选修基因工程讲义二轮复习

①n代后，DNA分子有_2__n__个
②n代后，DNA链有_2_n_+_1_条 ③第__3__代出现完整的目的基因
④n代后，含引物的DNA分子有__2n ___个
⑤n代后，共消耗_2_n+1-_2__个引物
⑥第n代复制，消耗了__2_n___个引物
⑦n代后，完整的目的基因有_2_ n-2_n_个
基因表达载体的组成
文和图36)( ) 8．干扰素是我国批准生产的第一个基因工程药物。(选择性必
√ 修3 P90“资料卡”)( ) × 9．对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的。(选
择性必修3 P93正文)( )
√ 10．转基因作为一项技术本身是中性的。(选择性必修3 P103正
文)( ) 11．治疗性克隆是指利用克隆技术获得胚胎，并将胚胎孕育成
在逆转录酶的作用下，以mRNA为模板按照碱基互补配对的原则可以合成cDNA
(2)[全国卷Ⅰ，40(1)]质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有 ___能__自__我_复__制__、_具__有__标__记_基__因__(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足 上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
体细胞
以农杆菌转化法为例： 将目的基因插入Ti质粒的T-
DNA上 ↓
转入农杆菌中 ↓
导入植物细胞 ↓
整合到受体细胞的DNA上
动物细胞
显微注射技术
受精卵
提纯含目的基 因的表达载体
↓ 显微注射
↓ 受精卵发育
↓ 具有新性 状的个体
微生物细胞
感受态细胞法
原核细胞 Ca2＋处理细胞
↓ 感受态细胞
↓ 基因表达载体与 感受态细胞混合
× (选择性必修3 P72正文)( ) × 4．目的基因就是指编码蛋白质的基因。(选择性必修3 P76

考点二 基因工程与疾病治疗
1.基因工程药物研制：
药物
胰岛素
干扰素
乙型 肝炎 疫苗
成分 蛋白质 糖蛋白 蛋白质
用途
治疗胰岛 素依赖型 糖尿病
治疗病毒 性肝炎和 肿瘤
预防 乙型肝炎
传统方法
从猪和羊的 胰腺中提取
从人血液 中提取
基因工程
通过基因工程技术利用 大肠杆菌生产
通过人白细胞干扰素基 因在受体细胞中的克隆 和表达获取 通过基因工程技术利用 酵母菌或哺乳动物细胞 生产
据图回答：
(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体DNA，需用
限制性核酸
内切酶同时酶切载体DNA和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组DNA分子的
大肠杆菌首先需要在含
的培养基上进行。(Fra bibliotek)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是
(填字母代号)。
RR
(3)为检测人乳铁蛋白基因是否成功表达，可采用
技术(填字母代号)。
④经过改造后的造血干细胞输回到患者
中并产生正常的血细胞。
(2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是
类型一 基因工程与遗传育种
大肠杆菌首先需要在含
的培养基上进行。
答案：(1)pH、渗透压、温度以及无菌等 糖、氨基酸、无机盐、维生素、血清等
答案：(1)含kanR质粒 限制性核酸内切酶 DNA连接酶(两种酶顺序可颠倒)
(1)
图细胞为镰刀形细胞贫血症患者的红细胞。导致这种病的
根本原因是
。
(2)图中A是
，
其作用为
。
(3)图中C的作用为
。
(4)完善以下操作步骤。
①将正常基因插入到

基因工程 是指按照人们的愿望,进行严格的 设计,并通过体外DNA重组和转基因等技术,赋 予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人 们需要的新的生物类型和生物产品.(又叫DNA 重组技术)
考点一、基因工程诞生的理论基础：
(1)DNA是生物的主要遗传物质。 (2)基因是控制生物性状的基本单位。 (3)遗传信息的传递遵循中心法则。 (4)生物界共用一套遗传密码子多DNA 片段,导入受体菌的群体中储存,各个受 体菌
直接分离： 鸟枪法 人工合成 反转录法
2）噬菌体或某些动植物病毒
三、基因的载体 —“分子运输车”
3、载体的种类：
质粒是一般专指细菌、酵母菌和放线菌等生 物中核区以外的环状DNA分子。
质粒是基因工程最常用的运载体。
最常用的质粒是 大肠杆菌的质粒， 其中常含有抗药基 因，如四环素的标 记基因。质粒的存 在与否对宿主细胞 生存没有决定性作 用，但复制只能在 宿主细胞内成。 • 大肠杆菌的质粒：
※ 利用PCR技术扩增目的基因
二、基因表达载体的构建 (核心)
1、基因表达载体的作用 a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并 遗传给子代
b、同时使目的基因能表达和发挥作用
二、基因表达载体的构建
2、基因表达载体的组成
目的基因 启动子 终止子
标记基因
二、基因表达载体的构建
化学合成
目的基因
比较上述三种目的基因提取方法的优缺点
优点 鸟枪法
操作简便 成本低
缺点
工作量大，盲目，分 离出来的有时并非一 个基因 操作过程麻烦，mRNA 很不稳定，要求的技 术条件较高 仅限于合成核苷酸 对较少化学合成 专一性最强 法
※ 利用PCR技术扩增目的基因
前提：一段已知目的基因的核 苷酸序列(合成引物) 原理：DNA的复制 条件：模板DNA、引物、四种脱 氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶等。 过程：变性→复性(退火)→延伸 结果：目的基因的数量呈指数增加(2n)

(5)已知YCF1特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上。据此分析，转基因杨树比野生 型能更好地适应高Cd环境的原因是________________________________。
相 较 于 草 本 植 物 ， 采 用 杨 树 这 种 乔 木 作 为 Cd 污 染 土 壤 修 复 植 物 的 优 势 在 于 _________(写出两点即可)。
6．愈伤组织的细胞排列整齐而紧密，且为高度液泡化、无定形态的薄壁细胞
( ×) 7．植物产生的种子能发育成新的个体，是种子细胞全能性的体现( × ) 8．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经组织培养获得的愈伤组织细胞基因都
是相同的( × ) 9．在动物细胞培养与植物组织培养中，都需要对培养基灭菌，还都需要用到
注：目的基因插入位置：插入至启动子下游，终止子上游
(3)将目的基因导入受体细胞的“3 大方法” ①导入植物细胞——农杆菌转化法(花粉管通道法、基因枪法)。 ②导入动物细胞——显微注射法(一般导入受精卵)。 ③导入微生物细胞——使用 Ca2＋处理细胞。 (4)理清目的基因的检测与鉴定 ①导入检测：DNA 分子杂交技术(使用 DNA 探针)。 ②表达检测转录：分子杂交技术检测mRNA
4．(教材选修3 P36“小知识”)说出植物组织培养的培养基组成。大__多__数__都__是__由__ _无__机__营__养__成__分__、__有__机__营__养__成__分__、__激__素__、__琼__脂__四__部__分__组__成____ 。
5．(教材选修3 P52“生物技术资料卡”)病毒灭活的含义是什么？_灭__活__是__指__用__物__ _理__或__化__学__手__段__使__病__毒__或__细__菌__失__去__感__染__能__力__，__但__是__并__不__破__坏__这__些__病__原__体__的__抗__原__结__构__ 。

解密26 基因工程核心考点一 基因工程的概念与操作工具分析1．基因工程的概念2．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）识别序列的特点：呈现碱基互补对称。

无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如，以中心线为轴，两侧碱基互补对称；=====CCAGG GGTCC 以=====AT 为轴，两侧碱基互补对称。

（2）切割后末端的种类（3）限制酶的选择技巧①根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类a ．应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择Pst Ⅱ。

b ．不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择Sma Ⅱ。

c ．为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用Pst Ⅱ和Eco R Ⅱ两种限制酶（但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点）。

②根据质粒的特点确定限制酶的种类a ．所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致，以确保产生相同的末端。

b．质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶SmaⅡ会破坏标记基因；如果所选酶的切割位点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。

3．“分子缝合针”——DNA连接酶（1）作用：将限制酶切割下来的DNA片段拼接成DNA分子。

（2）类型都缝合磷酸二酯键，如图：4．载体（1）条件与目的（2）作用①作为运载工具，将目的基因导入宿主细胞内。

②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。

5．DNA连接酶与限制酶的关系（1）限制酶和DNA连接酶的作用部位都是磷酸二酯键。

（2）限制酶不切割自身DNA的原因是该原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

（3）限制酶是一类酶，而不是一种酶。

（4）DNA连接酶起作用时不需要模板。

6．限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶等相关酶的分析比较考法一（2020·浙江高考真题）下列关于基因工程的叙述，正确的是（）A．若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定B．抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。

的诞生和发展的意义 为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件
。
• ⑷1985年，穆里斯等人发明了PCR,对于基因工程的诞生和发展的意
义 为获取目的基因提供了有效手段。
有关核酸的方向性问题：
①核苷酸：
5
1
4
3
2
1’碳连碱基
2’碳（脱氧核糖连无氧；核糖有氧）
3’碳连羟基（-OH）
5’碳连磷酸
②一条脱氧核苷酸链（DNA单链）:
第四轮循环即DNA复制4次，共形成24＝16个DNA分子，其中含有最初模板链的2个
DNA分子含有引物A或引物B，其余14个DNA分子均含有引物A和引物B，所以第四
轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例为14/16＝7/8
第四轮循环产物中含
有引物A的DNA片段
所占的比例为？
15/16
离出目的基因。 第三个循环，当以
第二个循环得到的新片段为模板时，
因为这个片段的长度就是需要扩増的
长度，所以当第三个循环完成时，这
个片段是需要的长度，且是双链DNA，
这就得到了需要的目的基因了。所以
至少要3个循环才能分离出目的基因。
PCR反应相关计算:
4．利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。
氨酸-甘氨酸），该发光基团可利用定点突变技术使第66位酪氨酸换成组氨酸，即
可发出更明亮的蓝光，成为蓝色荧光蛋白（图4）。
定点突变第一步得把突变位点设计在引物上，据图中信息人工合成短 DNA 引物
应包含的序列是 AGAGTGCTC 。
定点诱变技术是近年来生物工程研究中发展迅速的一个领域。经典的大引物PCR定
扩增，得到融合基因。 图中引物2或引物3设计的要求是

基因工程可以克服自然状态下远缘杂交 的不亲和性，人为实现种间遗传物质的 交换，C正确；基因工程的基本原理是 DNA重组，D错。
2．下表是关于基因工程中有关基因操 作的名词及对应的内容，正确的组合是 ()
供体 剪刀 针线 载体 受体
限制性 DNA 提供目 大肠 A 质粒 核酸内 连接 的基因 杆菌
(1)限制性核酸内切酶能够识别特定的 __核__苷__酸__序__列____，并在特定的__位__点____ 上进行切割。 (2)DNA连接酶可以将___外__源__基__因_____ 和__载__体__D_N__A___连接在一起。
(3)质粒是能够__自__主__复__制___的双链环状 DNA分子，最常用的质粒是_大__肠__杆__菌__ 的质粒，含有__抗__生__素__抗__性__基因，是重 组基因导入受体细胞的标志。
载体
断开特定 使两 通过质粒、
作用 实质
部位两核 苷酸间的 磷酸二酯
DNA片 段之间形 成磷酸二
病毒感染等 特性将目的 基因携带至
键
酯键 受体细胞中
限制酶 DNA连接酶 载体
作用 特点 (条件)
(1)识别 特定的 核苷酸
序列 (2)在特 定位点 上切割
(1)E·coli DNA连接酶 只连接粘性
末端
→表达
将含有目的 基因的表达 载体提纯→ 取卵(受精 卵)→显微注 射→受精卵 发育→获得 具有新性状
的动物
Ca2＋处理细 胞→感受态 细胞→重组 表达载体与 感受态细胞 混合→感受 态细胞吸收 DNA分子
易误警示 (1)以植物细胞作为受体细胞可采用体细 胞，经植物组织培养获得转基因植物， 原理是植物细胞的全能性。
分子
载体DNA连接在一起

农杆菌转化法
特点:
能感染双子叶植物和祼子植物,对 单子叶植物无感染能力
Ti质粒的T—DNA可转移至受体细 胞并整合到其染色体上
转化过程:
Ti质粒 目的基因
构建
表 达
转入
农 杆Βιβλιοθήκη 导入载菌体
植 物 细 胞
插入
植物细胞 表达 染色DNA
新 性 状
⑶导入微生物细胞
①原核生物特点： 繁殖快、单细胞、 遗传物质少
c、延伸 （70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模 板互补的_D_N_A_链____。
⑶人工合成：
化学合成法:
蛋白质 的氨基
mRNA 推测 的核苷
推测
结构基因 的核苷酸
酸序列
酸序列
序列
化学 合成
目的 基因
2.基因表达载体的构建——核心
⑴构建过程
质粒
同一种
目的基因 限制酶处理
一个切口 两个黏性末端
④标记基因 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而 将含有目的基因的细胞筛选出来； （供重组DNA的鉴定和选择）
它们有什么作用？
练习3.限制性核酸内切酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一， 限制性核酸内切酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC一。在质粒上 有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶Ⅱ的切点。 ⑴请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。 ⑵目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
光素酶能催化荧光素产生荧光）连接成融合基因（表达的蛋白质能
保留两种蛋白质各自的功能），然后构建重组表达载体。
（3）在过程①、②转化筛选时，过程_②____中T-DNA整合到 受体细胞染色体DNA上，过程__①_____在培养基中应加入卡那 霉素。

基因工程和细胞工程 复习学案*考点突破：一、基因工程的操作工具和操作程序： 【知识应用】1、（2012·新课标，40）根据基因工程的有关知识，回答下列问题。

（1）限制性内切酶切割DNA 分子后产生的片段，其末端类型有 和 。

（2）质粒运载体用Eco R Ⅰ切割后产生的片段如：为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA 除可用Eco R Ⅰ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是______________________________________________。

（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA 连接酶有两类，即 DNA 连接酶和 DNA 连接酶。

（4）反转录作用的模板是 ，产物是 。

若要在体外获得大量反转录产物，常采用 技术。

（5）基因工程中除质粒外， 和 也可作为运载体。

2、应用生物工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。

请据图回答下列问题： （1）在培育转人生长激素基因牛的过程中，①过程是指 ，被称为基因工程的核心步骤。

其需要的工具酶是 ，②过程常用的方法是 。

（2）在抗虫棉的培育过程中，进行④过程最常采用的方法是 ，当棉花受体细胞是体细胞时，可利用 ，培育出抗虫棉个体（3）转基因技术是否成功，需要对受体细胞进行分子水平的检测，首先是检测受体细胞 上是否插入目的基因，这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键，检测的方法是 。

最后还要检测目的基因是否翻译成了相应蛋白质，利用的技术是_________________。

【归纳总结】1．思考与操作工具有关的问题 (1)三种操作工具化学本质都一样吗？(2)质粒都可以当做运载体吗？运载体的必要条件是什么？2．思考与操作程序有关的问题(1)基因工程的基本操作步骤中哪几步用到了限制酶？基因表达载体的构建必须用到同一种限制酶吗？(2) 将目的基因导入受体细胞二、细胞工程（一）植物细胞工程： 图为马铃薯一番茄植株的栽培过程示意图，据图回答。

与DNA分子相关的酶 （学案P4,2）
限制酶
DNA连接酶
解旋酶
DNA聚合酶
例2 科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因 抗盐烟草。图6是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的 DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答 ：
（3）为筛选出已导入重组质粒的农杆菌，应在培养基中 加__M_抗__生__素______。 （4）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，在个体水 平上鉴定之前，常用放_射__性__同__位_素__标__记__的__抗_盐__基__因_____ 作探针进行分子杂交测试。
用一种限制酶处理， 易出现质粒和目的基 因自身环化，和质粒 与目的基因的反向连 接，影响表达。
问问问构题题题建51：3基：：在因能若构表不用建达能B基载a选m因体用H表时IS和达，mH载可aiIn切体以d割I时形II两外，成种源限哪限D制些N制酶产A酶的物和切选？质割择粒外上？源要D注N意A和哪质些粒问，题？ 问问题题24：：若若只用使两用种限Ec制oR酶I一与种选限用制一酶种切限割制外酶源切D割N对A和比质，粒有，什构么建优基点？ 因表达载体时，可以形成哪些产物？
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接， 形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_______B_a。m在H 导Ⅰ入重 组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用 添加_____抗__生_素的B培养基进行培养。经检测，部分含有重组质 粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的 原因是____用__一__种_限__制__酶__，__容_易__产__生__基。因与质粒反向连接。
例2 科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基 因抗盐烟草。图6是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的 DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答 ：

栏目 导引
专题十问题： (1)经 BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体
Sau3A Ⅰ 酶切后的产物连接，理由是 被____________ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 __________________________________________________ 。
1.基因工程的诞生(Ⅰ) 2.基因工程的原理及技术(含 PCR) (Ⅱ) 3.基因工程的应用(Ⅱ) 4.蛋白质工程(Ⅰ)
5．植物的组织培养(Ⅱ) 6.动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅰ) 7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)
专题十六
基因工程和细胞工程
[宏观把脉]
栏目 导引
专题十六
基因工程和细胞工程
考点一
基因工程
(2016· 高考全国卷乙，40)某一质粒载体如图所示，外 源 DNA 插入到 Ampr 或 Tetr 中会导致相应的基因失活(Ampr 表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr 表示四环素抗性基因)。有人 将此质粒载体用 BamHⅠ酶切后， 与用 BamH Ⅰ酶切获得的 目的基因混合，加入 DNA 连接酶进行连接反应，用得到的
↓
GATCC CCTAG↑ G
GATCA ACTAG↑ T
↓
GATC
AGCTT TTCGA
↑
CTAG↑
A
栏目 导引
专题十六
基因工程和细胞工程
栏目 导引
专题十六
基因工程和细胞工程
(1) 用 图 中 质 粒 和 目 的 基 因 构 建 重 组 质 粒 ， 应 选 用
BclⅠ和HindⅢ 两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基 ________________ DNA连接 酶作用后获得重组质粒。为了扩 因片段，通过____________ 感受 态的大肠杆菌。 增重组质粒，需将其转入处于________

(单选)。
A.含B基因的染色体缺失 聚合酶失活
基因发生基因突变 基因的启动子无法启动转录
(2)从水稻体细将该序列与Luc基因(表达的荧光素
酶能催化荧光素产生荧光)连接成融合基因(表达的蛋白质能保留
两种蛋白质各自的功能),然后构建重组表达载体。
分子杂交技术 功显示
(DNA 和 mRNA 之 出杂

间)
交带
第三步
目的基因是否翻译成蛋 白质
抗原—抗体杂交
个体水平 鉴定
根据目的基因表达出的性状判断,包括做抗虫、抗病的 接种实验,以确定是否有抗性以及抗性的强弱;对基因 工程产品与天然产品的功能进行活性比较,以确定功 能是否相同
12/9/2021
10
二、蛋白质工程 1.蛋白质工程
12/9/2021
11
2.蛋白质工程与基因工程的比较
蛋白质工程
基因工程
预期蛋白质功能→设计预期 过 的蛋白质结构→推测应有的 程 氨基酸序列→找到相对应的
获取目的基因→基因表达 载体的构建→将目的基因 导入受体细胞→目的基因
脱氧核苷酸序列 区 别实 定向改造或生产人类所需的
①E·coli DNA 连 接酶只能连接黏 性末端 ②T4 DNA 连接酶 能连接黏性末端 和平末端
①能在宿主细胞内稳 定存在并大量复制 ②有一个至多个限制 酶切割位点 ③具有特殊的标记基 因
12/9/2021
2
限制酶
DNA 连接酶
载体
常用 类型
ESmcoaRⅠⅠ限限 制制 酶酶、E酶 酶·c、olTi 4DDNNAA连连接接
步骤组成一轮循环。
(4)PCR扩增时,复性温度的设定是成败的关键。复性温度过高会破

第1讲基因工程和细胞工程基础自查明晰考位[纵引横连建网络]提醒：特设长句作答题，训练文字表达能力[边角扫描全面清]提醒：判断正误并找到课本原话1．基因工程的相关判断(1)携带链霉素抗性基因受体菌的筛选必须通过分子检测(×)(2)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通过分子检测(×)(3)一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列(√)(4)用限制性核酸内切酶可以切割烟草花叶病毒的核酸(×)(5)每个重组质粒至少含有一个限制性核酸内切酶识别位点(√)(6)自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上，属于基因工程(×)(7)转抗虫基因的植物，不会导致昆虫群体抗性基因频率增加(×)(8)重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子中脱氧核糖和磷酸交替连接(×)(9)应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其是否完全表达(×)(10)动物的生长激素基因转入植物后不能表达(×)2．细胞工程的相关判断(1)产生抗人白细胞介素­8抗体的杂交瘤细胞的筛选必须通过分子检测(√)(2)21三体综合征的诊断必须通过分子检测(×)(3)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是组织培养(√)(4)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(√)(5)乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养(×)(6)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞(×)(7)动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体体现了细胞的全能性(×)(8)体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体(×)(9)单克隆抗体技术可用于治疗老年痴呆症(√)(10)细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行(×)考点梳理整合突破整合考点20 基因工程和细胞工程[考点突破固考基]1．理清基因工程3种操作工具的作用与特点限制酶DNA连接酶载体作用切割目的基因和载体拼接DNA片段形成重组DNA分子携带目的基因进入受体细胞作用部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键作用特点(条件) (1)识别特定的核苷酸序列；(2)在特定位点上切割DNA分子(1)E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端；(2)T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端(1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；(2)有一个至多个限制酶切割位点；(3)具有特殊的标记基因2.掌握基因工程的操作步骤(1)目的基因的获取途径：方法具体操作直接分离从自然界已有的物种中分离，如从基因文库中获取人工合成化学合成已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用化学方法合成，不需要模板反转录法以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成PCR技术扩增目的基因DNA受热变性后解链为单链，引物与单链相应互补序列结合，然后在热稳定性DNA聚合酶作用下延伸(2)基因表达载体的构建——重组质粒的构建：①表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。

应试基础必备
a．启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端， 是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出 mRNA。 b．终止子：一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。 c．标记基因：筛选、鉴别受体细胞是否含有目的基因。
③基因表达载体的构建方法
考点55 基因工程的工具及操作程序
考点55 基因工程的工具及操作程序
(2)DNA连接酶——“分子缝合针” ①功能：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸间的磷酸二酯键。 ②种类：E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。 (3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” ①作用：携带外源基因进入受体细胞，并在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 ②必须具备的条件： a．能在受体细胞中稳定保存并复制。载体可在细胞中自我复制或整合到染色体DNA上， 随染色体DNA进行同步复制。 b．具有一个至多个限制酶的切割位点，以便与外源基因连接。 c．具有特殊的标记基因，供重组DNA的检测与鉴定。 ③种类：最常用的载体是质粒，其他载体有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 3．基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 获取目的基因的途径主要有以下三种： ①从扩增获取 a．原理：DNA复制。 b．前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。 c．其他条件：一对引物、四种游离的脱氧核苷酸、热稳定的DNA聚合酶、能量等。
考点55 基因工程的工具及操作程序 考点56 基因工程的应用及蛋白质工程
考点55 基因工程的工具及操作程序
考点55 基因工程的工具及操作程序
应试基础必备 高考考法突破
考法1 基因工程的概念与操作工具分析 考法2 基因工程的基本操作程序
考点55 基因工程的工具及操作程序