实时荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测HBV M结果的关系

垂蕉匿芏醚堂塑ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＥＮＧＤＥＭＥＤＩＣＡＩ。

ＣＯＬＬＥＧＥ恶性疾病。

ＣＡｌ９—９是‘种特异的肿瘤细胞终表达产物，其它细胞几乎不表达ＣＡｌ９＿９。

ＣＡｌ９—９可以被某些恶性细胞表达并分泌于体液中而被检测至ｑ，动态检测ＣＡｌ９＿９在判断疗效和转归方面也具有很好的应用价值。

有研究表明，检测腹水中ＣＡｌ９—９对渗断与鉴别诊断良、恶性腹水也有较好的帮鲥，‘１。

本研究结果提示，ＣＡｌ９－９对诊断与鉴别诊断良、恶性腹水具有高度的特异度，但敏感度偏低，且与ＣＥＡ近似。

ＣＡｌ２—５是应用于诊断卵巢肿瘤的标志物，曾有检测胸腹水中ＣＡｌ２＿５诊断恶性疾病的报道ｍ，但炎症时ＣＡ】２—５也可呈附｜生表达㈣。

本研究结果表明，ＣＡｌ２＿５在良、恶性腹水中均呈较高的附陆表达，且差别无显著意义。

因此提示，采用ＣＡｌ２—５诊断与鉴别诊断良、恶性腹水的效果不理想，价值不确定。

我们的研究结果表明，检测腹水中ＣＥＡｍＲＮＡ、ＣＥＡ和ＣＡｌ９９对诊断与鉴别诊断良、恶性腹水具有较高应用价值，ＣＥＡｍＲＮＡ和ＣＡｌ９９的价值优于ＣＥＡ，其中以ＣＥＡｍＲＮＡ的价值最高；检测腹水中ＣＡｌ２—５诊断与鉴别诊断良、恶性腹水的效果不理想，价值不确定；ＣＥＡｍＲＮＡ与ＣＡｌ９—９联检后，可以保持较高的特异度，且可进一步提高敏感度。

【参考文柏【１］孙军．腹水肿瘤标志物检测的研究进展【Ｊ］国外医学－内科学分册，２００ｌ，２８（６）：２５３—２５５．１２］刘素丽，王玲．良恶性腹水鉴别诊断的若于进展ｆＪ】，临床医学，２００２，２２（７）：５２—５３．【３］刘霞，薛承岩，李晓阳．检测ＣＥＡ和ＣＥＡｍＲＮＡ指标诊断恶性腹水［Ｊ］．中国肿瘤临床，２００２．２９（８）：５５７—５５９．【４】陈杰，张雪华，张行，等．ｃＥＡｍＲＮＡ、ｃＥＡ蛋白检测在良恶性胸腹水巾鉴别诊断的价值［Ｊ］．中国实验诊断学，２００３，７（２）：９７—９９．【５］陈晓泉，李立武，刘东林．腹水ＣＡｌ９—９测定对恶性腹水的诊断价值［Ｊ】．世界今日医学杂志，２００１，２（１）：６０．【６】解祥军，谢方瑜，李青华，等．联合检测腹水ＣＡ５０、ｃＡｌ９—９与ＣＥＡ对鉴别良恶性腹水的价值探讨［Ｊ］．山东医药，２００ｌ，４１（７）：４３—４４．【７】邓咏梅，刘玉兰，王智峰，等．肿瘤标志物对良恶性腹水鉴别诊断价值的探讨［ＪＪ．中国医师杂志，２００３，５（１）：１ｌ—１４．【８］刘人伟．现代实验诊断学检验与临床【Ｍ】．北京：化学工业出版社，２００２．３５３—３５４．收稿日期：２００７一０４—２４）实时荧光定量ＰｃＲ检测ＨＢＶＤＮＡ与ＥＬｌｓＡ检测ＨＢＶＭ结果的关系李红丽，范丽芳，刘敬敏（保定市第三中心医院检验科，河北保定０７１０５１）【摘要】目的：探讨实时荧光定量ＰｃＲ（ＦＱ—ＰｃＲ）检测ＨＢＶＤＮＡ与ＥＬＩｓＡ检测ＨＢＶＭ结果的关系。

方法：采用实时ＦＱ—ＰＣＲ和Ⅱ。

ＩＳＡ方法分别对２４０例乙肝患者进行ＨＢＶＤＮＡ定量测定和ＨＢＶＭ检测。

结果：２４０俩｜ＨＢｓＡｇ阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性率为７４．５８％。

Ｈｂ＆Ａｇ、ＨｂｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ和Ｈ捶Ａｇ、ＨｂｅＡｇ阳性组的Ｉ噩ｊＶＤＮＡ含量及ＨＢＶＤＮＡ阳性率均明显高于ＨｂｓＡｇ、ＨｂｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ和Ｈ１］ｓＡｇ、ＨＢｃＡｂ组（尸＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。

１２２仞Ｉ｝ＩＢｅＡｇ阳性的血清中９７．５４％的ＨＢＶＤＮＡ阳性；１１８馋ＩＨＢｅＡｇ阴性的血清中有５０－８５％ＨＢＶＤＮＡ阳性。

结论＋实时Ｆ蟹－ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ准确灵敏，是ＨＢＶ感染及复制的直接证据。

ＩＩＢＶＭ和ＨＢＶＤＮＡ的检测各有其独特的临床检测意义，在乙型肝炎的诊断治疗中均具有重要的临床价值。

【关键词】乙型肝炎；实时荧光定量ＰＣＲ；ＨＢＶＤＮＡ；ＨＢＶＭ【中图分类号】Ｒ５１２．６【文献标识码】Ａ【文章编号】Ｉ００４—６８７９（２００７）０３一０２５０＿０３砌ｍＡＴＩＯＮＳＩ珈ＰｓＢ日—ＶＥＥＮＤＥＴＥＣⅡＯＮＯＦＨＢＶＤＮＡＢＹＲ队Ｌ－即Ａ量ＥＦＬＵＯＲＥＳＣＥＮＴＱＵＡＮｌｌ－ＴＡＴⅣＥＰＣＲＡＮＤＤＥＴＥＣＴＩｏＮＯＦＨＢＶＭＢＹＥＵＳＡＬＩＨｏｎｇ—ｌｉ，ＦＡＮＬｉ—ｆａｎｇ，ＵＵＪｉⅡｇ－１１１ｉｎｒ弛ｅ如ｆ耐ｃｇｎｆ阳№ｏｊ驴ｌ衄ｆＤ，Ｂ“Ｄｄｆｎ吕ｍ６鲥丑Ⅱ碱怄Ｄ７ｍ５Ｊ，∞ｆｎ口ｊ・２５０・茎堡匡堂医生担ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＥＮＧＤＥＭＥＤＩＣＡＬＣＯＬＬＥＧＥ【ＡＢＳＴＲＡｃＴ】ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：１ｂｉｎｖｅｓｄｇａｔｅｔｈｅｒｅｌａｄｏｎｓｈｉｐｓｂｅｔｗｅｅｎＨＢＶＤＮＡｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌ—ｔｉｍｅｎｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｄｔａｔｊｖｅＰＣＲ（Ｆ０一ＰＣＲｌａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＢＶＭｂｙＥＬＩＳＡ．Ｍｅｔｌｌｏｄｓ：ＨＢＶＤＮＡａｎｄＨＢＶＭｉｎ２４０ＨＢｐａｔｉｅｎｔｓｂｌｏｏｄｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌ—ｔｉｍｅＦＱ．ＰＣＲａｎｄＥＬＩＳＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｔｏｔａｌＨＢＶＤＮＡ口ｏｓｉｔｉｖｅｍｔｉｏｉｎｓｅｍｍｗａｓ７４．５８％．ＴｈｅＨＢＶＤＮＡｃｏｍｅｍａｎｄｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｉｏｏｆＨＢｓＡ譬，ＨＢｅＡｇ，ＨｂｃＡｂａｎｄＨＢｓＡｇ，ＨｂｅＡｇｇｒｏｕｐｗｅｒｅａｌｌｓｉｇＩｌｉ６ｃａｎⅡｙｈｉｇｈｅｒ山ａ１１ｔｈａｔｏｆｔｌｌｅＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨｂｃＡｂａｎｄＨＢｓＡｇ，ＨｂｃＡｂｇｒｏｕｐ（尸＜００５，尸＜００１）．ＴｈｏＰｏｓｉｔｉｖｅｒａ６０ｏｆＨＢＶＤＮＡｗａｓ９７．５４％ｉｎｌ２２｝ＩＢｅＡｇｐｏｓｊｔｉｖｅｓｅｍｍ；ｗｈｉｌｅｔｌｌｅ口ｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｉｏｏｆＨＢＶＤＮＡｗａｓ５０８５％ｉｎ１１８ＨＢｅＡｇｎｅｇａｔｉｖｅｓｅｍｍ．ＣｏｎｃＩｕｓｉｏｎｓ：ＴｈｅｄｅＬｅｃｔｉｏｎｏｆＨＢＶＤＮＡｂｖｒｅａｌ．ｎｍｅＦＯ—ＰＣＲｉｓａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｓｅｎｓｉｎｖｅ，ｉｔｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｄｉｒｅｃｔｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒＨＢＶｉｎｆｃｃｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．ＴｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨＢＶＤＡＮａｎｄＩ｛ＢＶＭｈａｓ血ｅｉｒｏｗｎｕｎｉｑｕｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅａｎｄａⅡｈａｖｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｌｉｌｌｉｃａｌｖａｌｕｅｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｓａ１１ｄｔｈｅｒａｐｖｏｆＨＢＶｈｅｐ撕廿ｓ【ＫＥＹＷｏＲＤＳ】Ｓｅｍｍｈ印ａｄｔｉｓ；Ｒｅａｌ—ｎｍｅｎｕｏｒｅｓｃｅｎｔｑｕａｎｍａｄｖｅＰＣＲ；ＨＢＶＤＮＡ；ＨＢＶＭ己型肝炎是一种全球性传染性疾病，我国是乙肝病毒感染的高发地区，ＨＢｓＡｇ阳性率平均为ｌＯ．１Ｗ“。

ＥＬＩＳＡ法检测血清免疫学标志物（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ，简称ＨＢＶＭ）在临床上得到了广泛应用，并将ＨＢ＆Ａｇ和／或ＪＩｂｅＡｇ阳性作为ＨＢＶ感染的重要标志，其检测结果反应了人体对ＨＢＶ的免疫状态。

ＨＢＶＤＮＡ是直接反应ＨＢＶ复制的指标，可为判断乙肝的传染性及观察疗效提供准确依据。

实时荧光定量ＰＣＲ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｒ】ｔＱｕａｎ廿ｔａｎｖｅＰＣＲ，ＦＱ—ＰＣＲ）测定ＨＢＶＤＮＡ可对ＨＢＶＤＮＡ进行相对量化，可直接反映乙肝患者体内ＨＢＶ的复制及传染性。

本文对实时ＦＱ—ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ与ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶＭ结果的关系进行了探讨。

１资料与方法１１资料选择２００５年１０月一２００７年１月来我院就诊的ＨＢＶ感染者２４０例，其中男１８９例、女５ｌ例，年龄１６—７４岁，平均（３６．２±１２．３６）岁。

静脉采血，２小时内分离血清，一２０℃保存待测。

每人至少进行２次抗原抗体检查，一般进行一次ＨＢＶＤＮＡ含量测定，对于ＨｂｅＡｇ阳性而病毒量低、ＨｂｅＡｂ阴性而病毒量高者均进行复查，２次结果相差应在１个数量级以下。

所有病人诊断均符合２０００年９月西安第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议讨论修订的《全国病毒性肝炎防治方案》诊断标准ｆ２】。

１２方法１２１ＨＢＶＭ测定：ＨＢＶＭＥＬＩＳＡ试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，按说明操作，采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶＭ。

１２２ＨＢＶＤＮＡ含量测定：采用西安天隆公司的ＴＬ９９８ＡＲｅａｌ—ｔｉＩｎｅＰＣＲ仪、上海克隆生物高技术有限公司提供的乙肝病毒实时ＦＱ—ＰＣＲ试剂盒，按试剂盒说明检测ＨＢＶＤＮＡ，以ＨＢＶＤＮＡ含量大于ｌ×１０３ＩＵ／ｒｎｌ（１ＩＵ／ｍ】＝ｌ拷甄ｌ／ｎ１１）为阳性，阴性为零。

１．３统计方法ＨＢｖＤＮＡ含量的对数值取平均值，采用ｔ检验及ｘ２榆验，ＳＡＳ７．０统计软件进行统计处理。

２结果２４０例乙肝患者ＨＢＶＭ结果与ＨＢＶＤＮＡ定量结果的关系见附表。

附表乙肝患者ＨＢｖ瞄果与№ＶＤＮＡ定量结果的关系①ＨＢｓＡｇ（＋），③ＨＢｅＡｇ（＋），④ＨＢｅＡｂ（＋），⑤ＨＢｃＡｂ（＋）注：ｖｓ①＠⑤’Ｐ＜０．０ｌ｛ｖｓ①③ｏ尸＜０．０１，ｏ；Ｐ＜０．０５将Ｉ佃－ＶＭ的检测结果分为四组，分别统计其ＨＢＶＤＮＡ的含量及例数。

由附表可见：ＨｂｓＡｇ、ＨｂｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ和Ｈｂ＆Ａｇ、｝ＩｂｅＡｇ阳性组的ＨＢＶＤＮＡ含量及ＨＢＶＤＮＡ阳性率均明显高于ＨｂｓＡｇ、ＨｂｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ和ＨｂｓＡｇ、ＨＢｃＡｂ组（尸＜０．０５，Ｐ＜（）．０１）。

２４０例ＨＢｓＡｇ阳性血清中１７９例ＨＢＶＤＮＡ阳性，占７４．５８％（１７９／２４０）；１２２例ＨＢｅＡｇ阳性的血清中１１９例ＨＢＶＤＮＡ阳性，占９７．５４％（１１９／１２２）；在１１８例ＨＢｅＡｇ阴性的血清中有６０例ＨＢＶＤＮＡ阳性，占５０．８５％（６０／１１８）。

３讨论我国是乙型肝炎的高发区，判断乙肝病毒的复制和活动情况对于疾病的治疗和监测具有重要意义。

传统检测乙肝病毒的ＥＬＩＳＡ方法简便、经济，在乙肝病毒感染・２５１・垂堡堡堂暄堂塑ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＨＥＮＧＤＥＭＥＤＩＣＡＬＣＯＬＬＥＧＥ的不同时期，其ＨＢＶＭ有不同的结果。

ＨＢＶ在病人血清中有３种存在形式：球形颗粒、管形颗粒和完整的病毒颗粒（Ｄａｎｅ）。

Ｄａｎｅ颗植中含ＨＢＶＤＮＡ，而球形颗粒、管形颗粒不含ＨＢＶＤＮＡ。

不论何种形式的ＨＢＶ，只要其达到一定的浓度即可被ＥＬＩＳＡ检出，而只有当Ｄ锄ｅ颗粒存在时，实时ＦＱ—ＰＣＲ才能出现阳性结果【３】。

实时ＦＱ—ＰＣＲ方法是采用Ｔａｑｍａｎ荧光探针定量技术和完全封闭的检测方法，与传统聚合酶链式反应方法相比有三大优势：精确定量、假阳性低、减少操作人员和环境队标本的污染ｆ４】。

以往的经验认为，血清ＨＢｅＡｇ阳性是乙肝病毒复制活跃、传染性强的标志，ＨＢｅＡｇ转阴或ＨＢｅＡｂ的出现，表示乙肝病毒感染的缓解或乙肝病毒的清除。

在本组资料中，ＨＢｅＡｇ阳性患者血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率和含量明显高于ＨＢｅＡｇ阴性患者（Ｐ＜Ｏ．０５，Ｐ＜Ｏ．叭）；但ＨＢｅＡｇ阴性而ＨＢｅＡｂ阳性或阴性患者的血清中也有一定ＨＢＶＤＮＡ的存在，这可能与乙肝病毒发生前Ｃ区基因突变或机体发生特异性的免疫耐受有关ｂｊ。