第三代试管Fish技术与A-CGH技术的区别

基因定位和基因测序技术的研究进展基因定位和基因测序技术在生物医学领域的应用已经逐渐成熟。

基因定位技术是一种寻找基因在染色体上具体位置的方法，而基因测序则是对基因序列的测定。

这两种技术的结合可以大大促进疾病的早期诊断和治疗。

现在，我们来了解一下这两种技术的研究进展。

基因定位技术随着基因检测技术的发展，越来越多的基因与遗传病之间的关联被发现。

因此，基因定位技术对于遗传疾病的诊断和治疗非常重要。

常用的基因定位技术包括Fluorescence In Situ Hybridization（FISH）、Comparative Genomic Hybridization （CGH）、Microarray和Polymerase Chain Reaction（PCR）等。

目前，最为常见的基因定位技术是微阵列技术。

这种技术可以同时检测成百上千种基因的表达水平，从而帮助研究者快速了解基因表达的变化，识别潜在疾病的生物标志物。

并且，该技术还可以解析基因的互作网络，了解基因在细胞信号通路中的功能。

不过，微阵列技术的局限性也显而易见，它只能对固定的几千种基因进行监测，不能检测未知基因的表达情况。

为了克服这种局限性，新一代测序技术的应用得以迅速发展。

基因测序技术基因测序是对DNA、RNA或者蛋白质等生物分子进行测定的技术。

如今，第二代测序技术已经获得了突破性的进展，使得大规模基因测序成为了可行之举。

第二代测序技术主要应用于癌症基因的筛查和诊断，因为这种技术可以精确的检测个体基因组中与癌症相关的变异。

在应用方面，肿瘤标本的测序通常用于研究癌症变异、研究肿瘤诊断和预后，还可以为肿瘤学家提供开发新型治疗方法的突破口。

此外，基因测序技术还可以用于染色体异常检测和生殖健康等领域。

对于染色体异常检测，研究者可以检测新生儿染色体疾病或者染色体异常导致的婴儿畸形。

而在生殖健康领域，夫妻之间的基因差异可以引起一系列重大的生殖难题，例如习惯性流产、囊肿性纤维化等。

比较基因组杂交（comparative genomic hybridization, CGH）技术是在染色体荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization, FISH）技术的基础上发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术。

其基本原理是：分别用不同的荧光标记体系标记来自待检组织和正常组织的全基因组DNA （分别称为测试DNA和参照DNA），各取等量标记产物制备成混合探针，与足够量的同一种属来源的Cot－I DNA先进行预杂交以封闭基因组上的重复序列，然后与正常中期分裂相进行染色体原位抑制杂交。

测试DNA探针和参照DNA探针竞争性地与染色体上的靶序列杂交，经计算机软件分析, 将染色体上每一象素上测试DNA/参照DNA荧光强度的差异进行换算，以研究测试DNA拷贝数的增多或缺失。

该技术不需染色体培养，一次杂交实验即可在整条染色体或染色体区带水平对不同基因组间DNA序列拷贝数的差异进行检测并定位。

因此，一经报道，很快广泛应用于基因不平衡性的检测[1, 2]。

随着生命科学与自然科学的发展以及学科交叉的不断渗入，各种技术之间的联合应用成为趋势。

目前，一种将基因芯片和CGH相结合的新技术——微阵列－比较基因组杂交（microarray－CGH，又称arrayCGH）技术日趋成熟，并以其独特的优势而备受瞩目。

1 arrayCGH的特点基因芯片又称DNA探针微阵列（microarray），它通过在一微小的基片表面固定大量的基因探针，待检测样品标记后与已固定的核苷酸序列进行杂交，根据检测信号的有无和强弱，确定样品中该基因或核苷酸序列的含量。

ArrayCGH实际上就是用微阵列取代传统CGH的中期分裂相，使荧光标记的测试DNA探针和参照DNA探针竞争性地与微阵列上的短片段靶序列杂交。

根据被检组织基因组的大小和实验要求，微阵列上的核苷酸靶序列可来源于不同的基因组文库，如YAC （0.2-2Mb）,BAC(300kb左右)，P1(~70-100kb), PAC(~130-150kb)和cosmid(~30-45kb)等文库。

优点：特异性强；敏感性高；定位准确、形态与功能相 结合。
缺点：准确率差；操作复杂；人为主关影响大；均质性 差；样本单一；蛋白水平。
临床常用检测技术
IHC
免疫组化（IHC） 样本类型 灵敏性，特异性 准确性 重复性 理论基础 DNA扩增突变 定位作用 mRNA表达 蛋白质表达 操作复杂程度 实验要求 均质性 组织切片，细胞爬片等 较高 高(50%~75%) 较高 免疫反应 —— 原位 —— 定性，相对定量 复杂 高 否 高 高(95%以上) 高 链式聚合酶反应 能(突变定量) —— 相对/绝对定量 —— 简便 严格指控，无污染 是 临床常用检测技术 RT-PCR 所有样本
•
•
临床常用检测技术
其他
液相芯片技术
临床常用检测技术
其它
变性高效液相色谱（DHPLC）
利用液相色谱技术（HPLC），既在高压闭合液相流路中，将DNA样品自动注 入并在缓冲液携带下流过专利的DNA分离柱，通过缓冲液的不同梯度变化，
在不同分离柱温度条件下实现对DNA不同的分析；由紫外检测或荧光检测被
FISH
操作流程
红色探针：与17号染色体Her2基因结合 绿色探针：与17号染色体中心粒结合 临床常用检测技术
FISH
结果判读
红色探针：与17号染色体Her2基因结合 绿色探针：与17号染色体中心粒结合
临床常用检测技术
FISH
优点
• 准确性高，重复性好
• 与临床疗效相关性好 • 冰冻和固定的标本均可
分离的DNA样品。
临床常用检测技术
谢 谢！
15%~20% 高
不需要 —— 定性 —— ~1000bp 复杂 是 科研，临床
5~10% 高

基本状况
基因芯片(Chromosomal Microarray Analysis ，CMA)
1998 年底 美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科 学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。目前已应用于生物 科学众多的领域之中。 在实际应用方面：疾病诊断和治疗、 药物筛选、农作物的优育优选、 司法鉴定、食品卫生监督、环境检测、国防、航天等许多领域。
微珠无序组装，每个光纤代表一个
微珠
基因芯片基本原理 ⑵.原位合成法（光刻技术）
在合成碱基单体5‘羟基末端连接一 个光敏保护基 首先使支持物羟基化，并采用光敏 保护起来 每次选取适当蔽光膜使需要聚合的 部位透光，受光部位脱羟基保护而活 化 每次通过控制蔽光膜的图案（透光 或不透光）决定哪些区域应被活化， 以及所用单体的种类和反应次序，就
SKY
CMA
目录
FISH、SKY和 CMA简介 基因芯片(CMA)临床应用
基本状况
基因芯片的优点
最大的优点是高通量，其次是解决了目前遗传物质盲区的 检测（基因组病），是细胞遗传向分子遗传过度的技术，检测 精确度高，可以发现未知片段。
基因芯片基本原理
临床上最常用基因芯片技术
⑴.SNP array：以检测SNP位点为主的微整列基因芯片技术
① ② ③ ④
CMA产前诊断临床适应症
产前超声或磁共振（MRI）检查提示胎儿结构异常：推荐CMA技术替代染色体核
型分析作为一线检测方法
胎儿核型为遗传自亲代或为新发平衡重组且表型异常：推荐CMA进一步检测 胎儿核型无法明确诊断的染色体：推荐CMA技术进一步检测。这种情况包括衍 生染色体、标记染色体等，通过CMA检测可帮助明确异常片段的来源和性质 无明确超声结构异常但接受产前诊断的胎儿样本：CMA和核型分析可任选其一 这种情况包括孕妇高龄、血清学筛查阳性、孕妇焦虑、不良生育史、染色体异 常家族史、超声软指标阳性等

目前国内做试管婴儿的医院很多，只是针对不孕不育的一部份人去做的，而那些遗传疾病患者，例如：白血病，地中海贫血，染色体异常等等，一系列需要做基因鉴定病症。为不孕不育家庭带来“优生”的福音。
泰国第三代试管婴儿就是针对基因筛选的病症去做，a－CGH是一项晶片式全基因体定量分析技术，可以提供较传统产前检测更高解析度的分析，一张晶片便能精确筛检超过200种以上的遗传疾病，它高达2,500多组的探针，快速扫瞄人体46条染色体，短时间内可解读多种染色体的状况。利用a－CGH产前症，例如：发育迟缓、生长停滞、智能障碍、脸部异常等先天性发育异常之病症，可侦测127种遗传疾病率达99%。泰国A-CGH的技术可以筛查200多种基因病症，这一技术帮助一部份人群怀孕健康的宝宝。从而做到优生优育。
现在都讲究优生优育，但不是每个人都可以，对于那些本身不能怀孕或者身体有遗传疾病者，就不可以正常怀孕一个小孩，更不用谈优生优育了，面对这一群体，医学上做出了一部份贡献，在医学不继进步中，目前试管婴儿已经可以做到，帮助那些不孕不育患者成功怀上小孩，还帮助那些有家族遗传病史的人，先天性疾病孕育下一代健康的小孩。

荧光原位杂交法 pcr-荧光对比荧光原位杂交法（FISH）和PCR-荧光对比（PCR-FLP）都是分子生物学中常用的技术，可以用于基因定位、染色体结构和功能等方面的研究。

本文将分别介绍这两种技术的基本原理、应用场景和优缺点。

一、荧光原位杂交法1.基本原理荧光原位杂交法是一种基于DNA序列互补碱基配对原理的技术，利用荧光探针对染色体上的特定区域进行标记，以便于观察和分析。

该技术主要包括以下几个步骤：（1）制备探针：将已知序列的DNA片段与荧光标记分子连接，生成荧光标记的DNA探针。

（2）加热解离：将待检样品中的DNA加热，使其解离成两条单链DNA。

（4）荧光显色：利用显微镜观察染色体上的荧光标记，并确定标记位置及数目。

2.应用场景荧光原位杂交法可用于以下方面的研究：（1）核型分析：检测染色体数目、大小和形态等信息。

（2）染色体重排：观察染色体间的换位、倒位等结构改变。

（3）基因定位：确定特定基因在染色体上的位置。

（4）肿瘤诊断：检测肿瘤细胞染色体的数目和结构变化。

3.优缺点（1）高灵敏度：能够检测到细胞核中的单个分子。

（2）高特异性：探针与目标序列可以实现完全互补。

（3）数据可视化：能够直观地呈现染色体结构及荧光信号大小。

而其缺点主要包括：（1）长时间实验：需要多个步骤和时间，且荧光信号非常容易被淬灭。

（2）需要DNA标记：需要荧光标记作为探针，费用较高。

二、PCR-荧光对比PCR-荧光对比（PCR-FLP）是一种应用荧光标记测量PCR产物数量的技术，能够在短时间内准确、可靠地检测和测量DNA的含量和变异。

具体操作过程如下：（1）样品制备：将待测DNA标记荧光标记，与另一非标记探针PCR反应。

（2）荧光PCR扩增：通过PCR反应增生DNA分子。

（3）荧光观察：利用荧光标记观察PCR产物。

（1）定量PCR：准确检测PCR反应中模板DNA的数目。

（2）基因表达：测量基因在不同实验条件下的表达水平。

（3）点突变检测：定性判断DNA中的单个碱基是否发生变异。

荧光原位杂交（FISH）技术在产前诊断中的应用摘要】目的探讨FISH技术在产前诊断中的应用前景。

方法应用国产探针(CSP18 /CSPX/CSPY探针组和 GLP13 /G LP21探针组 ) 对 50例羊水中的细胞进行检测, 从而判断胎儿13、18、21、X和Y染色体的数目有无异常，同时与50例羊水染色体培养结果进行对比。

结果严格按照实验流程操作, 50例羊水的FISH均检测成功，与胎儿羊水染色体核型分析的结果相比较, 准确率为100%。

但部分F I S H检测结果中出现少量带有异常杂交信号的核。

结论 F I S H技术相比羊水培养具有时间周期短，准确率高等特点，具有重要的应用价值，但并不能完全取代羊水培养在产前诊断中的作用。

【关键词】荧光原位杂交产前诊断羊水【Abstract】 Objective To study application of fluorescence in situ hybridization(FISH) technology in prenataldiagnosis. Methods Applying national probe (probe group CSP18 /CSPX/CSPY and probegroup GLP13 /GLP21)to detect fifty amniotic fluid cells, then deciding whether the numbers of chromosomal 13,18,21,X,Y are normal,and comparing with consequence of fifty amniotic fluid cell culture. Results According to experiment flow-sheetstrictly, fift FISH detects are successful, and its accuracy rate is 100% compared with consequence of fifty amnioticfluid chromosomal karyotype analysis. But part of FISH detects appeared few hybridization signal. ConclusionFISH technology has a few features including short time cycle and high accuracy rate compared with amniotic fluidculture. Although FISH has important application value, it cant’t totally displace effect of mniotic fluid culture inprenatal diagnosis.【Key words】fluorescence in situ hybridization prenatal diagnosis amniotic fluid 我国计划生育政策执行30多年来，人口数量得到了显著控制，目前的计生工作重点已经从单纯的控制人口数量转变到提高人口素质。

技术优势
➢ 重复性好、稳定；
➢ 高灵敏性及特异性；
➢ 可用于间期细胞，不需要细胞培养；
目前，FISH已成为一种常见检测手段，国外广泛地用 于产前、产后遗传病诊断及血液肿瘤、实体瘤等方面的
检测。在欧美发达国家应用FISH产前诊断检测染色体 异常占30-40%。
技术原理与方法
产前诊断检测非整倍体需要21、13、 18、X和Y染色体上的五种探针。其中21 号和13号染色体检测探针列为一组，为 位点特异探针，分别用Rhodamine (红 色和FITC (绿色)标记。18号、X和Y染色 体探针列为一组，为染色体着丝粒特异性 重复序列探针,分别用DEAC(蓝色) FITC (绿色)和Rhodamine (红色)标记。
➢ 试剂及设备成本高。
aCGH快速检测间期细胞全基 因组拷贝数
Байду номын сангаас
21世纪细胞遗传学的革命 – aCGH
简称：aCGH
英文名：array-comparative genomic hybridization； Microarray based Comparative Genomic Hybridization ）
SpectralWare® software provides a visual representation of the data generated from the microarray
Targeted aCGH
对已知病症提供清晰的信号
避免实验室反复用FISH 方法来 进行实验诊断
结果易懂 将错失不覆盖区域的基因缺失
因。 生育过先天性心脏病患儿父母进行检测，
可以预测下一胎儿患先心病的可能性。
光谱核型分析技术检测染色体异常

G-显带、FISH、CGH在产前诊断中的应用程序及意义的开题报告一、研究背景产前诊断是指在胎儿出生前通过各种检查手段，诊断胎儿可能存在的问题或异常情况，以为产前基因诊断提供依据，保障胎儿的健康和安全。

其中，基因诊断技术是产前诊断的核心，其作为高质量的个体化医疗模式的关键工具，成为了近年来各国医学科学家所研究的重点之一。

G-显带(G-banding)、FISH(Fluorescence in situ hybridization)、CGH(Comparative genomic hybridization)技术是现代医学中常用的基因检测手段，尤其在产前诊断领域中的应用广泛。

因此，本研究将以这三种方法为主线，探讨其在产前诊断中的应用程序及意义。

二、研究目的本研究的目的是通过对G-显带、FISH、CGH这三种检测手段的详细介绍，探讨它们在产前诊断中的应用程序及意义。

通过理论论证和案例分析，探寻这三者的应用优势和局限性，对其未来的发展趋势进行展望。

三、研究内容1. G-显带技术在产前诊断中的应用程序及意义1.1 G-显带技术原理1.2 G-显带技术在产前诊断中的应用程序1.3 G-显带技术在产前诊断中的意义2. FISH技术在产前诊断中的应用程序及意义2.1 FISH技术原理2.2 FISH技术在产前诊断中的应用程序2.3 FISH技术在产前诊断中的意义3. CGH技术在产前诊断中的应用程序及意义3.1 CGH原理3.2 CGH技术在产前诊断中的应用程序3.3 CGH技术在产前诊断中的意义4.案例分析4.1 G-显带技术在染色体畸变的检测中的应用案例4.2 FISH技术在先天性心脏病检测中的应用案例4.3 CGH技术在遗传性失聪的检测中的应用案例5.技术比较分析5.1 G-显带技术、FISH技术和CGH技术的比较5.2 应用场景下技术选择的建议5.3 未来技术发展趋势分析四、预期结果通过本研究，预计可以深入了解G-显带、FISH、CGH这三种基因检测技术在产前诊断中的应用程序及意义，明确其应用优势和局限性，对未来的发展趋势进行预测，从而对产前诊断的临床实践提供理论参考，并对患者检测及开展基因检测领域的研究工作具有一定的参考价值。

荧光原位杂交技术（FISH）技术在疾病分型诊断中的应用生命科学的发展，生物技术的进步使我们对疾病本质的认识不断地深入，也使我们拥有更多新的治疗方法和药物应对疾病的威胁。

如何准确有效地利用这些新的治疗方法和药物治愈疾病是我们迫切需要研究的内容。

如何对疾病进行正确的分型和诊断却是上述工作的基础。

只有全面地把握病情，并在此基础上进行准确的判断和分析，才能为病患制定及时有效的治疗方案。

因此我们要求疾病的诊断工作能提供更为准确和及时的结果。

而古老的“望、闻、问、切”和传统的常规手段已远远无法满足我们对疾病诊断的要求，迫切需要将新的技术引入疾病诊断领域。

荧光原位杂交技术(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。

它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。

自20世纪80年代末，Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域后，FISH技术就在临床诊断及科研工作中得到了广泛的运用，显示出与一些传统技术相比的明显优势。

与传统的免疫组织化学法（IHC）相比，FISH具有良好的稳定性和可重复性。

目前免疫组织化学法正广泛应用于肿瘤等多个领域的临床诊断。

免疫组化的检测对象是疾病相关的蛋白。

由于蛋白的表达和本身的构象受各种因素的影响很大（例如酸、碱和变性剂），检测条件的稳定性对检测结果至关重要。

此外，免疫组化检测结果的判断依赖于检测者对显色结果的主观判断，对于一些弱阳性的结果，不同的检测者容易产生分歧。

上述的因素都可能影响医生对病情的最终诊断。

荧光原位杂交技术检测的对象是细胞中的DNA，致密的双螺旋结构使DNA 可以历经千百万年而依然保持良好，其结构稳定，不易被环境条件影响，为荧光原位杂交技术的稳定提供了良好的基础。

Chromosome 1 Whole Painting Probe, Green Label
Chromosome painting of human metaphase chromosomes with chromosome specific probes (paints). Chromosome 2 is labelled in green fluorescence and chromosome 5 in orange.
C. 须计数的颗粒状信号 （R=3.5，低度扩增）
C
免疫组化（2+）与FISH对比图 1.
>30%的肿瘤细胞全部 的细胞膜弱至中等着色
×40
住院号：175465 浸润性导管癌Ⅱ级 IHC：++ FISH：Ratio>5，中度扩增
×100
免疫组化（－）与FISH对比图1
×40 <30%的肿瘤细胞弱的着色或不着色
传统细胞遗传学的不足
首先，受限于显带技术的分辨率（超过3Mb的DNA才能 被识别），检出像染色体微缺失综合症之类的微小染色 体变异可能性很小；
其次，传统细胞遗传技术只能分析中期分裂相细胞。而 且，许多肿瘤特别是实体，染色体重组非常复杂，无法 通过显带分析方法得到全部染色体核型。
♠ 因此，传统的细胞遗传学方法，如显带技术、 核型分析等，都受到分辨率和覆盖率的限制， 以致于无法全面地发现可能的异常。
FISH有上述优点的原因：
1）使用了荧光标记与检测系统取代放射性标记与检测系统
标记探针的物质：（1）生物素(biotin)/地高辛(digoxigenin)
——半抗原报告分子（间接标记） （2）荧光物质（直接标记） Cy2 (绿色) / Cy3(橙色) / Cy3.5(猩红色) / Cy5(红色) 间接标记的信号检测（抗biotin或digoxigenin抗体上连接荧光物质）物质： (1)Fluorescein isothiocyanate(FITC)——绿色 (2)Rhodamine, ——红色 (3)AMCA——兰色

医学科普：第三代试管婴儿知识大全试管婴儿已经不是什么新鲜的事情了。

可是要通过试管婴儿的方式将父母可能遗传给孩子的疾病排除掉可不是一项容易的技术。

例如平衡易位携带者，是属于遗传性疾病的一种，举例来说就像中指和食指因外伤断裂，断指再植时假设医生不小心，将断下的食指接到中指上，又将断下的中指接到食指上，显然是张冠李戴了。

染色体易位患者自身通常没有临床症状，但当精子与卵子结合的时候，染色体先配对再分离时就会出现染色体异常导致的胚胎问题。

一般来说，胎儿所携带的异常染色体片断越小，存活时间越长；反之，异常片断越大，则存活时间越短，所以同一个病例，每次妊娠的结局未必相同，从早孕期流产、中孕期死胎或畸形到出生后低智或其他缺陷，应有尽有。

且迄今为止，没有任何药物可以改善妊娠结局，这类患者如果想要生一个健康宝宝，要作好长期抗战的思想准备。

曾经有个患者反复流产达12次之多才凑巧生了个健康的宝宝。

而胚胎种植前遗传学诊断技术（PGD）的开展和应用，无疑为这些患者带来了福音。

它就是俗称的“第三代试管婴儿”：指在IVF-ET的胚胎移植前，取胚胎的遗传物质进行分析，诊断是否有异常，筛选健康胚胎移植，防止遗传病传递的方法。

上海集爱遗传与不育诊疗中心常务副院长孙晓溪教授告诉记者：“胚胎植入前遗传学诊断技术具体说就是胚胎在植入母体前，先做诊断并筛选出没有遗传病的胚胎，再将合格的高质量的胚胎植入母体，就好比对工厂生产出的产品进行质量检查，只有贴上了合格标签的产品才能出厂一样，经过这一步骤，就杜绝了缺陷后代的出生，对染色体异常或其他遗传性疾病高危家庭而言，这一技术提供了后代安全的保障。

”1、什么是第三代试管婴儿？它与第一、第二代有什么区别？经典的第一代试管婴儿用穿刺针将卵子取出后在体外与精子结合，将受精后的胚胎移植到宫腔，避开了生理情况下精子与卵子在输卵管结合的过程，因此主要用于输卵管堵塞病例。

第二代试管婴儿则针对男性少、弱、畸精子症患者，这些患者精子质量较差，往往很难自己钻进卵子完成受精过程，我们用一根显微穿刺针，将精子注射入卵子帮助其受精。

染色体识别和分离技术的研究染色体是生物体内的带状结构，携带着遗传信息。

对染色体的识别和分离技术的研究，为人类的遗传学研究和疾病诊断治疗等方面带来了很大的进展。

本文将介绍染色体识别和分离技术的研究进展及其应用。

一、染色体识别技术在遗传学研究和医学诊断治疗中，染色体识别技术是非常重要的。

传统的染色体识别技术是采用显微镜观察染色体形态和数量，但这种技术需要高分辨率显微镜和专业技能，比较费时费力。

近年来，随着分子生物学的发展，染色体识别技术得到了很大的进展。

1. FISH技术FISH（Fluorescence in situ hybridization）技术是一种基于荧光探针的染色体分析技术，可用于染色体结构、数量、位置和功能等的研究。

采用FISH技术，先制备一批荧光染料探针，通过探针与特定染色体序列的互补结合，使特定的染色体区域呈现荧光信号。

FISH技术可应用于基因分型、异常染色体检测以及人类遗传性疾病的筛查等方面。

相比传统染色体分析技术，FISH技术可以更快、更精确、更容易地检测出某些染色体异常。

2. CGH技术CGH（Comparative Genomic Hybridization）技术是一种非常重要的染色体识别技术。

它能够快速、准确地检测出染色体的异常，如缺失、扩增、重排等等。

CGH技术是一种先将不同来源的DNA 样品分别标记不同的荧光染料，再将它们混合在一起，分别掺入到正常人DNA样品中进行荧光信号的检测和分析。

这样，就可以得到一幅基因组荧光分布图谱，从而检测出整个染色体上基因的拷贝数目。

3. PCR技术PCR（Polymerase Chain Reaction）技术是一种用于从极微量DNA样品复制特定序列的技术。

PCR技术可以对染色体的序列进行扩增，以便进行相关研究和应用。

PCR技术比较简便、快速，可以扩增从染色体上提取的极微量DNA，常用于基因诊断、亲子鉴定、医学检测等。

二、染色体分离技术染色体分离技术是分离出染色体的细胞学技术，能够进行高质量的染色体制备，用于分析染色体的形态和数量及其遗传信息，并在许多方面应用。

fish技术在临床上应用近年来，随着科技的不断发展，人们在医疗领域也开始尝试运用各种先进的技术手段来提高诊疗水平。

其中，fish技术作为一种新型的遗传学技术，正在逐渐在临床上得到应用。

本文将对fish技术在临床上的应用进行探讨。

fish技术全称为荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization），是一种能够在细胞或组织中定位、检测和鉴定染色体的技术手段。

通过与含有荧光标记的特定DNA或RNA序列杂交，可以使得这些序列在显微镜下呈现出荧光信号，从而达到检测目的。

在临床上，fish技术主要用于以下几个方面：一、染色体异常的检测fish技术在染色体异常的检测中具有独特的优势。

通过对染色体进行特定序列的染色体间的“配对”检测，可以帮助医生及时准确地发现遗传病变，包括染色体缺失、易位、重复等问题。

这对于患者的疾病诊断、治疗和预后都有着重要的指导意义。

二、肿瘤诊断fish技术在肿瘤的诊断和分析中也有着广泛的应用。

通过检测肿瘤细胞中的染色体异常或基因突变，可以帮助医生确认肿瘤的类型、分级和预后，并指导后续治疗方案的制定。

而且，fish技术对于微小残存病灶的检测也非常敏感，能够在临床上提供更精准的诊断信息。

三、遗传病的筛查fish技术在遗传病的筛查中有着重要的应用。

通过对胎儿细胞或新生儿细胞进行fish检测，可以帮助医生早期发现患有遗传病风险的个体，从而及时进行干预和治疗，减少患病的可能性，保障健康。

四、肿瘤治疗监测除了用于诊断外，fish技术还可用于肿瘤治疗的监测。

通过检测肿瘤细胞的染色体异常和基因变异，可以及时了解肿瘤细胞的发展演化情况，判断治疗效果及肿瘤的耐药机制，为调整治疗方案提供依据。

总的来说，fish技术在临床上的应用前景广阔，不仅可以帮助医生更准确、更快速地进行疾病诊断，提高治疗的精准性和有效性，还可以为个体化医疗、精准医学的发展提供技术支持。

然而，需要指出的是，fish技术虽然在临床上有诸多优势，但也存在着检测范围有限、操作流程复杂、成本较高等问题，需要不断进行技术改进和优化。

DNA荧光原位杂交（FISH）简要综述DNA荧光原位杂交（FISH）简要综述DNA荧光原位杂交（FISH）技术是70年代末80年代初开始发展起来的一种重要的非放射性原位杂交技术，它的基本原理是将DNA探针用特殊修饰的核苷酸分子标记（如biotin-dUTP或digoxigenin-dUTP），然后将标记的探针直接原位杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维上的定位。

利用FISH进行DNA序列的定位具有实验周期短、灵敏度高、分辨率高、直观可见等优点。

总的说来，FISH技术的发展沿着两条路线前进：一方面是采用不同的探针，从而衍生出许多FISH新技术，如Muticolor-FISH、CGH、GISH、CISS、BAC-FISH、Chromosome Painting、Rreverse Chromosome Painting等等；另一方面则是努力提高FISH技术的分辨率，将靶目标从中期染色体发展到DNA纤维，使其分辨率由1Mb 发展到1kb,这更进一步拓展了FISH技术的应用领域，成为分子细胞遗传学的一项代表技术。

A．不同探针的应用：1．以基因组为探针的GISH技术可以定位外源DNA片段在染色体上的位置、大小、插入点等。

Durnam（1985）首先将GISH应用于体细胞杂种的异源染色体检测。

本实验室采用GISH方法在小麦中成功定位了许多外源染色体、染色体片段以及染色体结构变异。

2．以不同的荧光素标记探针的Muticolor-FISH，可以同时定位不同探针序列的分布。

1990年Nederlof等创建了多色荧光原位杂交技术。

他们用生物素、AAF（氨基乙酰荧光素）和CP三种半抗原对不同探针作单、双、三标记，再用这三种半抗原相应的分别标记了异硫氰酸荧光素（FITC，绿色）、氨甲香豆素乙酸（AMCA，蓝色）和碱性蕊香红（TRITC，红色）的抗体来检测荧光，该技术最多可同时观察7个靶染色体。

荧光标记原位分子杂交定位mrna荧光标记原位分子杂交（FISH）是一种常用的技术手段，用于在细胞或组织水平上定位mRNA。

这种技术结合了分子杂交和荧光显微镜技术，可以精确地检测和定位特定的mRNA序列，从而揭示其在细胞内的位置和功能。

在本文中，我们将详细介绍FISH技术的原理、步骤和应用，以及其在mRNA定位研究中的重要性和应用前景。

一、FISH技术的原理FISH技术的原理基于DNA或RNA互补碱基配对的规则。

在FISH实验中，首先需要设计一段特异性的探针序列，该探针可以与目标mRNA的序列完全互补配对。

探针序列通常是一段20-30个碱基的寡核苷酸序列，可以通过化学合成的方式制备，并在其适当位置上连接荧光标记物，以便在显微镜下观察。

当这段荧光标记的探针与目标mRNA序列发生互补配对时，就形成了一个稳定的杂交复合物。

在FISH实验中，首先需要将细胞或组织样本进行固定和裂解，并将目标mRNA 暴露在外。

然后将荧光标记的探针引入样本中，让其与目标mRNA发生互补配对。

接下来，利用荧光显微镜观察样本，并通过特定的滤镜组合来检测荧光信号。

如果目标mRNA存在于细胞中，则可以观察到荧光信号的位置和强度，从而确定其在细胞内的定位和数量。

二、FISH技术的步骤FISH技术一般包括以下几个主要步骤：1. 样本处理：首先需要对待测样本进行固定和裂解处理，以便使目标mRNA暴露在外。

通常使用乙醇或甲醛作为固定剂，蛋白酶作为裂解剂。

2. 探针杂交：将荧光标记的探针加入样本中，让其与目标mRNA发生互补配对。

可以同时使用多个不同颜色的荧光探针进行多重分析。

3. 洗涤和显微镜观察：洗去未结合的探针，然后用荧光显微镜观察样本，检测特定的荧光信号。

4. 数据分析：通过荧光信号的位置和强度，可以确定目标mRNA在细胞内的分布和数量，从而进行数据分析和图像处理。

三、FISH技术的应用FISH技术在生物医学领域有着广泛的应用，特别是在mRNA定位研究中。

荧光原位杂交技术的研究进展何世斌;柴连琴;谭珺隽;沈尧;周萍;马云峰;李立家【摘要】荧光原位杂交(FISH)是在染色体、间期细胞核和DNA纤维上进行DNA序列定位的一种有效手段.近年来,围绕提高检测的分辨率和灵敏性,不断将免疫染色、量子点和微流控芯片等物理化学技术引入到荧光原位杂交中,促进了它的快速发展.本文主要综述了荧光原位杂交的基本原理和发展历程,重点介绍了免疫染色-荧光原位杂交(immuno-FISH)、量子点-荧光原位杂交(QD-FISH)和微流控芯片-荧光原位杂交(FISH on microchip)等多种新技术及其检测特点,如快速、灵敏、动态、多样化等.随着荧光原位杂交技术的不断完善与发展,将在细胞遗传学、表观遗传学及分子生物学等领域发挥更加重要的作用.【期刊名称】《植物科学学报》【年(卷),期】2014(032)002【总页数】6页(P199-204)【关键词】荧光原位杂交;免疫染色;量子点;微流控芯片【作者】何世斌;柴连琴;谭珺隽;沈尧;周萍;马云峰;李立家【作者单位】河南大学生命科学学院,河南开封475004;河南大学生命科学学院,河南开封475004;武汉大学生命科学学院,武汉430072;河南大学生命科学学院,河南开封475004;河南大学生命科学学院,河南开封475004;河南大学生命科学学院,河南开封475004;武汉大学生命科学学院,武汉430072【正文语种】中文【中图分类】Q343分子细胞遗传学的发展为宏观细胞学和微观分子生物学的研究架起了一座桥梁。

早期细胞遗传学的研究是建立在细胞核和染色体基本特征上的，如染色体的长短、臂比、着丝粒、端粒、核仁组织区等，荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization，FISH)的出现标志着分子细胞遗传学一个重要阶段的开始。

近年来，随着物理、化学技术的发展与进步，免疫染色、量子点和微流控芯片等不断被引入到荧光原位杂交中，促进了荧光原位杂交技术和分子细胞遗传学的发展。