow DNA 聚合酶是经蛋白酶裂解而从全酶中除去活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。

三、选择题(共10题，每小题2分，共20分)1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（）。

A、特定的三联密码；B、双链DNA 的特定碱基对；C、双链DNA 的特定碱基序列；D、单链DNA 的特定碱基序列。

2、在切口平移方法标记DNA 探针时只能使用（）。

A、Klenow 酶；B、DNA 聚合酶Ⅰ；C、DNA聚合酶Ⅱ；D、DNA聚合酶Ⅲ。

3、在下列进行DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（）。

A、反应体积；B、酶反应温度；C、反应时间；D、酶量。

4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（）。

A、退火温度过低；B、退火温度过高；C、dNTP 浓度过高；D、循环次数过多。

5、以下不属于PCR 的应用的为（）。

A、随机扩增多态性DNA（RAPD）；B、扩增片段长度多态性（AFLP）；C、RACE；D、S1 酶作图。

6、pUC18 与pUC19 的区别在于（）。

华东理工大学二〇〇四年硕士研究生入学考试试题微生物学一、是非题（每题1.5分，共30分）1、当培养基中含有葡萄糖和乳糖这两种碳源时，大肠杆菌只利用葡萄糖2、在自然界清洁淡水水体中很少存在异养型微生物3、要实现恒化培养，必须使流加的新鲜培养基中有一种营养物保持在较低浓度4、在污水的生物处理过程中，丝状菌大量繁殖会引起活性污泥的膨胀5、当基因发生点突变时，DNA链中一个碱基被取代，其所产生蛋白质中氨基酸序列一定发生改变6、青霉素对细菌的作用是抑制细胞壁肽聚糖亚单位间的交叉相连，因而对人体细胞无效7、自养微生物能以CO2作为唯一的碳原8、自发突变是指微生物在没有人工参与下所发生的突变，称它为“自发突变”即意味着这种突变是没有任何原因的9、使微生物处在休眠状态，就可降低它的变异率10、原核微生物都能在人工培养基上生长11、温度影响生长单位的复制速率，而不影响其长度12、高或低生长速率下细菌细胞平均大小无变化13、细菌倍增（世代）时间不能少于染色体复制一轮所需时间14、菌丝生长单位越小，分枝越多15、启动和复制是性质截然不同的两种过程16、分批培养中生长的细胞群体的平均细胞质量不受温度的影响17、巴斯德效应是对发酵活性的抑制，而克列勃特里效应是呼吸酶合成的抑制18、在Aw<0.990下，随着水活度的降低，细胞得率升高19、在细胞得率相同的情况下，生长在甲烷比甲醇的热得率要高20、胞内脂质成分随生长温度的增加，不饱和脂肪酸的含量下降二、填充题（每题1分，共45分）1、高感染复数的烈性噬菌体对宿主细胞进行吸附，有可能导致宿主发生_______________。

2、细菌产生抗药性的三种主要途径是____________、_____________和________________。

3、证明核酸是遗传变异物质基础的经典实验——转化实验，所用的菌种是______________。

4、首先观察到细菌的学者是__________________，第一次分离出的病毒是___________，在微生物的发展史上，巴斯德的主要贡献在于_________________、__________________、_________________和___________________。

第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）A．I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A. 是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。

B. 它们的识别序列完全相同。

C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。

D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。

E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（ A ）A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。

B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。

C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP，S-腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。

D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性，II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。

E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。

5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。

B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。

C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。

D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。

E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

基因⼯程习题集基因⼯程习题集⼀、名词解释Southern blotting；Cosmid；cDNA library；RACE；RT-PCR；MCS ；cDNA；插⼊失活；反义RNA；PCR，mRNA差异显⽰技术；巢式PCR；实时荧光定量PCR；基因⽂库；星号活性；载体；转化；转染⼆、填空题1.基因⼯程的四⼤要素是、、、2.在基因⼯程中，切割载体和含有⽬的基因的DNA⽚段中，⼀般需使⽤酶3.⽤冷的氯化钙处理对数⽣长期的⼤肠杆菌细胞，可以诱导细胞进⼊称为态的⽣理状态进⾏遗传转化。

4.写出在质粒载体图谱上下列符号表⽰的含义：Amp , LacZ , ori ,MCS 。

5.PCR包括三个步骤_ ，，。

6.限制性内切酶酶切DNA⽚断后通常有两类末端：、。

7.⽬的基因与噬菌体DNA进⾏重组时，可采⽤重组⽅式，也可采⽤重组⽅式。

8.柯斯质粒是⼀类⼈⼯构建的质粒-噬菌体杂合载体，它的复制⼦来⾃，cos 位点序列来⾃分离⽬的基因常采⽤从基因组⽤分⼦杂交等⽅法从构建的或中获得含⽬的基因的克隆⼦。

10.在的作⽤下，将含⽬的基因的DNA⽚断与克隆载体连接成为重组DNA分⼦11.载体根据功能可以分为和12.常⽤的DNA连接酶有和，前者即可以连接粘性末端⼜可以连接平末端，后者只可以连接粘性末端。

13.据图回答：①图中基因组⽂库（填“⼩于”、“等于”或“⼤于”）cDNA ⽂库。

②B过程需要的酶是；A、C过程中（填“可以”或“不可以”）使⽤同⼀种探针筛选含⽬的基因的菌株。

③⽬的基因Ⅰ和Ⅱ除从构建的⽂库中分离外，还可以分别利⽤图中和为模板直接进⾏PCR扩增，该过程中所⽤酶的显著特点是。

⼆、选择题1.基因⼯程的设计操作是在什么⽔平进⾏的（）A.细胞B.分⼦C.细胞器D.原⼦2.基因⼯程的单元操作顺序是（）A 增，转，检，切，接B 切，接，转，增，检C 接，转，增，检，切D 切，接，增，转，检3.分离纯化基因组DNA应保证核酸⼀级结构的完整性，下列哪些因素可能导致⼀级结构被破坏（）A. PH 8.0B.EDTAC.PH 14D.70%⼄醇4.分离纯化基因组DNA应尽量去除蛋⽩质的污染，实验过程中我们通常采⽤什么⽅法去除与DNA结合的蛋⽩质（）A.等电点沉淀法B.盐析法C.有机溶剂变性法D.强酸强碱法5.分离纯化基因组DNA时，我们通常选⽤以下哪种试剂来沉淀基因组DNA（）A.⽔B.⼄醇C.氯仿D.苯酚6.关于不同构象的质粒DNA的电泳速率，下列排列顺序正确的是 ( )A ocDNA >lDNA>scDNAB scDNA >ocDNA> lDNAC ocDNA >scDNA > lDNAD scDNA >lDNA>ocDNA7.PCR技术的操作步骤依次是（）A．⾼温变性、中温延伸、低温复性B．⾼温变性、低温复性、中温延伸C．中温延伸、⾼温变性、低温复性D．中温延伸、低温复性、⾼温变性8.PCR的主要步骤不包括（）A.设计⼀对特异性引物B.⾼温使模板DNA变性C.降温到合适的温度使模板DNA与引物杂交D.加热使DNA聚合酶失活9.PCR反应体系不包括（ )A.DNA模板B.引物C.dNTPD.NTP10.核酸分⼦杂交实验不能⽤于（）A.单链DNA分⼦之间杂交B.单链RNA分⼦之间杂交C.单链DNA分⼦与RNA之间的杂交D.抗原与抗体分⼦之间的杂交11.⽤作探针的DNA分⼦必须（）A.在杂交前变性B.在杂交前复性C.是双链分⼦D.能形成颈环结构12.Southern blotting是（）A.将DNA转移到膜上所进⾏的杂交B.将RNA转移到膜上所进⾏的杂交C.将蛋⽩质转移到膜上所进⾏的杂交D.将多糖转移到膜上所进⾏的杂交13.确切地讲，cDNA⽂库包含（）A.⼀个物种的全部基因信息B.⼀个物种的全部RNA信息C.⼀个⽣物体组织或细胞的全部基因信息D.⼀个⽣物体组织或细胞所表达的mRNA信息14.要了解某⼀基因在某组织细胞中的mRNA表达⽔平时，采⽤哪种⽅法最合适A.Southern blottinB.Northern blottingC.Western blottingD.Eastern blotting15.DNA序列⾃动化测序中不正确的描述是（）A.测序原理与⼿⼯测序基本相同B.不需要引物C.需要模板D.需要四种荧光染料标记的ddNTP16.Sanger双脱氧末端终⽌法中不需要（）A.dNTPB.ddNTPC.DNA聚合酶D.DNA连接酶17.cDNA⽂库的建⽴不需要（）A.逆转录酶B.DNA模板C.mRNA模板D.依赖于RNA的DNA聚合酶18.下列哪项不是基因⼯程中经常使⽤的⽤来运载⽬的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA19.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的⽣存C.能够在宿主细胞中复制D.有⼀个或多个限制酶切点20.下列有关基因的叙述，错误的是（）A蛋⽩质是基因表达的唯⼀产物B 基因是 DNA 链上具有编码功能的⽚段C 基因也可以是 RNAD 基因突变不⼀定导致其表达产物改变结构21.下列各组专业术语中，含义最为接近的是（）A 终⽌⼦与终⽌密码⼦B 基因表达与基因转译C DNA 退⽕与 DNA 复性D 重组⼦与转化⼦22.下列有关连接反应的叙述，错误的是（）A 连接反应的最佳温度为 37 ℃B 连接反应缓冲体系的⽢油浓度应低于 10%C 连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能⾼于 1mMD 连接酶通常应过量 2-5 倍23.下列各常⽤载体的装载量排列顺序，正确的是（）A Cosmid >λ-DNA > PlasmidB λ -DNA > Cosmid > PlasmidC Plasmid >λ -DNA > CosmidD Cosmid > Plasmid >λ-DNA24.质粒是基因⼯程最常⽤的运载体，它的主要特点是：①能⾃主复制②不能⾃主复制③结构很⼩④蛋⽩质⑤环状RNA⑥环状DNA⑦能“友好”地“借居”A ：①③⑤⑦B ：②④⑥C ：①③⑥⑦D ：②③⑥⑦25下列黏性末端属于同⼀种限制酶切割⽽成的是：A．①② B．①③ C．①④ D．②③26下列平末端属于同⼀种限制酶切割⽽成的是A.①③B.①④C.②③D.②④27．作为基因的运输⼯具——运载体，必须具备的条件之⼀及理由是A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并⼤量复制，以便提供⼤量的⽬的基因B.具有多个限制酶切点，以便于⽬的基因的表达C.具有某些标记基因，以使⽬的基因能够与其结合D.对宿主细胞⽆伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择28.限制性内切核酸酶的星活性是指：A 在⾮常规条件下，识别和切割序列也不发⽣变化的活性。

20202021大学基因工程期末课程考试试卷含答案2020-2021大学基因工程期末课程考试试卷（含答案）一、选择题（共40题，每题2分，共80分）1. 以下哪项不是基因工程的主要应用领域？A. 转基因植物的培育B. 基因治疗的研究C. 疾病的基因诊断D. 遗传算法的应用2. 哪个细胞器是负责蛋白质合成的？A. 叶绿体B. 中心体C. 核糖体D. 质体3. 基因工程研究中的DNA重组技术是指：A. DNA的合成B. DNA的裂解C. DNA的修复D. DNA的重排4. 下面哪种技术是基因工程研究中经常用到的？A. 西方印迹B. 南方印迹C. 北方印迹D. 东方印迹5. PCR反应中，以下哪项是PCR的三个温度阶段？A. 解链、退火、延伸B. 解链、延伸、退火C. 退火、解链、延伸D. 延伸、退火、解链... （省略部分内容）二、判断题（共10题，每题2分，共20分）请判断以下各题，正确的在括号内打“√”，错误的在括号内打“×”。

1. （√）基因工程是应用与微生物的生物技术，对生物技术的发展起到了巨大推动作用。

2. （×）扩增子是一段有相同序列的DNA重复片段。

3. （√）逆转录聚合酶是将RNA的信息转录为DNA的酶类。

4. （√）转基因技术被广泛应用于农作物的改良。

5. （×）CRISPR/Cas9是一种RNA干扰技术。

三、简答题（共5题，每题10分，共50分）1. 请简述基因工程的概念及其应用领域。

解答示例：基因工程是利用生物技术对生物体中的基因进行操作与改变的一门学科。

其应用领域涵盖农业、医学、工业等多个领域。

例如，基因工程可以通过转基因技术，将具有特定性状的基因导入植物，提高作物的产量和抗逆能力；在医学领域，基因工程可以用于基因诊断、基因治疗等，旨在改善人类健康状况；在工业领域，基因工程可以生产各种重要蛋白质和化合物，应用于药物生产、环境污染治理等方面。

2. 请简述PCR反应的原理及其在基因工程中的应用。

基因工程期末考试试题及答案卷型：A考试时间：90分钟满分：100分一、名词解释（3X5）限制性内切酶（或其它工具酶）：能在特异位点上催化双联DNA 分子断裂，产生相应的限制性DNA片段荧光定量PCR所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法（半定量PCR 是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA 反转录成cDNA再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA勺相对数量）星活性：非标准条件下切割相似序列，产生非特异性片段同裂酶（或同尾酶）：来源不同但具有相同识别序列，产生相同或不同末端转基因技术（或转基因动植物等）就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中，从而达到改造生物的目的。

二、填空（1X15）1.Cosmid实际上是由cos位点和质粒构成的杂合载体,也可以说是带有cos序列的质粒。

2.超螺旋质粒DNA开环质粒DNA线状质粒DNA在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒＞线状质粒＞开环质粒。

3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。

4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。

5.设计引物是一般要求C+G的比例在40%-60%,长度在17-30bp。

6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。

三、选择题（2X15,实卷应是1X35）1.基因工程创始人（D）A A.KornbergB W.GilbertC P.BergD S.Cohen2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）A.既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNAB.只能作用于单链DNAC.只能作用于双链DNAD.只能作用于RNA3.氨苄青霉素的工作原理为（A）A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成B.可以抑制核糖体的转位C.可以与核糖体50S亚基结合并抑制蛋白质合成D.可以与核糖体30S亚基结合并抑制蛋白质合成4.反转录酶是一种（C）A.依赖DNA的DNA聚合酶B.依赖DNA的RNA聚合酶C.依赖RNA的DNA聚合酶D.依赖RNA的RNA聚合酶5.11类限制性内切核酸酶（A）A.仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供B.限制性识别非甲基化的核苷酸序列C.有外切核酸酶和甲基化酶活性D.仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供6.下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列（C）A.GAATCGB.AACCTTC.GATATCD.ACGGCA7.（多选）在基因工程中，可用碱性磷酸酶（AB）。

一、填空题1、基因文库的构建通常采用cDNA 法和鸟枪法两种方法。

2 、限制性内切酶识别序列的结构普通为具有 180 度旋转对称的回文结构。

3、DNA 连接酶主要有两种：T4 噬菌体和大肠杆菌 DAN 连接酶。

4、根据质粒在宿主细胞中所含拷贝数的多少，可以把质粒分为两种类型：密切型质粒和松弛型质粒。

5、原核受体细胞通常包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。

6、原核生物或者低等真核生物，将外源重组 DNA 导入受体细胞的方法有借助生物载体的转化、转染、转导。

7、对细菌细胞进行转化的关键是细胞处于感受态。

8、基因工程是_____1970’____年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

9、部份酶切可采取的措施有：(1)减少酶量； (2)缩短反应时间； (3)增大反应体积等。

10、第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。

11、DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割 DNA 聚合酶I 得到的份子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性：(1)5'-3'合成酶的活性； (2)3'-5'外切核酸酶的活性。

12、为了防止 DNA 的自身环化，可用_碱性磷酸酶__去双链 DNA_ 5’端的磷酸基团_。

13、测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它惟独5'-3'合成酶的活性，而没有 3'-5' 外切酶的活性。

14、切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的5'一 3'合成酶和 5'一 3'合成酶的作用。

15、欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 份子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1 核酸酶切割或者DNA 聚合酶补平。

16、反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有核酸水解酶 H 的作用，可以将DNA-RNA 杂种双链中的 RNA 水解掉。

1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。

2.如何正确使用微量移液器？答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。

3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？答：loading Buffer。

主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。

溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。

4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。

答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。

5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75）答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31）答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。

7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。

1.基因工程定义。

答：基因工程原称遗传工程。

从狭义上讲，基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行剪接重组，然后转入另一生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。

广义的基因工程定义为DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。

上游技术指的是外源基因重组、克隆、表达的设计与构建（即狭义的基因工程）；而下游技术则涉及含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养，以及外源基因表达产物的分离纯化过程。

2.基因工程三大要素。

答：供体、受体、载体。

3.基因过程基本过程：切、接、转、增、检。

4.基因工程基本原理。

答：基因工程的主体战略思想是外源基因的稳定高效表达。

5.基因工程的研究意义。

答：①大规模生产其他生物体内含量极微但却具有较高经济价值的生物分子；②设计构建新物种(新性状乃至全新物种)。

③搜寻、分离和鉴定生物体尤其是人体内的遗传信息资源(基因)。

第二章 1.绝大多数分子克隆实验所使用的载体是DNA双链分子，其功能是：（1）为外源基因提供进入受体细胞的转移能力；（2）为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力；（3）为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力。

2.质粒的定义。

答：质粒是一类存在细菌和真菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状DNA分子，也称为cccDNA。

3.质粒的四个特性。

答：（1）自主复制性；（2）可扩增性；（3）可转移性；（4）不相容性。

4.人造染色体载体定义及用途。

答：定义：将细菌接合因子、酵母或人类染色体DNA上的复制区、分配区、稳定区与质粒装配在一起，即可构成染色体载体。

用途：可以用于人类大规模测序。

5.限制性核酸内切酶。

答：几乎存在于任何一种原核细菌中，它能在特异位点上催化双链DNA分子的断裂，产生相应的限制性片段。

6.II类限制性核酸内切酶的命名。

答：具体规则：以生物体属名的第一个大写字母和种名的前两个小写字母构成酶的基本名称，如果酶存在于一种特殊的菌株中，则将株名的一个字母加在基本名称之后，若酶的编码基因位于噬菌体（病毒）或质粒上，则还需用一个大写字母表示这些非染色体的遗传因子。

基因工程期末考试题一、选择题（共30道，每题2分，共60分）1. 基因工程是指利用 ____________ 高效地、准确地选择特定基因并将其导入目标生物体中的一种综合技术。

A. 生物化学B. 细胞生物学C. 遗传工程D. 免疫学2. 基因工程的主要目的是为了 ____________ 人类生活和生命周期质量。

A. 提高B. 保护C. 改变D. 探索3. 基因工程的基本原理是将 ____________ 导入目标细胞中。

A. 细胞质B. 蛋白质C. DNAD. RNA4. 基因剪切酶是一种能够识别并切割 ____________ 两个特定序列的酶。

A. DNAB. RNAC. 蛋白质D. 磷酸5. PCR是一种 ____________ ，它可以在体外扩增DNA片段。

A. 酶B. 基因C. 酵素D. 反应6. 转基因作物通常被设计来抗击 ____________ 的入侵。

A. 病毒B. 放射性物质C. 细菌D. 真菌7. 基因治疗是利用基因工程技术来治疗导致 ____________ 的遗传疾病。

A. 精神失常B. 免疫系统失调C. 癌症D. 遗传性疾病8. CRISPR-Cas9系统被广泛应用于基因编辑，其中Cas9是一种____________ 。

A. RNA分子B. 基因C. 脉冲D. 酶9. 基因测序是指对一个生物体的 ____________ 进行测量和分析。

A. 基因型B. 表型C. 繁殖方式D. 器官10. 重组DNA技术可以通过 ____________ 来溶解DNA双链，以便将目标基因导入到更大的DNA片段中。

A. 碱基B. 酶C. 酸D. 氨基酸11. 基因工程的伦理问题主要包括食品安全、 ____________ 和知情同意等方面的问题。

A. 知识产权B. 生态环境C. 科学研究D. 资金支持12. 基因药物是利用基因工程技术来生产 ____________ 来治疗疾病。

A. 蛋白质B. 病毒C. 抗生素D. 细胞13. 基因工程领域的研究主要集中在 ____________ 和基因编辑技术上。

生物化学（本）202301模拟1注：找到所考试题直接看该试题所有题目和答案即可。

查找按键：Ctrl+F 超越高度一、单选题（共30题,每题2分,共60分）1. 对多羟基醛糖立体-构型的判定是根据以下哪个碳原子上-OH的位置确定的：（）A、羟甲基临近的碳原子B、醛基临近的碳原子C、离醛基最远的碳原子D、离醛基最远的手性碳原子正确答案： D2、符合米氏方程的酶促催化反应中，测得酶促反应 v=80%Vmax时，[S] 与Km 的关系是：（）A、1:4B、 1:8C、 1:10D、 1:2正确答案：A3、脂肪的碱水解反应在生物化学中被称为（）A、皂化反应B、酯化反应C、还原反应D、氧化反应正确答案： A4、酶促催化的可逆性抑制中，竞争性抑制剂的动力学特点是（）A、 V max和K m都不变B、V max不变，K m减小C、V max变小，K m不变D、V max不变，K m增高正确答案： D5、乳糜微粒、中间密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）、和极低密度脂蛋白（VLDL）, 高密度脂蛋白（HDL）都是血清脂蛋白，这些颗粒按密度从低到高排列，正确的次序为：（）A、 LDL，IDL，VLDL，乳糜微粒,HDLB、乳糜微粒，VLDL，IDL，LDL,HDLC、 VLDL，IDL，LDL，乳糜微粒,HDLD、乳糜微粒，VLDL，LDL，IDL,HDL6、酶能够提高化学反应的速率，本质是产生以下哪种效应（）A、提高产物能量水平B、降低反应的活化能C、提高反应所需活化能D、降低反应物的能量水平正确答案： B7、以下不含糖苷键的化合物是（）A、蔗糖B、麦芽糖C、脑苷脂D、脑磷脂正确答案： D8、神经节苷脂属于哪种类型的物质（）A、脂蛋白B、糖蛋白C、糖脂D、磷脂9、有机磷农药结合胆碱酯酶活性中心的哪种基团：（）A、氨基B、羧基C、羟基D、巯基正确答案： C10、下述关于核糖体的生物活性表述的内容中，不包括（）。

2003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷（A卷）一、填空题（20分）1.基因工程的四大要素是、、和。

2．可用T4 DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和的活性。

3．乙醇沉淀DNA的原理是。

4. 受体细胞的感受态是。

5．在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。

6. 通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以最好。

7. Ⅱ类限制性内切核酸酶既具有的专一性，又具有的专一性。

切割后产生末端的DNA片段和末端的DNA片段，作用时需要作辅助因子。

8．Klenow大片段是用切割DNA聚合酶Ⅰ得到的，它具有和两种活性。

二、单项选择题（20分）1.1953年Watson和Crick提出：（）（a）多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋（b）三个连续的核苷酸代表一个遗传密码（c）遗传物质通常是DNA而非RNA（d）分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变2. 在原核生物DNA复制中,以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸（）（a） DNA聚合酶Ⅲ（b） DNA聚合酶Ⅱ（c） DNA聚合酶Ⅰ（d） DNA连接酶3.关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。

（a）由作用于同一DNA序列的两种酶构成（b）这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶（c）这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰（d）不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4. Ⅱ型限制性内切核酸酶（）（a）有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列（b）仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供（c）有外切核酸酶和甲基化酶活性（d）仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供5.T4 DNA连接酶是从T4噬菌体感染的E.coli中分离的，这种连接酶（）（a）催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源（b）既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接（c）是一种单肽酶，分子量为74kDa（d）既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接6.从E.coli中分离的连接酶：（）（a）需要ATP作辅助因子（b）需要NAD作辅助因子（c）用于进行平末端的连接（d）作用时不需要模板7.DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，（）（a）将双链DNA中的5′-P同3′-OH末端重新形成磷酸二脂键（b）作用时不消耗能量（c）需要Mn2+等二价辅助离子（d）也可以连接RNA分子8.松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到（）（a） 30-50 （b） 100-200 （c） 300-400 （d） 500-700 9.第一个作为重组DNA载体的质粒是（）（a）pBR322 （b）ColE1 （c）pSC101 （d）EcoB 10.关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确？（）（a）溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体（b）溶液Ⅱ的作用是使DNA变性（c）溶液Ⅲ的作用是使DNA复性（d）质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性11. Southern印迹的DNA探针（）杂交（a）只与完全相同的片段（b）可与任何含有相同序列的DNA片段（c）可与任何含有互补序列的DNA片段（d）可与用某些限制酶切成的DNA片段12. 下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的？（）（a）特定组织或细胞中提取DNA或RNA（b）用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA（c）以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA（d）用S1核酸酶去除双链的发夹结构13. 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）（a）产生新切点（b）易于回收外源片段（c）载体不易环化（d）影响外源基因的表达14.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确？（）（a）噬菌斑颜色的变化（b）cI基因失活造成的噬菌斑的变化（c）对IPTG的分解能力（d）对Xgal的分解与否15. 下列哪一种酶作用时需要引物？（）（a）限制酶（b）碱性磷酸酶（c）反转录酶（d）DNA连接酶16. 关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确？（）（a）在不同的宿主中具有不同的复制机制（b）在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点（c）在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶（d）在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度17.下面关于多克隆位点（MCS）的描述，不正确的一句是（）（a）仅位于质粒载体中（b）具有多种酶的识别序列（c）不同酶的识别序列可以有重叠（d）一般是人工合成后添加到载体中18.cDNA文库包括该种生物的（）（a）某些蛋白质的结构基因（b）所有蛋白质的结构基因（c）所有结构基因（d）内含子和调控区19. 同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（）（a） SC DNA＞L DNA＞OC DNA （b） SC DNA＞OC DNA＞L DNA （c） OC DNA＞SC DNA＞L DNA （d） L DNA＞SC DNA＞OC DNA 20. ColE1是用作基因工程载体的自然质粒，它不具有下列哪个性质（）（a）是松弛复制型（b）具有四环素抗性（c）能被氯霉素扩增（d）产生大肠杆菌素三、判断题（15分）1．同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。

某大学《基因工程》课程考试试卷一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端2、基因工程3、质粒的不相容性4、基因组文库5、克隆(clone)6、电击转化法7、重组PCR8、限制性酶切图谱法9、质粒10、重组率的定义二、填空题（共10小题，每小题1分，共10分）1、在基因克隆中碱性磷酸单酯酶的主要用途有：A、在用P标记DNA 5′端之前；B、在DNA重组技术中，去除DNA片段的，可防止酶切后的载体的与。

2、载体的功能是运送高效转入；为外源基因提供能力或能力；为外源基因的或提供必要的条件。

三、简答题（共10小题，每小题4分，共40分）1、载体应具备的条件是什么？2、受体细胞应具备的条件？3、蓝白斑筛选原理是什么？4、PCR克隆目的基因的基本程序是什么？5、酵母菌表达外源基因的优势是什么？6、营养缺陷型的哺乳动物受体细胞的遗传标记是什么？7、λ-DNA作为载体的优点是什么？8、巴斯德毕赤酵母表达系统特征及优势是什么？9、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？10、分泌型目的蛋白表达系统的构建策略是什么？四、论述题（1-2每小题8分，3-4题每小题12分，共40分）1、论述PCR原理及引物设计的基本原则。

2、强化转录终止的必要性是什么？3、请论述λ-DNA载体的构建策略是什么。

4、请论述植物基因工程的共整合转化程序和二元整合转化程序及二元整合转化程序的特征。

某大学《基因工程》课程考试试卷答案一、名词解释（共10小题，每小题1分，共10分）1、粘性末端因酶切位点在两条DNA单链上不同（对称）酶切后形成的具有互补碱基的单链末端结构，酶切产生的两个粘性末端很容易通过互补碱基的配对而重新连接起来。

2、基因工程指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。

上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。

注意：请将所有答案填到答题纸上。

一、选择题（每小题只有一个正确的答案，每小题1分，共30分）1．天然限制性内切酶HindⅢ的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii2．天然限制性内切酶Bam HⅠ的来源是：( ) A．Bacillus amyloliquefaciens B．Escherichia coliC．Haemophilus influenzae D．Providencia stuartii3．碱法提取质粒DNA时，为了去除RNA，常采用哪种酶水解RNA。

( ) A．DNA 连接酶B．核酸内切酶C．RNase D．DNase 4．T4-DNA连接酶需要的辅助因子分别是：( ) A．NAD B．ATP C．ADP D．NADH5．至今发现的限制性核酸内切酶可分为3种类型，真正用于基因工程操作的是哪种核酸内切酶：( ) A．Ⅰ型酶B．Ⅱ型酶C．Ⅲ型酶D．3种类型都有用6．限制性核酸内切酶作用的底物是：( ) A．单链DNA B．双链DNAC．单链RNA D．双链RNA7．具互补黏性末端的两DNA片段间的连接可用以下哪种连接酶：( )A．大肠杆菌DNA连接酶或T4 DNA连接酶B．大肠杆菌DNA连接酶C．T4 DNA连接酶D．两者都不能用8．某一双链环状DNA含有n个限制性核酸内切酶Hind III的识别序列，用Hind III完全酶切该双链环状DNA后，产生的片段数为：( ) A．n B．n+1 C．n-1D．n+29．提高重组率的方法包括：( ) I 加大外源DNA与载体的分子之比II 载体分子除磷III 连接酶过量IV 延长连接反应时间A．I + II B．I + II + IIIC．I + III + IV D．I + II + III + IV10．Southern印迹杂交作用的对象是：( ) A．DNA B．RNA C．蛋白质D．以上都不对11．DNA分子在电场作用下，可在凝胶中向正极方向移动，对其迁移率描述正确的是：( ) A．迁移率与DNA分子的构型和大小相关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序无关B．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都相关C．迁移率与DNA分子的构型和大小无关，而与DNA分子中的碱基组成和顺序相关D．迁移率与DNA分子的构型和大小以及DNA分子中的碱基组成和顺序都无关12．以下哪种细胞是真核生物受体菌：( ) A．大肠杆菌B．枯草杆菌C．蓝细菌D．酵母菌13．限制性核酸内切酶以双链DNA为底物，在合适的反应条件下，识别一定的核苷酸序列，使两条核苷酸链上特定位置的什么键断开，产生具有3’-OH基团和5’-P基团的片段：( ) A．氢键B．磷酸二酯键C．磷酸三酯键D．其他化学键14．PCR循环中采用的酶是：( ) A．Klenow fragment B．大肠杆菌DNA聚合酶C．Taq DNA聚合酶D．T4 DNA聚合酶15．热激法转化大肠杆菌的温度是多少：( ) A．37℃B．42℃C．56℃D．72℃16．在最优PCR反应条件下，经过4次循环后，待扩增的特异性DNA片段可达到多少个拷贝数：( ) A．4B．8 C．16D．3217．双链DNA的两条脱氧核苷酸链中，以下碱基互补配对正确的是：( ) A．A与T、G与C B．A与C、G与TC．A与G、C与T D．A与T、G与U18．基因工程操作的三大基本元件是：( ) I 供体II 受体III 载体IV 抗体V 配体A．I + II + III B．I + III + IVC．II + III + IV D．II + IV + V19．琼脂糖电泳中DNA用什么染色：( ) A．EB B．考马斯亮蓝C．溴酚蓝D．二甲苯青20．T 4-DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是：( ) A．2' -OH 和5' -P B．2' -OH 和3' -PC．3' -OH 和2' -P D．3' -OH 和5' –P21．下列哪个试剂可以用于制备感受态大肠杆菌：( ) A．KCl B．CaSO4C．CaCl2D．CuSO422．DNA在多少波长处有最大吸收峰：( ) A．260nm B．280nm C．560nm D．600nm23．限制性内切酶切割方式有：( ) A．切成平头B．切成5′端突出黏性末端C．切成3′端突出黏性末端D．以上都对24．下列五个DNA 片段，最可能含有BglII酶切位点的是：( )A．GAAACTGCTTTGAC B．GAAAAGATCTACTG C．GAAACTGGTCAAAG D．GAAACTGCAGTTTC25．下列哪一个不是II型限制性内切酶的特点：( ) A．通常识别4-8个相连的核苷酸B．识别序列为旋转对称C．序列内通常富含GC D．切割位点一定在识别序列内26．关于PCR说法错误的是：( ) A．原理类似于体内DNA复制B．需要镁离子的参与C．循环次数越多越好D．延伸温度是72℃27．下列哪一个不是重组子的筛选鉴定方法：( ) A．Western blot B．电泳鉴定C．PCR D．蓝白斑筛选28．蛋白质分子量的测定可以用哪个方法：( ) A．琼脂糖凝胶电泳B．SDS-PAGEC．PCR D．Northern blot29．基因工程常用的载体有：( ) A．质粒B．病毒C．人工染色体D．以上都是30．细菌耐药性基因位于：( )DNA C．RNA D．小的线性DNA1分，共12分）1．至今发现的限制性核酸内切酶可分为3种类型，即I型酶、II型酶和III型酶，它们各具特性；在基因工程操作中真正有用的是。