牛血清蛋白标准曲线

警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。

对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。

对于所提供的任何材料的内容或其执行情况， MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。

法律提示5. 蛋白质鉴定和误差分析5.1. 初级实验要求：“牛的心脏里有什么呢？”实验技能列表：●用吸移管定量移液●吸移管校正●标准曲线制作●梯度稀释●紫外-可见（UV-Vis）分光光度计使用实验预讨论：●蛋白质鉴定装置：●吸移管：100P，1000P●洗耳球：大、小型● 8支试管● Eppendorf管和管架● UV-Vis一次性比色皿（5mL）目标：●你将拿到含有牛心细胞色素C的溶液样品，并且用Pierce公司的Coomassie® PlusProtein Assay试剂来鉴定样品中蛋白质的浓度。

注意：●你将拿到一组Eppendorf管：一个装储备液，3个装有50μL的牛心细胞色素C，以及若干用于混合溶液的空管。

还有一瓶pH为7的25mM MOPS缓冲溶液。

实验要点：吸移管的校正在实验中使用吸移管以前，首先应对它进行校正。

该步骤将决定移入液体体积的精确值。

对移液管的校正非常方便，只需吸取一定量的水，然后将它们移入一个已知重量的带盖容器，然后再称取其重量。

由于已知水的密度是 1.00g/mL，因此，进行简单的换算就可以知道吸移管的准确度。

大多数吸移管不需要修正，若要修正，一般不应该超过1μL。

Coomassie®试剂和蛋白质的反应蛋白质的检验可以通过其和Coomassie®染料形成的配合物来实现。

当染料附着在蛋白质上之后，染料的紫外吸收会从465nm移至595nm (A595)。

首先测定一系列已知浓度的牛血清蛋白(BSA)溶液在595nm处的吸光度，绘制标准曲线，然后测定未知样品在595nm处的吸光度，对比标准曲线确定样品的浓度。

牛血清蛋白标准曲线牛血清蛋白表1.Folin酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表01234567样1样2试管编号200ug/mL牛血清蛋白标准液（mL）0.000.300.400.500.600.700.800.90 1.001.00 1mol/1000mL人血清蛋白（mL）PH7.4磷酸缓冲液（mL)1.000.700.600.500.400.300.200.100.000.00 Folin酚甲（mL）以上各管均加入1.00mL，振荡均匀后，反应15min Folin 酚乙（mL）以上各管均加入 4.00mL，振荡均匀后，55℃水浴反应25minA650nm实测OD值0.0000.2380.3020.3650.4210.4850.5210.5730.4730.378 表2.Folin酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表0123456试管编号标准牛血清蛋白呈色浓度（ug/mL）0.00A650nm实测OD值回归方程对应OD值线性回归方程斜率a线性回归方程截距b线性回归方程实验相关性（r）710.0013.3316.6720.0023.3326.6730.000.0000.2380.3020.3650.4210.485 0.5210.5730.0330.2220.2840.3470.4100.4730.5360.5990.018870.03298y= 0.01887x+0.032980.9934 凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用孙彦平1杨光2(11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040)〔文章编号〕1002-2376(2004)02-0017-02〔中图分类号〕TH773〔文献标识码〕B〔摘要〕目的:利用Controlplasma建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原(FiB)检测方法,并对其初步评价。

一、实验目的配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml，0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。

测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。

二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

三、实验过程1．准备所需的药品和仪器。

2．计算所需配制的溶液的量。

先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液（PBS）配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液，再将这组溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。

计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。

3．具体操作过程。

用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶液，溶液的浓度为10mg/ml。

用移液枪分别取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul的BSA 溶液，置于的EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。

得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。

移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液，置于的EP管中，各加入900ul 的PBS溶液，震荡使溶液混合均匀。

考马斯亮蓝G-250标准曲线法测定蛋白含量实验目的：学习和掌握考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量的原理和方法。

实验原理：考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h 内保持稳定。

该法是1976年Bradford 建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

材料、主要仪器和试剂1．实验材料新鲜绿豆芽2．主要仪器（1）分析天平、台式天平（2）刻度吸管（3）具塞试管、试管架（4）研钵（5）离心机、离心管（6）烧杯、量筒（7）微量取样器（8）分光光度计3．试剂（1）牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取100mg 牛血清白蛋白，溶于100mL 蒸馏水中，即为1 000μg／mL 的原液。

（2）蛋白试剂考马斯亮蓝G-250 的配制：称取100mg 考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸100mL，最后用蒸馏水定容到1 000mL。

此溶液在常温下可放置一个月。

（3）乙醇（4）磷酸（85％）四、操作步骤1．标准曲线制作（1）0~100μg／mL 标准曲线的制作：取6 支10mL 干净的具塞试管，按表1 取样。

盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混合，放置2min 后用1cm 光经的比色杯在595nm 波长下比色，记录各管测定的光密度OD595nm，并做标准曲线。

最新[牛血清蛋白标准曲线]考马斯亮蓝法标准曲线牛血清蛋白表1.Folin酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表01234567样1样2试管编号200ug/mL牛血清蛋白标准液（mL）0.000.300.400.500.600.700.800.90 1.001.00 1mol/1000mL人血清蛋白（mL）PH7.4磷酸缓冲液（mL)1.000.700.600.500.400.300.200.100.000.00 Folin酚甲（mL）以上各管均加入1.00mL，振荡均匀后，反应15min Folin酚乙（mL）以上各管均加入4.00mL，振荡均匀后，55℃水浴反应25minA650nm实测OD值0.0000.2380.3020.3650.4210.4850.5210.5730.4730.378 表2.Folin酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表0123456试管编号标准牛血清蛋白呈色浓度（ug/mL）0.00A650nm实测OD值回归方程对应OD值线性回归方程斜率a 线性回归方程截距b线性回归方程实验相关性（r）710.0013.3316.6720.0023.3326.6730.000.0000.2380.3020.3 650.4210.4850.5210.5730.0330.2220.2840.3470.4100.4730. 5360.5990.018870.03298y=0.01887x+0.032980.9934 凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用孙彦平1 杨光2(11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040)〔文章编号〕1002-2376(2004)02-0017-02 〔中图分类号〕TH773 〔文献标识码〕B 〔摘要〕目的:利用Controlplasma建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原(FiB)检测方法,并对其初步评价。

B r f o r d法测蛋白质浓度 Prepared on 24 November 2020Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml，0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。

测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。

二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。

其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/ml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

三、实验过程1．准备所需的药品和仪器。

2．计算所需配制的溶液的量。

先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液（PBS）配制一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液，再将这组溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。

计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液的体积。

3．具体操作过程。

用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶液，溶液的浓度为10mg/ml。

用移液枪分别取100ul，80ul，60ul，40ul，20ul 的BSA溶液，置于的EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。

得到一组浓度分别为ml ，ml，ml ，ml ，ml的BSA溶液。

I. 紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。

二、实验原理蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。

该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。

但此方法存在以下缺点：1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。

2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。

但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。

但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。

三、实验器材1．紫外分光光度计2．移液管3．试管及试管架4．石英比色皿四、材料与试剂1．标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。

2．待测蛋白溶液：酪蛋白稀释溶液，使其浓度在标准曲线范围内。

五、操作方法1．标准曲线的制作按表1加入试剂。

表1 标准曲线的制作度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。

2．未知样品的测定取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。

并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

II. Bradford法测定蛋白质的含量一、实验目的学习考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的原理和方法。

二、实验原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，迅速而准确的定量蛋白质的方法。

染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。

蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。

牛血清蛋白标准品消光系数概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在论述牛血清蛋白标准品消光系数的相关知识以及其重要性与意义。

牛血清蛋白作为一种常用的生物分子，其消光系数主要用于描述其在特定条件下对入射光的吸收情况。

了解和研究牛血清蛋白标准品消光系数不仅可以帮助我们更好地理解和应用这一生物分子，在生物医学研究、药物研发等领域也具有广泛的应用前景。

1.2 文章结构本文将按照以下结构展开内容：引言部分旨在引起读者对牛血清蛋白标准品消光系数的关注，并介绍文章的目录结构。

第二部分探讨了牛血清蛋白标准品及其消光系数的意义与重要性，包括对标准品的介绍以及消光系数在科学研究中的作用。

第三部分详细阐述了测量牛血清蛋白标准品消光系数所采用的方法，包括紫外-可见吸收光谱法、聚二甲基硅氧烷凝胶过滤色谱法和荧光光谱法。

第四部分探讨了影响牛血清蛋白标准品消光系数的因素，并对其进行解释和说明，包括标准溶液浓度与测定结果关系的解析，pH值对消光系数的影响分析以及温度对消光系数的影响分析。

最后，在结论部分总结主要观点，并展望未来对该领域的研究方向。

1.3 目的本文旨在全面介绍牛血清蛋白标准品消光系数的相关知识，提高读者对该主题的理解和认识。

通过详细阐述牛血清蛋白标准品消光系数的定义、测量方法及其影响因素等内容，希望能够增进读者对这一领域的知识储备，并为未来相关研究提供一定参考。

2. 牛血清蛋白标准品消光系数的意义与重要性2.1 牛血清蛋白标准品介绍牛血清蛋白标准品是一种常用的实验试剂，在生物科学领域中扮演着重要的角色。

它通常用于校准分析仪器和评估测量结果的准确性。

牛血清蛋白标准品可作为一种参照物质，用于比较和量化其他样品中蛋白质的含量。

2.2 消光系数的定义与作用消光系数是描述溶液对电磁辐射吸收程度的参数。

在牛血清蛋白标准品中，消光系数被用来确定样品在特定波长下吸光度与浓度之间的关系。

通过测量吸光度并利用标准回归曲线，可以计算出未知样品中蛋白质的浓度。

Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为0.10mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml，0 mg/ml 的牛血清蛋白（BSA）溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。

测定未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。

二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大该法试EP管中，再分别加入900ul，920ul，940ul，960ul，980ul的磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。

得到一组浓度分别为1.0mg/ml ，0.8mg/ml，0.6mg/ml ，0.4mg/ml ，0.2mg/ml 的BSA溶液。

移液枪分别移取100ul刚配好的一组BSA溶液，置于1.5ml的EP管中，各加入900ul的PBS 溶液，震荡使溶液混合均匀。

得到一组浓度分别为0.10 mg/ml ，0.08mg/ml，0.06mg/ml ，0.04mg/ml ，0.02mg/ml的BSA溶液。

另外量取1ml的PBS溶液（BSA溶液浓度为0 mg/ml）作对照试验。

用移液枪分别移取50ul配好的一组BSA溶液，滴加到孔板中，再分别加入200ul的考马斯亮——仅供参考蓝（CBB）。

静置10min后，用酶标仪测得这组BSA溶液的吸光度。

四、实验数据及处理测得的BSA溶液的吸光度如下：用orgin作出吸光度对BSA浓度的关系曲线。

五、实验结果分析得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=3.09x+0.6807，R2=0.9541。

可以看出吸光度—浓度——仅供参考。