肾缺血再灌注损伤大鼠模型具体步骤及说明

大鼠脑缺血再灌注损伤模型造模方法
方法简述：
体重230-260g雄性SD大鼠，禁食，自由饮水，麻醉，颈部去皮，仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA) 和颈内动脉(ICA)，在CCA 远心端和近心端及ECA处挂线备用。

用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。

然后在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将栓线插入到ICA, CCA远心端的细线轻轻系牢栓线，用眼科镊轻推栓线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18mm时，结扎固定好栓线及ECA血管，后拔除栓线至ECA，再次扎紧ECA，缝合，术后给予青霉素抗炎。

注意事项：
1. 保温:60W白炽灯高度为37cm，直接照射能使肛温保持在37℃。

2. 推栓线时，要将血管放松至原来状态,且保证标记点在分叉处。

3. 栓线事先剪好。

4. 栓线不能在血管里反复进退，否则极容易造成蛛网膜下腔出血。

5. 插入线栓要轻柔熟练，速度尽可能快，以避免时间长了血管内血栓形成。

1. 建立肾缺血模型，观察肾缺血对肾脏功能的影响。

2. 探讨肾缺血对肾脏组织形态学、病理生理学及生物化学指标的影响。

3. 为临床肾缺血疾病的防治提供理论依据。

二、实验材料1. 实验动物：清洁级雄性SD大鼠，体重200-250g，共40只。

2. 实验仪器：手术显微镜、超声刀、手术器械、生理盐水、肝素、0.9%氯化钠溶液等。

3. 实验试剂：苏木素-伊红（HE）染色试剂盒、Masson染色试剂盒、肾小球滤过率（GFR）测定试剂盒、血清肌酐（Scr）测定试剂盒、尿素氮（BUN）测定试剂盒等。

三、实验方法1. 实验分组：将40只SD大鼠随机分为4组，每组10只，分别为正常组、肾缺血模型组、缺血预处理组、肾缺血+预处理组。

2. 建立肾缺血模型：采用腹主动脉夹闭法建立肾缺血模型。

麻醉大鼠后，无菌条件下进行手术，暴露腹主动脉，使用无创动脉夹闭腹主动脉，持续夹闭时间为45分钟。

3. 缺血预处理：在建立肾缺血模型前30分钟，给予大鼠预先给予一定浓度的肝素和生理盐水溶液，以降低肾缺血引起的肾脏损伤。

4. 观察指标：（1）肾小球滤过率（GFR）：通过测定大鼠尿量、血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）浓度，计算GFR。

（2）肾脏组织形态学：采用HE染色和Masson染色观察肾脏组织形态学变化。

（3）肾脏生物化学指标：检测血清Scr和BUN浓度。

5. 数据处理：采用SPSS 22.0软件进行统计学分析，数据以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）和LSD检验。

1. 肾小球滤过率（GFR）：与正常组相比，肾缺血模型组GFR显著降低（P<0.05）；缺血预处理组和肾缺血+预处理组GFR与正常组相比无显著差异（P>0.05）。

2. 肾脏组织形态学：HE染色结果显示，肾缺血模型组肾脏组织出现明显的水肿、炎症细胞浸润和肾小球纤维化等病变；缺血预处理组和肾缺血+预处理组肾脏组织形态学变化与正常组相似。

血管再灌注实验报告1. 引言血管再灌注(Ischemia-reperfusion, I/R) 是指血液供应阻断后再恢复供应。

血管再灌注实验常被用于研究心脏、肝脏、肾脏等器官缺血再灌注损伤的机制和治疗方法。

本实验旨在通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度，探讨可能的保护措施。

2. 材料与方法2.1 实验动物雄性C57BL/6小鼠，体重22-26g，年龄8-10周。

2.2 实验组织心脏组织。

2.3 实验设计将实验动物随机分为以下组别：- 对照组(Sham)：动物接受手术操作，但没有缺血再灌注处理。

- 缺血再灌注组(I/R)：动物在缺血30分钟后再进行1小时的再灌注。

- 预处理组(PreC)：在缺血前15分钟，给予预处理药物。

2.4 缺血再灌注模型建立1. 手术动物采用深度麻醉并固定在手术台上。

2. 通过胸骨处切口，暴露心脏。

3. 用缝线将冠状动脉结扎。

4. 结扎30分钟后，解开缝线并进行1小时的再灌注。

5. 收集心肌组织样本。

2.5 组织损伤评价方法1. 心脏组织样本定量化。

2. 彩色素沉淀法(TTC staining) 观察心脏梗死面积。

3. 光镜下观察组织结构。

2.6 统计分析采用统计学软件进行数据的描述性分析，并使用方差分析(ANOVA) 进行组间比较，p < 0.05认为差异有统计学意义。

3. 结果3.1 心脏梗死面积变化通过TTC染色观察心脏梗死面积的变化，在I/R组中心脏梗死面积显著增加(p < 0.05)，而在预处理组中心脏梗死面积较小，差异有统计学意义。

3.2 组织结构观察使用光镜观察心肌组织结构变化，发现I/R组心肌细胞出现明显的坏死和水肿，而预处理组心肌细胞结构相对完整，坏死和水肿程度明显减轻。

4. 讨论本实验通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型，观察心肌组织的损伤程度。

结果表明，缺血再灌注会导致心肌梗死面积增加和心肌组织结构损伤。

然而，在预处理组中给予药物处理后，心肌梗死面积减小，心肌组织结构保持较好。

缺血再灌注的实验原理缺血再灌注是指在一段时间内，组织或器官遭受缺血（血液供应不足）后，再次供应血液的过程。

这个过程中会引起一系列的病理生理学变化，对于研究机体的对缺血和再灌注的适应和损伤机制具有重要的意义。

缺血再灌注的实验原理主要包括以下几个方面：1. 缺血模型的建立：缺血再灌注实验的第一步是建立缺血模型。

常用的方法包括结扎、缩窄或堵塞供应血管等手段，使组织或器官在一段时间内得不到足够的血液供应。

常用的实验动物包括小鼠、大鼠和兔子等。

2. 缺血时间的控制：缺血的时间是实验中的关键因素之一，不同的缺血时间会引起不同程度的损伤。

通常情况下，短时间的缺血（如15分钟）可以模拟暂时性缺血，而长时间的缺血（如1小时以上）则会导致严重的缺血损伤。

在实验过程中，可以通过监测血流或组织氧分压等指标来控制缺血的时间。

3. 再灌注的时间和方式：在缺血一定时间后，再灌注是恢复组织或器官正常功能的关键步骤。

通常，再灌注可以通过解除结扎、放松或恢复供应血管等方式进行。

再灌注的时间和方式也会对实验结果产生影响，因此需要根据实验目的进行合理选择。

4. 生理指标的监测：在缺血再灌注实验过程中，可以通过监测一系列生理指标来评估实验结果。

包括血流量、血液氧分压、血液乳酸水平、组织或细胞损伤指标（如丙氨酸氨基转移酶、肌酸激酶等）等。

同时，还可以通过组织病理学检查来观察组织结构的变化和损伤程度。

5. 病理生理学变化的分析：通过对实验结果的分析，可以了解缺血再灌注对组织和器官的损伤程度以及机体的适应能力。

例如，长时间的缺血再灌注可以引起严重的组织坏死和炎症反应，而短时间的缺血再灌注则可以触发组织保护性的适应机制，如激活细胞凋亡、抗氧化反应等。

综上所述，缺血再灌注实验是一种常用的研究手段，通过建立缺血模型及控制缺血时间和再灌注方式来模拟缺血再灌注损伤，通过监测各种生理指标和分析病理生理学变化来研究机体对缺血再灌注的适应和损伤机制。

健脾清化方对急性肾缺血再灌注SD大鼠氧化应激损伤的影响急性肾缺血再灌注损伤（acute kidney injury, AKI）是一种常见的临床病理生理过程，其发病机制涉及多种复杂因素，包括氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等。

健脾清化方是一种中草药复方，据传统中医理论，健脾清化方具有补脾益气、清热解毒的功效。

本研究旨在探究健脾清化方对急性肾缺血再灌注SD大鼠氧化应激损伤的影响，为临床应用提供科学依据。

一、急性肾缺血再灌注SD大鼠模型建立1.1 实验动物选择健康雄性SD大鼠，体重200~250g，随机分为健脾清化方治疗组、模型组和对照组。

1.2 模型制备采用肾缺血30分钟再灌注法制备急性肾缺血再灌注模型。

术前24小时禁食，术前12小时禁水。

大鼠随机分组，分别进行左肾血管结扎和右肾血管结扎手术制备健脾清化方治疗组和模型组。

对照组大鼠仅暴露于手术环境。

二、健脾清化方对急性肾缺血再灌注氧化应激指标的影响2.1 肾功能指标测定分别在术后6、12、24小时采集大鼠血清，检测肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平。

结果显示健脾清化方治疗组的肾功能指标明显低于模型组，表明健脾清化方能够改善急性肾缺血再灌注损伤对肾功能的影响。

2.2 氧化应激指标测定采集大鼠肾组织，检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。

结果显示健脾清化方治疗组的MDA含量显著降低，SOD活性显著增加，表明健脾清化方能够减轻急性肾缺血再灌注损伤对氧化应激的影响。

三、健脾清化方对急性肾缺血再灌注SD大鼠病理学损伤的影响3.1 组织学观察采集大鼠肾组织，进行H&E染色观察。

结果显示，健脾清化方治疗组的肾小管坏死、间质水肿、炎细胞浸润等病理学损伤明显减轻，表明健脾清化方能够减轻急性肾缺血再灌注损伤对肾组织的损害。

五、结论健脾清化方能够显著改善急性肾缺血再灌注SD大鼠的氧化应激损伤，减轻肾组织的病理学损伤，抑制炎症因子表达，从而保护肾脏功能。

肾缺血再灌注（IR）模型急性肾损伤动物模型
动物模型 / 泌尿及生殖系统疾病模型 / 肾缺血再灌注（IR）模型当前，主要使用两种的肾缺血再灌注（IR）模型：双侧肾IR和单侧肾IR。

通常使用双侧缺血性急性肾损伤（AKI）模型，因为它被认为与人类病理状况更为相关，在人体病理状况中，血液供应通常受到两个肾脏的影响，并且与临床情况相似。

通常，可以通过使用小型非创伤性血管钳夹肾动脉，然后进行再灌注来建立模型。

从技术上讲，该手术可通过腹侧（腹腔镜）或背侧（腹膜后）方式进行。

此外，肾动脉钳制法的一个重要优点是它是易于重复的方法。

尽管存在一定的局限性，但该模型仍被研究人员广泛使用，并且有望因其可重复性而对AKI和治疗的潜在机制提供更重要的数据。

Hematoxylin and eosin stained kidney sections. Ischemic changes including tubular necrosis (tn) and
hemorrhage (hg) were highly observed in I/R and L1 groups at 24 h post-IR(Nahid Aboutaleb et al.2019)
Fig.1 Blood urea nitrogen (BUN) level of C57BL/6 mice after different ischemia-reperfusion periods.
(Weietal.2012)
这里提供以下肾功能测量：
·血尿素氮（BUN）·血清肌酐·促炎细胞因子·免疫组织化学·组织学观察。

线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备方法Pipilulu目录：第一部分线栓模型制备理论及经验1插线法局灶性脑缺血模型简介2大鼠颈部及颅内动脉解剖及常用插线位置3大鼠大脑中动脉阻断实验的总结和心得（zhuqing0506战友）4 也谈大鼠MCAO模型的实验体会（bladeflyer战友）5 我的做MCAO模型的一些体会（intelligentwang战友）6 线栓法大鼠脑缺血再灌注模型（MCAO）制备技巧（ysf2k战友）第二部分线拴模型制作过程（雨后天晴战友）第三部分灌注取脑（pipilulu战友）第四部分 TTC染色（pipilulu战友）前 言相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。

为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO 模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。

第一部分线栓模型制备理论及经验⒈插线法局灶性脑缺血模型简介八十年代Koizumi和Longa创用了不开颅的大鼠MCA可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。

该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。

从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。

此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。

1994年Huang等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。

1997年Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。

阿托伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用摘要] 目的：观察阿托伐他汀对肾缺血再灌注损伤的保护作用。

方法：30 只SD大鼠随机分为3组:（1）假手术组Sham;（2）缺血再灌注组I/R;（3）阿托伐他汀组Ators. 给药2 周后，建立肾缺血再灌注损伤模型, 再灌后24h 取血及肾脏，血清测定尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）水平，肾组织匀浆测超氧化物歧化酶( SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。

结果：与假手术组比,缺血再灌注组BUN、Scr与MDA含量升高,SOD 活性降低(P<0.01); 阿托伐他汀组BUN、Scr和MDA 含量降低, SOD活性升高( P 均<0.01)。

结论：阿托伐他汀可通过抗自由基损伤和减轻脂质过氧化实现对肾损伤的保护作用。

【关键词】肾缺血再灌注损伤; 超氧化物歧化酶; 丙二醛肾缺血再灌注损伤(ischemia/ reperfusion injury ,I/ RI) 是临床上常见病理生理现象, 在缺血性急性肾损伤的病理过程中起重要作用，是多因素参与的复杂的病理过程。

他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂，目前已普遍用于临床治疗高脂血症。

近年来的研究发现,他汀类药物对肾脏也有一定的保护功能，但是否对肾缺血再灌注损伤有保护作用，这一观点目前少有报道。

为此本实验就阿托伐他汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用进行了初步研究，现将结果报告如下。

材料与方法1 材料：成年健康雄性SD大鼠（河北省实验动物中心提供），血清BUN、Scr、SOD、MDA试剂盒（南京建成生物制品公司）。

2 方法与步骤：2.1 分组与模型建立：在18-22℃实验室安静饲养两日后动物随机分为3 组(n=10)，即：（1）假手术组；（2）缺血再灌注组；（3）阿托伐他汀组。

动物分组后，阿托伐他汀组每日20mg/kg灌胃,持续2W。

假手术组和缺血再灌组每日等量生理盐水灌胃。

2W后复制模型，动物经1%戊巴比妥钠腹腔麻醉，开腹暴露双侧肾动静脉。