小鼠急性缺血-再灌注肾损伤模型的建立及体会

小鼠缺血再灌注（实用版）目录1.小鼠缺血再灌注的背景和意义2.小鼠缺血再灌注的实验方法和操作步骤3.小鼠缺血再灌注的实验结果和分析4.小鼠缺血再灌注的结论和展望正文一、小鼠缺血再灌注的背景和意义小鼠缺血再灌注是指在小鼠体内某一部位发生缺血后，再通过灌注使其恢复血流。

这一过程在生物医学研究中具有重要意义，因为它可以模拟人类某些疾病的发生过程，如心肌梗死、脑卒中等。

通过研究小鼠缺血再灌注，可以深入了解缺血后再灌注对组织和器官的影响，为临床治疗提供理论依据。

二、小鼠缺血再灌注的实验方法和操作步骤1.实验动物选择：选用健康成年小鼠，分为实验组和对照组。

2.制备缺血模型：将实验组小鼠放入灌注装置中，通过调整灌注流量和时间，使小鼠某一部位（如心肌、脑组织等）发生缺血。

3.观察缺血程度：通过检测相关生理指标（如心率、血压、血氧饱和度等），评估小鼠缺血程度。

4.再灌注操作：在观察到缺血程度达到预设值后，恢复灌注流量，使缺血部位重新获得血流。

5.观察再灌注效果：通过检测生理指标，评估再灌注对小鼠的影响。

三、小鼠缺血再灌注的实验结果和分析实验结果显示，在缺血发生后，小鼠的心率、血压、血氧饱和度等指标会发生明显变化。

再灌注后，这些指标会逐渐恢复到正常水平。

但不同缺血时间和程度的小鼠，再灌注后的恢复情况有所不同。

通过对实验结果的分析，可以得出以下结论：1.缺血再灌注对小鼠的组织和器官具有一定的保护作用，能够减轻缺血带来的损伤。

2.缺血时间和程度的不同，再灌注的效果有所差异，提示再灌注治疗需要个体化。

四、小鼠缺血再灌注的结论和展望总之，小鼠缺血再灌注实验为研究缺血后再灌注的生物学效应提供了一个有效模型。

通过对这一模型的深入研究，可以为临床治疗缺血性疾病提供理论依据和技术支持。

全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。

建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。

本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。

动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。

一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。

对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。

手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。

首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。

其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。

在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。

手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。

随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。

2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。

3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。

4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。

5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。

6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。

检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。

常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。

通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。

小鼠缺血再灌注
小鼠缺血再灌注（I/R）是一种实验模型，用于研究组织缺血引起的损伤以及血液再灌注对损伤的影响。

这一模型通常用于心血管疾病、脑卒中、肝脏和肾脏等器官的研究。

操作步骤通常包括以下几个阶段：
1.缺血阶段：通过暂时封闭（结扎）或阻断（通过其他方法）血
管，以模拟组织缺血。

这可以在不同的器官中进行，比如通过
结扎冠状动脉来模拟心肌缺血，或者结扎肾动脉来模拟肾脏缺
血。

2.再灌注阶段：在一定时间后，重新开通或恢复血液供应，模拟
组织再灌注。

这一步骤旨在模拟血流的恢复，但在一些情况下，
再灌注本身也可能导致组织损伤。

3.取样和分析：小鼠通常在不同的时间点被处死，组织样本被取
出以进行各种生化、组织学和分子生物学分析，以评估缺血再
灌注对组织的影响。

小鼠缺血再灌注模型可以用于研究相关疾病的机制、开发治疗策略以及评估药物的疗效。

例如，这个模型可以用于研究心肌梗死、脑卒中、肾功能损伤等疾病。

在进行这种类型的实验时，需要确保符合伦理和动物福利的要求，并遵循实验室和国家的相关规定和指南。

研究人员应该采取适当的措施来减少动物的痛苦和苦恼。

芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤模型小鼠的肾保护作用及其机制研究目的：研究芬戈莫德对肾缺血再灌注损伤（RIRI）模型小鼠的肾保护作用及其机制。

方法：将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、芬戈莫德组（1 mg/kg）和芬戈莫德+wortmannin组[芬戈莫德1 mg/kg+磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性阻滞药wortmannin 1.4 mg/kg]，每组15只。

除假手术组外，其余3组小鼠均建立RIRI模型，术前24 h一次性经尾静脉注射相应的药物。

再灌注24 h后收集每组小鼠血清，使用全自动生化分析仪测量各组小鼠血清中血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平；光镜下观察肾组织病理变化；Western blot法检测肾组织中细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白的表达。

结果：与假手术组比较，模型组小鼠血清中Scr和BUN 水平明显升高（P＜0.01）；肾组织出现病理性改变，肾小管上皮细胞坏死，炎性细胞浸润；肾组织中ICAM-1和MCP-1蛋白表达水平明显升高（P＜0.01），p-Akt 蛋白表达水平轻微升高（P>0.05）。

与模型组比较，芬戈莫德组小鼠除肾组织中p-Akt蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）外，其余指标均明显改善（P＜0.01）。

与芬戈莫德组比较，芬戈莫德+wortmannin组小鼠的上述指标变化均逆转（P＜0.05或P＜0.01）。

结论：芬戈莫德能减轻RIRI模型小鼠的肾损伤，其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

ABSTRACT OBJECTIVE：To study the protective effect of fingolimod on renal ischemia reperfusion injury （RIRI）model mice and its mechanism. METHODS：A total of 60 mice were randomly divided into sham operation group，model group，fingolimod group （1 mg/kg）and fingolimod+wortmannin group [fingolimod 1 mg/kg+phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）specific blocker wortmannin 1.4 mg/kg]，with 15 mice in each group. Except for sham operation group，RIRI model was induced in other 3 groups，and those model mice were given relevant medicine via caudal vein at once 24 h before surgery. Serum of mice were collected in each group after 24 h perfusion. Serum levels of Scr and BUN were measured by automatic biochemical analyzer. The pathological changes of renal tissue were observed under light microscope. The protein expression of intercellular cell adhesion molecule-1 （ICAM-1），monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）and phosphorylated protein kinase B （p-Akt）in renal tissue were measured by Western blot assay. RESULTS：Compared with sham operation group，the serum levels of Scr and BUN in model group were increased significantly （P＜0.01）. Pathological changes were found in the kidney，and RIRI led to widespread renal tubular epithelial cell injury，apoptosis and inflammatory cells infiltration. The protein expression of ICAM-1 and MCP-1 in renal tissue were increased significantly （P＜0.01），the protein expression of p-Akt was increased slightly （P>0.05）. Compared with mo- del group，other indexes of fingolimod group were improved significantly （P＜0.01）except that the protein expression of p-Akt in renal tissue was increased significantly （P＜0.01）. Compared with fingolimod group，above indexes of fingolimod+wortmannin group were reversed （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Fingolimod can obviously ameliorate renal injury induced byRIRI in mice，the mechanism of which may be associated with the activation of PI3K/Akt signaling pathway.KEYWORDS Fingolimod；Renal ischemia reperfusion injury；Mice；Phosphatidylinositol 3-kinase；Phosphorylated protein kinase B肾缺血再灌注损伤（RIRI）是临床常见的病理过程，如处理不及时可能使多个脏器受累。

小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型缺血再灌注损伤(IRI)是器官移植、休克、动脉搭桥术后等普遍存在的问题。

肾脏是发生IRI极为常见的器官之一，尤其肾移植，不可避免的要经历一定程度的IRI,肾脏缺血再灌损伤是急性肾衰的常见原因。

对麻醉动物的肾动脉进行阻断和再通后，可引起肾脏缺血再灌注损伤。

在缺血再灌注过程中，钙超载、线粒体能量合成障碍、氧自由基的增多等因素导致肾小管内皮细胞脱落，肾脏组织结构的破坏进而使肾脏功能发生障碍。

1.实验动物SPF级Balb/C小鼠，雄性，周龄为4w~6w，体重为20g~22g。

2.实验分组：实验分组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组，每组15只动物。

3.模型周期24h、72h4.建模方法1. 选取20-22g左右小鼠，术前禁食12h，自由饮水。

2. 3％戊巴比妥钠(80mg／kg)腹腔注射麻醉,小鼠背部去毛，消毒备皮。

3. 在背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5cm处剪开皮肤及肌肉，可见到肾脏,小心分离出两侧肾脏的肾动脉，迅速用动脉夹夹闭两侧肾动脉。

4. 缺血45min后松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况。

5. 分两层缝合开口,待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。

6. 对照组不做缺血处理，其他操作相同。

7. 分别取再灌注0h、3h、6h、12h、24h、72h六个时间点取材。

麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80冰箱冻存。

同时取左肾组织留作病理标本，右肾组织分生标本。

5.模型的评价1 血清生化指标检测：取各时间点（0h、1h、3h、6h、12h、24h、72h)血清，检测血清BUN（尿素氮）和Scr（血肌酐）水平,评估肾功能。

2 肾系数检测摘取双侧肾脏后，生理盐水冲洗，称重计算肾系数。

肾系数=双侧肾重（mg）/体重（g）3 病理组织学检测：4％多聚甲醛溶液固定48h。

常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋。

血管再灌注实验报告1. 引言血管再灌注(Ischemia-reperfusion, I/R) 是指血液供应阻断后再恢复供应。

血管再灌注实验常被用于研究心脏、肝脏、肾脏等器官缺血再灌注损伤的机制和治疗方法。

本实验旨在通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度，探讨可能的保护措施。

2. 材料与方法2.1 实验动物雄性C57BL/6小鼠，体重22-26g，年龄8-10周。

2.2 实验组织心脏组织。

2.3 实验设计将实验动物随机分为以下组别：- 对照组(Sham)：动物接受手术操作，但没有缺血再灌注处理。

- 缺血再灌注组(I/R)：动物在缺血30分钟后再进行1小时的再灌注。

- 预处理组(PreC)：在缺血前15分钟，给予预处理药物。

2.4 缺血再灌注模型建立1. 手术动物采用深度麻醉并固定在手术台上。

2. 通过胸骨处切口，暴露心脏。

3. 用缝线将冠状动脉结扎。

4. 结扎30分钟后，解开缝线并进行1小时的再灌注。

5. 收集心肌组织样本。

2.5 组织损伤评价方法1. 心脏组织样本定量化。

2. 彩色素沉淀法(TTC staining) 观察心脏梗死面积。

3. 光镜下观察组织结构。

2.6 统计分析采用统计学软件进行数据的描述性分析，并使用方差分析(ANOVA) 进行组间比较，p < 0.05认为差异有统计学意义。

3. 结果3.1 心脏梗死面积变化通过TTC染色观察心脏梗死面积的变化，在I/R组中心脏梗死面积显著增加(p < 0.05)，而在预处理组中心脏梗死面积较小，差异有统计学意义。

3.2 组织结构观察使用光镜观察心肌组织结构变化，发现I/R组心肌细胞出现明显的坏死和水肿，而预处理组心肌细胞结构相对完整，坏死和水肿程度明显减轻。

4. 讨论本实验通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度。

结果表明，缺血再灌注会导致心肌梗死面积增加和心肌组织结构损伤。

然而，在预处理组中给予药物处理后，心肌梗死面积减小，心肌组织结构保持较好。

小鼠脑缺血再灌注损伤模型的建立及评价王朗;卢燕云;周琴;水小兰【摘要】目的：探讨稳定的小鼠脑缺血再灌注损伤模型的制备和评价方法，评价缺血时间的延长对缺血再灌注损伤的影响。

方法采用硅胶线栓暂时性阻塞小鼠大脑中动脉制备脑缺血再灌注损伤模型，通过神经功能评分、TTC染色、伊文氏蓝染色、Tunel染色、免疫荧光染色等方法评价45 min和60 min缺血再灌注时间所导致的梗死体积、神经功能、神经元凋亡以及氧化应激水平的差异。

结果与45 min组相比，60 min缺血再灌注损伤使脑梗死体积增加了78.21%、神经功能评分升高了31.66%，神经元凋亡比例增加了44.49%，血脑屏障的破坏程度和氧化应激水平随着缺血时间的增加也明显增高。

结论通过严格的手术操作和严密的术中监测，可以获得稳定的小鼠脑缺血再灌注损伤模型，缺血时间的延长显著增加了脑组织的损伤。

%Objective To establish a murine cerebral ischemia-reperfusion model and a scientific evaluation system for the model, and to evaluate the effect of prolonged ischemia time on ischemia reperfu-sion injury. Methods Transient middle cerebral artery occlusion was used for establishing the murine cerebral ischemia-reperfusion model. Neurological score, TTC staining, Evan's blue staining, Tunel staining and immunofluo-rescence technique were used to compare the infarct volume, neurological deficit, blood brain barrier (BBB) disrup-tion, neuronal apoptosis and oxidative injury between 45 min ischemia and 60 min ischemia. Results Compared with 45 min ischemia, 60 min ischemia increased infarct volume by 78.21%, neurological score by 31.66%, neuronal apoptosis rate by 44.49%, and significantly exacerbated BBB disruption and oxidative injury.Conclusion Strict op-eration and rigorous intraoperative monitoring can obtain stable murine ischemia-reperfusion injury model. Prolonged ischemic time led to worsened brain injury.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2014(000)020【总页数】5页(P2965-2969)【关键词】脑缺血再灌注损伤;凋亡;氧化应激;小鼠【作者】王朗;卢燕云;周琴;水小兰【作者单位】武汉大学人民医院心血管内科，湖北武汉 430060; 武汉大学心血管病研究所，湖北武汉 430060;武汉大学心血管病研究所，湖北武汉 430060;武汉大学人民医院神经内科，湖北武汉 430060;武汉大学人民医院心血管内科，湖北武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R-332脑卒中是多种脑血管疾病的严重表现形式，具有极高的致残率和较高的致死率，是危害人类生命健康的最主要疾病之一。