黑色素染色法

。
性对 照染色， 镜 下控 制观察黑色素呈黑色为止 。如需要可在第五步后用 Ｏ ． ２ ％ 氯 化金 调色 ，也可选用 Ｖ ａ ｎ Ｇ ｉ ｅ ｓ ｎ ，Ｈ ａ Ｅ做对 比染色。银氨液的配制 保存及使用 中 ，各环节要求 洁净 避光等 ，类似网染。脱 色素漂 白法 即酸化高锰酸钾氧化 ２ — ４ ｈ后草酸漂 白。通常 ，要证实是否有黑色素存在 时，应作 连续切 片染 色：Ｈ Ｅ 染 色，黑色素染色、脱色素漂 白染色 ， 并使用 已知 阳性片作 阳性对照 对无 色素 性 黑色素瘤 ，此法不能显示 ，需用 Ｄ Ｏ Ｐ Ａ反应加 以证实 。银氨液浸染 时间不 宜 过 长（ 置３ ７ ￣ Ｃ 温箱作用 １ ｈ即可） ，除黑色素外 ，亲银颗粒 、嗜铬颗粒 、胆色素、 某 些脂褐素均呈黑色 ，应注意 区别。
家庭心理 医生
２ ０ １ ５年 ５ 月第 ５期
Ｆ ａ ｍｉ Ｉ Ｙ ｐ ｓ ｙ ｃ ｈ ｏＩ ｏ ｇｉ ｃ ａＩ ｄ ｏ ｃ ｔ ｏｒ
临 床 医学
黑色素 染色方法及诊 断农垦九三管理局 中心 医院 黑龙江 嫩江 １ ６ １ ４ ４ １ ）
【中 图 分 类 号 】 Ｒ ４ ４ 【 文 献 标 识 码 】Ａ 【文 章 编 号 】 １ ６ ７ ２ — ８ ６ ０ ２（ ２ ０ １ ５ ） ０ ５ — ０ １ ７ １ — ０ １
黑色 素由起源于神经嵴的黑色素 母细胞所产 生 ， 并移行 到皮肤 、眼和中枢神 经 系统 。正常情况下 ， 皮肤 的表面．毛囊、眼的虹膜、睫状体、脉络膜 ， 脑的软 脑膜， 黑质、迷走背核 交感神经节 ，脊神经 节的节细胞等均可有黑色素存在 常用的银氨液 浸染法还作 为亲银反应显示 类癌的亲银 细胞颗粒。虽 然此法大 多已被特异 的黑 色素瘤抗体 的免疫组化染 色所取代。但 常需结合脱色 素漂白法 的应用 。现以对银氨液浸染法和硫 酸亚铁法操 作方法及诊断应用进行分析。 ｌ染色方法

结缔组织染色法Mallory三色染色法：胶原和网状纤维蓝色，软骨、淀粉样变物质淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒红色，髓鞘和红细胞橘红色。

2.Masson三色染色法：胶原纤维绿色，肌纤维红色，红细胞橘红色。

鉴别胶原纤维和肌纤维最宜采用的方法。

3.三联染色法：胶原纤维红色，网状纤维黑色，弹性纤维绿色，肌肉和红细胞淡黄色。

二.胶原纤维染色1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法：胶原纤维鲜红色，肌纤维、细胞质和红细胞黄色，胞核蓝褐色。

与胶原纤维染色相比的缺点是：易褪色和对比度差。

2.天狼星红（Sirius Red）苦味酸染色法：胶原纤维红色，细胞核绿色，其他黄色。

在偏光显微镜下可见4种胶原纤维。

三.网状纤维染色：包括：Gomori和James。

Gomori银氨染色法：网状纤维黑色，胶原纤维红色。

鉴别诊断中的应用：1）癌和肉瘤的鉴别。

2)恶性淋巴瘤和组织细胞肉瘤。

3）血管内皮细胞瘤和外皮细胞瘤。

4）黏液纤维瘤和黏液肉瘤。

四.弹性纤维染色：效果最好的固定液是：甲醛生理盐水。

Gomori醛复红染色法：弹力纤维深紫色，黏液紫色（肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色），背景不同程度的黄色。

1）配制后需在室温静置1-2日。

2）是碱性品红加入三聚乙醛和盐酸配制而成。

3）醛复红所谓的成熟是颜色为深紫色。

3)可使胃主细胞着色。

5）应放置在冰箱内保存。

五.显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法：维多利亚蓝+丽春红S：弹性纤维蓝绿色，胶原纤维红色，背景淡黄色。

六.横纹肌组织染色：Mallory磷钨酸苏木精染色法(PTAH)：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、横纹肌等均蓝色；胶原、网状纤维、骨基质及骨黄色或玫瑰红色。

1）要在室温下成熟。

2）可使用高锰酸钾促使PATH成熟。

3）乙醇分化时要保存一定的红色。

4）染色后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。

七.糖类染色：过碘酸的作用是氧化。

过碘酸-Schiff（PAS）染色法：糖原及其他PAS反应阳性物质红色，细胞核蓝色。

• 仪器分析方法，x-射线衍射法、红外光谱法( IR) ,电子光 谱学化学分析法( ESCR) 、电子顺磁共振波谱法( EPR) 等对其结构进行研究。
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23
黑色素鉴定
• 但单独的每一种都无法用来确认黑色素, 只能采用综合鉴 定法, 将各种鉴定实验所表现出的结果进行综合分析, 以此 来确认待测物是否为黑色素。
黑色素鉴定
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黑色素简介
• 天然黑色素是一种广泛存在与生物体的异源多聚芳香族化 合物，一般由吲哚化合物或者多酚氧化聚合而形成。
• 天然黑色素在水中难溶,且不溶于有机溶剂，可溶于碱溶 液，具有结构复杂、分子量高等特点。
• 同时具有很强的金属螯合能力，因为天然黑色素主要有苯 醌和对苯二酚两个功能基团，两个功能基团根据不同的 pH值，分别在金属离子吸收过程起着主导作用。
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黑色素简介
•天然黑色素是黑色食品中的主要活性成分，具有延缓衰老、 增强免疫力、促进造血功能、保护心血管、抗动脉粥样硬化 等功能特性，植物中的黑色素具有促进视红素再合成、Vp样 机能、改善血液微循环、抗溃疡、抗炎症、抗衰老等多种药 理活性。
•黑色素不仅是一类光保护剂、抗辐射剂、螯合剂、生物抗氧 化剂和免疫促进剂，而且还是一类生物半导体材料。
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18
黑色素合成
植物黑色素合成的底物主要为含有邻位酚羟基的多酚, 如没 食子儿茶素( ga llocatechin)、儿茶素( catech in)、4- 羟基儿 茶素( lecoantocyan-idin) 的聚合物, 经多酚氧化酶催化氧化 形成邻位醌。这些邻苯醌本来并没有太深的颜色, 但因为此 邻苯醌上拥有众多的助色团酚羟基, 因而颜色就迅速加深, 而 且, 在一定范围内, 聚合度越高, 含有的酚羟基越多, 那么其氧 化产物醌的色泽越深, 直至变成黑色。

❖ 显示脂类的基本原理 ：用易溶于脂类的染料, 使之溶于所检的脂质(如脂滴)中,使组织内的 脂类着色.
❖ 常用方法： 苏丹黑B法、油红O法、硫酸尼 罗蓝法 、苏丹Ⅲ染色法等
❖ 基本要求 ⑴ 不用石蜡切片. ⑵ 固定剂一般用Formalin保存磷脂较好. ⑶ 方法: ① 物理法:脂溶性染料,不溶于水,属 偶 氮染料.常用苏丹Ⅲ,Ⅳ,苏 丹黑 ,油红O等. ② 化学方法:硫酸尼罗蓝显示脂肪酸. ③ 选择 性提取法(对照)
❖ 差不多与此同时(1900-1935年)，发现疾病组织中出 现的物质变化，更促进了化学技术在病理学染色方法 中的应用，也丰富了在显微镜下显示无机物、色素、 脂类、糖类、蛋白质、核酸等物质的组织化学内容， 此后又出现了酶的组织化学等。由此可见，“组织化 学”一词的含意是随时代而变化的，由定位趋向于与 定量相结合的研究。
❖ 3、灌注固定法：从心血管途径将固定剂灌注到全 身或某一个器官，使细胞保持生活时的状态而不发 生移位，固定后再迅速取材。
三、制 片
❖ 涂片法、石蜡切片法、冰冻切片法 ❖ 最常使用的为恒冷箱冰冻切片法。
四、注意事项
❖ 1、实验所用的器械、器皿都必须清洁无污染。 ❖ 2、配制试剂时应使用双蒸馏水。 ❖ 3、固定、取材都应在冷的环境下进行。 ❖ 4、各种试剂的pH值都要调准，否则影响反应结果。 ❖ 5、所用试剂要纯，都必须达到分析纯(A·R级)。 ❖ 6、同时、同条件情况下做阴性和阳性对照。 ❖ 7、了解和掌握被检组织中所要测定的化学物质或
❖ 以下介绍McGee-Ruseell核固红法。 ❖ 1、操作步骤 ❖ (1) 石蜡切片常规脱蜡至水。 ❖ (2)核固红染液染色2一10分钟。 ❖ 核固红染液的配制：核固红2g，蒸馏水100ml洗涤2次，剩

自己动手做挑染非常困难，相对菜鸟看，第一次尝试，必须选择与头发本色色差不太大得，成效能很不错。
染发前，必须要确保头发是干净得，不能有摩丝、发胶等定型产品。而且，烫发必须要在染发前做，之间要相隔一周。过敏性皮肤要做过敏测试。
齐耳得短发，用一盒染发膏足以了。齐肩得中发，用1到2盒染发膏，至于长发，可能需要2到3盒。
xx的使用方法
15-20分钟，时间越长效果越好。
3．调成糊状的海娜粉放置50分钟，这样使海娜粉溶解的更加均匀，对头发的粘度和上天然植物色很有帮助。
4．将调好的海娜粉均匀涂抹在头发上，白发多的部位多涂抹，轻轻按摩3-5分钟。
5．用浴帽将头发包好停留2-3个小时，如用电加热只需要45分钟（稍长更好）
6．用清水洗干净即可，两日后再用洗发液清洗。
要别用热毛巾也许吹风机加热，使染发成效更好呢？田洪禹得提议是没必要，20摄氏度得室温已经足以了，热毛巾和吹风机反而能使得染发剂上色不均匀。
染发后及时补色
刚染完头发得，别用电夹板等靓发仪器，高温能严重伤害头发。
洗头时，要用温水。有人怕水温高能使头发褪色，索性用冷水洗。那也错误。
用太凉得水洗，洗发水和护发素得杂质能被锁在毛鳞片里，冲不干净，天长日长，
1.xx50xx，用沸水浸泡20分钟。
2.用“菊花水”将全部头发浸湿后，用热毛巾包一个小时，然后风干后用水洗净。
3.连续用3~5天即可见效果。
☆啤酒染发法变色效果：
黄色
在日本，有研究证明啤酒花的提取物可以用于染黑头发，但是我们用的啤酒和提取啤酒花毫无关联，而且实验证明，低浓度酒精褪色力很强。
染发步骤：
专家点评：
这两个方法是针对不同情况的白发而产生的，效果都很明显，都是充分发挥了何首乌的药用价值，而且安全无毒，环保健康，还有养发、护发和生发等多重作用。操作简单、经济实惠，可以尝试。

第１ 期
郭赓 艺， 等： 粒毛盘 菌 Ｙ Ｍ４ ０ ４黑色素发 酵、 纯化及其染 色效果
色素 的影 响 ， 确 定最 佳 发酵 条件 。
１ ． ５ 分级 分 离
１ ０ １
染发剂 ， 但 其 提取液 对天 然 白发 的染 发效果 较 差［ ７ ］ 。因此 ， 研究与开发天然染料的无毒染发剂
１ ０ ｄ 。发 酵 液 抽 滤 ２ ～ ３次 ， 收集发 酵液， 在
Ｚ ＨＷＹ 一 ２ １ ０ ２ 气浴摇床 ， 苏州净化设备有限公 司； 冷冻干燥机 ， 北京博 医康实验仪器有 限公 司； ７ ５ ２ 紫外可见分光光度计 ， 上海 菁华科技仪器有 限公 司； Ａ Ｃ ＱＵ Ｉ Ｔ Ｙ Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ Ｌ ＵＴ 液 质 联 用 仪 ， 美国
Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ 公 司。
吸 光度值 ， 绘 制 其 洗 脱 曲线 。收 集 主要 组 分 经 减
压 浓缩后 ， 于截 留分 子量 为 ２ ０ ０ Ｄ ａ的透 析袋 中透
１ 材料 与方法
１ ． １ 菌株
析４ ８ ｈ ， 冷 冻干燥 后 获得 Ｌ Ｅ Ｍ４ ０ ４的均一组 分 。
１ ． ６ 质 谱 分析
采用 质 谱 联 用 仪 对 Ｌ Ｅ Ｍ ４ ０ ４均 一 组 分 （ Ｌ Ｅ Ｍ４ Ｏ ４ 一 ａ ） 进行质谱 分析。分析条 件Ｅ ］ ： 电喷
果进 行 了评 价 ， 为粒 毛 盘 菌 黑 色 素 资 源 的 开 发利 用 提供 科学 依 据 。
黑色素（ Ｉ Ｅ Ｍ４ ０ ４ ） 。参考文献 ［ ７ ］ 的方法， 采用葡 聚糖 Ｇ － １ ０ ０ 凝胶柱 ， 以０ ． ５ Ｎａ Ｃ Ｏ。 为洗 脱 液 ，
Ｌ Ｅ Ｍ４ ０ ４的质 量 浓 度 为 ２ ０ ｍｇ ／ ｍＬ ， 进 样 量 为 ｌ ｍＬ ， 控 制 流速 为 ３ ０ ０／ ￣ Ｌ ／ ｍｉ ｎ ， 每 管 收集 ５ ｍＬ， 柱温保持 ２ ０℃。收集洗脱液于 ５ ２ ０ ｎ ｒ ｎ下测定

规培考试笔记｜特殊染色技术总结【常用染色方法】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色：Masson三色染色法。

2、胶原纤维染色：Van Gieson苦味酸酸性品红染色法。

3、网状纤维染色：醋酸氨银染色法。

4、弹力纤维染色：Verhoeff铁苏木素染色法。

5、横纹肌染色：Mallory磷钨酸-苏木素（PTAH）染色法。

•神经组织染色1、尼氏小体染色：硫堇染色法。

2、神经元和神经纤维染色：Bielschowsky改良法。

3、神经髓鞘染色：Weil染色法。

4、神经胶质细胞染色：Cajal神经胶质细胞染色。

5、能同时显示髓鞘和尼氏小体的染色方法是Luxolfastblue染色法。

•各类聚集物质染色1、脂类物质染色：苏丹Ⅲ染色法。

2、黏液物质染色：过碘酸雪夫染色（PAS染色），又称糖原染色。

3、黑色素染色：氨银染色法（Masson-Fontana染色法）。

4、淀粉样物质染色：刚果红特殊染色法。

•病原菌染色1、抗酸杆菌染色：改良的Ziehl-Neelsen染色法。

2、真菌染色：Grocott六胺银染色法。

3、螺旋体染色：Warthin-Starry染色法。

【染色结果及用途】•各类间叶组织染色1、结缔组织多色染色用苯胺蓝复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈蓝色；用亮绿色复染时，胶原纤维、软骨、黏液呈绿色。

肌纤维、红细胞、神经胶质呈红色，胞核呈清晰的蓝黑色。

主要用于肝脏和肾脏穿刺病理的诊断和鉴别。

2、胶原纤维染色镜下胶原纤维呈鲜红色，肌纤维胞质、神经胶质及红细胞呈黄色。

主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别诊断。

3、网状纤维染色镜下网状纤维呈黑色。

在免疫组化开展前用于癌与肉瘤、血管内皮肿瘤与血管外皮肿瘤的鉴别诊断，目前用于观察病变组织纤维化程度。

4、弹力纤维染色镜下弹力纤维呈黑蓝色。

用于显示真皮弹力纤维增生和变性等多种皮肤疾病，观察心内膜和血管壁中弹力纤维增生程度，显示肿瘤组织中的弹力纤维等。

5、横纹肌染色横纹肌纤维呈紫蓝色，胶原纤维和网状纤维呈棕红色。

各种染色方法苏木精—伊红染色法（HE染色法）石蜡切片技术里常用的染色法之一。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。

细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。

着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。

例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。

胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

活体染色活体染色是指一个获得动物或植物的细胞活组织被染色。

至于体外活体染色是指也获得动物或植物分离出来的一部分细胞活一部分组织被一种活体染色剂染色而不影响细胞活组织的生命。

活体染色与体外活体染色的主要区别：活体染色是在有机体内部，因此不在空气中而是在还原的环境中进行的，至于体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行的。

所以一种真正的活体染色剂就是在一种生物的活细胞的某种构造上面的染料，但对于细胞、对于组织和对于生命本身不发生任何有害的作用。

活体染料多为碱性染料，如中性红、健那绿、次甲基蓝、甲苯胺蓝、亮焦油紫等，它们解离后带正电，其中有的染料与胞内某些结构有专一性接合。

例如，中性红染液泡系，健那绿染线粒体。

DNA-Feulgen染色方法是DNA定量测定的主要染色方法之一。

其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA 分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。

Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。

也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。

Masson-Fontana 黑色素染色液简介：黑色素属于非血源性内生色素，是一组由黑色素母细胞产生的颜色从浅棕色到黑色的色素。

这种色素通常出现在皮肤表皮、眼睛、大脑的黑质和毛囊中。

黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成的黑色素可与蛋白质紧密结合。

黑色素另一个物理性质是能够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。

在病理情况下，这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。

在常规HE 染色中不呈黑色而是呈棕黄色或棕黑色。

许多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，如还原方法，如Masson-Fontana 银技术和Schmorl 三价铁-铁氰化钾还原实验；酶方法(如多巴反应)；荧光方法；免疫组织化学。

Leagene Masson-Fontana 黑色素染色利用黑色素具有将银氨溶液还原为金属银特性即嗜银反应原理来显示黑色素，染色后黑色素呈黑色，该法属于常用的黑色素特殊染色法，效果较其他染色理想。

组成：自备材料：1、 10%中性福尔马林固定液2、 温箱或水浴锅3、 蒸馏水操作步骤(仅供参考)：1、 固定: 10%中性福尔马林是最好的固定液，应当避免使用铬酸盐和氧化汞等固定液。

2、 切片: 所有类型的切片都可以处理，数值切片可能需要做一些调整。

3、 将实验切片及对照切片入蒸馏水中。

4、 入Fontana 氨银溶液，避光浸染或温箱孵育。

4、 蒸馏水多次洗净(5～6次)。

5、 入海波溶液处理切片。

6、 自来水处理。

7、 (可选)入中性红染色液，轻轻复染。

编号 名称DJ0021 3×50mlDJ0021 3×100mlStorage试剂(A): Fontana 氨银溶液 50ml 100ml 4℃ 避光 试剂(B): 海波溶液 50ml 100ml RT 试剂(C): 中性红染色液 50ml100ml RT 避光使用说明书1份8、蒸馏水冲洗。

过程说明： 1.组织常规脱水包埋，切片脱蜡至蒸馏水。 2.标本入硫酸亚铁液内恒温水浴（37℃）处理 20-30min，
蒸馏水洗 3 次，每次 1 分钟。 3.标本入铁氰化钾醋酸液恒温水浴（37℃）处理 20-30 分
钟。
4.用移液抢吸取冰醋酸溶液稍冲洗标本。 5. Van Gieson 染液滴染 2-3 分钟（Van Gieson 染液临用 前 Van Gieson A：Van Gieson B=1:9 混合，临用前混合） 6.蒸馏水速洗，无水乙醇迅速脱水，二甲苯透明。中性树 胶封固。
染色结果：
产品组成：
货号 S-1526
广州市外显子生物技术有限公司
黑色素染色液（硫酸亚铁法）
Http//
产品说明： 黑色素属于非血源性内生色素，是一组颜色从浅棕色到
黑色的色素。这种色素通常出现在皮肤、眼睛、大脑的黑质 和毛囊中。黑色素有一个显著的物理性质，即完全不溶解于 大多数有机溶剂——几乎可以肯定是由于黑素体中已形成 的黑色素可与蛋白质紧密结合。黑色素另一个物理性质是能 够被强氧化剂漂白，尽管这个过程是缓慢的。在病理情况下， 这种色素也可出现在良性痣细胞瘤中和恶性黑色素瘤中。许 多方法可用于识别黑色素和黑色素生成细胞，该染色方法为 亚铁离子吸附法，黑色素能摄取亚铁离子，即把亚铁离子吸 附在黑色素上，形成黑色素亚铁复合物，其后铁氰化钾与亚 铁离子结合，在酸性环境下生成铁氰化亚铁即滕氏蓝反应。
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产品
硫酸亚铁液 铁氰化钾醋酸液
冰醋酸液 Van Gieson 染液
说明书
规格 储存条件
20ml RT 避光 20ml RT 避光 20ml RT 避光 20ml RT 避光
1份
皮肤组织 ×400 结果判定：黑色素呈绿色或墨绿色，胶原纤维呈红色，肌 纤维呈黄色。

功 能 高 分 子 学 报Vol. 35 No. 6 560Journal of Functional Polymers2022 年 12 月文章编号： 1008-9357(2022)06-0560-06DOI: 10.14133/ki.1008-9357.20220223001改性透明质酸在黑色素染发中的应用郑 宸， 黄 晶， 李 婷， 东为富（江南大学化学与材料工程学院, 合成与生物胶体教育部重点实验室, 江苏 无锡 214122）摘 要： 首先将透明质酸（HA）醛基化得到双醛修饰的HA（AHA），接着通过AHA与席夫碱反应，将多巴胺(DA)接枝到HA上，得到DAHA，最后通过DAHA对头发进行预处理，加强聚多巴胺(PDA)与头发之间的相互作用。

利用傅里叶变换红外光谱仪（FT-IR）、紫外-可见分光光度计（UV-Vis）、核磁共振氢谱仪（1H-NMR）、扫描电镜（SEM）、单纤维强度测试仪、色差仪等对DAHA的性质以及染色性能进行了一系列表征。

结果表明：DA成功接枝到了HA上，并且数均分子量为0.2×104～1.0×104的DAHA接枝率为34%。

经过DAHA辅助染色的头发，表面PDA 纳米粒子分散更加均匀，同时具备更好的耐洗涤性能。

关键词： 聚多巴胺；透明质酸；席夫碱反应；染发；护发中图分类号： O63 文献标志码： AApplications of Modified Hyaluronic Acid in Melanin Hair DyeingZHENG Chen, HUANG Jing, LI Ting, DONG Weifu（Key Laboratory of Synthetic and Biological Colloids, Ministry of Education, School of Chemical andMaterial Engineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu, China）Abstract:Most of the traditional permanent hair dyes containing aniline molecules have the risk of carcinogenicity and sensitization. Since polydopamine has a similar molecular structure to eumelanin and good biocompatibility, the use of polydopamine in hair dyeing has become a hot research topic. However, due to the hydrophobic structure of the hair surface, the adhesion of dopamine in situ deposition on the hair surface is weak. Here, by taking advantage of the effect of hyaluronic acid (HA) to hair, dopamine (DA) was grafted onto HA via Schiff base reaction to strengthen the interactions between polydopamine and hair. The chemical structure of DA grafted hyaluronic acid (DAHA) was confirmed by Fourier Transform Infrared Spectrometer (FT-IR), Ultraviolet-Visible (UV-Vis) spectrophotometer, Proton Nuclear Magnetic Resonance (1H-NMR). The dyeing properties assisted by DAHA were characterized by Scanning Electron Microscope (SEM), single fiber strength tester and colorimeter. Results show that DA has been successfully grafted onto HA, and the grafting ratio for HA with a number average molecular weight of 0.2×104—1.0×104 was 34%. Compared with the hair samples dyeing without DAHA, the hair pretreated with DAHA has better color fastness after 30 washes. Moreover, with DAHA pretreatment, the tensile strength of hair improves, and the improvement rate is about 7.4%. SEM photos demonstrate that the polydopamine nanoparticles on the surface of hair dyed with DAHA were more uniform than those without DAHA.收稿日期： 2022-02-23基金项目： 国家自然科学基金（21975108）作者简介： 郑　宸（1996—），男，硕士生，主要研究方向为生物基天然染发剂。

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临床与实验病理学杂志 ＪＣｌｉｎＥｘｐＰａｔｈｏｌ ２０１９Ｊａｎ；３５（１）
网络出版时间：２０１９－１－１７１０：５７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１９０１１７．１０５６．０３３．ｈｔｍｌ
ＤＡＢ显色后去黑色素法在免疫组化中的应用
122细胞沉淀制作食管癌细胞系te1经pbs清洗胰酶消化后用含血清培养基终止胰酶消化并以3000rmin离心3min然后用培养基重悬计数细胞细胞量太少得到的细胞沉淀少效果不佳经过实践验证大于1106个细胞样本较适宜将细胞转移至15ml离心管经3000rmin离心3min弃上清95乙醇重悬细胞并定容至1215ml固定1h后经3000rmin离心3min弃上清95乙醇约05ml重悬细胞沉淀并转移至模具腔隙中经5000rmin离心10min弃上清在沉淀中缓慢加入10中性福尔马林08ml避免将细胞沉淀吹散固定过夜
பைடு நூலகம்
刘兴华，刘 鹏，刘萌萌，魏 丽，刘若慧 ，张 萌
关键词：黑色素；氧化剂；ＤＡＢ；免疫组织化学 中图分类号：Ｒ４４６８ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００１－７３９９（２０１９）０１－０１１２－０２ ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０１９．０１．０３３
在病理科 的 日 常 工 作 中，经 常 会 遇 到 含 有 黑 色 素 的 组 织，由于未经染色的黑色素呈棕褐色或深褐色的颗粒，特别 是在免疫组化的诊断中，ＤＡＢ的显色与黑色素的颜色相近， 会影响免疫组化结果的判读。去除黑色素的方法有很多，文 献报道比较常用的是高锰酸钾草酸法和过氧化氢脱色法［１］， 但两者均为强氧化剂，在先去除黑色素后再进行相关免疫组 化染色时，对抗原有一定的损伤。为解决上述问题，本科室 在 ＤＡＢ显色后再用强氧化剂去除黑色素既不破坏抗原又能 把黑色素完全去除，得到了满意的效果，现报道如下。

结缔组织染色 肌肉组织染色 糖类染色 色素类染色 病理内源性沉着物染色 病原微生物染色 内分泌细胞染色
一、纤维素染色
纤维素 (fibrin) 又称为纤维蛋白， 它是存在于血液内的纤维蛋白原分子聚合 而形成的特殊蛋白质。 在病理状态下， 血管内和血管外以及其它组织中， 均可见到纤维素沉着物 。 常见于炎症渗出性改变， 弥漫性血管内凝血 、 高血压的小血管壁和一些胶原性疾病的疏松纤维，肾小球的毛细血管腔内和 基底膜等均有纤维素的存在。
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抗酸杆菌 (acid fast bacteria) 体内含有脂质、蛋白质和多糖类并由糖脂形成一 个蜡质的外壳，能与苯酚碱性复红结合成复合物，这种复合物能抵抗酸的脱色， 所以称为抗酸杆菌。
病毒是最小的非细胞型微生物，当病毒引起疾病的时候，其感染 的细胞内可以形成包涵体，而存在于细胞浆和细胞核内，但有时 胞浆和胞核内同时可见到包涵体，在一般的情况下， RNA病毒形 成胞浆内包涵体，DNA病毒形成核内包涵体。
一、弥散神经内分泌细胞染色(diffuse neuroendocrine system， DNES) 弥散神经内分泌系统的细胞具有细胞化学、 病理和超微结构的形态特点 。 从生物
化学方面而言，这些内分泌细胞都能合成和分泌胺，而且细胞是通过摄取胺前体 (氨基酸) 经脱羧后产生胺的。随着对细胞研究的深入，发现其不仅产生胺，而且还 产生肽。 DNES 的组成至今已有40多种细胞，分为中枢和周围两大部分。中枢部分包括下丘 脑一垂体轴的细胞和松果体细胞。周围部分包括胃、肠、胰、呼吸道和泌尿生殖道 的内分泌细胞，以及甲状腺滤泡旁组胞，甲状旁腺细胞，嗜铬细胞，颈动脉体细胞 等。 日前证明这些细胞的染色方法较多，但常用的是使用亲银和嗜银反应来鉴别细胞浆 中的银颗粒。

4 O p ie L H. A n g i o ten sin co n ve r t i n g en zym e i n h ib ito r s: Sc i en2t i f i c ba s is fo r c l in ica l u se. A u tho r’s P u b lish in g. H o u se N ew Yo rk , 1992: 1695 S ihm I, Sch ro ede r A P , A a lk j o a re e t a l .N o r m a liza t i o n o f m ed ia to lu m en ra t i o o f h u m an subcu tan eo u s a r te r ie s du r i n g an t i h y p e r t en sive t r ea t m en t w ith a p e r i n dop r i l ba s ed r eg i2 m en. E u r H ea r t J , 1993; 14 (Sup p l) : 63 7 A s m a r R G, Jo u rno H J , L a i o lley P J e t a l . T rea t m en t fo r o n e yea r w ith p e r in dop r il effec t o n ca rd ia l m a ss an d a r te r i a l com p lian ce in e ssen t ia l h yp e r ten si o n. J H yp e r ten s, 1988;6 (Sup p l 3) : S338 M ich e l J B , C a t t i o n A L , Su lz m an n J L e t a l . H o r m o n a l an d ca rd ia l effec t s o f co n ve r t in g en zym e inh ib it i o n in ra t m y2 o c a r d i a l in fa r c t i o n. C ire R e s, 1988; 62 (4) : 641(收稿: 1996205207; 修回: 1997201206)(编辑王红、沈锡庚)6 L evy B I, M ich e l J B , Sa l z m an n J L e t a l . A r t e r i a l effec t so f A C E inh ib ito r in reno v a s cu la r an d sp o n t an eo u sly h y p e r2ten sive ra t s. J H yp e r t en s , 1988; 6 (Sup p l 3) : S23Therapeut i c ef f e c t s of per i n dopr il on con g e s t i ve hear t fa ilureC h e n Gu a n g h u i, Zh u Sh a n j u n,Y u a n Y u q u a n (D ep a r t m en t o f C a r d i o lo gy, X in q i ao H o sp t i a l, T h ird M ilita r y M ed i ca l U n i2 ve r s ity, C h o n gq i n g, 630037)A b stra c t O b je c t i v e :T o in ve s t i ga t e th e th e r ap e u t i c effec t s o f p e r i n dop r i l o n co n ge s t i ve h e a r t fa i lu re(CH F )an d it s p o ssib le m ech a n is m. M e tho d s: 40 p a t i en t s(20 m a l e s, 20 fem a l e s) w ith th e age ran g in g f r om21 to 77 yea r s o ld (m ean = 51. 47) w e re r an dom ized in to th e co n t ro l g ro up ( n = 17) t rea ted w ith d ig ita l is andd iu re t ic s an d th e t rea t m en t g ro up ( n = 23) t rea ted w ith p e r in dop r il, d ig ita lis an d d iu re t ic s.T h en th e ch a ng e so f th e fo llow in g in d ice s w e re o b se rved: 1) N YHA c la ss; 2) h em o dyn am ic s an d ca rd iac p e rfo rm an ce such a sF S, E F , C I, C O an d SV ; 3)V ST , L V I D, L V PW T an d L V m a s s; 4) p la s m a A N F , A NG II, A ld, E T, A C Ean d PRA. R e s u lts : In th e t rea t m en t g ro up , it w a s fo un d th a t: 1)N YHA c la ss w a s am e li o ra ted; 2) th e ca r d i a cp e rfo rm an ce an d h em o dyn am ic s w e re i m p ro ved; 3) th e b loo d RA A S w a s in h ib ited; 4) th e syn th e sis o f A N Fan d d isch a r ge o f E T w e re sign if ican t l y dec rea sed. C o nc lus io n: P e r in dop r il is an effec t ive agen t i n th e t r ea t2m en t o f CH F. It s m ech an is m m igh t be to dec rea se th e syn th e sis o f A N F an d d isch a rge o f E T be side s i n h i b it2in g RA A SKey words p e r i n dop r i l; co n ge s t i ve h e a r t fa i lu re (CH F ) ; ren in 2an g i o ten sin2a s d s te r o n e sy s tem (RA A S)培养黑素细胞生物学鉴定方法及选择The m e t hodm e l an o cy t e san d cho ice of iden t i f i ca t i on on b i o l og i ca l cult i va ted 钟白玉邓军叶庆佾(第三军医大学附属西南医院皮肤科) 重庆, 630038皮肤色素障碍性疾病主要与皮肤黑素系统中的黑素细胞(M C ) 有关。

（一）单纯固定液甲醛：1．浓度：40%，气体2．渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3．不能使白蛋白和核蛋白沉淀4．保存脂类，必须用冷冻切片。

是糖的保护剂5．可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1.浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2.穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3.未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。

酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。

4.固定高尔基体和线粒体有良好效果。

5.酸性染料着色好，碱性染料着色差6.固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。

苦味酸1.黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏2.穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。

3.能沉淀一切蛋白质4．对脂肪和类脂无固定作用。

5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过24h，7. 固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。

升汞1. 浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶2．穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3, 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸5%的醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。

2. 穿透力强3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定脂肪和内酯，不能保存糖5 .固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1.为三氧化铬的水溶液，浓度%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2 穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。

4 对脂肪无固定作用5 固定线粒体和高尔基复合体6. 宜避光保存，以防蛋白质溶解。

7. 必须彻底流水冲洗（≥24h）。

锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利。

结缔组织染色法1.Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞2.Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞3.显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞胶原纤维染色法1.Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核2.天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他网状纤维染色Gordon-Sweets银氨染色法黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织胆色素染色三氯醋酸染色法绿色：胆色素红色和黄色：其他纤维蛋白染色1.Lendrum等MSB染色法*本法的MSB指马休黄猩红蓝法红色：纤维蛋白紫色：陈旧性纤维蛋白蓝色：细胞核黄色：红细胞2.Gram甲紫染色法蓝黑色：纤维蛋白红色：背景淀粉样物质染色1.刚果红染色法红色：淀粉样物质蓝色：细胞核2.Jurgens甲紫染色法红色或紫红色：淀粉样物质蓝色：细胞核真菌染色1.Grocott六胺银染色法*真菌均被着色黑褐色：菌丝和孢子红色：细胞核淡绿色：背景2.高碘酸复红染色法（1994年）紫红色：真菌浅黄色：红细胞细菌染色1.Gram碱性复红结晶紫染色法蓝色：革兰阳性菌红色：革兰阴性菌、细胞核2.Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法红色：抗酸杆菌3.胃幽门螺杆菌棕黑色或黑色：胃幽门螺杆菌淡黄色：背景螺旋体染色1.Giemsa染色法蓝—淡紫色：螺旋体、细菌蓝色：细胞质橘黄色：红细胞2.Ryu碳酸钠碱性复红法红色：螺旋体病毒包涵体染色Macchiavello包涵体染色法乙型肝炎表面抗原染色1.Shikata地衣红染色法（1974年）棕色：HBsAg阳性2.醛复红改良染色法（1988年）紫色：乙型肝炎表面抗原阳性物质红色：结缔组织黄色：红细胞及基质3.维多利亚蓝染色法蓝绿色：乙型肝炎表面抗原物质红色：细胞核神经组织染色△神经细胞尼氏小体染色方法1.焦油紫（cresyl violet）染色法紫色：尼氏小体淡紫色：胶质细胞2.Einarson棓酸青蓝染色法黑蓝—紫色：尼氏小体蓝色：核浅灰色：背景3.甲苯胺蓝染色方法深蓝色：尼氏小体淡蓝色：细胞核无色：背景△神经纤维的染色方法1.Holmes神经纤维染色方法黑色：神经纤维灰紫色：背景2.Bielschowsky神经纤维染色方法黑色：神经纤维紫色：背景3.V on Braunmubl神经纤维、扣结、老年斑染色方法黑色：神经纤维、扣结、老年斑浅灰色：背景4.Eager退变神经纤维的染色方法黑色：退变神经纤维浅棕色：背景△神经髓鞘的染色方法1.Weigert—Pal髓鞘染色方法黑蓝色：髓鞘淡灰色：背景2.Weil髓鞘染色方法蓝黑色：髓鞘淡灰色：背景3.Kultshitzky髓鞘染色方法（Heidenhains改良法）蓝黑色：髓鞘淡黄色：背景4.Luxol fast blue髓鞘染色方法蓝色：髓鞘紫色：核仁、尼氏小体5.变色酸2R—亮绿髓鞘染色方法深红色：神经髓鞘绿色：轴索、间质不着色：脱髓鞘纤维6.Marchi退变髓鞘染色方法黑色：退变髓鞘浅棕色：背景△神经胶质细胞染色方法1.Cajal星形细胞染色方法（冷冻切片法）紫黑色：原浆性及纤维性星形细胞2.Naoumenko和Feigin改良的Cajal染色方法（石蜡切片法）黑紫色：星形细胞粉红色：背景3.Weil及Davenport小胶质细胞及少突胶质细胞染色方法黑色：神经胶质细胞、少突胶质细胞黄棕色：背景4.Naou menko及Feigin小胶质细胞石蜡切片染色方法黑色：小胶质细胞灰色：背景神经内分泌细胞染色△亲银反应1.Lillie—Masson二胺银反映法黑色：亲银颗粒细胞红色：细胞核灰黄色：背景ori—Burtner六胺银法黑色：亲银细胞浅红色：背景△嗜银反应1.De Grandi改良硝酸银反应法（1970年）棕黑色：嗜银细胞颗粒红色：细胞核2.碱性重氮反应法橘红色至红色：嗜银细胞颗粒蓝色：细胞核黄色：胞质嗜铬细胞染色1.Giemsa改良染色法红色至紫红色：嗜铬细胞蓝色：皮质细胞粉红色：红细胞2.Wiesel染色法黄绿色：嗜铬细胞质红色：细胞核蓝色：其他肥大细胞染色1.甲苯胺蓝改良染色法紫红色：肥大细胞颗粒蓝色：细胞核2.醛复红法深紫色：肥大细胞颗粒橘黄色：红细胞黄色：其他组织DNA染色1.酸水解—无色品红法紫红色：DNA绿色：细胞质、其他成分2.甲基绿—派洛宁法红紫色：细胞质和核仁内的核糖核酸（RNA）绿色或绿蓝色：细胞核染色质内的脱氧核糖核酸（DNA）脂肪染色苏丹Ⅲ—Mayer苏木精染色（冷冻切片）橘红色：中性脂肪蓝色：细胞核。

改良高锰酸钾-草酸脱黑色素法在黑色素瘤苏木素-伊红染色和免疫组织化学检测中的应用吴昊;袁静萍;阎红琳;周亨【摘要】Objeetive To identify the optimal potassium permanganate-oxalic acid bleaching method in removal of melanin in hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistoehemistry of melanoma.Methods Melanoma tissue sections riched in melanin were emersed in 0.5％ potassium permanganate solution at 40℃,45℃,50℃and 55℃ for 2,4,6 and 8 minutes,respectively.The sections were then treated with 1％ oxalic acid solution for 3 cycles of 30 seconds followed by one minute waterrinse.Based on the conditions which gave the best HE staining depigmentation effect,the same method was further optimized in immunohistoehemistry.Results Specimens treated with 0.5 ％ potassium permanganate solution at 55℃ for 4 minutes follo wed by 3 cycles of 1 ％oxalic acid incubation for 30 seconds showed a better depigmentation effect in HE staining.On the same base,immunohistochemical staining worked best when the potassium permanganate incubation time was reduced to 2 minutes.Conclusion The modified potassium permanganate-oxalic acid method not only completely removed melanin pigment granules within tissue sections,but also preserved tissue antigenicity which met the requirements of clinical pathology in the diagnosis and differential diagnosis of malignant melanoma.%目的通过比较不同条件下高锰酸钾-草酸脱黑色素法在苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)和免疫组织化学检测中的应用,探讨最佳脱色条件.方法取富含黑色素的黑色素瘤组织切片,分别在40℃、45℃、50℃、55℃的0.5％高锰酸钾中脱色,每种温度下分别孵育2min、4min、6min、8min,然后1％草酸溶液处理30s×3次,水洗1min,比较HE染色效果,选取效果最好的高锰酸钾脱色条件(温度、时间).基于HE最佳染色条件,将高锰酸钾处理时间减少2min,1％草酸溶液处理30s×3次,观察免疫组化染色效果.结果标本经0.5％高锰酸钾溶液,55℃水浴加热4min,1％草酸溶液处理30s×3次,HE染色效果最好;在此基础上,将处理时间减少到2min,免疫组织化学染色效果更好.结论改良后的高锰酸钾-草酸脱黑色素法既能彻底脱去组织内的色素颗粒,又能较完整的保留组织的抗原性,满足了临床病理对恶性黑色素瘤的诊断及鉴别诊断的需求.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2017(026)005【总页数】4页(P510-513)【关键词】高锰酸钾-草酸脱黑色素法;黑色素瘤;改良【作者】吴昊;袁静萍;阎红琳;周亨【作者单位】武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060【正文语种】中文【中图分类】R446.8某些含有黑色素的肿瘤组织因黑色素沉积过多，可遮盖细胞，干扰免疫组织化学抗原与抗体的结合，并且色素本身的颜色也影响免疫组织化学染色的判读，严重影响最终的诊断。