莽草酸脱氢酶(SD)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6-PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC2100规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。

临用前配制，加入5mL试剂一，混匀。

；产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH逆境生理中具有重要作用。

6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm吸光度增加速率，计算6PGDH活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的处理称约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清液，待测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。

3.加样表：在比色皿中依次加入试剂名称（μL）测定管（μL）空白管（μL）样本100-蒸馏水-100试剂一700700试剂二100100试剂三100100于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸光值记为A2。

记△A测定=A2测定-A1测定，△A空白=A2空白-A1空白。

三、6PGDH活性计算：1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg pr）。

6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=536×(△A测定-△A空白)÷Cpr（2）按样本鲜重计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U（U/mg prot）。

脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4460可见分光光度法规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60mL×1瓶4℃保存提取液二液体0.6mL×1支4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×1瓶4℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；2、试剂三：临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；3、试剂四：临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。

4、工作液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液，临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：试剂三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混匀。

（注意：现配现用，用多少配多少）产品说明：ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。

降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g样本，加入1mL 提取液一），进行冰浴匀浆，1500g4℃离心15min，取上清液于一支新的EP管中，加入10μL提取液二，涡旋混匀，冰浴放置30min后，15000g4℃离心20min，取上清置冰上待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0955规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体110mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体1mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：液体18mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入到试剂三中溶解待用；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入3.333mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。

产品说明：SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、SDH的提取准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤和加样表1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

2、样本测定试剂名称（μL）测定管空白管试剂三168168试剂五121237℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min左右样本10蒸馏水10试剂六1010将试剂三和试剂五依次加入到1.5mLEP管中，37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min后加入到微量比色皿或96孔板再按表格依次加入各试剂，在600nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2，得到ΔA测定，ΔA空白。

NADH氧化酶（NOX可见分光光度法货号：BC0630规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：试剂六：临用前加入9 mL双蒸水，用不完的试剂-20℃分装保存。

产品说明：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD+。

该酶不仅参与NAD+的再生，而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD+，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2.将匀浆600g，4℃离心5min。

将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

3.将上清液转移至另一EP管中，即胞浆提取物，用于线粒体中泄露NOX活性测定。

4.沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，反复吹打充分混匀，用于NOX活性测定，并用于蛋白浓度测定。

6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号: UPLC-MS-4360规格: 50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：1、试剂二：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

2、试剂三：用时每支加650 μL双蒸水充分溶解备用。

3、工作液配制：临用前将试剂一、试剂二、试剂三以15：0.2：0.2 比例混合。

产品说明：G6PDH（EC 1.1.1.49）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是磷酸戊糖途径的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯，同时将NADP+还原为NADPH，供生物合成及维持细胞内的还原状态用。

因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。

G6PDH 催化NADP+还原生成NADPH，在340nm 下测定NADPH 增加速率。

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每500 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%超声3s，间隔10s，重复30 次）。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样本：直接检测。

二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2、试剂一置37℃水浴预热30min。

转氢酶-2活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC3260规格：50T/24S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前加入6mL试剂三备用，可分装后-20℃保存，但避免反复冻融。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入10mL试剂三备用。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；产品说明：转氢酶位于线粒体的内膜上，又称为线粒体复合体六，催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互转化，调节线粒体NAD(H)和NADP(H)平衡。

把逆向反应称为TH-2，催化NADPH和NAD+生成NADP+和NADH。

NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。

用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸（APAD+）替代NAD+，TH-2催化APAD+还原生成APADH，APADH在375nm有特征光吸收，测定375nm光吸收的增加速率，来计算TH-2活性。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、转氢酶-2的提取(1)称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0mL提取液，用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

(2)4℃600g离心10min。

(3)将上清液移至另一离心管中，4℃11000g离心15min。

(4)上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的转氢酶-2（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

(5)在沉淀中加入800μL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于转氢酶-2酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至375nm，蒸馏水调零。

2、样品测定：在1mL石英比色皿中分别加入试剂名称测定管对照管试剂一400-试剂二400400样品100100试剂三100500将上述试剂分别加入1mL石英比色皿后充分混匀，于375nm处测定初始吸光值A1，迅速将比色皿连同反应液放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴锅中水浴3min，然后迅速拿出擦干测定3min后的吸光度A2，计算△A测定=A2测定-A1测定，△A对照=A2对照-A1对照，△A=△A测定-△A对照。

锰过氧化物酶（Mnp）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：UPLC-MS-4253可见分光光度法规格：50T/48S产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体80mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体200μL×1支2-8℃保存溶液配制：试剂四：临用前根据实验所需量按照试剂四（μL）：蒸馏水（μL）=1:49的比例配制，现用现配。

产品说明：锰过氧化物酶（Mnp）（EC1.11.1.13）是一种普遍存在于细菌和真菌中的微生物木质素分解酶，在微生物木质素分解系统中起着关键作用，它可以有效的降解木质素以及废水和土壤中比较难降解的化合物，在生物制浆、生物漂白和污染物的生物降解等工业领域具有广泛应用。

锰过氧化物酶在Mn2+环境下，可将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，四邻甲氧基连酚在465nm处有吸收峰，通过检测465nm处吸光值的变化，可测定锰过氧化物酶的活性。

Mn2+Guaiacol Tetra-o-methoxylianol(465nm)Mnp注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声波细胞破碎仪、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿、震荡仪、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照样本质量（g）：试剂一体积（mL）为1:5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆；10000g4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一）加入试剂一，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率30%或300W，超声3s，间隔7s，总时间3min），10000g4℃离心10min，取上清置冰上待测。

莽草酸脱氢酶（SD）活性检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4468规格:50T/48S紫外分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：1、提取液：内含不溶物，用前摇匀。

2、试剂二：临用前加入10mL蒸馏水溶解。

3、试剂三：临用前每瓶加入11mL蒸馏水溶解。

4、工作液的配制：根据用量按照试剂一：试剂二：试剂三为7:4:8的体积比例充分混匀，现用现配，用前25℃预热15min。

产品说明：莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶(EC1.1.1.25)是莽草酸合成代谢途径中催化第四步反应的关键酶。

莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（加入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

2、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2210规格：25T/24S50T/48S产品内容：提取液：30mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体15µL×1支，4℃保存；临用前加入0.5mL蒸馏水充分混匀，或根据比例现配现用；用不完的试剂4℃保存一周。

产品说明：GAPDH（EC1.2.1.12）催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。

GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、无机磷和NAD+，340nm处测定NADH的减少量可反映GAPDH活性的高低。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

乙醇脱氢酶（ADH ）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC1085规格：100T/96S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体2 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；2、试剂一：临用前把试剂二转移到试剂一中，分装保存于-20℃。

产品说明：ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶，催化乙醇与乙醛可逆转换，在很多生理过程中起着重要作用。

哺乳动物ADH 主要在肝脏生成，肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。

血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。

ADH 催化NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD +，NADH 在340nm 处有吸收峰，而NAD +没有；测定340nm 吸光度下降速率，来计算ADH 活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV 板）、可调式移液器、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、 组织：按照组织质量（g ）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆。

16000g ，4℃离心20min ，取上清置冰上待测。

2、 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w ，超声3秒，间隔7秒，总时间3min ）；16000g ，4℃离心20min ，取上清液置冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

黄嘌呤氧化酶（XOD）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC1090规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×4瓶，4℃保存。

产品说明：XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是核苷酸代谢的关键酶之一。

XOD主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时，XOD大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。

XOD催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一．粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提第1页，共3页取液），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

或者直接用0.5mg/mL的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二．操作步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、XOD检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，充分混匀，待用；用不完的试剂4℃可保存一周。

3、测定前按需取出一定量的XOD检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）水浴30min以上。

DOI: 10.3969/j.issn.1673-713X.2021.02.007·综述·莽草酸激酶作为抗结核分枝杆菌药物发现靶标的研究进展李蒙，代晓伟，卞聪，朱小红，司书毅，李妍，姜威近年来，随着结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）单药耐药（SDR-TB）、多药耐药（MDR-TB）和广泛耐药（XDR-TB）菌株的不断出现和蔓延，使得传统抗结核药物的临床有效率不断下降，结核病也因此再次成为严重危害人类健康和公共安全的传染性疾病[1-5]。

研发新型抗结核药物，解决结核病治疗所面临的难题成为控制结核病疫情的当务之急。

针对传统药物进行结构优化或是通过对现有药物进行组合获得新的组剂，相对而言是获得抗结核新药的捷径，由此获得的新药在特定情况下可提高治疗效率，但由于此类药物在化学结构和作用机制上与传统药物无明显差异，导致其不能有效地避开MTB 的耐药机制，对高水平耐药结核菌无效，仍然不能有效地治疗耐药结核病[6-9]。

因此发现新的药物靶标进而发现新的先导药物成为抗结核药物研发的重要方向。

莽草酸途径是细菌、真菌、藻类、高等植物等合成必需芳香族氨基酸的必需途径，该途径合成的分支酸是合成色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸以及叶酸、泛酸和奎宁酸等芳香型化合物的前体物质[10]。

人体内并不存在莽草酸途径中各个酶的编码基因，而且目前尚未有以莽草酸途径为靶标的抗结核药物应用于临床，以莽草酸途径的关键酶为靶标的抗结核药物可能具有有效、低毒且无交叉耐药的优势，因此莽草酸途径中的关键酶作为新型抗结核药物靶标引起了研究者的广泛关注[11-15]。

目前已经发现多个以莽草酸途径中的关键酶为靶标的具有抗结核活性的药物，其中多数为莽草酸激酶（shikimate kinase，SK）抑制剂，该激酶被认为是莽草酸途径中最具有潜力的药物研发靶标[16]。

本文就近年来结核分枝杆菌莽草酸激酶（MtSK）结构和功能相关研究及其抑制剂的发现等方面作简要综述，为新型抗结核药物的研发提供参考。

酶法检测试剂盒举例5个酶法检测试剂盒是一种用于测定特定物质或分子在生物样本中的含量或活性的工具。

它们通常由一系列试剂和材料组成，可以通过酶反应来测量目标物质的浓度或活性。

以下是五个常见的酶法检测试剂盒的举例：1. 葡萄糖酸脱氢酶（G6PD）检测试剂盒：G6PD是一种关键的酶，参与细胞内葡萄糖代谢过程中NADPH的产生。

G6PD缺乏会导致溶血性贫血等疾病。

G6PD检测试剂盒可用于测定血液样本中G6PD活性水平，从而帮助诊断和监测相关疾病。

2. 脯氨酸氧化酶（PAO）检测试剂盒：PAO是一种参与氨基酸代谢的重要酶，可以将脯氨酸转化为丙酮酸和亚硝胺。

PAO检测试剂盒可用于测定尿液中PAO活性水平，从而评估肾功能和相关代谢紊乱。

3. 乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒：LDH是一种广泛存在于各种组织和细胞中的酶，参与乳酸代谢过程。

LDH检测试剂盒可用于测定血液、尿液或其他体液中LDH活性水平，从而帮助诊断和监测心肌梗死、肝病、恶性肿瘤等疾病。

4. 超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒：SOD是一种抗氧化酶，能够清除细胞内的超氧阴离子自由基。

SOD 检测试剂盒可用于测定血液或组织样本中SOD活性水平，从而评估抗氧化能力和相关疾病的风险。

5. 淀粉酶（AMY）检测试剂盒：AMY是一种参与淀粉消化的消化酶，能够将淀粉分解为葡萄糖。

AMY检测试剂盒可用于测定食物样本或消化系统分泌物中AMY活性水平，从而评估消化功能和相关消化系统疾病。

以上是五个常见的酶法检测试剂盒的举例。

这些测试剂盒在医学、生物学研究和临床诊断中起着重要的作用，帮助我们了解生物样本中特定物质或分子的含量或活性水平，从而为疾病诊断、治疗和监测提供有力支持。

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号: UPLC-MS-4358规格: 50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

溶液的配制：1、试剂二：临用前配制，加入5 mL 试剂一，混匀；2、试剂三：临用前配制，加入5 mL 试剂一，混匀。

产品说明：磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PDH）和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH）依次催化NADPH 合成，与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。

此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。

6PGDH 催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 吸光度增加速率，计算6PGDH 活性。

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称约0.1g 组织，加入1mL 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心10min，取上清粗酶液，待测。

二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于37℃水浴预热30min 以上。

3.于340nm 处测定3min 内吸光值变化，第0s 吸光值记为A1，第180s 吸光值记为A2。

记ΔA 测定=A2 测定-A1 测定，ΔA 空白=A2 空白-A1 空白。

三、6PGDH 活性计算（1）按蛋白浓度计算活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。

6PGDH 酶活性(U/mg prot) =[(ΔA 测定-ΔA 空白)÷(ε×d)×109×V 反总]÷(Cpr×V 样)÷T=536×(ΔA 测定-ΔA 空白)÷Cpr（2）按样本质量计算活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH 的酶量为1 个酶活单位。

细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）还原后峰值的增高，即采用光度法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种细菌菌株裂解悬液样品乙醇脱氢酶的总活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase；ADH；EC1.1.1.1），又称为乙醇NAD氧化还原酶（alcohol NAD- oxidoreductase），属于氧化还原酶家属成员之一，是一组含有6个亚酶的催化乙醇氧化的锌依赖性金属酶蛋白。

存在于许多生物体中。

通过氧化原发性和继发性醇类分子和半缩醛（hemiacetals），转化产生乙醛或酮。

乙醇脱氢酶分成三类：一类为辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）或辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP）依赖型；一类为吡咯喹啉醌-，血红素基团、F420（Pyrroloquinoline quinone，haem group，F420）依赖型；一类为黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin adenine dinucleotide）依赖型。

NAD或NADP依赖型乙醇脱氢酶又可以分成三种：一种为锌依赖性的中长链型（350氨基酸残基）；一种为锌非依赖性的短链型（250氨基酸残基）；一种为铁激活性（385氨基酸残基）。

在微生物中，乙醇脱氢酶起着发酵功能。

且用于酒精性饮料、工业溶剂、醋的生产，参与外源性芳香族化合物（xenobiotic aromatic compounds ）的降解，帮助细菌或酵母在甲醇环境中生长。

基于底物乙醇，在乙醇脱氢酶的作用下，转化为乙醛（aldehyde）产物后，通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）的变化（340nm 波长），来定量分析乙醇脱氢酶的总活性。

苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4456规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×3瓶4℃保存试剂三液体5mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前取1瓶加入4mL蒸馏水充分溶解待用；现配现用。

4℃可以保存2周。

产品简介：PAL（EC4.315）广泛存在于各种植物和少数微生物中，是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切相关，在植物正常生长发育和抵御病菌侵害过程中起重要作用。

PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在290nm处有最大吸收值，通过测定吸光值升高速率计算PAL活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至290nm，蒸馏水调零。

2、操作表试剂名称测定管（μL）空白管（μL）样本20试剂一780800试剂二200200混匀，30℃准确水浴30min试剂三4040混匀，静置10min后，在290nm处记录测定管吸光值A1和空白管吸光值A2，ΔA=A1-A2。

（空白管只需做1-2次）三、PAL活性计算（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟使290nm下吸光值变化0.1定义为一个酶活力单位。

紫外分光光度法测定莽草酸的解离常数
何冀川;李松;罗英
【期刊名称】《绵阳师范学院学报》
【年(卷),期】2006(25)5
【摘要】根据光度法测定酸解离常数的原理,采用紫外分光光度法测定了莽草酸的解离常数.在选定波长(215、220、224、226、230 nm)处测定不同pH值的莽草酸溶液吸光度值,得到莽草酸的离解常数为3.87±0.08.方法简便,结果可靠.
【总页数】3页(P40-42)
【作者】何冀川;李松;罗英
【作者单位】绵阳师范学院,化学与化学工程系,四川,绵阳,621000;绵阳师范学院,化学与化学工程系,四川,绵阳,621000;绵阳师范学院,生命科学与工程系,四川,绵阳,621000
【正文语种】中文
【中图分类】O6
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5.紫外分光光度法测定葛根素的解离常数 [J], 刘西京;杨大坚;罗杰英;陈士林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单宁含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4299规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体75mL×2瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶常温保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：10mg单宁酸。

临用前加入1.175mL提取液溶解为5000nmol/mL的标准液，2-8℃保存两周。

产品说明：单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。

单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。

其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。

根据光谱特性，单宁在275nm下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。

技术指标：最低检出限：0.385nmol/mL线性范围：0.39-18nmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、1mL石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g，加入2mL提取液（封口膜封口防止液体溅出），于70℃水浴，准确提取30min，期间可摇晃数次。

12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至2m L，待测。

二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min，波长调至275nm，提取液调零。

2.标准液的稀释：将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。

3.标准液稀释可参考下表：序号稀释前浓度（nmol/mL）标准液体积（µL）提取液体积（µL）稀释后浓度（nmol/mL）1500010090050025002003800253252000200012.5412.520002000 6.255 6.2520002000 3.1256 3.12520002000 1.56257 1.5625200020000.78125备注：实验中每个标准管需1000µL标准溶液。

货号：QS2608 规格：50管/48样山梨醇脱氢酶（sorbitol dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：SH（EC1.1.1.14）催化山梨醇脱氢生成果糖，是调控生物体内山梨醇含量的关健酶之一。

测定原理：SH催化山梨醇脱氢生成果糖，同时还原NAD+生成NADH，测定340nm吸光度增加速率可以计算SH活性。

自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶， -20℃保存；临用前每瓶加入15mL蒸馏水，用不完的试剂仍-20℃保存。

粗酶液提取：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

5min20秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

SH活性计算：第1页，共2页1、血清（浆）SH活力的计算单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。