实验七 酵母菌的形态观察和死活细胞鉴别

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

南京林业大学实验报告实验四酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（一）实验目的1、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式；2、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

（二）实验原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物。

无性繁殖主要是出芽生殖。

本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色。

三）实验器材1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）培养约2d的麦芽汁斜面培养物；2、染色液和试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液；3、器材：载玻片、盖玻片、酒精灯、擦镜纸、显微镜等。

(四）实验方法（美蓝浸片）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均匀；用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上；将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。

（五）注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察；2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。

酵母菌死活细胞区别图（10×40倍下观察）死细胞（呈蓝色或淡蓝色）活细胞（无色）（六）心得体会：在制片的时候，先将盖玻片一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，并且要避免产生气泡。

在用美篮染色的时候，注意染色液和菌液不宜过多或过少，并且应该尽量等量而且要混匀。

酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

1。

酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。

美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。

同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。

死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。

子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。

在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。

酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。

麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。

孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。

因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。

在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。

【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。

2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。

3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。

4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。

【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。