细菌一般染色方法PPT幻灯片

微生物学实验细菌的简单染色和革兰氏染色
二、实验原理
1、细菌的简染色原理
①细菌菌体微小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须通过染色来增加菌体的显示力， 从而更清楚地观察到其形态和结构。 ②在碱性、中性或弱酸性溶液中，细菌菌体通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染 色局部带正电荷〔酸性染料的染色局部带负电荷〕，因此，碱性染料很容易与菌体结合而是菌 体着色。
2、细菌革兰氏染色的原理
G+菌和G-菌的细胞壁结构和组成有较大的区别。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小， 通透性降低，结晶紫-碘复合物被滞留在细胞内，因此细菌仍保存初染时的颜色，经番红复染后呈蓝紫 色。 G-菌细胞壁的外膜层富含类脂，而且其肽聚糖层次薄、交联度低；乙醇脱色时，细胞壁因类脂被 溶解而出现较大缝隙，使得菌体内的结晶紫-碘复合物较易渗出，而使菌体变成无色，再经番红 复染就成为红色。
〔 〔涂使混乙。乙。3直倾结右右G在 倾直5菌〔染倾G在②荷先结〔将①②荷右直将先将乙。2〔 m 〔 〔 水 〔〔、、++菌匀醇醇至去晶区区细去至体1色去细在〕用晶三玻细在〕区至染用玻醇三2、菌菌片〕固 水2415洗3i体 并 脱 脱 流 染 紫 — — 胞染 流 尚 时 染 胞 碱 ， 低 紫 区 片 菌 碱 ， — 流 好 低 片 脱细细〕n区定 洗涂〕染〕〕〕不固涂色色下液、——内 液下未间液内性因倍、：置菌性因—下的倍置色〕胞胞。；： ：片：枯定成时时的，碘大大， ，的成1，，、此镜碘左于体、此大的涂镜于时媒色复壁壁易初枯用 倒—-脱2于薄，，水用液肠肠因 用水熟用因中，找液区玻微中，肠水片找玻，倾左中中染m燥夹 去—染过载膜细细为洗、杆杆此 洗为或洗此性碱到、片小性碱杆为放到片细—染燥i肽肽色n子 染“去区。三玻〔胞胞无瓶菌菌细 瓶无菌瓶细或性视架而或性菌无空视架胞99—。及。聚聚厚夹 液55。及区片注壁壁色自区区菌 自色体自菌弱染野上透弱染区色气野上壁苏。%%—加染糖糖住 ，固滴〞，上：因因为载〕〕仍 载为过载仍酸料后，明酸料〕为中后，因云酒酒将 镜层层—载用卢将液涂。涂类类止玻。。保玻止老玻保性很，加，性很。止晾，加类金精精定加厚厚否玻 洗玻 检片苏片脂脂。片存 片。，片存溶容再适在溶容。干再适脂芽、、戈玻且且，片 瓶蕃。法那不被被的初 的可的初液易换量普液易或换量被孢沙沙交交云片 。氏一 自。易溶溶一染 一能一染中与油〔通中与者油〔溶杆黄黄片用红联联步么端 载金碘置 将过解解端时 端使端时，菌镜以光，菌用镜以解菌或或度度， 玻洗倾复造厚而而轻的 轻染轻的细体观覆学细体吸观覆而区骤蕃蕃芽液高高于 染迅 片〕出出轻颜 轻色轻颜菌结察盖显菌结水察盖出；红红瓶染斜，，成速 的同孢一。现现冲色 冲结冲色菌合菌微菌合纸菌现玻 好，，类类通 一自2局较较洗， 洗果洗，体而膜镜体而吸膜较，杆简滴并并脂脂过 端片 的m大大，经 ，呈，经通是为下通是干为大判判载质质部菌火 轻，连单缝缝直番 直现直番常菌度不常菌。度缝断 断架 涂含含i焰 轻区菌玻n染隙隙至红 至相至红带体〕易带体〕隙菌菌染续量量冲2上片，，流复 流反流复负着结识负着结，后～；体体少少色体片洗色使使下染 下的下染电色晶别电色晶使滴3的的，，，放，〔次中1脱得得的后 的结的后荷。紫，荷。紫得的革革经经法切加，菌菌水呈 水果水呈，染必，染菌立加空央兰兰脱脱m 色勿一体体为蓝 为。为蓝而液须而液体。氏氏色色9即区将适气i不内内无紫 无无紫碱染通碱染内端染染n剂剂5菌—的的色色 色色色性色过性色的水量中色色，处处完膜% 轻结结。。 。。。染染染结11反反理理—洗冲～～水〔晾全晶晶料色料晶响响后后轻掉22两乙紫紫在来在紫至洗性性反反以干mm，〕冲电增电---种ii。。碘碘碘而而nn醇流，。而覆或离加离；；复复复使使洗菌时菌时出脱合合合肽肽使盖者，体，的，物物物聚聚液色G其的其菌用较较较糖糖混直分显分无-易易易层层2膜吸菌合子示子至渗渗渗的的色0的力的呈为水区出出出孔孔～流染，染。，，，径径；现度纸色从色而 而 而缩缩下2局 而 局右革使使使小小〕吸5部更部的菌菌菌，，区兰s带清带结干体体体通通水至—正楚正氏变变变透透晶。电地电为成成成性性—流阳荷观荷紫先无无无降降大无〔察〔出性色色色低低染用酸到酸肠，，，，，色结液性其性再再再液低结结杆。染形染果经经经晶晶无染倍料态料菌番番番紫紫。的和的色红红红--区色镜碘碘染结染复复复复复〕，色构色找1染染染合合局。局～。就就就立到物物部部成成成被被2带带即视为为为滞滞负负红红红留留电电色色色 野脱后色时，间再对换革油兰镜氏观染察色结，果并的判影断响菌：体脱的色时革间兰过氏短染，色G反-菌响转性呈。革兰氏阳性结果；如果脱色时间过

技能训练5 细菌标本片的制备及染色方法
1
实训目标
能利用不同的材料进行细菌标本片的制备 掌握常规的染色方法，并认识细菌的不同染色特性
2
仪器材料
酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美 蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、 染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜 纸、细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌 病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等
10
（2）组织抹片的制作 待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后，用经火焰灭菌的 镊子夹起组织，用灭菌剪刀剪下小块组织，将组织切 面在载玻片上等距离轻压几下，使其留有组织切面的 压迹。
11
（二）常用的细菌染色方法
1．美蓝染色法 2．革兰氏染色法 3．瑞氏染色法
12
1．美蓝染色法
在已固定好的抹片 上，滴加适量美蓝染色 液覆盖涂面，染色2～ 3 min， 水 洗 ， 吸 水 纸 轻压吸干或晾干和镜检， 结果菌体呈蓝色。
（2）卢戈氏碘液 碘1g、碘化钾2g、蒸馏水300ml。将碘化钾放入研钵 中，加入少量蒸馏水，使其溶解，再放入已磨散的碘片，徐徐加 水，同时充分磨匀，待碘片完全溶解后，把余下的蒸馏水倒入， 再装入瓶中。
（3）石炭酸复红稀释液 取碱性复红酒精饱和溶液（碱性复红10g溶于 95%酒精100ml中）1ml和5%石炭酸水溶液9ml混合，即为石炭酸 复红原液。再取原液10ml和90ml蒸馏水混合，即成石炭复红稀释 液。
14
3．瑞氏染色法
细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片 上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液 等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻 轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗， 干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈 其他颜色。

微生物常用染色法
1
细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
2
涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
18
涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
19
涂片见G+球菌，呈链状排列
20
染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
9
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
10
革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
24
染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
25
剂.也可用加热法促进着色.
6
脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.

复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有：
革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 荚膜染色法等。
2019-9-15
感谢你的欣赏
13
革兰氏染色（Gram stain） 1984年，丹麦医生Gram采用革兰氏染色法细 菌细胞壁区分为两种类型：革兰氏阴性（G+） 和革兰氏阳性（G-）
2) 油镜使用完毕，切记按规定步骤擦干净， 否则可能损害镜头
3）擦油镜镜头方法：分三步 A）先用擦镜纸揩去 镜头上的香柏油 B）从双层瓶的下层沾少许二 甲苯滴在另一片擦镜纸上 ，擦拭镜头； C）再用 一小片擦镜纸擦去镜头上可能残留的二甲苯。
2019-9-15
感谢你的欣赏
12
2、革兰氏染色
单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。
23
思考题
简单染色:
(1) 你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节? (2) 如果你的涂片未经热固定，将会出现什么问题？如果加热温度过高、
时间太长，又会怎样呢？
革兰氏染色: (1) 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节
是什么? (2) 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆茵的粗壮杆菌，请你鉴定其革兰
8
2、干燥 室温自然干燥
操作步骤（continued）
3、固定
固定的目的： 1）使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2）并使菌体牢固地附着在载玻片上。
固定方法： 热固定：涂面朝上，通过火焰数次 注意：温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜， 否则会改变甚至破坏细胞形态
2019-9-15
感谢你的欣赏

细菌革兰氏染色ppt课件
目录
• 引言 • 革兰氏染色的基本原理 • 革兰氏染色的操作步骤 • 革兰氏染色的结果分析 • 革兰氏染色的应用和限制 • 结论
01 引言
目的和背景
目的
介绍革兰氏染色的原理、方法及应用，帮助学习者更好地了解和掌握这一基本 染色技术。
背景
革兰氏染色是细菌学中最经典、最常用的染色方法之一，通过对细菌的染色， 可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，对于临床诊断和治疗具有 重要的指导意义。
结合其他技术
将革兰氏染色与其他技术如分子生 物学、免疫学等相结合，实现更精 确的细菌分类和鉴别。06Βιβλιοθήκη 结论总结革兰氏染色的重要性
临床诊断的关键工具
革兰氏染色是临床微生物实验室的基 本技术，用于快速识别细菌种类，对 准确诊断感染和选择合适的治疗方案 至关重要。
指导抗生素选择
科研的基础
在科研领域，革兰氏染色是研究细菌 种群结构、进化、生态和致病性的重 要手段。
染色
染色
用革兰氏染色液对固定后的涂片进行 染色，分别使用结晶紫、碘液和脱色 液进行初染、媒染和脱色处理。
染色注意事项
染色时应按照规定的步骤进行，避免 染色过度或不足，同时要确保染色液 的新鲜度和浓度适宜。
脱色
脱色
用脱色液对染色后的涂片进行脱色处理，以 去除菌体表面的结晶紫和碘液。
脱色注意事项
脱色时应控制脱色时间和脱色液的用量，避 免脱色过度或不足，影响染色效果。
革兰氏染色的工作原理
革兰氏染色利用了细菌细胞壁的成分 和结构对染料亲和性的差异，通过结 晶紫初染和碘液媒染后，由于细胞壁 组成成分对革兰氏染料的吸附能力不 同，酒精脱色时，细胞壁对染料的吸 附能力不同，从而导致被脱色的程度 不同，最终影响了复染后细菌的着色。

常用的脱色液有乙醇、丙酮等，脱色时间需要根据染色液和染色方法而定。
复染的目的是使染色后的细菌更加清晰可见，常用的复染液有稀释复红、稀释结晶 紫等。
干燥与镜检
干燥与镜检是细菌染色技术的最 后步骤，需要将染色完成的载玻 片干燥后进行显微镜检查，以便
观察染色效果和细菌形态。
干燥过程中需要注意避免过度加 热或干燥，以免影响染色效果。
01
02
03
04
简单染色法
利用单一染料对细菌进行染色 。
复染色法
利用两种或多种染料对细菌进 行染色，以便区分不同的细胞
结构。
荧光染色法
利用荧光染料对细菌进行染色 ，通过荧光显微镜观察。
特殊染色法
针对某些特殊性质或结构的细 菌，采用特殊的染色方法。
染色过程中的物理和化学变化
物理变化
染色过程中染料分子与细菌细胞 之间的相互作用，如吸附、渗透 等。
勤洗手
操作后应立即用肥皂和水彻底 清洗双手，确保个人卫生。
废弃物处理
使用过的培养物、染料和其他 废弃物应按照实验室规定进行
安全处理。
染色技术的优缺点和未来发展方向
优点
细菌染色技术是一种简单、快速、有效的细菌检测方法，能够直观地观察细菌的形态和结 构，有助于初步鉴定细菌种类。
缺点
染色技术需要人工操作，容易受到操作者主观因素的影响，且无法对细菌进行深入的分子 生物学鉴定。
《细菌染色技术》 ppt课件
REPORTING
目录
• 引言 • 细菌染色技术的基本原理 • 细菌染色技术的操作步骤 • 细菌染色技术的结果分析 • 细菌染色技术的注意事项和问题解决
PART 01
引言
REPORTING

形态。
记录与分析
详细记录观察结果，并 对异常形态的细菌进行 分析，提高实验的可靠
性。
实验后的清理
清洁工作台
实验结束后，对实验台面进行 彻底清洁，去除残留物。
废物处理
按照实验室规定正确处理废弃 物，防止对环境造成污染。
仪器归位
将使用过的显微镜、载玻片、 盖玻片等仪器归位，方便下次 使用。
总结与反思
对本次实验进行总结，反思实 验过程中的不足之处，以提高
污水处理效果。
环境污染评估
染色技术可以用于评估环境中的 细菌污染状况，为环境保护提供
科学依据。
生态平衡研究
染色技术可以用于研究生态系统 中细菌的作用和平衡，了解生态
系统的运行机制。
05
实验操作注意事项
实验前的准备
实验材料准备
确保所有实验材料齐备，包括细菌培养物、染色 液、显微镜、载玻片、盖玻片等。
04
细菌染色技术的应用
在医学上的应用
诊断疾病
通过细菌染色技术，医生可以准 确诊断感染性疾病，如肺炎、肠 道感染等，为患者提供及时有效
的治疗。
抗生素敏感性测试
染色技术可以用于测试细菌对抗生 素的敏感性，帮助医生选择合适的 抗生素进行治疗。
病原体追踪
在传染病爆发时，染色技术有助于 追踪病原体的传播途径和来源，为 防控措施提供依据。
《细菌的染色及观察》ppt课件
目录
• 细菌染色技术简介 • 细菌的染色过程 • 细菌的观察方法 • 细菌染色技术的应用 • 实验操作注意事项
01
细菌染色技术简介
染色的目的和原理
目的
使细菌能被肉眼或显微镜观察， 以便区分不同形态和特征。
原理
染色剂与细菌结合，改变细菌的 折光率和颜色，使其与其他物质 区分开来。

包括：脂蛋白：向内与肽聚糖（ＤＡＰ） 相连
脂质双层：液态，似细胞膜 脂多糖：G－菌的内毒素，由 类脂A、核心多糖、特异性多糖组成
2021/3/29
30
（1）革兰氏阴性菌“肽聚糖” （大肠杆 菌）包括聚糖骨架、四肽侧链
四肽侧链的第三位
氨基酸由二氨基庚
二酸（DAP）替代，
以肽健直接与相邻
四肽侧链中的D-丙
N-乙酰葡萄糖胺（N-acetyl glucosamine，G）
溶菌酶作用点
N-乙酰胞壁酸 （N-acetyl muramicacid， M）
2021/3/29
青霉素作用点
26
（2）磷壁酸（Teichoic acid）
G+菌特有，是由核糖醇(Ribitol)或甘油 (Glyocerol)残基经磷酸二酯键相互连接而成的多 聚物，并带有一些氨基酸或糖。约30个或更多磷 壁酸分子组成的长链，穿插于肽聚糖中。
细菌细胞膜的结构与真核细胞 者基本相同，由蛋白质、脂类 和少量的多糖组成。所含的脂 类均为磷脂，不含胆固醇。磷 脂由磷酸、甘油、脂肪酸和含 氮的碱基构成。
2021/3/29
23
凡能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物 质，都能损伤细胞壁而使细菌变形或 杀伤细菌，如：
– 溶菌酶能水解肽聚糖支架的β-1，4糖苷键， 引起细菌裂解。
– 青霉素和头孢霉素能抑制四肽侧链上D-丙 氨酸与五肽桥之间的联结，使细菌不能合 成完整的细胞壁，可导致细菌死亡。
2021/3/29
外膜
①脂蛋白：
位于肽聚糖层和脂质双层之间，起连 接作用，使外膜和肽聚糖构成一个整体。
②脂质双层：
磷脂双层，内嵌外膜蛋白（out membrane protein OMP），具有不同的 功能。如有的外膜蛋白为孔蛋白是小分子 的通道；有的是噬菌体、性菌毛、细菌素 的受体。

编辑ppt
13
细菌分裂过程：
➢ ①菌体伸长，核质体分裂 ➢ ②形成横隔壁 ➢ ③子细胞分离
☆少数有菌毛的菌可进行有性繁殖
编辑ppt
8
五、细菌的群体形态
（一）种类：
▲固体培养时的群体形态： ① 菌落（colony) ②单菌落（clone) ③菌苔(lawn)
culture plate
▲液体培养时的群体形态： 编辑ppt
分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如Eosin, Congo red , Acid fuchsin 等。
③脂溶性染料—如Sudan black。
编辑ppt
7
四、细菌的繁殖
方式
无性繁殖 有性繁殖
一般为无性繁殖，二分裂法。
➢ 同形裂殖：裂殖后形成的子细 胞大小相等。
➢ 异形裂殖：分裂产生两个大小 不等的子细胞。
二菌落形态1大小2颜色3透明度4表面状态5质地6边缘形态7隆起形状正面观samplesweretakenfromnumberedcoloniesexaminedmicroscopically三影响菌落形态的因素各种微生物在一定条件下形成的菌落其形态特征有一定的稳定性和专一性因而可以作为识别鉴定菌种的一个依据但也受某些因素的影响观察时应加以注意
三 、细菌染色法:
细菌染色
活菌染色
死菌染色
正染色
负染色
普通染色
特殊染色
简单染色法
复杂染色法
芽孢染色法
荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
编辑ppt
1
负染色
编辑ppt
2
简单染色
制备涂片标本→染色
涂片
干燥
固定
水洗、吸干