渗透压计算
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渗透压:渗透压与溶液中可一元解离的离子浓度有关。如:0.1mol/LNaOH溶液可一元解离为0.1mol/L Na+和0.1mol/L OH-。他的渗透压就是0.2 Osm/L=2mOsm/L。
下面我将外文文献中膜提取液与本实验膜提取液以及戴天
明论文中血影蛋白提取液的渗透压进行比较如下:
1972年Separation and Some Properties of the Major Proteins of the Human Erythrocyte Membrane
0.155M-NaH2PO4 (iso-osmotic phosphate buffer,pH7.4) The cells were lysed into 37 litres of a stirred solution of iso osmotic phosphate buffer, pH7.4, diluted with 19.5vol. of deionized water (diluted phosphate buffer, pH7.4) maintained near 0°C with a cooling coil connected to a circulating refrigeration bath and a solution of
0.3ml of di-isopropyl phosphorofluoridate in 3ml of propanol was immediately added slowly to the lysate.
等渗缓冲液:0.155M-NaH2PO4,渗透压为0.155 M×2=0.155mol/L×2=310 mOsm/L(注:1 M NaH2PO4可一元解离为1 M Na+和M H2PO4-,1mol/L NaH2PO4的渗透压为2 Osm/L=2000 mOsm/L。等渗液的渗透压在280-320 mOsm/L范围内)低渗缓冲液:将等渗缓冲液用19.5倍体积的去离子水稀释而成。也就是稀释了20.5倍,渗透压上除以20.5即可。
渗透压为310 mOsm/L÷20.5=15 mOsm/L.
低渗液加入少量氟磷酸异丙酯<胆碱酯酶抑制药>和丙醇
本实验中等渗液
rPBS,PH=7.4(KCL137mM,NaCL2.7mM,Na2HPO4 8.1mM,KH2PO4 1.5
mM) 渗透压:137 mM×2+ 2.7 mM ×2+8.1mM×3+ 1.5 mM×2=306.7 mOsm/L PBS,PH=7.4 (NaCL137mM,KCL2.7mM,Na2HPO4 8.1mM,KH2PO4 1.5
mM,)渗透压同上计算为306.7 mOsm/L
rPBS,PH=5.6 (KCL137mM,NaCL2.7mM,Na2HPO4 0.5mM,KH2PO4 9.5mM)
渗透压为137 mM×2+ 2.7 mM ×2+0.5mM×3+ 9.5 mM×2=299.9 mOsm/L PBS,PH=5.6 (NaCL137mM,KCL2.7mM,Na2HPO4 0.5mM,KH2PO4 9.5mM,)配制1L:渗透压同上计算为299.9 mOsm/L
低渗液由等渗液稀释30倍而成,
PH=7.4的渗透压为306.7 mOsm/L /15=20.4 mOsm/L
PH=5.6的渗透压为299.9mOsm/L /15=20 mOsm/L
戴天明论文中
低渗液为0.1mmol/L Na2HPO4 12H2O,加入0.1mmol/L EDTA和0.1mmol/L PMSF。
渗透压为0.1mmol/L×3=0.3 mOsm/L。
文献中低渗透压为15 mOsm/L;
我的20 mOsm/L,曾经查到一篇文献提到PH=5.8-5.9,20 mOsm/L的磷酸缓冲液提取到的膜上最大程度的结合血红蛋白;
戴天明的0.3mOsm/L。
推断:戴天明采用的是低离子强度的低渗溶液,所以能提取出Hb和Sp,而你采用的是提取gohst,所以用的提取液虽然也是低渗,但由于要获得完整的膜骨架,所以不能采用离子强度太低的溶液,否则会将Sp组成的网络会破坏,因为Sp 网络除了在与带3、血型糖蛋白等跨膜蛋白以及与带4.1和肌动蛋白结合部位既存在静电作用和疏水作用,在Sp网络的其它部分主要以疏水作用维系,所以采用低离子的低渗溶液不仅能破细胞,而且能将Sp抽提出来同时不涉及对膜蛋白的影响,或者说提取液的经离心后的可溶相中只是Hb和Sp