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实验二十日本血吸虫病实验室诊断技术日本血吸虫病是一种人畜共患的寄生虫病，被世界卫生组织列为全球重点防治疾病之一。
它严重威胁着疫区人和动物的健康和生命安全，给畜牧业带来巨大的经济损失。
在我国，本病严重流行于长江流域及其以南13个省、市、自治区。
家畜如牛、羊、猪感染日本血吸虫后，不仅祸害自身，更重要的是作为人体血吸虫病的主要保虫宿主，为传播本病起了重要作用。
大量调查研究表明，家畜是血吸虫病流行最主要的传染源和污染源。
控制传染源是综合防治疫病、扑灭疫情的重要环节，而控制传染源的前提是确诊传染源。
因此，应用灵敏、快速、经济的诊断方法确诊传染源，己成为日本血吸虫病流行病学调查、疫情监测、以及控制其流行和扑灭疫情必需解决的问题，这样才能做到有的放矢，减少在人力、物力和财力等方面的浪费。
当前对于日本血吸虫病的诊断方法已有大量的报道，根据本科教学的需要，下面介绍几种本科阶段应该掌握或者需要了解的实验室常用的日本血吸虫病诊断方法。
一、实验目的及要求1.熟悉日本血吸虫卵和毛蚴的形态特征。
2.掌握血吸虫病虫卵检查方法。
3.掌握血吸虫病毛蚴孵化方法。
4.了解血吸虫病的几种常见的血清学（免疫学）诊断方法。
二、实验器材(一)病原学诊断1．直接涂片法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：50%甘油水溶液或普通水；（3）器材：载玻片、滴管、盖玻片、显微镜。
2．沉淀法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛、滴管、金属环、载玻片、显微镜（普通离心机）。
3．浮集法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂:普通水、饱和食盐水、33％的硫酸锌溶液；（3）器材:专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（60目/英寸）、滴管、金属环、载玻片、显微镜。
4.毛蚴孵化法。
（1）检验材料：新鲜动物粪便；（2）试剂：pH约6.8-7.2，温度约20-30℃的灭菌自来水(脱氯处理)；（3）器械：专用乳白色塑料粪杯、竹筷、铜筛（40目/英寸）、尼龙筛网兜（260目/英寸）、塑料袋、长颈烧瓶（或三角瓶）（500ml）、脱脂棉、天平、温箱。
日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定赵前峰;陈红霞;任翠平;刘淼;沈际佳【摘要】To clone and express Schistosoma japonicum Nanos-like protein gene ( SjNanos ) and prepare its specific polyclonal antibody. Methods Amplified SjNanos gene by PCR from Schistosoma cDNA which was subcloned into pET28a( + ) vector,then recombinant proteins were expressed in the presence of IPTG. The fusion protein was purified under denaturing conditions to immunize the rabbits with the polyacrylamide gel particles containing the recombinant protein for polyclonal antibody preparation. The sera were detected for antibody titer by ELISA assay and specificity by Western blot. Results The gene as a new gene of Schistosoma japonicum, whose coding sequence of the open reading frame( ORF ) is 672 bp, encodes 223 amino acids whose theoretical molecula weight is 25 ku; semi-quantitative RT-PCR analysis showed that the gene in the different stages of Schistosoma japonicum has different expressions; successfully constructed the recombinant expression plasmid pET28a( + )-S; Nanos, and obtained expression protein in E. Coli Western blot analysis showed that the recombinant protein has good immunogenicity. Conclusion The Nanos protein of Schistosoma japonicum encoding the full length ORF was successfully expressed and its specificpoly antibody was prepared which would be useful for the further studies.%目的获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA 序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用 ELISA 和Western blot法对表达蛋白进行初步鉴定.结果该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的ORF为672 bp,编码 223个氨基酸,理论相对分子量为25 ku;半定量RT-PCR技术分析显示该基因在日本血吸虫的虫卵及各期虫体有不同的表达量;成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-SjNanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western blot分析表明该重组蛋白具有较好的免疫原性.结论获得日本血吸虫Nanos 蛋白编码基因的全长ORF,在大肠杆菌中克隆表达了日本血吸虫Nanos样基因,并制备了特异性多克隆抗体,为进一步研究其在日本血吸虫生殖生物学中的功能奠定了基础.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2011(046)011【总页数】5页(P1109-1113)【关键词】日本血吸虫;Nanos样蛋白;原核表达【作者】赵前峰;陈红霞;任翠平;刘淼;沈际佳【作者单位】安徽医科大学病原生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学病原生物学教研室,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R383.24血吸虫病是由寄生于人体的血吸虫引起的以虫卵肉芽肿和肝纤维化为主要特征的人兽共患寄生虫病，呈世界性分布［1］。
日本血吸虫卵的分离及活性鉴定摘要】目的：为血吸虫病预防和控制中制造抗原、研究血吸虫病致病机理和相关药物研发创造良好的基础，研究取得较高生物活性的日本血吸虫卵的分离方法与活性鉴定措施。
方法：将被血吸虫感染的肝脏组织悬液进行分级过滤，然后将滤液离心，去除碎片，再以325目分样筛过滤分离的虫卵，收集筛上的虫卵，将收集到的虫卵以密度为1.070的Percoll分离液进行梯度离心，吸取Percoll液下层的纯化虫卵，用显微镜观察其纯度，用丫啶橙染色检查分离虫卵的死活，用环卵沉淀试验检查分离虫卵的分泌活性。
结果：每块肝脏均能获得0.6克左右的虫卵，且分离出的虫卵纯度较高，环卵沉淀试验结果和丫啶橙染色结果均显示分离出的活虫卵比例较高、生物活性较好。
结论：该日本血吸虫卵分离法用时较短，操作简且效果较好，所分离出的虫卵完全能够满足研究需要。
【关键词】日本血吸虫卵分离活性鉴定【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2013）03-0300-01血吸虫卵是血吸虫病传播的重要媒介，因此，控制传染源是从源头上治疗血吸虫病的根本途径，而无论是相关实验研究还是现场对策制定，都需要分离高浓度和生物活性的完整血吸虫卵。
当前血吸虫卵分离方式较多，但绝大多数方式操作都十分繁琐，且血吸虫卵的有效分离率偏低，虫卵的纯度、成熟卵比率与分泌活性均比较低。
本次研究利用尾蚴是血吸虫生活史中感染人体和保虫宿主的重要阶段，用被尾蚴感染了的肝脏组织分离虫卵，在总结以前办法的基础上对日本血吸虫卵的分离方式做了一定的简化与改善，取得了较为理想的效果，现报告如下。
1 材料与方法1.1 一般材料倒置荧光显微镜和光学显微镜（日本奥林巴斯公司生产），多种口径的样品筛（河南安平筛网厂生产）、组织捣碎机（上海标本模型厂生产），吖啶橙（美国Amersco公司生产）、Percoll细胞分离液（美国Pharmacia公司生产）、NaCl，尾蚴感染钉螺。
日本血吸虫不同时期虫体蛋白质的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电
泳分析
吴涤;高兴政
【期刊名称】《中国寄生虫病防治杂志》
【年(卷),期】1998(11)1
【摘要】用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，比较日本血吸虫不
同发育时期虫体的蛋白质组成。
尾蚴、雄只和虫卵各分离出２６、５１、５６和６０条蛋白带，其主带也不相同。
雌、雄虫比较有９处蛋白带呈明显差异．日本血吸虫蛋白质组成有期和性的特异性，尾蚴、雄虫、雄虫和虫卵不仅有各自的特异蛋白，而且还有大量相同蛋白带。
【总页数】4页(P51-54)
【作者】吴涤;高兴政
【作者单位】北京医科大学寄生虫学教研室;北京医科大学寄生虫学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R383.24
【相关文献】
1.五种啮齿动物核型和血清蛋白质的SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 [J], 王守仁;贾凤兰
2.不同环境丰富度设置下猪血清蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析研究 [J], 席赫岐;史秀丽
3.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析五种种子类中药炒制前后蛋白质成分的变化 [J], 唐雪梅;魏琪;陈璐;国锦琳
4.中国大陆日本血吸虫品系的研究 X.成虫蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析[J], 薛海筹;何毅勋;诸陈文;张永红;裘丽姝
5.日本血吸虫Wnt受体蛋白Fz5编码基因的克隆及其在不同发育时期虫体的表达差异 [J], 韩琳;苑纯秀;冯新港
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日本血吸虫微管蛋白基因的分离和cDNA序列分析刘传爱;肖建华;梁瑜;廖力;张愉快;曾桥【期刊名称】《实用预防医学》【年(卷),期】2005(12)1【摘要】目的分离和鉴定日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)新基因 ,为防治日本血吸虫病提供药物靶标或候选疫苗。
方法构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行引物步移法测序 ,获取其全长cDNA序列 ;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白质二级结构的初步预测。
结果获得了 1个日本血吸虫新基因—微管蛋白基因 ,全长14 3 9bp ,编码 44 3个氨基酸 ,与肝片形吸虫微管蛋白基因具有 79%的同源性。
编码蛋白的理论分子量为 7.2 198KDa ,等电点为 9.12 ;抗原表位可能位于cDNA序列3 73～ 3 96处。
结论获得了日本血吸虫微管蛋白基因的全长cDNA序列 ,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础。
【总页数】3页(P20-22)【关键词】日本血吸虫;微管蛋白;序列分析;表达序列标签;引物步移法【作者】刘传爱;肖建华;梁瑜;廖力;张愉快;曾桥【作者单位】南华大学病原生物学实验中心【正文语种】中文【中图分类】R383.24【相关文献】1.日本血吸虫精氨酸编码基因CDNA的分离和序列分析 [J], 吴忠道;郑亦男;徐劲;余新炳2.小地老虎β-微管蛋白基因cDNA序列的克隆、序列分析和表达检测 [J], 闫硕;张璟;张青文;王琼;熊晓菲;刘小侠3.二化螟β1微管蛋白基因cDNA序列的克隆与序列分析 [J], 樊东;秦松柏;朴冬花;许艳丽4.黏虫体内两种微管蛋白基因cDNA序列的克隆与序列分析 [J], 樊东;秦松柏;朴冬花;许艳丽5.镰形扇头蜱微管蛋白基因的分离和cDNA序列分析 [J], 石磊;李庄;周勇志;周金林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
日本血吸虫(大陆株)成虫低密度脂蛋白受体初探王 亮 詹希美 李卓雅 王 轶(中山医科大学寄生虫学教研室,广州510089)摘 要 利用非离子去污剂Triton X-100抽提日本血吸虫成虫表膜蛋白,反相高效液相色谱(HPLC )分离纯化后,收集各主要蛋白峰,以125I 标记的人血浆低密度脂蛋白(LDL )作为放射性配基,通过放射性自显影初步鉴定表明日本血吸虫成虫表膜具有可与人血浆LDL结合的受体蛋白。
结果显示,低密度脂蛋白受体保留时间约为11min 时,经SDS-P AGE 电泳鉴定其分子量约60000,此蛋白能特异结合碘标记人血浆LDL 。
本实验为了解血吸虫在宿主体内获得脂质的途径及进一步研制新的抗血吸虫药物打下基础。
关键词 日本血吸虫,低密度脂蛋白受体,高效液相色谱(HPLC)分类号 R 383.24日本血吸虫成虫不能自行合成长链脂肪酸及胆固醇类物质,而是直接从宿主体内获取[1]。
脂类物质不仅是构成血吸虫表膜的重要成分,也是合成血吸虫生长发育所需物质的基本成分,因此,了解血吸虫在宿主体内获得脂质的机制是十分重要的。
已表明,血吸虫主要通过虫体表膜受体蛋白结合宿主血浆脂蛋白而得到其所需脂类的物质。
本研究旨在探讨日本血吸虫成虫表膜存在的低密度脂蛋白受体,对其进行分离,纯化及鉴定,从而为今后更深入地研究打下基础。
收稿日期61 材料与方法1.1 日本血吸虫成虫获取在实验室内,温度为28℃,去氯水,光照条件下逸出尾蚴,经人工感染家兔,每只家兔感染尾虫幼约1000条。
第42天处死家兔,自肠系膜下静脉取出血吸虫成虫,用预冷的PBS 反复冲洗,分装于Eppendorf 管中,即置于超低温冰箱-80℃保存备用。
1.2 人血浆低密度脂蛋白的分离一次性密度梯度超速离心分离人血浆LDL [2]。
将100mL 新鲜非冰冻血浆中加入烘干的溴化钾37.113g,调血浆密度为1.400,配密度为1.006溶液(NaCl 85%,EDT A 5%,pH 7.6)。
